培养液中不同浓度的小牛血清对前列腺癌细胞增殖的影响

目的培养液中不同浓度的小牛血清对前列腺癌细胞增殖的影响.方法用含有不同浓度小牛血清的细胞培养液培养人前列腺癌细胞系(PC-3)和人雄激素非依赖型前列腺癌细胞系(PC-3M),培养3天后,进行细胞记数并用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测上清液中血管生成素的含量.结果(1)不同浓度的小牛血清对前列腺癌的增殖有不同的影响,浓度越高增殖速度越快;(2)上清中的血管生成素与细胞增殖结果呈正相关.结论培养液中血清含量高细胞的增殖速度快;外源血管生成素的缺乏能够刺激细胞分泌更多的血管生成素来维持细胞的增长.     

抗癌药对培养的人盲肠未分化腺癌细胞的即时杀伤作用

用氟脲嘧啶等4种抗癌药物短时间作用于体外培养的人盲肠来分化腺癌(HCe-8693)细胞系,初步观察了药物对该细胞生长、核分裂指数及~3H-TdR掺入DNA的影响。以期选择较有效的抗癌药物作为大肠癌手术病人腹腔冲洗液。材料与方法材料细胞采用本所新建立的HCe-8693细胞系。培养液为含20％小牛血清的日产RPMl-1640,每ml培养液中含青霉素100 U、链霉素100μg、氢化可的松 10μg、胰岛素0.01 U,pH为6.8～7.0。~3H-TdR是北京原子能所产品,比活性为27.2 Ci/     

酵母菌污染的S180腹水瘤细胞株的抢救

细胞培养是现代医学研究的一项最基本的技术和重要手段。肿瘤方面的研究工作离不开细胞培养技术。细胞在体外传代培养过程中,虽然在超净台操作但有时操作过程较长,人为污染的因素可能发生,再加上所用的小牛血清和培养液又是微生物很好的滋生条件,所以有时会发生微生物污染。尤其酵母菌和霉菌的污染     

人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCRγδ抗体扩增及其培养和保存的条件

目的:比较人外周血γδ T细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件。方法：分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性antiTCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI 1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδ T细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδ T细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶（lacate dehydrogenase,LDH）法检测γδ T细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用。结果：添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI 1640培养液对γδ T细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液。可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδ T细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδ T细胞受体（T cell receptor,TCR）库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性。这些γδ T细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4 ℃条件下保存12 h,细胞存活率仍达95%以上。结论：可溶性antiTCR γδ抗体和含有人AB血浆的RPMI 1640培养液可以用于人外周血γδ T细胞的体外扩增,扩增得到的γδ T细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好。     

人外周血γδ T细胞的可溶性anti-TCR γδ抗体扩增及其培养和保存的条件

目的:比较人外周血γδ T细胞不同的制备方法,摸索适于临床应用的培养和保存条件.方法:分离人外周血单个核细胞,分别以固相化和可溶性anti-TCRγδ抗体进行刺激,以添加小牛血清或人AB血浆的RPMI 1640培养液或AIM V无血清培养液进行培养,采用锥虫蓝染色法检测γδ T细胞存活率,采用免疫荧光染色法考察γδ T细胞的纯度和亚型,采用乳酸脱氢酶(lacate dehydrogenase,LDH)法检测γδ T细胞对不同肿瘤细胞系的杀伤作用.结果:添加15%小牛血清和添加5%人AB血浆的RPMI 1640培养液对γδ T细胞的培养效果接近,均优于AIM V无血清培养液.可溶性抗体与固相化抗体扩增外周血γδ T细胞的效果相似;可溶性抗体扩增的γδ T细胞受体(T cell receptor,TCR)库容完整,同时具有TCR Vδ1和Vδ2两种亚型;对肺癌、肝癌和卵巢癌细胞系均有体外杀伤活性.这些γδ T细胞在含1%人AB血浆或0.25%人血白蛋白的生理盐水中、4 ℃条件下保存12 h,细胞存活率仍达95%以上.结论:可溶性anti-TCR γδ抗体和含有人AB血浆的RPMI 1640培养液可以用于人外周血γδ T细胞的体外扩增,扩增得到的γδ T细胞在含有血浆或白蛋白的生理盐水中稳定性较好.     

榄香烯乳对体外培养人肺癌细胞株超微结构的影响

榄香烯乳(Elemene emulsion)是从中药温莪术(Gurcurma Wenyujin Y.HCHEN)的挥发油中提取的抗癌活性成分,经乳化处理而制成的乳剂注射液。体内、体外实验研究均证实该药对肿瘤细胞有直接及间接的抑制作用。临床上显示对多种肿瘤有效,并能改善病人症状,提高生活质量。为进一步了解榄香烯乳的作用机理,我们从超微结构上观察了其对人肺癌细胞株的影响。 1 材料与方法 1.1 细胞培养 选取体外人小细胞肺癌细胞株H128、SPC,人肺腺癌细胞株Anip-937、A549、Spc-A1,在含15％小牛血清的RPMI-1640培养液中常规培养传代。     

应用人癌性胸水上清液替代牛血清培养肿瘤细胞的探讨

在人癌性胸腹水中除含有肿瘤细胞外,还含有大量的淋巴细胞及其它组织细胞。这说明胸腹水中有许多能维持细胞生长,刺激细胞增殖的因素。在目前的组织培养中一般采用培养液中加10～20％的小牛血清,因血清来源不同,效果也差别较大,且价格较高。我们采用来源方便的临床病人的癌性     

冰茶栓含药血清诱导人胃癌SCC-7901细胞凋亡

[目的]观察冰茶栓含药血清对体外培养的胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用。[方法]通过血清药理学的方法制备冰茶栓含药血清。将冰茶栓含药血清与体外培养的人胃癌SGC-7901细胞共同培养48h后，应用光学显微镜观察细胞形态的变化：用DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段的梯状条带：用流式细胞术检测凋亡峰（亚G1峰）来分析研究冰荼栓含药血清诱导的细胞凋亡。[结果]经过冰荼栓含药血清作用后，SGC-7901细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变；DNA琼脂糖凝胶电泳有特异性梯状条带出现；流式细胞仪检测出现凋亡峰，并显示凋亡率为27．44％，而空白血清组凋亡率仅为4．71％。[结论]冰茶栓含药血清可诱导胃癌细胞SGC-7901发生凋亡，为冰茶栓临床抗胃癌治疗提供实验依据。     

大鼠卵巢颗粒细胞的原代培养与鉴定

背景与目的： 探讨大鼠卵巢高纯度颗粒细胞培养及鉴定的方法,建立一种简便、稳定的细胞模型。 材料与方法： 选用SD雌性大鼠(21～25 d),皮下注射孕马血清促性腺激素(PMSG),48 h后用颈椎脱臼法处死,剖取双侧卵巢,采用机械分离方法释放卵巢颗粒细胞,0.25％胰蛋白酶消化结合低速离心分离细胞,用含15％胎牛血清的DMEM/F12培养基,置于37 ℃,5％ CO2培养箱培养。以HE染色和卵泡刺激素受体(FSHR)免疫组化染色对所培养的卵巢颗粒细胞进行鉴定,用MTT法绘制细胞生长曲线,并检测细胞培养液雌二醇(E2)和孕酮(P)的分泌量。 结果： 分离培养的卵巢颗粒细胞存活率>90％,细胞纯度达到95％以上;体外培养的颗粒细胞对数生长期为48～96 h;颗粒细胞具有正常的分泌雌激素功能,在培养24 h细胞培养液中E2和P的分泌量分别为(10.36±15.89) pg/ml和(77.91± 17.24) pg/ml。 结论： 采用机械分离法结合胰蛋白酶消化及低速离心法分离培养的卵巢颗粒细胞纯度高、活性好,用FSHR表达染色鉴定颗粒细胞是一种简便快速的方法。     

人肠癌细胞系SIC-8101的建立及其生物学特征的初步观察

本细胞系SIC-8101是从1例人肠癌手术组织培养而建成的。培养液RPMI-1640内含40％小牛血清及适量抗菌素、胰岛素和葡萄糖。小牛血清最好选用无溶血配制培养液,Hank氏液及其他试剂所用水均为三蒸馏水。培液pH维持在7.0～71.2。细胞形态为多边形细胞。细胞传代后,培养3～4天,细胞的总分裂指数约50％左右,其中异常分裂指数在20％以上。染色体数目的众数为60～64占总数的77％。细胞的异种移杭长瘤率高。皮下肿块经切片检查均证实为恶性肿瘤、细胞呈典型巢状排列伴腺管并侵入肌层。上述本系细胞特征与手术切除标本十分相似。     

舒肝凉血方与三苯氧胺合用对人乳腺癌细胞MCF-7生长及ER表达影响

[目的]了解舒肝凉血方与三苯氧胺合用对体外培养的雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞MCF-7的生长及雌激素受体表达的影响.[方法]人乳腺癌细胞MCF-7分别加入终浓度20%的含药血清培养液,孵育24、48、72h,MTT法检测各组含药血清对细胞的生长抑制效应.MCF-7细胞加入20%的含药血清培养液,共同孵育48h,提取细胞蛋白质及总RNA,用Western blot法检测各组细胞中雌激素受体α表达,RT-PCR法检测各组细胞ERα mRNA的表达水平.[结果]MTT结果显示,三苯氧胺、中药、三苯氧胺 中药均可抑制MCF-7细胞的体外生长,且有时间依赖性,三苯氧胺加中药组抑制作用最强.采用RT-PCR检测到三苯氧胺组、中药组、三苯氧胺 中药组的ERαmRNA表达略低于对照组,统计学分析差异无显著性.Westem blot结果显示中药组ERα蛋白表达下调,三苯氧胺组及三苯氧胺 中药组的ERα蛋白表达上调.[结论]中药舒肝凉血方与三苯氧胺合用有协同效应,抑制乳腺癌MCF-7细胞的体外生长,并使ERα蛋白的表达上调.     

人脑胶质瘤组织中分离与培养肿瘤干细胞

目的 从胶质瘤组织中培养、分离肿瘤干细胞,并初步探讨其生物学特性。方法采集8例人脑胶质瘤手术标本,剪碎、胰酶消化,滤网过滤收集细胞。淋巴细胞分离液除去其中的红细胞,用含EGF、LIF和bFGF的无血清培养液培养,形成细胞球体后经免疫磁珠分离获取CD133^＋细胞,用有限稀释法继续在上述无血清培养基中培养得到肿瘤细胞球后连续传代培养。取第5代肿瘤干细胞,用含10％FBS培养液诱导分化。分化前后用Nestin、MAP2、GFAP免疫细胞化学染色检测肿瘤干细胞及其分化细胞的相应标志物。结果在1例间变性星形细胞、室管膜细胞混合瘤中克隆到了CD133^＋细胞,这些细胞在体外培养时,能稳定维持于球形生长状态（3个月,14代）,在适合的环境中随时能自我更新和增殖,并分化成MAP2^＋的瘤性神经元和GFAP^＋的瘤性胶质细胞,而CD133^-细胞则无此特性。结论在胶质瘤组织中有肿瘤干细胞存在,这些细胞在体外能长期培养和传代,可为进一步研究胶质瘤的细胞生物学和分子生物学特征开拓新途径。     

arresten在CHO细胞的表达及其生物学效应

目的 初步探讨血管生成抑制因子arresten在中国仓鼠卵巢细胞（CHO）中的表达及其生物学效应。方法 用脂质体转染法将真核表达载体pSecTag-arresten导入CHO,抗生素Zeocin筛选获得阳性克隆。RT—PCR检测arresten在mRNA水平的表达,Western blot检测arresten在蛋白水平的表达。将人脐静脉内皮细胞（huvec）分为加DMEM培养组、加SFX无血清培养基培养组及加含arreten的上清培养液组,TransweH小室检测arresten对huvec细胞迁移的影响,Mamgel胶体外管腔生成试验检测arresten对huvec细胞血管形成能力的影响。结果 RT—PCR和Western blot检测显示,arresten在mRNA水平与蛋白水平均有表达。迁移抑制曲线显示,含arresten组的迁移抑制率明显高于对照组（P〈0．05）。加DMEM培养组、加SFX无血清培养基培养组和加含arresten的上清培养液组细胞形成的血管腔分别为16±2、13±1和7±2个,加含arresten的上清培养液组显著低于其他两组（P〈0．05）。提示arresten对huvec细胞的迁移和血管形成具有抑制作用。结论成功构建arresten的真核表达体系,并发现arresten因子可抑制huvec细胞迁移和管腔形成,这可能是其抑制血管生成的途径之一。     

肺癌细胞分泌蛋白特异性抗体检测

目的研究肺癌患者血清中是否存在肺癌细胞分泌蛋白的特异性抗体。方法收集34例非小细胞肺癌患者血清、12例小细胞肺癌肺癌患者血清及15例健康对照者血清。收集A549细胞及HBE细胞培养的培养液上清液，同时收集胎牛血清培养液做对照；进行蛋白SDS—PAGE分离及电转膜。用肺癌患者及健康对照者的血清作第一抗体进行蛋白印迹检测。只与A549培养液蛋白样品有反应条带，而与HBE及对照无反应即认为是蛋白印迹阳性。结果在分子量约为30kD的蛋白条带处，有61．8％（21／34）的非小细胞肺癌患者血清中存在分泌蛋白的抗体，小细胞肺癌患者（0／12）及健康对照者血清中未发现阳性条带（0／15）。结论非小细胞肺癌患者血清中存在分子量约为30kD的A549分泌蛋白特异性抗体。     

人体胃腺癌细胞株 SGC—7901的培养及其特征

本细胞株SGC—7901是从一例胃癌患者外科手术切除标本中获得的转移淋巴结,在离体条件下应用静置培养而建成的。培养液用RPMI—1640内含40％小牛血清,并加适量抗菌素,胰岛素和萄葡糖。所用小牛血清选用少溶血或无溶血者配制培养液,Hank氏液及其他试剂所用水均为三蒸馏水。培液pH维持在6.8～7.0范围内。细胞形态为上皮性。在传代后4天时,正常和异常有丝分裂指数高达55‰,中期分裂相多于其他各期。染色体主流数为不足三倍体值。细胞的异种移植长瘤率高。接种4只小鼠都见肿瘤生长,细胞是多边形,大小不一,部分细胞内纤维组织包围成巢可见到典型的腺癌结构。上述本株细胞特征与手术切除标本十分相似,具有胃腺癌特征,本株细胞肯定为胃癌细胞。     

保尔佳抑制体外培养人肝癌细胞的生长

保尔佳是从动物脾脏中提取的活性肽,为证明其直接抗肿瘤细胞生长作用,我们观察了人肝癌细胞株在含保尔佳培养液中的生长情况。１　材料与方法１．１　材料人肝癌细胞株ＨＣＣ－９２０４和ＳＭＭＣ－７７２１由第四军医大学病理教研室提供。对照组为含１０％小牛血清的ＲＰＭＩ－１６４０培养液,实验组另加入３０μｇ／ｍｌ的保尔佳。１．２　噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法和流式细胞术（ＦＣＭ）获取对数生长期人肝癌细胞制成１×１０４／ｍｌ浓度的细胞悬液,按１０００个／孔的密度接种于２４孔培养板上,过夜后细胞换液,加入实验组和对照组…     

顺铂诱导人肝癌细胞凋亡机理研究

顺铂是多种化疗方案的核心药物,在对人卵巢癌细胞和大鼠肝癌细胞的研究中,发现其具有诱导凋亡的作用。本实验从细胞形态、ＤＮＡ裂解片段、细胞周期、ＤＮＡ断裂点末端标记,凋亡相关基因观察顺铂诱导人肝癌细胞凋亡的作用机理。1　材料与方法1.1　细胞培养及药物人肝癌细胞ＳＭＭＣ-7721,引自中国科学院上海细胞生物学研究所细胞库。在含10%小牛血清的ＲＰＭＩ-1640培养基(Ｇｉｂｃｏ产品),37℃,5%ＣＯ2条件下培养。顺氯氨铂(ｃｉｓｐｌａｔｉｎ,ＤＤＰ齐鲁制药厂出品,批号:960601),用含10%正常大鼠血清的ＲＰＭＩ-1640培养液配制,ＤＤＰ终…     

非小细胞肺癌分泌蛋白的蛋白质组学研究

背景与目的:癌细胞分泌蛋白是潜在的血清标志物,而且对肿瘤的早期筛选也具有重要意义。因此,系统、全面地研究肿瘤细胞分泌蛋白对于肿瘤血清标志物的筛选具有重要意义。本研究旨在鉴定肺癌细胞分泌蛋白,为肺癌血清标志物筛选提供实验依据。方法:用含胎牛血清的RPMI-1640培养液培养非小细胞肺癌细胞系A549细胞,收集A549细胞培养液中的蛋白及胎牛血清培养液中的蛋白(对照)进行蛋白双向电泳,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)及生物信息学鉴定A549凝胶上特有的蛋白质点。筛选出人属的蛋白质点后,应用RT-PCR方法检测其在肺癌组织及配对远处肺组织中的表达差异;并检测培养液及血清中锰-超氧化物歧化酶(manganesesuperoxidedismutase,Mn-SOD)水平。结果:鉴定出人属的蛋白质点14个,包括肌动蛋白、!烯醇酶(alphaenolase,ENO1)、Mn-SOD、谷胱苷肽S转移酶P(glutathioneS-transferaseP,GSTP1-1)、二氢二醇脱氢酶(dihydrodioldehydrogenase,DDH)、磷酸甘油酸变位酶1(phosphoglyceratemutase1,PGAM1)、葡萄糖依赖性胰岛素释放肽受体(glucose-dependentinsulinotropicproteinreceptor,GIPR)、肽基脯氨基顺反异构酶(peptidyl-prolylcis-transisomeraseA,PPIA)、磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidylethanolaminebindingprotein,PEBP)、蛋白基因产物9.5(ubiquitincarboxyl-terminalhydrolaseisozymeL1,PGP9.5)、peroxiredoxin1(PDX1)、galectin-1及专利蛋白WO0222660等。RT-PCR检测示ENO1、DDH、PEBP、PGP9.5、PDX1、PGAM1、PPIA在肺癌组织中高表达。酶活性检测发现A549培养液中存在Mn-SOD,且发现非小细胞肺癌患者血清中有高水平的Mn-SOD。结论:本研究首次对非小细胞肺癌细胞的分泌蛋白进行了鉴定;发现多种高表达的非小细胞肺癌分泌蛋白基因,其中首次发现ENO1及PEBP基因在非小细胞肺癌中高表达;Mn-SOD是非小细胞肺癌的分泌型血清标志物。该研究为非小细胞肺癌血清标志物的筛选提供了新的方法和候选分子。     

化疗药物体外药敏试验（MTT分析法）

目前,MTT分析法已被用于细胞系筛选新抗肿瘤药物,并正式用于临床.我们用MTT分析法对26例人肿瘤标本进行了化疗药物的体外药敏试验,探讨其临床应用的可能性.1 材料与方法1.1 主要试剂与仪器完全培养液 RPMI 1640培养液(美国GIBCO产品),含20%小牛血清(北京军事医学科学院),青霉素100u/ml,链霉素100μg/ml.清洗液Hanks液 青霉素、链霉素各500u/ml.消化液 0.25%胶原酶(Ⅰ型,sigma产品) 0.002%DNA酶(Fluka产品).     

改良鱼精蛋白-脂质体-寡聚核苷酸复合体法转染卵巢癌SKOV3细胞

目的:优化鱼精蛋白-脂质体-寡聚核苷酸(oligodeoxynuleotides,ODN)复合体(1iposome-protamine-ODN,LPD)法以提高SKOV3细胞的转染效率,并探讨该转染法对细胞体外增殖能力的影响.方法:参照文献设计核转录因子-κB(NF-κB)诱捕物ODN和对照物Scrambled ODN,并用FITC标记.LPD表面 /-电荷比例设计为1,2,4,6,并按转染液中是否含有小牛血清分成2组.用荧光光度计、流式细胞仪测定转染效率.用MTT法观察LPD法对SKOV3细胞在体外增殖的影响.结果:SKOV3细胞经LPD法转染, /-电荷比例为4时转染效率最高,达96.41%,而无鱼精蛋白-脂质体的裸露ODN细胞转染效率为12.87%,两者差异有统计学上的高度显著性意义.培养液中10%小牛血清对转染效率无明显影响.结论:适宜电荷比例的LPD法是一种不受血清影响的高效率转染方法,有望用于体内转染.