基质金属蛋白酶8 mRNA在大鼠牙胚发育中表达及氟对酶活性的影响

用原位杂交方法研究基质金属蛋白酶 8(ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐ ｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ 8,ＭＭＰ 8)在鼠牙胚发育钟状期的表达 ,用蛋白凝胶电泳法研究氟对酶活性的影响 ,了解ＭＭＰ 8对牙本质发育基质改建的作用 ,探讨氟损伤牙本质的机制。1 .材料与方法 :①原位杂交 :取ＳＤ1 7ｄ胎鼠及生后 6ｄ仔鼠 ,取含有第一磨牙的上颌骨 ,常规石蜡切片 (0 1 %ＤＥＰＣ水展片 )。依说明进行原位杂交 ,ＭＭＰ 8寡核苷酸探针序列 :5'ＧＡＴＡＣＡＴＣＡＡＧＧＣＡＣＣＡＧＧＧＴＣＡＧＡＧＧＡＧＴ 3'。②氟对ＭＭＰ 8降解Ⅰ型胶原活性影响检测 :1 5…     

人冠部牙本质中基质金属蛋白酶8的表达和分布

目的 研究正常人类基质金属蛋白酶8(MMP-8)在牙冠部牙本质中的表达和分布规律,探讨其在牙本质形成和改建中的作用.方法 对37颗正常人牙冠部的脱矿牙本质进行免疫组化染色,以Image pro-plus 6.0图像分析系统分层测量牙本质中免疫阳性区的光密度值.结果 人冠部牙本质全层中均可见MMP-8的免疫染色.在染色强度上,成牙本质细胞层最强,前期牙本质层、邻近釉牙本质界5μm区、成熟牙本质深中浅层依次降低.各层的平均光密度值依次为0.186/pix2、0.143/pix2、0.092/pix2、0.032/pix2、0.021/pix2和0.020/pix2.结论 人冠部牙本质全层中均含有MMP-8,其分布具有不均衡性,提示MMP-8在牙本质的形成、矿化和改建中具有重要的作用.     

基质金属蛋白酶8对牙本质树脂粘接的影响

目的 研究基质金属蛋白酶8(MMP-8)对牙本质树脂粘接的影响,探讨其抑制剂在粘接中的应用.方法 收集60颗口腔颌面外科拔除的人正常第三磨牙.其中20颗用于制备牙本质粉并随机平均分成4组,第一组不做处理,第二组磷酸酸蚀,第三组磷酸酸蚀后粘接剂处理,第四组磷酸酸蚀后先用基质金属蛋白酶8的特异性抑制剂(MMP-8 Inhibitor I)孵育;然后4组均粘接剂处理,提取蛋白质检测MMP-8的活性.另外40颗离体牙随机均分为对照组和MMP-8Inhibitor I处理组(实验组),制作牙本质树脂试件并储存在人工唾液中,分别在储存l天和3个月时进行微拉伸试验分析粘接强度的变化,电镜观察断面和混合层降解的情况.结果 MMP-8活性实验结果显示,第一组呈现少量酶活性:第二组活性大幅度提高;第三组活性下降;第四组未检测到MMP-8活性.微拉伸试验结果显示在相同的时间点,实验组的粘接强度高于对照组,差异有统计学意义.扫描电镜显示,3个月后实验组混合层的胶原纤维网比较完整,对照组的胶原纤维出现明显的降解.结论 MMP-8 Inhibitor I可以通过抑制牙本质中MMP-8的活性抑制混合层胶原纤维网的降解.     

大鼠牙胚发育中MMP-2的表达和分布

目的：研究大鼠牙胚发育各个不同时期基质金属蛋白酶－2（MMP－2）的表达，以探讨其在牙胚发育过程中的作用。方法：取大鼠牙胚不同发育时期标本切片，采用原位杂交方法检测明胶酶A（MMP－2）水平。结果：牙胚发育过程中的蕾状期，帽状期，肿状晚期基质金属蛋白酶－2（MMP－2）均有表达，但以钟状期前牙本质细胞的表达最明显。讨论：本实验提示MMP－2可能参与牙胚形态变化及牙齿发育过程。     

牙齿发育中的基质金属蛋白酶

在胚胎发育、器官形态发生、组织的增生和改建中 ,细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ)的及时降解是必不可少的 ,基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏ ｔｅｉｎａｓｅｓ ,ＭＭＰ/ｍａｔｒｉｘｉｎ)在这一过程中起着重要作用。1　基质金属蛋白酶及其特异性组织抑制剂1.1　ＭＭＰ的分子结构[1～ 4 ]ＭＭＰ是一组依赖二价金属阳离子的内肽酶 ,对ＥＣＭ有特异的降解作用。根据其特异底物和结构不同 ,ＭＭＰ一般分为 4类 :胶原酶 (Ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ) ,明胶酶 (Ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ) ,基质溶解素 (…     

龈沟液中基质金属蛋白酶8及基质金属蛋白酶组织抑制物1水平与牙周病的关系

目的 探讨龈沟液中基质金属蛋白酶8(matrix metalloproteinases-8,MMP-8)及金属蛋白酶组织抑制物1(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMP-1)的水平变化与牙周病的关系,以期为临床提供参考.方法 试验人群共48例,分为牙周健康组16例、慢性牙龈炎组18例及慢性牙周炎组14例,采用酶联免疫吸附测定法检测各组人群龈沟液中MMP-8和TIMP-1水平,并计算MMP-8与TIMP-1的比值.结果 牙周健康组、慢性牙龈炎组及慢性牙周炎组中MMP-8的平均质量浓度分别为:(0.62±0.09)、(0.68 ±0.02)及(0.78±0.05) mg/L,3组之间差异有统计学意义(P＜0.01),并且两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05);牙周健康组、慢性牙龈炎组及慢性牙周炎组龈沟液中MMP-8与TIMP-1的比值分别为:0.16 ±0.06、0.23±0.09及0.32 ±0.15,3组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 龈沟液中MMP-8的质量浓度及MMP-8/TIMP-1比值的变化均可以作为判断牙周炎症水平有意义的临床指标.     

釉质溶解素在人和大鼠牙胚发育过程中的表达

目的：检测釉质溶解素（enamelysin)mRNA在人和大鼠牙胚发育不同时期的表达,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法：采用原位杂交法。结果：人牙胚钟状早期未见釉质溶解素mRNA;钟状晚期,成釉细胞和成牙本质细胞表达阳性。釉质溶解素mRNA在大鼠牙齿发育早期表达阴性,在钟状晚期成釉细胞和成牙本质细胞表达阳性。结论：釉质溶解素m RNA在牙齿发育过程中的表达有时空特异性,提示它可能参与釉质和牙本质的形成。     

小鼠牙胚体内、外发育的比较

牙胚培养是研究体外成牙本质细胞分化和基质分泌的理想模型。国外已成功地进行了多种动物牙胚的体外培养^[1,2]，而国内在这方面的研究刚刚起步^[3,4]。为了更好地了解牙胚体外发育状况，为牙胚体外发育模型的建立及后期研究奠定基础，我们对Balb／c小鼠上颌第一磨牙体内、外发育状况进行了比较研究。     

基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-3在大鼠牙周炎模型中的表达

目的 研究不同时期、不同严重程度的大鼠牙周炎模型中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-3（MMP-3）的表达和分布特征,探讨二者在牙周炎发生发展中的作用。方法 对大鼠牙周组织标本的石蜡切片进行MMP-2和MMP-3的免疫组化染色,并进行图像定量分析。结果 MMP-2和MMP-3在牙龈炎和牙周炎的牙龈上皮中呈强阳性表达,在牙周炎的牙周组织中,主要在牙周膜成纤维细胞、破骨细胞等细胞中呈强阳性表达。MMP-2和MMP-3的变化趋势为在健康牙周组织中呈弱阳性表达,急性龈炎和急性牙周炎中呈强阳性表达,到慢性牙周炎时期,表达较急性期有所降低。结论 MMP-2和MMP-3在牙周炎症组织中,随着炎症进程呈现不同特征的表达,可能直接参与牙周组织的炎性破坏。     

基质金属蛋白酶-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1在口腔鳞状细胞癌中的表达研究

目的 研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关性,探讨其在口腔鳞状细胞癌发生发展中的作用。方法 取20例正常口腔黏膜、40例口腔鳞癌(高、低分化鳞癌各20例),应用免疫组织化学SP法检测上述标本中MMP-9及TIMP-1的表达和分布。结果 口腔高分化鳞癌、低分化鳞癌组织中MMP-9、TIMP-1的表达均高于正常口腔黏膜组织(P<0·05)。口腔高分化鳞癌、低分化鳞癌、正常口腔黏膜组织中,MMP-9表达强度依次递增,TIMP-1表达强度依次递减。结论 MMP-9可能在口腔鳞状细胞癌的发生发展中起重要作用,其活性受TIMP-1的负性调控。     

细胞内信号转导分子——Smad7在人牙胚发育中的表达和意义

目的　探讨Smad7在TGF-β调节牙胚发育过程中的作用。方法　采用免疫组化ABC法观察Smad7在人牙胚发育各个时期的表达分布及其变化情况。结果　人牙胚发育各个时期均表达Smad7,但各期分布模式有所不同。Smad7在不同发育时期牙胚中的分布与TGF-β及其特异的信号转导分子Smad2、3有相似之处。结论　Smad7 可能在TGF-β调节成釉细胞和成牙本质细胞分化的信号转导通路中起一定的作用。     

重组人类可溶性受体对大鼠正畸牙移动影响的研究

目的研究局部注射不同浓度重组人类可溶性受体对大鼠正畸牙移动进程的影响，了解其在牙周局部发挥作用的最小有效浓度范围。方法选取52只雄性SD大鼠，随机分为四组，用螺旋拉簧牵引大鼠左上第一磨牙近中移动，实验组第一天起局部分别注射不同浓度的重组人类可溶性IL-1和TNF受体，14天后测量磨牙移动距离，并制作切片进行HE及TRAP染色分析。结果与对照组相比，各受体组浓度为4ug／ml、0．8ug／ml、0．16ug／ml小组磨牙移动距离均大幅度减少（P〈0．01），牙槽骨表面及牙根表面TRAP染色阳性细胞数量也明显减少（P〈0．01），而浓度为0．032ug／ml小组却没有统计学意义（P〉0．05），且各受体组相同浓度小组问差异无统计学意义（P〉0．05）。结论在大鼠正畸牙局部注射重组人类可溶性受体发挥作用的最小有效浓度范围为0．032ug／ml-0．16ug／ml。     

Tooth sensitivity and bleaching effectiveness associated with use of a calcium-containing in-office bleaching gel

BackgroundThe authors conducted a study to evaluate tooth sensitivity (TS) and the bleaching effectiveness associated with use of a calcium-containing (CC) in-office bleaching gel.MethodsThe authors used a 35 percent calcium-free (CF) hydrogen peroxide gel and a 35 percent CC hydrogen peroxide gel according to the manufacturer's instructions in 40 caries-free participants 18 years or older. They performed two bleaching sessions with a one-week interval between sessions. The authors registered the color at baseline and after the first and second bleaching sessions by using a shade guide and by gauging the participant's perception of TS as registered on a scale from 0 (none) to 4 (severe). The authors evaluated the bleaching effectiveness at each week's recall visit by means of the Friedman test, and they compared the groups at each assessment point by means of the Mann-Whitney test. They evaluated the percentage of participants with TS and the intensity of the TS by using the Fisher exact and Mann-Whitney tests.ResultsBoth groups demonstrated equivalent and significant tooth color enhancement compared with color values at baseline (P < .05), with an average bleaching of 7 to 8 shade guide units. Most of the participants from the CF group (80 percent) experienced sensitivity while undergoing the bleaching regimen, whereas only 40 percent of participants from the CC group reported experiencing TS (P = .02). The intensity of TS was significantly higher (P < .01) for the CF group during in-office dental bleaching.ConclusionsThe CC 35 percent hydrogen peroxide gel reduced the TS during in-office dental bleaching without jeopardizing the bleaching effectiveness.Clinical ImplicationsThe results of this study support the findings that a CC 35 percent hydrogen peroxide gel can reduce TS during in-office dental bleaching.     

MMP-8在龋病发展过程中的表达及意义

目的：观察MMP-8在不同程度龋损牙齿中的表达，探讨MMP-8与龋病发展的关系。方法：标本选自因龋未经治疗的第三磨牙，按临床及X线诊断为浅龋、中龋、深龋各10颗，无龋坏第三磨牙10颗为对照组。采用免疫组织化学方法观察MMP-8在不同龋损中表达。结果：正常组MMP-8在成牙本质细胞、前期牙本质、成纤维细胞略有着色；浅龋组成牙本质细胞和前期牙本质、成纤维细胞中有比较浅的阳性表达；中龋组成牙本质细胞增生活跃，前期牙本质增厚，染色阳性，牙髓细胞染色加深；深龋组成牙本质细胞呈阳性表达，牙本质基质中呈散在条索性表达。牙髓组织中成纤维细胞、血管内皮细胞强阳性表达，在修复性牙本质中MMP-8表达强阳性。结论：MMP-8参与龋病的进展过程。     

牙本质涎磷蛋白反义核酸对牙胚超微结构的影响

目的　探讨牙本质涎磷蛋白(DSPP)在牙胚发育和矿化中的作用及其机制。方法　胎龄为17 d Balb/C 胎鼠上颌第一磨牙,分为2组,对照组牙胚置于无血清BGJb半固定培养基中培养;DSPP反义核酸组牙胚置于含有 30μmol/L,长15 bp的DSPP反义寡核苷酸的半固体培养基中培养。牙胚体外培养10 d后,进行透射电镜观察。结果　2组牙胚牙尖处成牙本质细胞中均含有大量的细胞器,线粒体肿胀,粗面内质网扩张,且DSPP反义核酸组成牙本质细胞中粗面内质网扩张更为明显;胞外基质超微结构显示:对照组胶原纤维聚集成束,排列具有一定的方向, 牙尖基质带平均厚度为3μm ;DSPP反义核酸组胶原纤维粗细不等,排列紊乱,牙尖基质带平均厚度为2·5μm。结论　DSPP可能通过控制成牙本质细胞正常的分泌功能、胶原纤维的正常形态和排列在牙胚生长、矿化中起重要作用。     

Gli1抑制剂GANT61对小鼠牙胚体外发育的影响

目的:研究外源性Gli1抑制剂GANT61对小鼠磨牙胚体外发育的影响.方法:采用小鼠磨牙胚体外培养系统,运用体视镜、组织学HE染色方式观察小鼠磨牙胚被Gli1抑制剂GANT61影响后的发育情况,并对牙胚构成部分进行测量.结果:在Gli1抑制剂GANT61作用下,实验组相对于对照组出现下磨牙牙胚发育速度减慢,成釉器凹陷且...     

DLX1基因在人牙齿发育中的表达

目的：研究DLX1基因在人牙齿发育中的表达模式,确定DLX1转录子亚型。方法：提取人牙胚总RNA,利用巢式RT-PCR技术克隆DLX1cDNA序列;制备地高辛标记的RNA探针,检测人磨牙发育不同时期DLX1的表达情况。结果：人牙胚中表达的DLX1为转录子亚型1。在表达模式上,11周、14周、17周和19周4个不同发育时期磨牙均有DLX1表达,11周和14周少量表达于牙上皮和间充质,17周依然在牙上皮和间充质中表达,但表达增强,19周表达主要集中在内釉上皮细胞。结论：DLX1在人牙齿发育的各个时期均有表达,表明DLX1可能是人类牙齿发育中的一个重要调节因子。     

人牙齿发育中OSX的表达

目的:通过免疫组织化学方法观察人牙齿发育中OSX的表达规律,探索其功能及意义。方法:取自然流产的人胚胎上下颌骨,分别进行HE染色和免疫组织化学染色,用图像分析仪分析。结果:免疫组化显示,OSX分布于细胞浆中。蕾状期,OSX分布于牙蕾上皮细胞;帽状期,成釉器所有细胞均表达OSX,但在内釉上皮的釉结处表达明显集中;钟状期,成釉细胞、成牙本质细胞及邻近的牙乳头细胞高表达OSX,釉牙本质界、牙本质小管及新形成的釉质有表达。结论:OSX参与成釉细胞、成牙本质细胞的分化、成熟及细胞间信号传导,可能参与调节釉质和牙本质基质的分泌及其生物矿化过程。     

实验性牙移动中三叉神经节P2X3受体蛋白量及mRNA的表达变化

目的 研究正畸牙移动中P2X3受体蛋白量及mRNA在三叉神经节（TG）中的表达变化规律。方法 以雄性SD大鼠为实验对象,模拟临床矫治的牙移动过程,分别在实验4 h,1 d,2 d,3 d,5 d,7 d 和14 d时取出三叉神经节,应用Western blot分析检测P2X3受体蛋白的表达量,同时应用原位杂交方法对P2X3受体的表达部位及强度变化进行研究。结果 大鼠牙齿加力后,Western blot分析观察发现TG内P2X3受体蛋白量发生一定变化,并呈现一定的时间规律,在实验1 d后开始出现变化,3 d后达到高峰,14 d后下降至与对照组基本一致。同时观察到TG内P2X3 mRNA杂交信号阳性标记神经元的数量呈现一定的时间规律,与Western blot分析结果基本一致。结论 在大鼠牙移动过程中,TG中P2X3受体表达为一过性变化,呈现短时上调的规律,时间与正畸牙移动时的疼痛时间吻合,推测P2X3在正畸牙移动中可能与疼痛传导密切相关,但其作用机制还有待进一步探索。     

牙本质磷蛋白和成釉蛋白在组织工程牙胚的表达模式研究

目的：采用大鼠牙胚细胞与胶原蛋白构建组织工程牙齿,通过免疫荧光组织化学分析牙齿特异性蛋白在组织工程牙齿的表达模式。方法：采用出生后4dSD仔鼠磨牙牙胚细胞,培养后将牙胚细胞与胶原蛋白溶液混合构建组织工程牙胚,2W后取材,HE染色观察移植物中的成牙能力,免疫荧光组织化学染色观察牙本质磷蛋白DSP和成釉蛋白AM的表达模式。结果：组织工程牙胚移植后2W可在肾被膜下形成乳白色矿化组织,HE染色可见典型的牙髓牙本质复合体样组织和釉质样结构,免疫荧光组织化学染色观察可见成釉蛋白AM阳性的釉质样结构和牙本质磷蛋白DSP阳性的牙乳头样组织,与正常牙齿组织表达模式一致。结论：采用牙胚细胞可与胶原蛋白进行重新排列形成组织工程牙胚,本实验从组织和蛋白分析上证实了其具有较强的成牙能力,为以后的临床应用提供了理论基础。