心肌缺血及再灌注后心肌钙调蛋白及环磷酸腺苷含量的变化

本文以结扎、松开家兔冠状动脉左室支为缺血/再灌注模型应用放免技术对家兔心肌急性缺血及再灌注后心肌组织钙调蛋白(CaM)和环磷酸腺苷(cAMP)的变化进行了初步观察,同时测定了不同时间缺血及再灌注后心肌组织腺苷酸环化酶(AC)活性变化。     

钙调素在脑缺血与再灌注时含量和分布的变化

本文采用ELISA和免疫胶体金标记电镜技术,研究了蒙古沙土鼠急性脑缺血及再灌注后CaM的含量和分布变化。ELISA测定结果;结扎双侧颈总动脉10分钟后,CaM含量较正常组显著降低(P<0.01),再灌注20分钟,CaM含量较缺血10分钟组显著降低(P<0.01),免疫胶体金电镜观察表明,缺血组和缺血再灌组每个视野胶体金颗粒数明显低于正常组(P<0.01),在缺血神经元突触附近,可见胶体金颗粒明显减少。     

川芎嗪对实验性心肌缺血再灌注损伤中一氧化氮和内皮素的干预

目的:探讨一氧化氮(NO)和内皮素(ET)在心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用及川芎嗪对其的影响。方法:实验兔分为假手术对照组(n=10)、心肌缺血再灌注组(n=10)及心肌缺血再灌注+川芎嗪组(n=10);分别检测缺血前、缺血40min和再灌注20min3个时点的指标变化。检测血浆及心肌组织一氧化氮代谢产物(NOP)含量、测定ET水平、乳酸脱氢酶(LDH)活性,并行心肌电镜观察。结果:心肌缺血40min、再灌注20min血浆NOP明显低于、ET及LDH显著高于假手术对照组,尤以再灌注20min变化显著(均P＜0.01);心肌组织NOP和LDH明显低于、ET显著高于假手术对照组(P＜0.05和P＜0.01);心肌超微结构发生异常改变。川芎嗪可逆转上述指标的异常变化。结论:缺血再灌注导致血管内皮功能紊乱(即NO水平下降和ET水平升高),在MIRI发生发展中起介导作用;川芎嗪通过保护冠脉内皮,提高机体内NO水平和降低机体内ET水平,从而减轻MIRI。     

丹参素对大鼠心肌缺血／再灌注损伤的保护作用

本实验采用Langendorff灌注模型,对心肌缺血/再灌注损伤中氧自由基清除酶系统超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-P_x)和超微结构的变化及丹参素的抗氧化效应进行了观察。随缺血时间的延长,SOD及GSH-P_x的活性逐步下降。当心肌缺血40分钟后富氧再灌注20分钟,SOD的活性仍然继续下降;GSH-P_x的活性明显低于缺血60分钟组,此时超微结构损伤最为严重。预先给丹参素及亚硒酸钠再进行缺血/再灌注,心肌SOD、GSH-P_x活性明显高于单纯缺血/再灌注时,超微结构损伤亦较轻,且丹参素的保护效果优于亚硒酸钠。     

丹参对心肌缺血和再灌注损伤的保护作用

采用在家兔全麻、开胸、自主呼吸和自主心律的条件下,结扎冠脉左室支造成急性心肌缺血模型,进而松开结扎结形成再灌注损伤模型。对心肌缺血和再灌注损伤的组织脂质过氧化物含量和局部血流量变化进行测定,同时辅以心电图监护;以丹参注射液为保护剂观察其作用效果。结果表明,随着缺血时间的延续,心肌脂质过氧化物含量逐渐增加;当缺血60分钟后再灌注30分钟,脂质过氧化物含量仍继续上升,明显高于缺血60分钟组,但与缺血90分钟组比较则无显著差异;其缺血区局部组织血流量再灌注后仅恢复53.2%。给予丹参保护的再灌注组,其缺血区组织脂质过氧化物含量较再灌注损伤组下降56.0%(P<0.005),而局部组织血流量恢复则提高32.0%(P<0.001)。     

心肌缺血—再灌注损伤与心肌去甲肾上腺素的释放

家兔急性开胸实验,结扎冠状动脉左室支35分钟后,去除结扎(再灌注)10分钟,发现心脏功能较单纯结扎组明显降低,再灌注区心肌去甲肾上腺素(NA)含量显著降低,同时伴有组织Ca~( )含量显著升高。测定血钙和组织含水量结果提示,再灌注后心肌Ca~( )含量的升高系由Ca~( )在细胞内的堆积所致。再灌注损伤可能与再灌注过程中心肌组织内源性儿茶酚胺大量释放有关。     

辛伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤后心肌Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:观察辛伐他汀对肾缺血再灌注损伤后心肌组织的影响及其机制。方法:随机将36只大鼠分为假手术组、肾缺血再灌注组和辛伐他汀组,每组12只。后2组用夹闭双侧肾动脉的方法复制肾缺血再灌注损伤模型;辛伐他汀组在造模前给予辛伐他汀(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,持续2周。用生化检查检测血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、心肌组织丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,并用Western blot法检测Bcl-2和Bax的表达水平。结果:与假手术组比,缺血再灌注组SCr、BUN和心肌MDA含量均升高(P0.05),心肌LDH和CK活性增强(P0.05),心肌SOD活性明显下降(P0.05);与缺血再灌注组比较,辛伐他汀组SCr、BUN和心肌MDA的含量降低(P0.05),心肌LDH和CK活性明显减弱(P0.05),而心肌SOD活性增强(P0.05)。与假手术组比较,心肌Bcl-2与Bax的蛋白表达水平在肾缺血再灌注组增多(P0.05);与缺血组相比,Bax表达在辛伐他汀组明显降低,而Bcl-2表达增加(P0.05)。结论:辛伐他汀对肾缺血再灌注后的心肌有保护作用,保护机制可能与辛伐他汀可以消除自由基、升高Bcl-2蛋白表达和降低Bax蛋白表达有一定关系。     

左旋千金藤啶碱对沙土鼠脑缺血纹状体及海马CaMKⅡ活性的影响

目的 研究左旋千金藤啶碱(SPD)对缺血/再灌注纹状体、海马神经元CaM KⅡ活性的影响。方法采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断造成的前脑缺血模型,用放射性32P掺入法测定CaM KⅡ活性。结果 纹状体、海马神经元缺血/再灌注后CaM KⅡ活性明显下降,在缺血前、后腹腔注射SPD可分别使其CaM KⅡ活性明显升高。结论 SPD对缺血/再灌注纹状体、海马神经元CaM KⅡ活性有一定的保护作用。     

缺血预适应对青年与老年大鼠缺血/再灌注心肌氧化应激及线粒体功能的影响

目的:探讨缺血预适应(ischemic preconditioning,IPC)对青年与老年大鼠缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,IR)心肌损伤的影响。方法:雄性3月龄(青年)与20月龄(老年)Wistar大鼠,应用离体心脏灌流方法复制心肌IR与IPC模型。实验分为青年缺血/再灌注(YIR)组、青年缺血预适应(YPC)组、老年缺血再灌注(OIR)组与老年缺血预适应(OPC)组。透射电镜观察心肌及心肌线粒体超微结构变化;TTC染色测定心肌梗死面积;比色法测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附法测定心肌组织硝基化与羰基化蛋白质含量,TUNEL方法检测心肌细胞凋亡;氧电极法测定线粒体呼吸功能及钙诱导的线粒体渗透性转运孔开放情况。结果:与YIR组比较,YPC组心肌梗死面积明显减少,冠脉流出液中LDH活性降低,心肌组织的SOD活性增加,MDA含量降低,心肌硝基化与羰基化蛋白含量降低。电镜下可见YPC组心肌及分离的心肌线粒体膜结构完整、基质致密。YIR组心肌线粒体呼吸控制率与Ⅲ态耗氧量及P/O比值均明显增加,质子漏出减少,钙诱导的线粒体肿胀明显减轻,心肌细胞凋亡率下降。而与OIR组比较,OPC组上述指标均无显著统计学差异。与YPC组比较,OPC组心肌超微结构损伤明显增加,心肌氧化应激水平增加,线粒体呼吸功能下降,心肌细胞凋亡与坏死增多。结论:缺血预适应能够保护青年大鼠心肌缺血/再灌注损伤;而老年大鼠心脏对预适应刺激减敏,导致缺血预适应心肌保护作用钝化,这可能与老龄IPC心脏氧化应激水平增加导致线粒体损伤、细胞凋亡有关。     

碘杂环—65抗大鼠心肌缺血/再灌注损伤的机制探讨

雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组、缺血再灌组、缺血再灌给药组。开胸正压呼吸,结扎左冠状动脉40分钟再灌注20分钟,取左心室前壁左半部分用原子吸收光谱法测定心肌组织内钙含量,取左心室前壁右半部     

大鼠心肌缺血再灌注损伤时粘附分子CD40及CD40配体的表达

目的:探讨粘附分子CD40及CD40配体(CD40L)在心肌缺血再灌注损伤中的表达。方法:采用大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,大鼠分7组:对照组(n=3)、单纯缺血30min、缺血30min再灌注1min、5min、10min、20min和30min组(各组n=6),利用流式细胞技术观察外周血CD40及CD40L的表达,并用免疫组织化学法观察CD40及CD40L在心肌中表达情况。结果:单纯30min缺血组(I_30min)的CD40及CD40L高于对照组(P＜0.05);在不同的再灌注时间中,CD40及CD40L在再灌注1min(R_1min)开始升高,R_5min达高峰,随后开始下降,R_30min达基线,其中R_5min、R_10min的CD40及CD40L比I_30min及对照组高(P＜0.05),免疫组织化学法显示CD40及CD40L在心肌细胞膜上表达,正常心肌细胞膜上表达较弱,损伤心肌细胞膜上表达较强。结论:提示心肌缺血再灌注损伤的发生可能与粘附分子CD40及CD40L的异常表达有关。     

Bioelectrical Impedance May Predict Cell Viability During Ischemia and Reperfusion in Rat Liver

Ischemia and reperfusion (I/R) injury is a major cause of hepatic failure after liver surgery, but no method could monitor or predict it real-time during surgery. We measured bioelectrical impedance (BEI) and cell viability to assess the usefulness of BEI during I/R in rat liver. A 70% partial liver ischemia model was used. BEI was measured at various frequencies. Adenosine triphosphate (ATP) content, and palmitic acid oxidation rate were measured, and histological changes were observed in order to quantify liver cell viability. BEI changed significantly during ischemia at low frequency. In the ischemia group, BEI increased gradually during 60 min of ischemia and had a tendency to plateau thereafter. The ATP content decreased below 20% of the baseline level. In the I/R group, BEI recovered to near baseline level. After 24 hr of reperfusion, the ATP contents decreased to below 50% in 30, 60 and 120 min of ischemia and the palmitic acid metabolic rates decreased to 91%, 78%, and 74%, respectively, compared with normal liver. BEI may be a good tool for monitoring I/R during liver surgery. The liver is relatively tolerant to ischemia, however after reperfusion, liver cells may be damaged depending upon the duration of ischemia.     

心肌缺血／再灌注损伤时相性变化的电子示踪研究

本文以结扎家兔冠状动脉左室支为心肌缺血模型,应用镧电子示踪技术,生物体视学定量分析等方法,观察了心肌缺血不同时间再灌注后细胞膜系及线粒体超微结构以及镧示踪所提示的线粒体的功能变化等特点。结果表明,在心肌缺血20分时,细胞膜通透性升高,镧粒子进入细胞,再灌注时更为严重,即出现再灌注损伤。此时镧粒子多集于肌浆管。随缺血时间延长(30—40分),变化愈趋严重,缺血40分后再灌注,镧粒子大量涌入线粒体。而缺血60分,特别是再灌注时,心肌细胞严重破坏,几乎无完整线粒体,其中亦很少有镧颗粒。说明在此情况下的再灌损伤已属不可逆性。膜通透性的变化是由外及里的,即先肌膜而后为细胞内膜。就线粒体来讲则是先外膜而后内膜。实验结果提出可逆性(早期)再灌注损伤期,及不可逆性再灌注损伤期(晚期)的概念。     

心肌缺血再灌注损伤时细胞核钙含量与核孔复合体通透性的变化

 目的：探讨心肌缺血再灌注损伤时心肌细胞核钙含量与核孔复合体通透性的变化及其相互关系。 方法： 行大鼠心脏手术结扎左冠状动脉30 min后恢复灌注, 分别于再灌注后15、30、60、120和180 min取出心脏，用蔗糖密度梯度离心法分离纯化心肌细胞核，用原子吸收分光光度法测定细胞核钙含量，用荧光标记的钙调素跨核膜转运法测定核孔复合体通透性。 结果： 心肌缺血30 min后再灌注15、30、60、120和180 min时，核钙含量分别较假手术组高1.31、1.55、1.73、1.94和2.14倍；而核孔复合体通透性在再灌注15 min时与假手术组比无明显差异，再灌注30、60、120和180 min时仅较假手术组高1.31、1.38、1.40和1.48倍。 结论： 心肌缺血再灌注损伤时，细胞核钙含量的增加早于核孔复合体通透性的增加,核孔复合体通透性的增加可能仅对核钙超载产生有限的代偿性调节作用。     

基于压力相平面推导的τ和K在评价离体缺血/再灌注大鼠心脏左心室舒张功能中的作用

目的:应用分析和比较基于压力相平面(PPP)推导的心室等容舒张期时间常数)(和室腔僵硬度常数(K)在离体大鼠心脏缺血/再灌注过程中的变化,探讨其在评价左心室舒张功能异常中的价值。方法:采用SD大鼠心肌不同时程缺血/再灌注模型,分别计算出LVEDP、-(dp/dt)max、和K。同时,检测冠脉流出液中的乳酸脱氢酶(LDH),并进行心肌电镜观察。结果:在再灌注过程中,在各缺血组均明显高于空白对照组(P0.05),K在各缺血组均明显低于空白对照组(P0.05);而且,随着缺血时间延长,更高,K更低(P0.05)。除了缺血15min组,其余各组LDH含量在再灌注10min和20min时均高于空白对照组(P0.05);缺血45min组和缺血60min组LDH含量在再灌注10min和20min时均高于缺血30min组(P0.05)。随着缺血时间延长,心肌超微结构发生异常改变。结论:基于PPP推导的和K可以作为定量评价离体大鼠心脏缺血/再灌注过程中的左心室舒张功能的指标,还可以反映缺血/再灌注损伤的严重程度。     

大鼠全脑缺血再灌后,丙二醛及超氧化物歧化酶活性的变化

大鼠全脑缺血30分钟再灌5分钟,脑组织丙二醛(MDA)含量显著高于对照组,再灌15分钟达高峰;同时脑组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性在全脑缺血期下降,提示脂质过氧化主要发生于全脑缺血再灌注早期。     

甘氨酰谷氨酰胺在大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤中的保护作用研究

目的： 研究甘氨酰谷氨酰胺对缺血再灌注大鼠离体心脏的保护作用。方法：应用Langendorff离体心脏灌注系统建立心肌缺血再灌注模型。30只SD雄性大鼠随机分为正常对照组(control)、甘氨酰谷氨酰胺对照组(Gly-Gln)、缺血再灌注组(I/R)、缺血/再灌注+甘氨酰谷氨酰胺组(I/R+ Gly-Gln)。I/R组及I/R+ Gly-Gln组分别灌注30 min后,全心停灌20 min,再灌注40 min,I/R+ Gly-Gln组于再灌注时在灌流液中加入Gly-Gln;正常对照组连续灌流90 min,Gly-Gln对照组灌流液中加入Gly-Gln。记录各组灌注时,左室舒张末压(LVEDP)、左室发展压(LVDP)、左室压力最大变化速率(±dp/dtmax)、心率(HR)及心肌细胞单相动作电位(MAP);同时在相应的时点分别测定冠脉流出液中的乳酸脱氢酶（LDH)、肌酸激酶(CK)活性。结果：离体大鼠心脏缺血20min,再灌注40 min,导致严重的心功能抑制,表现为LVEDP升高,LVDP、±dp/dtmax降低;再灌注液中加入Gly-Gln后,LVEDP降低,LVDP、±dp/dtmax明显升高（P<0.01)。I/R+ Gly-Gln组冠脉流出液中LDH、CK活性明显低于I/R组(均P<0.01)。结论： Gly-Gln能有效减轻缺血再灌注引起的左室功能下降,减少心肌细胞LDH、CK的释出,表明Gly-Gln对缺血再灌注损伤的大鼠离体心脏具有保护作用。     

Effects of hypothermia on blood flow and neural activity in rabbit spinal cord during postischemic reperfusion

The effects of hypothermia on blood flow and neural activity were investigated in rabbit spinal cord during the acute phase of ischemia/reperfusion. Rabbits were exposed to ischemia for 10 or 40 min by occluding the abdominal aorta, using a balloon catheter. The body temperature was maintained either at 38 degrees C (normothermia) or 34 degrees C (hypothermia). Hyperperfusion was observed within 10 min after the cessation of ischemia in all rabbits exposed to ischemia. The magnitude of hyperperfusion in spinal cord blood flow (SCBF) was not significantly different between the 10 and 40 min ischemia rabbits, but the time for 50% recovery from the hyperperfusion was longer in the 40 min ischemia group (26.1 +/- 2.5 min) than in the 10 min group (15.1 +/- 2.1 min). The amplitude of evoked spinal cord potential decreased during ischemia and recovered to the baseline level during 8 h of reperfusion in the 10 min ischemia group. However, in the 40 min ischemia group, the amplitude was 40 +/- 8% of the baseline value after 8 h of reperfusion. Hypothermia prevented the delay of recovery from hyperperfusion and the reduction of evoked spinal cord potential. These results suggest that hypothermia plays a beneficial role in protecting tissue injury in the acute phase of ischemia/reperfusion in the spinal cord by shortening the time for recovery from postischemic hyperperfusion.     

肢体缺血再灌注损伤对大鼠肠系膜微循环和血液流变性的变化及意义

目的研究大鼠肢体缺血再灌注损伤时肠系膜微循环和血液流变性的变化，并探讨其意义。方法用BI-2000医学图像分析系统对肢体缺血再灌注大鼠的肠系膜微循环进行观察，大鼠随机分为6组（每组10只），在肢体缺血前（Control组），缺血4h（Ⅰ组），再灌注20min（IP,．20组），再灌注60min（IR60组），再灌注120min（IR120组），再灌注200min（IR200组）时观察和记录肠系膜微循环改变，并测定血液流变学指标并于上述各时间点分别测定各组动物血液流变学指标及前列环素（Pros—tacyclin，PGI2）水平、血栓素A2（Thromboxane A2，TXA2）水平、前列环素／血栓素A2比值（PG12／TXA2）。结果①与Control组比较，IR20组、IR60组大鼠肠系膜微动脉和微静脉管径缩小（P〈0．01或P〈0．05）；IR120组、IR200组大鼠肠系膜微动脉和微静脉管径扩大（P〈0．01或P〈0．05）；Ⅰ组变化差异无显著性（P〉0．05）。②与Control组比较，IR20组、IR60组、IR120组、IR200组大鼠肠系膜微动脉和微静脉血流速度依次减慢（P〈0．01）；Ⅰ组变化差异无显著性（P〉0．05）。③再灌注期，白细胞黏附聚集、白微栓及管周出血增多；血浆黏度、全血低切还原黏度（1s^-1）、全血高切还原黏度（200s^-1）、红细胞比容、红细胞聚集指数、血沉方程K值、红细胞刚性指数等指标增高，红细胞变形指数降低。血浆中PGI2、TXA2含量均于再灌注期先升高后降低，但PGI2／TXA2比值减小。结论大鼠肢体IR损伤时存在肠系膜微循环障碍和血液流变性异常，其发生可能与血管内皮的功能受损，PGI2／TXA2水平的平衡失调有重要关系。