E-钙粘蛋白和MMP-9在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达及其意义

目的观察E-钙粘蛋白、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在肾间质纤维化(R IF)大鼠肾组织中的表达,探讨E-钙粘蛋白、MMP-9在R IF中的作用。方法选用SD大鼠72只。随机分为正常对照组、假手术组和模型组,制备单侧输尿管梗阻UUO模型。采用病理及免疫组织化学等方法动态观察各组大鼠第1天、第3天、第7天、第14天肾脏组织学变化和E-钙粘蛋白、MMP在肾小管间质中表达情况。结果 UUO模型组大鼠肾小管间质损害明显,肾小管上皮细胞E-cadherin表达逐渐下调,于第14天达最低值。肾小管上皮细胞MMP-9表达上调,第3、7、14天与同期正常对照组、假手术组相比差异显著。肾小管上皮细胞E-钙粘蛋白表达量与肾小管间质损害程度呈负相关,MMP-9表达量与肾小管间质损害程度呈正相关。结论 E-钙粘蛋白表达下调、MMP-9表达上调、E-钙粘蛋白与MMP-9表达失衡可能是肾间质纤维化形成促进因素之一,并可能参与肾间质纤维化形成的全过程。     

福辛普利及霉酚酸酯对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏TGF-β1表达的影响

目的观察福辛普利及霉酚酸酯对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响,及其对肾间质纤维化的作用.方法UUO大鼠分别给予霉酚酸酯[Mycophenolate mofetil 25 mg/(kg·d)]、福辛普利[fosinopril 10 mg/(kg·d)]、霉酚酸酯联合福辛普利混悬液灌胃,用RT-PCR的方法检测术后第7天、14天TGF-β1表达量的改变.结果与假手术组相比,UUO组及药物治疗组TGF-β1表达均增高,但UUO组显著高于各治疗组(P<0.05),且联合治疗组更低于单用药组.结论福辛普利及霉酚酸酯可通过下调TGF-β1表达,从而减轻UUO术后肾组织间质纤维化,且联合用药作用更优于单用药.     

促肝细胞生长素对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的干预作用

目的研究促肝细胞生长素（pHGF）对肾间质纤维化大鼠肾组织中HGF、TGF-β1的表达的影响及其改善肾小管间质纤维化可能的机制,为临床防治肾间质纤维化提供实验性理论依据。方法采用单侧输尿管结扎术（unilateral ureteral obstruction UUO）建立肾小管间质纤维化大鼠模型。将54只大鼠随机分为三组：假手术组,UUO组,pHGF干预组。术后3、7、14天分3批处死各组大鼠,分别经免疫组化方法观察各组大鼠肾组织HGF、TGF-β1的表达情况,HE及Masson染色评定各组肾小管间质损害程度。结果UUO组TGF-β1的表达及肾小管间质损伤程度明显高于假手术组（P〈0．05）;而pHGF干预组明显低于UUO组（P〈0．05）;UUO组HGF于第3天表达最高,第7天稍有回落,第14天表达最弱;pHGF干预组术后第3天、第7天、第14天HGF的表达均显著高于同时期UUO组（P〈0．05）,肾小管间质病变程度明显减轻,肾间质相对面积显著减小（P〈0．05）。结论pHGF能够减轻单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的程度,这种作用可能通过有效抑制肾间质中TGF-β1的过度表达、促进肾间质HGF的表达而实现。     

PAX2基因在梗阻性肾病大鼠肾小管上皮细胞重新表达的意义

【目的】探讨PAX2基因在梗阻性肾病大鼠肾小管上皮细胞的重新表达对肾间质纤维化的意义。【方法】80只大鼠随机分为：假手术组（sham组）和模型组（UUO组）各40只。于术后3d、5d、7d、14d（每组10只）处死取肾组织。光镜观察肾脏病理形态改变,免疫组化、Westernblot及realtimePCR检测肾组织PAX2蛋白和mRNA的表达。【结果】①HE和Masson染色观察到UUO组肾间质呈现明显的纤维化。②免疫组化发现sham组肾小管上皮细胞无PAX2表达;UUO组肾小管上皮细胞表达较多;③Westernblot显示PAX2蛋白水平在UU0组术后3d相比sham组明显的增加（P〈0．05）,随着梗阻时间延长PAX2蛋白表达更加明显;④realtimePCR显示,PAX2mRNA与PAX2蛋白的,矗达趋势相同。⑤相关分析：PAX2蛋白水平与肾小管损伤程度呈正相关（r=0．991,P〈0．05）,与肾间质纤维化程度呈正相关（r=0．985,P〈0．05）。【结论】胚胎发育基因PAX2在梗阻性肾病大鼠肾小管存在重新表达;并参与了梗阻性肾病肾小管损伤和肾间质纤维化的过程。     

HSP47在单侧输尿管梗阻大鼠模型肾脏组织的表达及作用

目的:观察HSP47在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型肾脏组织的表达情况,探讨HSP47在肾小管间质纤维化中的作用。方法:将SD大鼠随机分为模型组(UUO组)和假手术组(Sham组),每组8只。采用单侧(左)输尿管结扎方法,建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型。术后第14天处死动物。观察两组间蛋白尿和血肌酐水平,运用HE和Masson染色观察肾脏组织形态学改变,采用免疫组织化学方法检测HSP47、胶原Ⅳ(CollagenⅣ)的表达。结果:与Sham组比较,UUO组大鼠血肌酐水平升高,蛋白尿差异无统计学意义。光镜下UUO组大鼠肾组织出现不同程度的肾小管扩张、间质炎症细胞浸润,间质面积增宽、部分肾小管萎缩、肾小管上皮细胞空泡样变性。Masson染色结果显示UUO组大鼠肾组织胶原在肾小管周围、间质区显著增多。免疫组织化学结果显示UUO组大鼠肾组织HSP47表达显著增加,在肾小管周围、间质区表达增加最明显;CollagenⅣ表达显著增加,在肾小管基底膜、间质区表达增加最明显。结论:HSP47在UUO大鼠模型肾脏组织中表达上调,且与胶原表达部位一致,提示HSP47促进肾间质纤维化,且该作用与其促进胶原蛋白的合成有关。     

厄贝沙坦对单侧输尿管梗阻大鼠基质金属蛋白酶-2的影响

目的:观察厄贝沙坦对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的影响并探讨其可能机制。方法:采用UUO肾间质纤维化模型。将24只大鼠随机分为3组,每组8只,即假手术组、UUO组、厄贝沙坦组。厄贝沙坦组给予厄贝沙坦10mg/(kg·d)治疗。术后2周处死大鼠,光镜下观察Masson和HE染色肾间质纤维化指数,观察肾组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾组织MMP-2的表达。结果:(1)UUO组与假手术组相比,血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平均显著增加(P<0.05)。(2)与假手术组相比,肾组织行HE染色UUO组可见弥漫的肾小管上皮细胞空泡变性、扩张、部分萎缩,偶见坏死,肾间质增宽,大量的炎细胞浸润和间质纤维化,肾小球病理改变不明显,厄贝沙坦组上述改变均有所减轻。(3)与假手术组相比,Masson染色结果显示UUO组可见肾间质增宽、有大量胶原纤维增生,肾小球病变不明显,厄贝沙坦组上述改变均有所减轻。(4)MMP-2在假手术组大鼠肾间质中呈棕黄色颗粒状表达,UUO组中大鼠肾间质仅有少量表达且着色稀疏,厄贝沙坦组MMP-2表达较假手术组轻,但仍高于UUO组(P<0.05)。结论:...     

安体舒通和缬沙坦对肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的探讨醛固酮受体拮抗剂和血管紧张素П-1型受体拮抗剂（AT1Ra）对大鼠单侧输尿管梗阻（UU0）模型肾间质纤维化的影响及其可能机制。方法Wistar大鼠行左侧输尿管结扎术，分为UU0模型组（n=11），安体舒通治疗组（12=12），缬沙坦治疗组（n=11）和[安体舒通＋缬沙坦治疗组（n=10）]，同时设假手术对照组（n=7）。术后第14天处死各组大鼠，进行HE和Massod染色，观察肾脏病理变化；比色法测定肾组织丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量；原位末端标记法（TUNEL）与DNA电泳观察肾小管上皮细胞凋亡情况；Western blotting检测半胱氨酸天门冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的蛋白表达。结果UU0组与其它组大鼠比较，肾组织MDA含量明显升高，SOD含量显著下降，肾脏病理改变加重，TUNEL染色及DNA琼脂糖凝胶电泳可见大量的肾小管上皮细胞凋亡，肾组织caspase-3的表达明显增加（P〈0．05）。各用药组与UU0组大鼠比较，肾组织MDA含量明显降低，SOD含量升高，肾小管上皮细胞凋亡和肾间质纤维化显著减轻，caspase-3的表达显著减少（P〈0．05）。结论安体舒通和缬沙坦均可显著改善UU0所致的肾间质纤维化，减轻肾小管上皮细胞的凋亡，部分下调肾组织caspase-3的表达，且联合用药效果更为显著。上述作用可能与该药物抑制氧化应激有关。     

不同剂量氯沙坦对防治肾间质纤维化效果的影响

目的：观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARBs）氯沙坦对大鼠单侧输尿管梗阻（UUO）模型肾间质纤维化的影响．探讨超大剂量能否优于常规剂量起到更多的肾脏保护作用：方法：建立大鼠UUO模型，术后3d分为常规剂量治疗组、超大剂量治疗组、UUO组和假手术组。药物干预组分别每天给予氯沙坦50mg／kg、氯沙坦500mg／kg灌胃，假手术组及UUO组每天给予同体积生理盐水灌胃。观察模型第7、14和21天鼠尾袖带血压（TCP）、24h尿蛋白、肾小管损害程度、肾间质纤维化程度、肾间质巨噬细胞数和转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA的表达。结果：随着梗阻时间延长．UUO组TCP逐渐增高、24h尿蛋白、肾间质纤维化程度、肾小管损害程度及肾间质巨噬细胞浸润显著增加，TGF-β1 mRNA含量明显增加，与其余各组相比差异有显著性（P〈0.05）。同时，超大剂量氯沙坦相对于常规剂量，能更有效地控制血压、减少蛋白尿、减轻肾小管损害和肾间质纤维化、减少肾间质单核巨噬细胞浸润，显著抑制TGF-β1 mRNA表达。结论：超大剂量氯沙坦在UUO大鼠模型中较常规剂量起到了更多的肾脏保护作用.     

肾康注射液对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的研究肾康注射液对梗阻性肾病大鼠肾小管间质纤维化的防治作用。方法采用单侧输尿管梗阻(UUO)诱导肾间质纤维化的动物模型,以血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)作为阳性对照,将大鼠随机分为:模型组(UUO)、肾康组、缬沙坦组,术后第14天处死大鼠,收集血清测定肌酐、尿素氮水平,肾组织用HE染色及免疫组化半定量检测各组肾间质的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。结果肾康组、缬沙坦组的肾小管间质TGF-β1、α-SMA的表达均明显低于UUO组;两治疗组组间比较,肾康组对TGF-β1、α-SMA表达的抑制作用同于缬沙坦组。结论中药肾康可减轻肾间质纤维化。     

NGAL在肾间质纤维化不质阶段的表达及意义

目的动态观测单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾组织中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白分子（NGAL）的表达变化,探讨NGAL在肾小管间质纤维化发展中的作用机制。方法48只SPF级雄性SD大鼠随机分为UUO模型组及假手术（SOR）组,每组24只,UUO组行左侧输尿管梗阻术,SOR组仅游离左侧输尿管不结扎。术后第1、4、7、14天分别处死每组6只大鼠,取左。肾行HE和Masson染色,并用免疫组化ELiVision^TM—plus法检测肾组织NGAL的表达。结果HE、Masson染色切片示：UUO组间质损伤指数与肾纤维化程度在术后不同时间点明显高于SOR组（P〈0．05）。免疫组化结果显示：SOR组大鼠肾组织中肾小管有一定量NGAL表达,UUO组术后第l天NGAL表达显著升高,第4天与其相比,差异无统计学意义,术后第7天表达量下降,术后第14天时明显低于第7天（P〈0．05）,但仍高于SOR组（P〈0．05）。结论实验大鼠梗阻侧肾组织中NGAL的表达在梗阻早期明显上升,并保持一定高表达状态,但随着梗阻时问延长而下调,提示NGAL可能在肾间质纤维化早期起负向调节作用。     

红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用及对MCP-1和TGF-β1表达的影响

目的探讨红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteralobstruction,UUO)模型大鼠肾间质纤维化的作用及其对单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant pro-tein-1,MCP-1)和转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响。方法将60只雄性Wistar大鼠分为假手术组(20例),UUO对照组(20例)及EPO治疗组(20例),分别于手术后第3,7,14,21d处死动物留取肾组织标本。应用马松染色进行肾间质纤维化程度评分;应用免疫组化方法和Western blot方法测定肾组织中MCP-1、TGF-β1的表达程度。结果马松染色显示手术后第3,7d,EPO治疗组肾间质纤维化程度较UUO对照组明显减轻(P0.05)。手术后第3,7,14d,EPO治疗组MCP-1、TGF-β1的表达明显低于UUO对照组(P0.05)。结论 EPO可以减轻UUO模型大鼠早期肾间质纤维化程度,该作用可能与EPO抑制肾组织MCP-1和TGF-β1的表达有关。     

真武汤调节肾间质纤维化大鼠NF-κB表达的研究

目的研究真武汤对NF-κB蛋白表达的影响,从分子水平对真武汤治疗肾间质纤维化的机制进行探索。方法采用单侧输尿管结扎的方法(UUO)制备大鼠肾间质纤维化模型,将150只SPF级健康雄性wistar大鼠,随机分为假手术组、模型组、尿毒清组以及真武汤低、中、高剂量组。术后2周、3周、4周分别处死大鼠,收集尿液、血清,结扎单侧肾组织,对24 h尿蛋白、血肌酐、尿素氮含量进行检测,分别用免疫组织化学法、ELISA法检测NF-κB的表达。结果在各时间点,真武汤各给药组与模型组相比,大鼠梗阻侧肾脏肿大和积水程度较轻,血肌酐、尿素氮含量较低,肾组织和血清中NF-κB蛋白表达均较弱。结论真武汤可减少间质纤维化,减轻肾组织损伤,其延缓肾间质纤维化进程的作用机制可能是通过抑制NF-κB的表达来实现的。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸抑制大鼠肾间质纤维化的研究

目的观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化的的改善作用并探讨其机制。方法将雄性Wistar大鼠36只随机分为假手术组,UUO组,处理组(AcSDKP+UUO),每组各12只。于造模第3、14d各处死大鼠6只,取其梗阻侧肾脏组织行HE染色,光镜下观察肾组织病理改变,计算肾间质纤维化指数。免疫组织化学方法检测其各组肾脏组织转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及a平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)表达,RT-PCR方法检测TGF-β1及a-SMA mRNA含量。结果与假手术组相比,各时间点UUO组大鼠肾脏病理损害进行性加重,AcSDKP处理后可明显减轻UUO组大鼠肾间质纤维化程度(P0.05);免疫组化染色及RT-PCR显示:TGF-β1、a-SMA的蛋白及mRNA表达UUO组和处理组明显多于假手术组,但处理组较UUO组明显减轻(P0.05)。结论 N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)可通过抑制TGF-β1及a-SMA表达,进而抑制大鼠肾间质纤维化,减缓肾纤维化的病程进展。     

柚皮素对单侧输尿管梗阻致肾间质纤维化大鼠 KIM-1表达水平的影响

目的：观察柚皮素对单侧输尿管梗阻致大鼠肾间质纤维化肾损伤因子-1（KIM-1）表达水平的影响。方法将24只SD 大鼠随机分为假手术组（Sham 组）、模型组（UUO 组）、柚皮素组（Nar 组）,每组8只。UUO 组及 Nar 组行左侧输尿管结扎术, Sham 组只游离但不结扎和剪断输尿管。造模后分别给予生理盐水、柚皮素25 mg/（kg·d）。14 d 后处死大鼠,处死前收集24 h尿液,ELISA 法检测大鼠尿液 KIM-1水平,取梗阻侧肾制作标本,行 HE 及 Masson 染色,光镜下观察肾间质纤维化程度并半定量对肾小管间质损伤指数进行积分;免疫组化法检测肾间质 KIM-1的表达。结果与 Sham 组比较,UUO 组肾小管间质损伤指数（TDI）升高,差异有统计学意义（P ＜0．05）,尿液、肾组织中 KIM-1水平均升高,差异也有统计学意义（P ＜0．05）。与 UUO 组比较,Nar 组 TDI 降低,差异有统计学意义（P ＜0．01）,尿液、肾组织中 KIM-1水平降低,差异有统计学意义（P ＜0．05）。相关性分析示24 h 尿液及肾组织 KIM-1水平与 TDI 呈正相关（r 分别为0．862、0．866,P 均小于0．01）。结论柚皮素可减轻肾间质纤维化,降低 KIM-1的表达。     

缬沙坦对人脐动脉平滑肌细胞MMP-9、TIMP-1表达的影响——附106份检测报告

目的：探讨缬沙坦对人脐动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-9（matrix metal—loproteinase,MMP-9）、组织型金属蛋白酶抑制物-1（tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1）表达的影响。方法：对人脐动脉平滑肌细胞进行原代培养,根据平滑肌原代细胞的培养方式分为氧化低密度脂蛋白（oxidized low—density lipoprotein,ox-LDL）培养组（ox-LDL组）、AngⅡ加ox-LDL培养组（AngⅡ组）、AngⅡ加ox-LDL加缬沙坦培养组（缬沙坦组）、普通培养基培养组（对照组）,应用ELISA法及逆转录PCR法分别检测4组上清液中的MMP-9、TIMP—1含量,以及细胞内MMP-9、TIMP-1 mRNA的相对表达量,并应用统计学方法进行比较。结果：AngⅡ组上清液中的MMP-9含量均明显高于其他3组（均为P〈0．01）。ox-LDL组与AngⅡ组上清液中TIMP-1的含量均明显低于对照组（均为P〈0．01）,缬沙坦组与对照组上清液中TIMP-1的含量比较差异无统计学意义（P〉0．05）。另外,AngⅡ组细胞内MMP-9 mRNA的相对表达量均明显高于其他3组（均为P〈0．01）,其TIMP-1 mRNA的相对表达量均明显低于对照组、ox-LDL组及缬沙坦组（均为P〈0．01）,缬沙坦组细胞内TIMP-1 mRNA的相对表达量明显低于对照组（P〈0．05）,但与ox-LDL组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：AngⅡ可增加人脐动脉平滑肌细胞MMP-9的表达而降低TIMP-1的表达,缬沙坦可以抑制AngⅡ的这种作用。