RNA干扰及其抗病毒作用

RNA干扰 (RNAi)是一种新发现的通过 ds RNA介导的特异同源靶基因沉默途径。 RNAi主要包括两个步骤 :RNase 样核酸酶切割 ds RNA而生成 2 1- 2 3nt的 si RNA和 si RNA引导 RNA诱导的沉默复合体 (RISC)降解同源性靶基因 m RNA。在某些生物体中 RNAi具有放大效应。通过将 - 2 1nt si RNA导入哺乳动物细胞的 RNAi技术不仅可避免非特异干扰素反应 ,更重要的是还可介导序列特异的基因沉默。最近将 RNAi应用于许多病毒性疾病的治疗研究均取得了显著的基因沉默效果 ,预示 RNAi有望成为一种预防、治疗病毒性疾病的新手段。     

RNA干扰及其在医学研究中应用的进展

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的,序列特异的基因沉默现象。小干扰RNA(siRNA)是RNAi作用中的效应分子。RNAi技术作为新兴的基因阻断技术具有明显优势,已经广泛地应用于基因功能研究、抗病毒感染和抗肿瘤等热门领域。现就RNAi作用机制、siRNA的制备、设计及RNAi技术在医学研究中应用做一综述。     

RNA干涉技术在临床医学中的研究进展

RNA干涉(RNA interference,RNAi)是由双链RNA(double strand RNA,dsRNA)引起的转录后基因沉默机制,具有序列特异性和高效性,RNAi作为一门新的基因阻断技术,在临床医学研究及基因治疗中具有广阔的应用前景。本文对RNAi作用机制以及在疾病发病机制及治疗方面的研究进展综述如下。     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究进展

RNA干扰(RNAi)技术是利用双链RNA,高效、特异性降解细胞内同源信使RNA,从而阻断特定基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型。与反义寡聚核苷酸技术相比,RNAi技术具有更高的特异性,是更有效的方法。目前,RNAi技术是肿瘤基因治疗领域的一个热点技术,它抑制癌基因表达及肿瘤血管生成,沉默细胞凋亡相关基因、肿瘤转移相关基因及肿瘤耐药相关基因,在肿瘤基因治疗领域显示出广阔的应用前景。     

RNAi在肿瘤中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的基因沉默(genesilencing)。在此过程中,与双链RNA有同源序列的信使RNA(mRNA)被降解,从而抑制了该基因的表达。因RNAi所致的基因沉默发生在转录后水平,所以被称为转录后基因沉默(post transcrip     

RNA干扰技术在肿瘤基因治疗中的研究现状

RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术是利用双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),高效、特异性降解细胞内同源信使RNA(messenger RNA,mRNA),从而阻断特定基因表达,使细胞出现靶基因缺失的表型.1998年Fire等[1]首次应用RNAi技术将dsRNA正义链与反义链的混合物注入线虫体内,结果发现注入dsRNA比单独注入单链RNA引起的基因沉默要强得多,并可导致子一代同源基因的沉默.     

RNA干扰与呼吸系统疾病的治疗

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA介导的由特定酶参与的特异性基因沉默现象,它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。RNAi作为一种强大的基因沉默技术,具有高效性和高特异性等特点,被广泛应用于生物医学等各个研究领域,其在呼吸系统疾病的治疗研究方面也取得了很多突破性的进展,广泛用于病毒感染、肺癌、哮喘等疾病的分子生物学机制的研究与治疗。本文对RNAi技术的发现、作用机制及在呼吸系统疾病治疗上的应用进行了综述。     

siRNAs介导的基因沉默技术和相关应用的研究进展

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导的、序列特异的转录后基因沉默机制,是一古老的细胞反应通路,其在抵抗病毒感染、抑制转座子活动、调控内源性基因表达等方面发挥重要作用.近年来,短链RNA干扰(siRNAs)已成功地应用于哺乳动物中,该文就其介导的基因沉默技术和相关应用的研究进展进行综述.     

RNA干扰沉默EZH2基因对人膀胱癌EJ细胞增殖的影响

目的:研究RNA干扰沉默EZH2基因对人膀胱癌EJ细胞周期和增殖的影响.方法:体外构建EZH2基因的shRNA的表达载体,Lipofectamin 2000介导转染膀胱癌EJ细胞,采用RT-PCR和Western Blot方法检测特异性shRNA对EZH2基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shRNA对细胞增殖的作用;应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变.结果:EZH2基因的shRNA表达载体有效下调EZH2基因的表达(P<0.05).与对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时引起细胞G1期阻滞,RNA干扰后,G1期细胞增加[(84.0±8.7)% vs (52.0±6.8)%, P<0.05],S期细胞减少[(11.0±1.1)% vs (43.0±4.9)%, P<0.05].结论:EZH2基因有望成为应用RNAi技术探索膀胱癌基因治疗的潜在靶基因.     

RNA干扰技术及其在椎间盘退变研究中的进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来发展起来的一种新兴的基因沉默技术,它是由双链RNA介导的靶向基因序列特异性转录后的沉默机制.RNA干扰序列特异性的抑制效应较反义DNA、抗体封闭技术等传统基因调节方法 有着明显的优势.在哺乳动物细胞中,RNAi可由21～25个核苷酸长度的小干扰RNA(sm...     

RNA干扰在肾间质纤维化研究中的应用

肾间质纤维化(RIF)是所有慢性进行性肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同形态学特点。RNA干扰(RNAi)是近年发展起来的一种新兴基因沉默技术,它是由双链RNA介导的靶向基因序列特异性转录后沉默机制。目前RNAi技术已广泛应用于基因功能研究及疾病治疗,在RIF的疾病发生机制方面也取得了一些进展,现综述如下。     

长链非编码RNA HOTAIR的信号通路、作用机制及与消化系统肿瘤的关系

长链非编码RNA（LncRNA）广泛参与机体生理和病理过程。其中,HOX转录反义RNA（HOTAIR）由HOXC基因座的反义链转录,却主要调控HOXD基因。HOTAIR能引导多梳抑制复合体2（PRC2）和赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（LSDI）复合体靶向特定目标基因,使组蛋白H3第27位赖氨酸三甲基化（H3K27me3）和组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化（H3K4me2）,引起染色体状态重编程,从而使染色体封闭,继而导致靶基因沉默。HOTAIR与人类多种肿瘤如肝细胞癌、胰腺癌、胃肠道间质瘤和大肠癌等的发生、发展、复发以及转移有着相关性,有望成为相关肿瘤的预测指标和新的治疗靶点。该文阐述了HOTAIR的可能作用机制及其信号通路,并总结了其与上述各类肿瘤关系研究的最新进展。     

RNA干扰技术在治疗系统性红斑狼疮中的应用

系统性红斑狼疮是典型的自身免疫性疾病,免疫系统的多种要素均可能成为狼疮治疗的靶点。RNA干扰是一种序列特异的转录后基因沉默,是一项新兴的基因阻断技术,其作用相当于基因剔除,导致相应基因的表型缺失。同治疗肿瘤一样,对免疫系统疾病的治疗也在不断寻找新的方法,可以避免传统药物治疗的不良反应,更精确地直达治疗靶点,最大程度地保护健康的细胞或组织。小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）成为治疗系统性红斑狼疮的新方法、新靶点,在免疫系统疾病的诊断治疗中,siRNA具有广阔的应用前景。     

RNA干扰技术及其在心脑血管疾病中的应用

RNA干扰（RNAi）是外源和内源性双链RNA在生物体内诱导同源靶基因的mRNA特异性降解,导致转录后基因沉默的现象.RNAi过程分为三个阶段,即起始阶段、效应阶段及扩增阶段.RNAi是一种高效特异性的阻断基因表达的基因阻断技术,不仅在生物学功能方面起到作用,如病毒防御,抑制转座子的转座,保护基因组的稳定性,以及调节基因表达,在医学领域也有着广泛的应用,包括高血压、心肌病变、心力衰竭及脑血管疾病等.     

针对小鼠VEGFA基因的siRNA干扰载体的构建和慢病毒包装

目的 针对NM_001025250.3,NM_001025257.3,NM_009505.4,构建4个针对靶基因小鼠VEGFA(血管内皮生长因子A)的小干扰RNA(siRNA)干扰载体,并将其重组转成慢病毒载体.方法 根据靶基因设计并合成4对siRNA干抚序列,将siRNA干扰序列克隆到pcDNA6.2-GW/EmGF...     

RNAi逆转肾癌细胞MDR1基因表达导致的替尼泊苷耐药

目的：研究RNA干扰（RNAinterference,RNAi）对肾癌细胞多药耐药基因（MDRl）表达的抑制作用,并分析干扰前后肾癌细胞对替尼泊苷（VM一26）敏感性的变化。方法：根据MDRI基因设计3条小干扰RNA（smalJinterferingRNA,siRNA）序列,在质粒的介导下转染肾癌A498细胞,RT—PCR法分析转染前后MDRlmRNA表达水平,筛选出干扰效率最高的siRNA序列;进而利用慢病毒包装siRNA重组质粒,感染A498细胞,RT—PCR法筛选沉默效果最好的细胞株进行克隆,Westernbolt法检测MDRl蛋白表达水平,MTT法对比干扰前后替尼泊苷对细胞半抑制浓度（ICSO）的变化。结果：3条siRNA序列均能不同程度地抑制细胞MDRl基因的表达,其中siRNA一1序列能更有效地封闭MDRl基因,使MDRlmRNA表达水平下降67％;筛选出的稳转细胞株与未干扰细胞株相比,MDRl蛋白表达量明显下降,并使替尼泊苷对细胞的IC50降低约79．8％,差异具有统计学意义（P〈O．01）。结论：RNAi可抑制肾癌A498细胞MDRl基因的表达从而逆转其对替尼泊苷的耐药,使肾癌细胞化疗耐药逆转成为可能。     

RNAi在大肠癌基因治疗中的研究现状

RNA干扰（RNAinterference）即转录后基因沉默，是由外源或内源性的双链RNA（doublestandedRNA）导入细胞而引起同源的mRNA降解，进而抑制其相应的基因表达。作为一项新技术，目前广泛地应用于生物体基因功能研究和多种肿瘤的研究。现针对大肠癌有关基因诊疗进行了积极的探索，并取得了突破性的进展。     

STAT3-siRNA表达框架的设计与构建

【目的】设计和构建针对STAT3基因的siRNA表达框架，并在结直肠癌细胞中观察其干扰效果。【方法】GeneBank中查询STAT3基因序列，Oligo 6．0软件设计siRNA靶序列，合成并修饰靶序列后PCR扩增siRNA表达框架，通过脂质体介导，直接将扩增产物转染至结直肠癌细胞SW480中，48h后提取细胞总RNA进行RT—PCR检测干扰效果。【结果】RT-PCR结果显示SW480细胞内靶基因STAT3 mRNA水平下降（62．16±12．50）％。【结论】本实验成功设计并构建的siRNA表达框架能干扰人结直肠癌SW480细胞内STAT3基因的表达。     

shRNA慢病毒抑制BGC823细胞株GnT-V表达的载体构建

目的构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V（GnT-V）基因的shRNA（short harpin RNA,siRNA前体）表达载体,鉴定GnT-V基因干扰效率。方法体外设计并合成针对GnT-V基因的慢病毒shRNA干扰载体,通过PCR及测序证实载体构建成功。将慢病毒颗粒以最适滴度转染人低分化胃癌细胞株BGC823,应用Real-Time PCR、Western blotting检测GnT-V抑制效率。结果构建的慢病毒载体的序列通过PCR、测序等鉴定证实与设计序列相同;Real-Time PCR检测显示干扰组BGC823细胞GnT-V mRNA表达率下降88.04%,Western blotting显示干扰组BGC823细胞表达GnT-V蛋白量较空白载体对照组明显减少。结论构建的shRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制BGC823细胞株GnT-V基因的表达。