人工角膜支架材料在动物体内应用的生物学反应

目的 探讨3种人工角膜支架材料经氩等离子体（Argon plasma)处理后植入兔角膜对角膜组织的生物学反应的影响。方法 选用3种支架材料：由80％的聚丙烯和20％聚丁烯化合而成的多孔材料；Polyester多孔材料；Expended polytetrafluoroethylene。处理组材料经Argon plasma处理。将盘状支架材料植入兔角膜囊袋内。结果 材料经处理后角膜水肿较未处理明显减轻，8周后3种材料中角膜水肿均消失。材料1，2植入时新生血管出现延迟，范围小，炎细胞浸润明显减少。术后6周纤维细胞迁徙入材料内。当材料植入角膜后角化蛋白（KS）含量降低，Dermatan(DS)含量增高，并有大分子葡萄糖聚糖（GAG）出现。结论 Argon-plasma处理可明显减轻兔角膜炎症反应，增加材料的组织相容性。     

HA表面改性人工角膜钛支架生物相容性动物实验研究

目的 经羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)表面改性的三襻式人工角膜钛支架植入兔角膜板层探讨其与角膜组织的生物相容性及组织愈合情况.方法 24只新西兰白兔随机分为A、B、 C 3组,A组(9只)及B组(9只)分别于右眼角膜板层植入HA表面改性后的三襻式人工角膜钛支架(HA-Ti)及人工角膜钛支架(Ti);C组(6只)为手术对照组,仅制备囊袋不植入支架.观察人工角膜支架的生物相容性及新生血管生长情况,并分别于术后2周、4周、16周取材,行组织病理学及支架表面组织扫描电镜观察.结果 观察期间A、B组均未见角膜感染、溶解、支架排出.早期实验组角膜有水肿及新生血管长入,A组新生血管明显多于B组.组织学观察术后2周,A组炎症细胞浸润重于对照C组及B组(P<0.05);4周和16周时A、B和C组各组间炎症反应无明显差别(P>0.05).A组支架周围基质成纤维细胞增生显著,术后2周、4周A组和B组成纤维细胞增生均多于对照C组(P<0.05),且A组增生明显多于B组(P<0.05);术后16周时各组间差异无统计学意义(P>0.05).扫描电镜HA-Ti支架表面角膜组织黏附好,胶原纤维与支架连接紧密.结论 HA表面改性三襻式钛支架促进角膜血管化,有利于人工角膜的稳定,使人工角膜支架具有良好生物相容性及促进组织界面愈合能力.     

羟基磷灰石表面改性人工角膜支架植入兔角膜后基质金属蛋白酶-2及胶原纤维的表达

目的 探讨经羟基磷灰石(HA)表面改性的三襻式人工角膜钛支架植入兔角膜板层后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及胶原纤维的表达,评价其生物相容性.方法 实验研究.24只新西兰白兔采用单纯随机抽样方法随机分为3个组,HA-Ti支架组(9只)及Ti支架组(9只)分别于右眼角膜板层植入HA表面改性后的三襻式人工角膜钛支架(HA-Ti)及人工角膜钛支架(Ti),6只仅制备囊袋不植入支架作为对照组.观察人工角膜支架的生物相容性及新生血管生长情况,并分别于术后2周、4周、16周取材,角膜组织行苏木素-伊红染色、并用免疫组织化学方法检测各组角膜基质中MMP-2的表达并进行半定量分析;用苦味酸天狼猩红苏木素染色的方法观察支架植入后对胶原的影响.多组间比较应用单因素方差分析,组间两两比较应用SNK-q检验.结果 观察期间Ti-HA支架组及Ti支架组均未见角膜感染、溶解、支架排出.早期实验组角膜有水肿及新生血管长入,HA-Ti支架组新生血管明显多于Ti支架组.组织学观察术后2周,植入HA-Ti支架组角膜基质内2周可见少量炎性细胞(中性粒细胞及噬酸细胞为主),此后逐渐减少.支架周围2周时可看到较多成纤维细胞,16周时成纤维细胞减少,粉染的胶原纤维增多.术后2周,HA-Ti支架组、Ti支架组及对照组MMP-2阳性细胞IOD值分别为103.729±15.112、84.439±13.699、69.310±13.078,组间比较差异有统计学意义(F =6.083,P＜0.05),但Ti支架组和对照组差异无统计学意义(F=3.209,P＞0.05);4周时3个组MMP-2阳性细胞IOD值逐渐降低,分别为88.963±9.017、53.005±4.605、49.326±4.443,组间比较差异有统计学意义(F=47.074,P＜0.01);16周时3个组MMP-2阳性细胞IOD值分别为72.176±12.815、50.014±8.813、46.734±11.670,组间比较差异有统计学意义(F=6.079,P＜0.05).偏光镜下观察见角膜组织内4周有大量绿色的Ⅲ型胶原纤维及黄红色Ⅰ型胶原纤维,16周时角膜内主要为鲜红色的Ⅰ型胶原纤维,仍有少量的Ⅲ型胶原纤维.结论 兔角膜植入HA-Ti支架引起MMP-2活化,持续高表达并未造成对角膜的溶解;其影响周围角膜细胞外基质中Ⅲ型胶原纤维向Ⅰ型胶原纤维的转化,利于支架稳定,HA-Ti支架具有较好的生物相容性.     

改良钛支架人工角膜生物相容性的实验研究

目的 探讨改良钛支架人工角膜的生物相容性和角膜生物愈合的过程.方法 实验研究.设计与制备改良钛支架人工角膜,钛支架采用喷砂、羟基磷灰石涂层处理,镜柱用聚甲基丙烯酸甲酯为原料按设计好的图纸手工磨制.将18只正常新西兰白兔采用单纯随机抽样方法分为A、B、C组,每组6只.18只新西兰白兔角膜碱烧伤模型采用单纯随机抽样方法分为E、F、G组,每组6只.其中A、E组和B、F组兔右眼角膜基质层内分别植入改良支架和对照支架(无涂层),C、G组仅做角膜板层切口;另取4只(分别为2只正常动物模型、2只碱烧伤模型)即D、H组分别作为空白对照;术后1、3个月取材,取出支架做拉出实验和扫描电镜检查;角膜组织行苏木素-伊红(HE)染色、透射电镜检查.另取8只兔(其中2只碱烧伤模型)植入改良支架,3个月后植入镜柱.两组剪切力比较采用t检验.结果 改良后的人工角膜支架表面呈鳞片状微孔结构,植入兔角膜反应轻,术后1、3个月取材,组织学检查见A、E组支架与角膜界面处成纤维细胞数多于B、F组支架.3个月时拉出试验测定剪切力A与B组比较、E与F组比较差异均有统计学意义(t=3.297,P<0.05;t=4.237,P<0.05),改良支架植入角膜3个月后的剪切力较对照支架强.扫描电镜检查显示A、E组支架表面被细胞外基质包裹,而B、F组支架细胞附着量明显少.透射电镜检查显示支架周围的胶原纤维束紊乱,A、E组支架与角膜的结合方式垂直或成一定角度,结合更牢固.支架植入后碱烧伤模型组角膜基质较正常兔角膜组愈合延迟.结论 改良钛支架人工角膜促进了材料与组织界面愈合,无论正常还是碱烧伤动物体内,改良钛支架人工角膜提高了材料的生物相容性.     

Argon—Plasma对人工角膜支架材料组织相容性的影响

目的 探讨3种人工角膜支架材料经Argon-Plasma处理后植入兔膜对兔角膜组织的影响。方法 选用3种支架材料：材料1：聚丙烯和聚丁烯（80:20）化合而成的多孔材料;材料2：Polyester多孔材料;材料 3:Expended polytetrafluoroethglene。上述3种材料切成直径6mm的圆盘状,每种材料分为处理组和非处理组。处理组材料经Argon-Plasma处理。选用63只新西兰大白兔,共分为7组,每组9只,6组为实验组及对照组（3组为处理组,3组为非处理组）,1组为手术对照组。以显微手术的方法,将盘状支架材料植入囊袋内,手术对照组仅制备囊袋不植入材料。术后定期观察角膜水肿及新生血管的生长情况。术后28、42、84d取角膜进行角膜组织学及免疫组织化学分析。结果 当材料经处理后角膜水肿较未处理明显减轻,8周后3种材料中角膜水肿均消失。材料1、2植入时新生血管出现延迟,范围也较小,同时炎细胞浸润明显减少。术后6周纤维细胞迁徒入材料内,术后12周空腔填充大量纤维细胞。材料处理与否不影响胶原蛋白的沉积。结论 Argon-Plasma处理可明显减轻兔角膜炎症反应,增加材料的组织相容性。     

改良聚羟乙基丙烯酸甲酯-聚甲基丙烯酸甲酯一体化人工角膜植入兔与猴角膜的研究

目的 探讨聚羟乙基丙烯酸甲酯（PHEMA）海绵支架材料与角膜组织的生物相容性,评价改良PHEMA-聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）一体化人工角膜植入兔与猴角膜的初步临床效果。方法通过两个阶段化学聚合结合车床机械切削合成改良的一体化人工角膜。实验分为两个部分完成。第1部分（A组）：将PHEMA海绵边裙材料植入10只正常兔角膜板层间,术后2、4周及2、3、4个月分别行组织病理、免疫组织化学及电镜检查,观察海绵边裙与角膜组织的生物学愈合情况。第2部分（B组）：8只兔眼和2只猴眼角膜囊袋内Ⅰ期植入一体化人工角膜,术后临床观察材料与组织的愈合情况;术后3个月时行Ⅱ期手术切除术眼角膜中央前板层角膜组织,暴露人工角膜中央镜柱,术后随访时间3—6个月,初步观察临床治疗效果。结果（1）A组：10只兔眼随访期间未见并发症。组织病理学显示,PHEMA海绵边裙材料植入术后2周始有成纤维细胞长入,术后2—3个月时多量成纤维细胞长入并伴有新生血管生长;免疫组织化学显示,海绵孔隙中长入的细胞和角膜基质细胞均对波形蛋白免疫反应呈阳性;电镜下可见,成纤维细胞在海绵材料间隙中生长,细胞生长状态良好,并分泌胶原和细胞外基质。（2）B组：6只兔眼的一体化人工角膜均在位,另2只兔眼Ⅰ期术后有前板层角膜基质融解。2只猴眼于Ⅰ期和Ⅱ期术后均未见明显并发症。结论PHEMA海绵能与角膜组织良好的生物学愈合;改良PHEMA—PMMA一体化人工角膜植入术后能获得相对稳定的治疗效果。（中华眼科杂志．2007,43：602-607）     

改良聚羟乙基丙烯酸甲酯-聚甲基丙烯酸甲酯一体化人工角膜植入兔与猴角膜的实验研究

目的：探讨聚羟乙基丙烯酸甲酯（PHEMA）海绵支架材料与角膜组织的生物相容性,评价改良聚羟乙基丙烯酸甲酯（PHEMA）一聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）一体化人工角膜植入龟与猴角膜的初步临床效果。方法：通过两个阶段化学聚合结合车床机械切削合成改良的一体化人工角膜。实验分为两个部分完成。第1部分（A组）：将PHEMA海绵边裙材料植入10只正常兔角膜板层间,术后2,4wk及2,3,4mo分别行组织病理、免疫组织化学及电镜检查,观察海绵边裙与角膜组织的生物学愈合情况。第2部分（B组）：8只兔眼和2只猴眼角膜囊袋内I期植入一体化人工角膜,术后临床观察材料与组织的愈合情况;术后3mo时行Ⅱ期手术切除术眼角膜中央前板层角膜组织,暴露人工角膜中央镜柱,术后随访时间3～6mo,初步观察临床治疗效果。结果：1）A组接受角膜板层间边裙植入术的10只兔眼,随访期间未见并发症：组织病理学显示,PHEMA海绵边裙材料植入术后2wk始有成纤维细胞长入,术后2～3mo时多量成纤维细胞长入并伴有新生血管生长;免疫组织化学显示,海绵孔隙中长入的细胞和角膜基质细胞均对波形蛋白免疫反应呈阳性;电镜下可见,成纤维细胞在海绵材料间隙中生长,细胞生长状态良好,并分泌胶原和细胞外基质。2）B组接受一体化人工角膜移植术的,6只兔眼一体化人工角膜均在位,男2只兔眼I期术后有前板层角膜基质融解。接受一体化人工角膜移植术的2只猴眼,I期和Ⅱ期术后均未见明显并发症。结论：PHEMA海绵能与角膜组织良好的生物学愈合;改良PHEMA-PMMA一体化人工角膜植入术后能获得相对稳定的治疗效果。     

多孔纳米羟基磷灰石-聚乙烯醇水凝胶人工角膜的实验研究

目的 评价多孔纳米羟基磷灰石-聚乙烯醇水凝胶(NHA-PAH)人工角膜在兔角膜内的生物学反应。方法 将NAH-PAHKPro加工成直径10．0mm，周边支架为2．5mm．中央光学部与裙袢连接部呈阶梯状，植入10只新西兰白兔角膜板层囊袋内。术后眼前段裂隙灯照相并分别于1月、2月、3月、4月、6月行术眼角膜组织病理学检查。结果 术后1个月大部分新生血管长入角膜中央，3月时新生血管生长达到高峰，术后6个月角膜中央存留大量变细的新生血管，未见人工角膜排出、基质融解、房水渗漏和感染。HE染色见术后1个月时成纤维细胞、新生血管及少量炎细胞长入裙袢孔隙内，伴有少量胶原形成。术后3个月所有孔隙均被胶原细胞和新生血管组织充填，成纤维细胞在孔隙内沿纵行方向一致性生长，胞头丰富，胞核小。中央光学部透明。结论 NHA-PAHKPro组织相容性好，具有临床应用的前景。     

改良聚羟乙基丙烯酸甲酯-聚甲基丙烯酸甲酯一体化人工角膜植入兔与猴角膜的实验研究(英文)

目的:探讨聚羟乙基丙烯酸甲酯(PHEMA)海绵支架材料与角膜组织的生物相容性,评价改良聚羟乙基丙烯酸甲酯(PHEMA)—聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)一体化人工角膜植入兔与猴角膜的初步临床效果。方法:通过两个阶段化学聚合结合车床机械切削合成改良的一体化人工角膜。实验分为两个部分完成。第1部分(A组):将PHEMA海绵边裙材料植入10只正常兔角膜板层间,术后2,4wk及2,3,4mo分别行组织病理、免疫组织化学及电镜检查,观察海绵边裙与角膜组织的生物学愈合情况。第2部分(B组):8只兔眼和2只猴眼角膜囊袋内I期植入一体化人工角膜,术后临床观察材料与组织的愈合情况;术后3mo时行Ⅱ期手术切除术眼角膜中央前板层角膜组织,暴露人工角膜中央镜柱,术后随访时间3 ～6mo,初步观察临床治疗效果。结果:1)A组接受角膜板层间边裙植入术的10只兔眼,随访期间未见并发症:组织病理学显示,PHEMA海绵边裙材料植入术后2wk始有成纤维细胞长入,术后2 ～3mo时多量成纤维细胞长入并伴有新生血管生长;免疫组织化学显示,海绵孔隙中长入的细胞和角膜基质细胞均对波形蛋白免疫反应呈阳性;电镜下可见,成纤维细胞在海绵材料间隙中生长,细胞生长状态良好,并分泌胶原和细胞外基质。2)B组接受一体化人工角膜移植术的,6只兔眼一体化人工角膜均在位,另2只兔眼I期术后有前板层角膜基质融解。接受一体化人工角膜移植术的2只猴眼,I期和Ⅱ期术后均未见明显并发症。结论:PHEMA海绵能与角膜组织良好的生物学愈合;改良PHEMA-PMMA一体化人工角膜植入术后能获得相对稳定的治疗效果。     

襻状支架人工角膜植入术的动物实验研究

目的：观察兔角膜碱烧伤后新生血管性角膜白斑在应用分子定向重排PMMA襻状支架人工角膜植入后的改变情况。方法：14只新西兰白兔，建立碱性角膜化学伤后偏中心新生血管性角膜白斑模型。将上述烧伤后1个月的新生血管性角膜白斑实验兔随机分为2组，每组7只，分别植入分子定向重排PMMA襻状支架人工角膜(实验组)和Fydorov-Zyev人工角膜(对照组)。结果：实验组：术后术眼均见刺激症状和角膜水肿，植床角膜水肿5—7d逐渐浅轻，2w后术眼刺激症状消失。术后人工角膜在位透明，1眼于术后7d出现人工角膜后膜，3眼于术后4—5w出现人工角膜前膜，钻除后有复发。对照组：人工角膜支架及自体耳软骨植入(第一期手术)后，术眼充血明显，植床角膜水肿，7—10d后逐渐消失，术后3w眼部刺激症状基本消失。人工角膜镜柱植入(第二期手术)后，术眼混合充血，近创缘处植床角膜水肿，2w后刺激症状基本消失，2眼于镜柱植入后5—10d出现人工角膜后膜，清除后1w又复发，3眼于术后4—6w出现人工角膜前膜，钻除后均有复发。结论：①襻状支架人工角膜与角膜植床之间的界面比Fydorov-Zyev型人工角膜的面积小，能减少支架对组织的损伤。②分子定向重排PMMA具有良好的生物相容性。③动物实验证实，襻状支架人工角膜植入后能稳定存留，无严重并发症，为应用于临床奠定了实验基础。     

A comparison of biological coatings for the promotion of corneal epithelialization of synthetic surface in vivo

PURPOSE: To investigate the effect of a range of biological coatings on corneal epithelialization of a synthetic polymer surface in vivo. METHODS: Eight diverse biological factors (collagen I, collagen III, collagen IV, laminin, fibronectin, endothelial extracellular matrix, hyaluronic acid, and chondroitin sulfate) were coated individually onto the surface of polycarbonate membranes with a pore size of 0.1 micro m. The coated membranes were implanted on the anterior cornea of adult cats and were clinically assessed for rapidity and extent of and persistence of epithelial overgrowth. The membranes with persistent epithelial attachment were examined histologically by immunohistochemistry and routine light and electron microscopy. RESULTS: Collagen I, collagen IV, and laminin consistently enhanced migration and attachment of corneal epithelial cells in vivo. Multiple-layered epithelium over the collagen I-, collagen IV-, and laminin-coated membranes was demonstrated histologically. The collagen I-coated membranes performed best, in that they showed greater stratification and differentiation of the epithelium. Formation of basement membrane and adhesion complexes over the collagen I-coated membranes was detected by immunohistochemistry and electron microscopy up to 9 weeks after implantation. Membranes coated by fibronectin, endothelial extracellular matrix, hyaluronic acid, and chondroitin sulfate did not support persistent epithelial overgrowth. Compromised biostability of these coatings was mostly likely associated with postsurgical reactions of the host corneal tissue. CONCLUSIONS: A biologically modified polymer can support migration and adhesion of corneal epithelial cells in vivo. The collagen I-modified surface exhibited the most promising performance, both clinically and histologically.     

近视眼角膜厚度及相关因素分析

目的:探讨青年近视患者角膜厚度分布特点及其相关因素。方法:选取青年近视患者200例(400眼),按屈光度不同分为4组,应用OrbscanⅡ眼前节分析系统对患者的角膜中央点、最薄点、后表面平均屈光度最大点,以及距中心1.5,2.5mm上方、下方、颞上、颞下、鼻上、鼻下、颞侧、鼻侧部位的角膜厚度及相应的前房深度、后表面高度、后表面曲率、前表面曲率进行测量。结果:角膜厚度呈中心薄周边厚分布,最薄点位于距中心2.5mm范围内(86%),角膜颞下部位(50%)。后表面平均屈光度最大点、最薄点、中央点三个点的角膜厚度在不同近视组中差异无统计学意义(P>0.05)。不同部位的角膜厚度与其他因素相关分析。结果:中央点:角膜厚度与前房深度、前表面曲率负相关(r=-0.181,-0.103,P=0.000,0.039)。最薄点:角膜厚度与相应的前房深度、后表面高度、后表面曲率绝对值、前表面曲率呈负相关(r=-0.167,-0.113,-0.104,-0.109;P=0.001,0.024,0.038,0.03)。后表面屈光度最大点:角膜厚度与相应的前房深度、后表面高度、后表面曲率绝对值、前表面曲率呈负相关(r=-0.342,-0.138,-0.189,-0.159;P=0.000,0.000,0.000,0.001)。结论:角膜厚度最薄点多位于旁中心2.5mm颞下部位;角膜厚度与近视程度无关;角膜厚度与相应的前房深度、后表面高度、后表面曲率绝对值、前表面曲率为负相关关系。     

Migration of rabbit corneal endothelial cells on vitreous strands. An organ culture experiment.

Anterior vitreous synechia, sometimes seen as a complication after anterior segment surgery, has been mimicked in organ culture experiments. A specimen consisting of a cornea with a vitreous strand adhering to the posterior surface has been kept in culture medium for 6 and 12 days. Migration of corneal endothelial cells onto the surface of the vitreous strand started after 6 days, and the surface of the strand was partly or almost totally covered by corneal endothelium after 12 days. At this stage the cells were elongated and directed along the strand. In clinical situations a vitreous strand adhering to the cornea may exert traction on the retina. This traction may be caused by contraction of actin filaments in endothelial cells covering the strand. This experimental model may be used in attempts to modify the behaviour of the cells by pharmacological manipulation.     

20%乙醇处理兔角膜后上皮增生和细胞凋亡的研究

目的探讨准分子激光角膜上皮瓣下磨镶术(LASEK)中采用20%乙醇浸润兔角膜40s后角膜上皮增生和角膜细胞凋亡情况与机械刮除角膜上皮后的异同。方法实验组42只新西兰大白兔,用直径为8mm的LASEK专用角膜上皮刀切割角膜上皮,20%的乙醇浸润单眼40s,机械刮除对侧眼中央8mm直径的角膜上皮,随机分7组,于术后0、4h,1、3、5、8、30d取材;6只兔眼为空白对照。角膜冰冻切片,行Ki67免疫组化检查和TUNEL检测,计数角膜中央前基质细胞。结果乙醇浸润后5d中央角膜上皮增生达峰值,术后1d周边角膜上皮增生达峰值;术后4h上皮刀口下方局限的角膜基质细胞TUNEL染色阳性,数量最多;各组角膜中央前基质细胞计数和空白对照比差异无统计学意义(P=0.68)。机械刮除角膜上皮后3d周边角膜上皮增生达峰值,其高于乙醇浸润后角膜上皮的增生峰值;术后4h可见大量中央前基质细胞TUNEL阳性;术后1d中央前基质细胞数量最少(P<0.05)。结论与机械刮除角膜上皮相比,20%乙醇浸润40s对角膜损伤轻,恢复快,乙醇浸润后的角膜上皮对基质细胞有保护作用。     

Development of a biopolymeric keratoprosthetic material. Evaluation in vitro and in vivo

Based on the results of in vitro and in vivo experiments, we have determined that the optimal material for the central transparent portion of a perforating keratoprosthesis is a polyvinyl alcohol copolymer hydrogel. The material supports the maintenance and growth of corneal epithelium in vitro as shown by population doublings and transmission electron microscopy. Discs preseeded with epithelial cells were cultured in vitro and transplanted into rabbit corneas. The proliferation of these cells in vivo was demonstrated using 3H-thymidine. Other experiments showed that the preseeded cells not only migrated from the central disc onto the peripheral rim of the host cornea but also that host peripheral epithelial cells migrated onto the anterior surface of the disc. The experiments described in this paper demonstrate that corneal epithelial cells preseeded onto hydrogel discs and transplanted into rabbit corneas remain adherent and are capable of proliferating.     

人脐静脉血管内皮细胞在体移植替代猴角膜内皮细胞的形态学分析

目的　使用去除后弹力层的恒河猴自体角膜为细胞载体,将培养的人脐静脉血管内皮细胞（ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎ-ｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＨＵＶＥＣ）种植到角膜内表面,观察ＨＵＶＥＣ替代恒河猴角膜内皮细胞的功能情况以及ＨＵＶＥＣ在恒河猴眼内生长的情况。方法　取恒河猴６只随机分为３组:实验组（３只）、实验对照组（２只）、空白对照组（１只）。实验组:用离心沉淀法将培养的ＨＵＶＥＣ移植到去除后弹力层的恒河猴自体角膜内表面,之后将自体角膜缝回植床;实验对照组:将撕除部分后弹力层的术眼角膜植片原位缝回植床;空白对照组:取下术眼角膜植片不做任何处理原位缝回植床。术后观察各组角膜植片透明情况;实验组及实验对照组于术后３０ｄ及６０ｄ、空白对照组于术后６０ｄ行术眼摘除,标本做病理切片、ＣＤ３４免疫组化及扫描电镜,观察房角结构及ＨＵＶＥＣ在角膜植片内表面形态分布。结果　实验组角膜植片维持了一定的厚度和透明性,而实验对照组角膜植片发生严重大泡性改变。病理切片示实验组角膜内表面可见一层细胞生长,ＣＤ３４染色阳性,提示为血管内皮细胞;实验对照组角膜内表面未见任何细胞生长;空白对照组角膜植片保留完整后弹力层及内皮细胞层。扫描电镜示实验组有ＨＵＶＥＣ单层在角膜内表面生长但有大量白细胞聚集及少量细胞碎片嵌顿于小梁网;实验对照组角膜内表面残留胶原纤维样物质,无细胞生长;空白对照组见完整六边形角膜内皮细胞层。结论　ＨＵＶＥＣ能够在撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面生长并发挥一定的屏障作用,维持角膜的厚度和透明性,但会产生较重的排斥反应。     

骨髓间充质干细胞移植治疗眼表损害的初步实验研究

目的观察体外培养的人骨髓间充质干细胞（hMSCs）移植到碱烧伤的兔角膜表面后,干细胞的成活、迁移和分化情况。方法采用NaOH溶液制作兔角膜碱烧伤模型,1个月后将培养有hMSCs的羊膜缝合到碱烧伤的兔角膜表面,以羊膜作为对照组,在裂隙灯显微镜下观察角膜的临床改变。术后1个月,摘除眼球,石蜡切片,苏木素-伊红（HE）染色观察角膜组织结构的变化,并进行抗人核抗体和细胞角蛋白12（CK12）的免疫组化染色以观察hMSCs的分布和分化情况。结果兔眼碱烧伤1个月后,角膜表面和基质层均可见大量血管,角膜呈瓷白色混浊,表面粗糙干燥,出现大量杯状细胞。hMSCs移植1个月后,角膜表面粗糙程度减轻,新生血管略有减少,但是角膜混浊未见明显改善,角膜表面杯状细胞消失;角膜表面和基质浅层存在抗人核抗体染色阳性的细胞;角膜表面细胞CK12染色阳性,而基质层未见CK12阳性细胞。对照组在羊膜移植1个月后,角膜状况较移植前无明显改善,角膜表面仍可见杯状细胞,角膜各层均未见抗人核抗体和CK12染色阳性的细胞。结论hMSCs移植到碱烧伤兔角膜表面后,能够成活并向角膜基质迁移,未发生移植排斥反应。hMSCs由于所在部位不同,可以在周围组织的诱导下向不同方向发生分化,角膜表面的细胞向角膜上皮细胞分化。而基质层中的细胞未分化为角膜上皮细胞。移植后角膜表面结膜化程度有所减轻。     

A thin glycoprotein coating of a synthetic lenticule does not cause nutritional deficiency of the anterior cornea.

PURPOSE: This study investigated whether a glycoprotein coating that will be used to enhance corneal epithelialization affects in situ nutritional passage through a permeable membrane. METHODS: Sixteen adult cats were equally divided into two groups. Polycarbonate membranes with pore size of 0.1 microm and total pore area (porosity) of 3.1% were used as implant materials. The membranes for Group 1 were coated with a thin layer of Collagen I, while the membranes for Group 2 were uncoated. Each membrane with 8-mm diameter was implanted into an interlamellar pocket of the cornea. The eyes were observed for approximately 35 days to monitor clinical signs of nutritional deficiency of the cornea, and then 7 membranes were removed from the eyes. The permeability of the explanted membranes to glucose, inulin and albumin was used to predict the in situ difference between the coated and uncoated groups in regard to nutritional passage through the membranes. To investigate the long-term effect of the surface coating on corneal health, two animals from Group 1 were followed for up to two years and then both eyes of each animal underwent histological examination. RESULTS: Clinically, no post-surgical complications associated with nutritional deficiency were observed in any of the eyes. Nutritional permeability tests showed no significant differences between the coated and uncoated membranes. Histologically, the long-term animals showed no abnormal morphology associated with nutritional deficiency in the cornea anterior or posterior to the membranes. CONCLUSIONS: A thin glycoprotein coating on a permeable membrane does not appear to affect the nutritional supply of the anterior cornea and therefore can be used to enhance epithelialization of synthetic corneal onlays in vivo.     

SPT-TransPRK术中联合0.02%丝裂霉素C 治疗后角膜基质细胞活化和光密度值的变化

观察智能脉冲技术辅助的经上皮准分子激光角膜切削术（SPT-TransPRK）中联合使用0.02%丝裂霉素C（MMC）治疗中度近视术后角膜基质细胞活化状态及角膜光密度值（CD）的变化。方法：前瞻性临床研究。纳入2021年3—6月于大连医科大学附属大连市第三人民医院眼科屈光中心近视患者25例,术前等效球镜度-6.00~-3.00D,同体配对设计,随机一眼使用0.02%MMC,为MMC组（25 眼）,另一眼不使用0.02%MMC,为对照组（25眼）,于术前及术后14d、1个月、3个月行HRTⅢ角膜共聚焦显微镜观察2组角膜细胞活化状态和Pentacam眼前节分析系统测量2组CD值,对CD值进行重复测量资料方差分析。结果：①0~2mm范围角膜于术后14d前部、中部CD度值升高,且MMC组CD值高于对照组（P<0.001、P=0.008）;术后1个月时前部、中部CD度值升高,MMC组CD值高于对照组（P<0.001、P<0.001）。②>2~6mm范围角膜于术后14d前部、中部CD值升高,MMC组CD值高于对照组（P<0.001、P=0.034）;术后1个月时前部、中部CD度值降低,且MMC组CD值高于对照组（P<0.001、P=0.036）。③>6~10mm范围内前、中部CD度值术后14d、1个月时较术前有所降低,但组间差异无统计学意义。④0~6mm范围内CD值于术后3个月时较术前增高,其中0~2mm、>2~6mm范围CD度值变化程度为MMC组低于对照组（P<0.001、P=0.005）。⑤共聚焦显微镜观察到对照在术后14d、1个月及3个月的基底层细胞外基质的活化状态均比MMC组强,团状高反光物质及前部基质的细胞密度较对照组多,后基质的细胞密度无差异。结论：SPT-TransPRK术中联合MMC在术后3个月内降低6mm范围前、中部和后部CD,但不会对角膜的光密度产生不良影响。     

hEGF在角膜中的基因表达

目的 观察人表皮生长因子(hEGF)基因对角膜细胞的转染情况，探讨用hEGF基因对角膜损伤治疗的可行性。方法 利用基因重组技术构建了hEGF全基因序列，将该基因序列插入pcDNA3．1真核表达高效穿梭质粒，用脂质体包裹注入家兔角膜前房。从RNA、DNA和蛋白质水平分别测定了角膜组织中hEGFmRNA和DNA的表达，用免疫组化法测定了hEGF在兔角膜组织中的表达。结果 基因转染24h后在全层角膜细胞内可见hEGF mRNA、DNA和蛋白质表达，第5d达到高峰，细胞转染率高达98％以上，随后逐渐降低，可持续表达20d以上。结论 用pcDNA3．1真核表达高效穿梭质粒作为载体，携带hEGF基因在脂质体包裹下经前房注射转染角膜，可达到极高的转染率，具有良好的应用前景。