不同青霉素红霉素敏感性组合模式肺炎链球菌的抗生素敏感性特征

目的分析不同青霉素和红霉素敏感性组合模式的肺炎链球菌对其他常用抗生素敏感性分布的特征,探讨监测青霉素和红霉素敏感性是否具有代表性意义。方法对2000—2002年每年2～5月北京、上海、广州三家儿童医院门诊就诊(年龄1个月至5岁)的急性上呼吸道感染儿童鼻咽部分离肺炎链球菌,采用纸片扩散法和E-test最小抑菌浓度(MIC)法检测其对8种常用抗生素的敏感性。结果将青霉素敏感性分为R(耐药)、I(中介)和S(敏感),红霉素敏感性分为NS(不敏感)和S(敏感),按青霉素敏感性/红霉素敏感性组合模式可分为6组(没有分离到R/S模式菌株)。R/NS组29·8%(17/57)对头孢曲松不敏感;对头孢呋辛和头孢克洛均不敏感;阿莫西林/克拉维酸不敏感株只出现于R/NS组。I/NS组仅0·03%(8/288)对头孢曲松不敏感;头孢呋辛和头孢克洛不敏感率分别为38·2%(110/288)和52·4%(151/288)。头孢克洛不敏感菌株还出现于I/S组。复方新诺明敏感性主要与红霉素是否敏感有关。氯霉素耐药株在各组分布的差异没有统计学意义。R/NS和I/NS几乎都是联合耐药株,S/S组无联合耐药株。结论不同青霉素和红霉素敏感性组合模式的肺炎链球菌对其他常用抗生素敏感性分布具有各自不同的特点,青霉素和红霉素是肺炎链球菌耐药性监测的代表性药物。     

大环内酯类抗生素对肺炎链球菌儿童株体外抗菌活性

目的了解大环内酯类抗生素对杭州地区肺炎链球菌儿童株的体外抗菌活性。方法对2001年7月至2002年2月浙江大学儿童医院鉴定的100株肺炎链球菌临床株和2002年2月至6月自入托幼儿分离到的53株健康携带株 ,用Kirby_Bauer琼脂扩散法检测其对红霉素、阿奇霉素和克拉霉素3种常用抗生素的耐药性 ,用E_test法检测红霉素的最低抑菌浓度 (MIC)。结果92.8 %的菌株 (142株 )对红霉素耐药 ,敏感株仅7.2 % (11株 ) ;红霉素MIC范围为0.047μg/ml～>256μg/ml,其中MIC>256μg/ml的高水平耐药株达73.9 %(113株)。肺炎链球菌对阿奇霉素和克拉霉素的耐药率均为92.8 % ,与耐红霉素情况完全一致。结论①红霉素能很好地代表大环内酯类抗生素对肺炎链球菌的体外活性 ;②大环内酯类抗生素对肺炎链球菌的体外抗菌活性差 ,不宜作为治疗肺炎链球菌感染的常规用药。     

160株儿童肺炎链球菌分离株的大环内酯类抗生素耐药特性研究

目的　研究 2 0 0 1年春季北京和西安市部分 0～ 5岁急性上呼吸道感染儿童鼻咽部肺炎链球菌分离株对红霉素及新型大环内酯类抗生素耐药特性。方法　使用超细鼻咽拭子从后鼻腔采取分泌物 ,用Optochin纸片做敏感性试验鉴定。采用E test方法及K B纸片扩散法对 16 0株肺炎链球菌分别进行 5种大环内酯类、6种其它相关抗生素敏感性检测。结果　 16 0株肺炎链球菌分离株中 ,90 6 %菌株的红霉素MIC等于或大于 1μg·mL-1为耐药株。在红霉素耐药的肺炎链球菌中 ,仅有 2 8%菌株的红霉素MIC在 1～ 4 μg·mL-1,为低水平耐药 ,97 2 %菌株的红霉素MIC在 16～≥ 2 5 6 μg·mL-1,为高水平耐药 ,其中 98 6 %耐药株的红霉素MIC≥ 2 5 6 μg·mL-1为极重度耐药。分离株对阿奇霉素、克拉霉素、罗红霉素、螺旋霉素耐药率与红霉素相似 ,分别为 90 6 %、89 4 %、88 1%和 88 1%。红霉素耐药表型分析显示 :以MLSB 耐药表型为主 ,占 97 2 % ;M耐药表型株仅为 2 8%。红霉素耐药分离株对克林达霉素、四环素、复方新诺明共同耐药率及多重耐药发生率分别为 96 6 %、97 2 %、85 6 %和 99 3% ,明显高于红霉素敏感组肺炎链球菌的 13 3%、73 3%、2 6 7%和 0。结论　北京和西安两地急性上呼吸道感染儿童鼻咽部肺炎链球菌分离株对红     

5岁以下健康儿童鼻咽部肺炎链球菌的流行病学研究

目的了解武汉地区儿童肺炎链球菌携带率、耐药性、耐药基因及血清型流行状况。方法采集鼻咽拭子,以琼脂稀释法测定肺炎链球菌对12种抗菌药物的最低抑菌浓度,聚合酶链式反应检测红霉素耐药基因,荚膜肿胀试验进行血清学分型。结果武汉地区儿童肺炎链球菌携带率为22．31％（135／605）。存活的133株细菌中,青霉素不敏感肺炎链球菌（PNSSP）发生率为45．9％（61／133）;头孢菌素第一代（头孢氨苄）、二代（头孢克洛）、三代（头孢克肟、头孢泊肟、头孢曲松）敏感率依次为6．0％、45．1％、54．9％、56．4％、88．7％;除1株环丙沙星低耐株外,未发现氟喹诺酮类耐药株。大环内酯类敏感率仅为14．3％～15．8％。在114株红霉素耐药株中,检出ermB基因76株（66．7％）,2株（1．8％）低耐株含有mefA基因,46株（40．4％）同时具有ermB和mefA基因。血清分型涉及17个血清群,主要分布在19、23、6、15和14血清群,7株细菌未能分群。PNSSP分布在19、23、6和未分型血清群。结论武汉地区肺炎链球菌耐药严重,红霉素耐药主要为核糖体修饰（ermB介导）引起。流行血清群以19、23、6为主。     

儿童肺炎链球菌分离株红霉素耐药性与相关耐药基因研究

目的检测儿童肺炎链球菌(SP)红霉素耐药性和相关耐药基因。方法对肺炎儿童进行痰培养,分离、鉴定SP菌株,经红霉素药敏试验检测SP药敏,通过PCR检测红霉素核糖体甲基化酶基因(ermB、ermA/B)、主动外排转运基因(mefA)3种基因表达。结果临床分离的31株SP,29株对红霉素耐药(93.5%),ermB基因阳性12株(38.7%),ermA/B基因阳性19株(61.3%),mefA基因阳性7株(22.6%),24株检出erm或和mef基因(77.4%),其中1株ermA/B、mefA基因表达均为阳性,1株ermB、ermA/B、mefA基因表达均为阳性。结论erm基因在SP有高表达,mef基因也有相当的表达,SP对红霉素具有高度耐药。     

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目的了解新生儿金黄色葡萄球菌(金葡菌)感染的临床特点及其菌株表型。方法对2004-02—2005-06受金葡菌感染的新生儿进行临床资料分析,并用纸片扩散法完成12种常用抗生素的药敏试验,同时用E-test法进行苯唑西林和万古霉素耐药性检测,并对所有菌株采用PCR技术检测mecA基因。结果金葡菌感染的新生儿共35例,年龄为6~28d,男性21例,女性14例。35例感染儿包括肺炎24例,败血症7例,皮下坏疽2例,皮肤蜂窝织炎伴脓肿形成1例,脐炎1例。药敏结果显示97·1%的菌株产生β内酰胺酶而对青霉素G耐药,82·9%的菌株对苯唑西林敏感,MIC50和MIC90分别为0·5μg/mL和4·0μg/mL;对头孢噻肟和头孢曲松的敏感率均为82·9%;对红霉素、四环素、克林霉素、甲氧苄啶-磺胺甲基异口恶唑、氧氟沙星和氯霉素的耐药率分别为54·3%、37·1%、17·1%、14·3%、5·7%和2·9%;所有菌株均对万古霉素和利福平敏感。MecA-PCR结果显示:6株耐苯唑西林株mecA基因均阳性,而标准株ATCC25923和所有敏感株均阴性。结论新生儿金葡菌感染以呼吸道感染为主,该菌对苯唑西林的耐药率不高。     

儿童肺炎链球菌分离株青霉素、红霉素耐药性与耐药相关基因研究

目的了解苏州地区儿童肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae,Sp)临床分离株青霉素、红霉素耐药的状况。方法对呼吸道感染患儿痰标本中分离到的26株Sp进行青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、红霉素E test药敏试验,和与青霉素、红霉素耐药相关的pbp2B、ermB、ermA/B、mefA基因PCR检测,测得pbp2B基因产物进行测序并与SpR6株(青霉素敏感株,登录号:NC003098)序列比较。结果(1)pbp2B基因突变15株(58%),均为点突变,突变类型有A型11株(73%)、B型2株(13%)、C型1株(7%)、D型1株(7%);(2)11株无突变菌中青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟敏感株分别为9株(82%)、10株(91%)、11株(100%)、11株(100%);15株突变菌中青霉素、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟不敏感株分别为13株(87%)、11株(73%)、1株(7%)、1株(7%);11株A型突变株对青霉素均不敏感,10株对二代头孢不敏感;(3)ermB基因阳性9株(35%)、ermA/B基因阳性16株(62%)、mefA基因阳性7株(27%)、erm或(和)mef基因阳性21株(81%);(4)erm或(和)mef基因阳性株红霉素最低抑菌浓度为2～>256mg/L。结论pbp2B基因突变是本地区Sp青霉素耐药机制的主要遗传学基础之一;突变株中,A类突变率最高,表现对青霉素、二代头孢不敏感;ermA、ermB和mefA3种红霉素耐药基因单独或共同表达     

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目的研究北京儿童医院脓疱疮患儿临床分离A组β溶血性链球菌(GAS)及其对抗菌药物的敏感性情况。方法收集北京儿童医院2003—2008年收治的1735例脓疱疮儿童皮损部位分离出的52株GAS菌株,采用琼脂稀释法测定9种抗菌药物的最低抑菌质量浓度(MIC)值;用聚合酶链反应方法对上述菌株进行大环内酯类抗生素耐药基因ermB、ermA和mefA检测以及emm分型情况。结果分离株对四环素及大环内酯类抗生素耐药率均为100%,MIC>256mg/L;对青霉素、头孢拉啶及氧氟沙星的敏感率高达100%。大环内酯类抗生素耐药基因ermB、ermA和mefA和阳性率分别为92.30%、7.70%和0;分离株的emm分型最常见的为emm12.0(53.85%),emm1.0(36.54%)。结论北京儿童医院收治的脓疱疮儿童GAS感染流行菌株对大环内酯类抗生素耐药率很高,主要耐药机制为ermB编码的23SrRNA甲基化酶导致靶位改变,在北京地区青霉素类和头孢菌素类抗生素仍是治疗GAS感染首选药物。     

急性呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌耐药及耐药机制分析

研究急性呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌（HI）耐药及耐药机制;探讨耐β-内酰胺类抗生素耐药基因和可能的耐药基因突变以及由此可能产生的耐药性改变。方法　2007年1月至2008年12月于苏州大学附属儿童医院呼吸科住院的患儿中,符合急性呼吸道感染（ARI）的诊断标准,且深部痰培养流感嗜血杆菌阳性者共135例,采集135株流感嗜血杆菌,采用E-test进行药敏试验,头孢硝噻酚试验检测β-内酰胺酶,分析耐药现状,套式聚全酶链式反应（n-PCR）法进行β-内酰胺酶基因TEM、R0B测定;对所有n-PCR阳性产物进行序列分析,并和基因库中公布的基因序列进行比较,进一步明确耐药机制和可能的突变耐药基因。结果　31.10%的分离株产β-内酰胺酶。流感嗜血杆菌对4种抗生素的体外药敏结果依次为：氨苄西林平均最低抑菌浓度MIC90 32 μg/mL、MIC50 1 μg/mL;氨苄西林/舒巴坦MIC90 2 μg/mL、MIC50 0.75 μg/mL;头孢克洛MIC90 24 μg/mL、MIC50 3 μg/mL;氯霉素MIC90 8 μg/mL、MIC50 0.5 μg/mL。39.3%的HI检测出TEM基因,未检测出ROB基因。53株TEM基因中有15株发生突变,突变基因组β-内酰胺类抗生素MIC高于未发生突变基因组。结论　苏州地区急性呼吸道感染患儿HI对氨苄西林的耐药情况不容乐观,其耐药机制是产生TEM基因并且28.3%TEM基因发生突变,TEM基因及其突变是苏州地区β-内酰胺类抗生素耐药性增高的重要因素。     

B组链球菌的耐药性及红霉素耐药基因检测研究

目的探讨北京和广州地区B组链球菌（GBS）抗生素耐药菌谱及对红霉素耐药机制。方法GBS菌193株,其中140株和47株GBS分别来自北京和广州地区正常妇女阴道拭子标本,6株GBS菌株来自北京地区新生儿感染性肺炎和脑膜炎患儿体液标本中培养分离。应用标准的KB纸片法对临床常用7种抗生素耐药性检测。应用PCR法对102株（包括57株敏感株及45株耐药株）GBS进行红霉素耐药基因ermB、mefA检测。结果193株GBS菌均对青霉素类、头孢菌素类抗生素敏感;但青霉素和氨苄青霉素中介率均为17％;北京地区GBS的红霉素和林可霉素耐药率从1998年到1999年分别从8％增加到16％和从20％增加到28％;广州地区1999年分离的GBS菌株对红霉素和林可霉素耐药率分别为45％和26％,与北京地区1998、1999年分离的GBS菌株的红霉素耐药率比较,差异有统计学意义（P=0．000）。在45株红霉素耐药GBS菌中有40株同时对林可霉素耐药,5株表现为红霉素耐药而林可霉素敏感。20株GBS红霉素耐药仅含有ermB基因;13株红霉素耐药株仅含有mefA基因;同时含有ermB和mefA基因有6株。6株耐药株未能检测到ermB和mefA基因。结论青霉素、氨苄青霉素可作为治疗GBS感染首选药物;头孢菌素类抗生素可作为二线的选择药物。而红霉素和林可霉素作为预防和治疗GBS感染的药物应用价值应重新给予评价。在我国ermB基因介导的核糖体靶位点改变在GBS耐药机制中可能起主要作用。     

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??Abstract??Objective??To investigate antibiotic resistance and mechanism of antibiotic resistance of Haemophilus influenzae ??HI?? in children with acute respiratory tract infection in Suzhou. To determine beta-lactamase genes of Haemophilus influenzae?? possible genetic mutation and the possible relationship between minimal inhibitory concentrations??MICs?? of beta-lactamases antibiotic and genetic mutation. Methods??The susceptibility of 135 clinical isolates of Haemophilus influenzae were calculated using E-tests?? and beta-lactamases of these stratins were detected. Besides?? the beta-lactamases genes were detected by net-polymerase chain reaction ??n-PCR?? followed by DNA sequencing. The sequences of drug resistance genes were compared with the published sequence in GeneBank. Results??The beta-lactamase positive rate of HI was 31.1%. The MIC90 and MIC50 of HI to ampicillin??ampicillin/sulbactam??cefaclor and chloramphenicol were??32 μg/mL??1 μg/mL??????2 μg/mL?? 0.75 μg/mL??????24 μg/mL??3 μg/mL?? and ??8 μg/mL??0.5 μg/mL?? respectively. Among the isolated 135?? TEM genes were detected in 53 HI. Beta-lactamase geneTEM was detected in 39.3%of HI??No ROB gene was detected. About 28.3% of TEM gene had been mutated. The mean minimal inhibitory concentration of beta-lactamases antibiotic in HI that had mutant TEM genes was higher than that of no-mutant TEM gene. Conclusion Ampicillin resistance in HI influenzae isolates from children in this region is challenging??The resistance mechanism of beta-lactamase antibiotics is of production beta-lactamase TEM and 28.3% of TEM gene has been mutated. The production of TEM and its mutation is one of the most important factors that leads to the high resistance to beta-lactamase antibiotics.     

北京地区儿童鼻咽部肺炎链球菌对大环内酯类抗生素耐药的检测

目的 研究北京地区儿童携带肺炎链球菌(SP)对大环内酯类抗生素的耐药特点。方法 对2002～2003年上呼吸道感染儿童鼻咽部200株SP分离株对4种大环内酯类抗生素、青霉素和克林霉素的最低抑菌浓度进行检测;耐药诱导试验分析部分耐药菌株大环内酯类耐药表型;PCR检测红霉素耐药基因ermB和mefA。结果 200株SP中179株对红霉素耐药。红霉素和青霉素的药敏结果无明显关连性。耐红霉素的147株SP中,阿奇霉素、克拉霉素、乙酰螺旋霉素和克林霉素的耐药率分别是100％,100％,95．2％,95．9％。耐药表型以结构型大环内酯类、林可酰胺类和链阳性菌素B耐药表型(cMLS)为主,占红霉素耐药株的95．9％。耐药基因检测中,仅携带ermB基因的菌株为79．6％,同时携带ermB和mefA基因菌株为17．7％,仅携带mefA基因的菌株为2．7％。结论 2002～2003年北京上呼吸道感染患儿携带的SP对红霉素耐药率达89．5％,分离株在对红霉素耐药同时也对其他大环内酯类药物和克林霉素耐药。耐大环内酯SP表型以cMLS为主,基因型以ermB为主。     

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??Abstract??Objective To investigate the genetic structure of Streptococcus pneumoniae serotype 19F isolates from children in Beijing. Methods A total of 130 isolates were identified as serotype 19F among 1033 S. pneumoniae strains collected from 1997 to 2006 and 2010. There were 120 isolates characterized by antibiotic susceptibility?? macrolide resistance gene and multilocus sequence typing??MLST??. Results Among the 120 strains?? only five strains were nonsusceptible to penicilln and the nonsusceptibility rate to cephalosporins increased from 1997 to 2010. There were 119??99.2%?? strains resistant to erythromycin?? 115??96.6%?? carried the ermB gene and 64??53.8%?? carried mefA gene?? 60??50.4%?? carried both genes. All isolates belonged to 31 sequence types?? ST983 was the most prevalent ST?? followed by ST271. From 1997 to 2010?? the percentage of CC271 increased from 14.3% in 1997-1998 to 92% in 2010?? whereas CC983 decreased from 64.3% to 0%. CC271 showed higher nonsuscetibility rate to β-lactam antibiotics than CC983. Conclusion The prevalence of serotype 19F of S.pneumoniae increases from 1997 to 2010 in Beijing. The increase of nonsusceptibility rate to β-lactam antibiotics is associated with the spread of international resistance clone CC271 due to the
selection of antibiotics overuse.     

2003-2004年广州地区儿童肺炎链球菌、流感嗜血杆菌抗生素敏感性调查

目的了解2003-2004年广州地区儿童呼吸道感染常见病原肺炎链球菌和流感嗜血杆菌对常用抗生素的敏感性,以便有效指导临床合理用药和预防.方法对2003-2004年在广州市儿童医院就诊的1565例上呼吸道感染儿童鼻咽分泌物进行培养,分离肺炎链球菌和流感嗜血杆菌;采用纸片扩散法及E-test方法对分离株进行常用抗生素敏感性检测.结果从1565例呼吸道感染儿童鼻咽部分离肺炎链菌球共172株,流感嗜血杆菌484株.172株肺炎链球菌对常用抗生素耐药株数（耐药率）分别为：青霉素55（32.0%）、阿莫西林/克拉维酸19（11.1%）、头孢曲松56（32.6%）、头孢呋辛31（18.1%）、头孢克洛68（39.5%）、红霉素142（82.6%）、四环素135（78.5%）、氯霉素42（24.4%）、复方磺胺甲基异噁唑150（87.2%）、克林霉素119（69.2%）、氧氟沙星5（3.1%）;肺炎链球菌的青霉素不敏感株对β-内酰胺类、红霉素、复方磺胺甲基异噁唑耐药率明显高于青霉素敏感株,且多重耐药率在90%以上.484株流感嗜血杆菌中,143株β-内酰胺酶阳性,产酶率为29.5%,484株流感嗜血杆菌的耐药株数（耐药率）分别为：氨苄西林194（40.1%）,阿莫西林/克拉维酸16（3.4%）、头孢曲松20（4.1%）、头孢呋辛9（1.9%）、头孢克洛27（5.6%）、复方磺胺甲基异噁唑272（56.2%）、四环素252（52.1%）、氯霉素84（17.4%）、阿奇霉素10（2.1%）、氧氟沙星3（0.6%）.结论广州地区儿童呼吸道肺炎链球菌和流感嗜血杆菌耐药形势严峻,与该地区前3年资料比较,肺炎链球菌对青霉素敏感性有所增加,但对头孢曲松耐药性增加,青霉素不敏感株的多重耐药率较高,以红霉素、四环素、复方磺胺甲基异噁唑多重耐药为主要特点.流感嗜血杆菌的产酶率上升,导致菌株对氨苄西林耐药性明显增高,对头孢二、三代抗生素、阿莫西林/克拉维酸、阿奇霉素有较高的敏感性.     

头孢地尼对儿科呼吸道常见致病菌体外抗菌活性的研究

目的探讨头孢地尼对小儿呼吸道常见致病菌的体外抗菌活性。方法E-test法测定头孢地尼对肺炎链球菌等7种细菌共380株的最低抑菌浓度(MIC),并与头孢克洛作对比研究。结果青霉素敏感肺炎链球菌(PSSP)对头孢地尼和头孢克洛均敏感,青霉素耐药肺炎链球菌(PRSP)均耐药,青霉素中介肺炎链球菌(PISP)对头孢地尼敏感率72．0％,头孢克洛为58．0％。不产β内酰胺酶的流感嗜血杆菌(HI)对两者均敏感,但对产β内酰胺酶HI,头孢地尼敏感率85．0％、头孢克洛70．0％,MIC90值头孢地尼(1．5mg/L)明显低于头孢克洛(256．0mg/L)。卡他莫拉菌(MC)、A组链球菌(GAS)和甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA),以及不产超广谱B内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌(E．coli)、肺炎克雷伯菌(k.pn),对头孢地尼抗菌活性均优于头孢克洛。对产ESBLs的菌株,两者均无抗菌活性。结论头孢地尼对PSSP、PISP、HI、GAS、MC、MSSA以及ESBLs(-)k.pn和E．coli均有强大的体外抗菌活性。