乙肝病毒核酸疫苗诱导BALB/c小鼠特异性免疫应答

目的 现察舍乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)preS2S基因的核酸疫苗免疫小鼠后的特异性免疫应答.方法 将BALB/c小鼠随机分为4组分别肌肉接种pCMV-S2S、乙肝表面抗原(HBsA8)、空载质粒(pCMV)及生理盐水(NS).免疫组织化学法检测接种局部组织preS2S抗原的表达,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测特异性CTL活性,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体Anti-HBs.结果 pCMV-S2S组小鼠肌肉细胞中有较多量的preS2S蛋白表达,其它小鼠肌肉细胞中均未检出preS2S蛋白表达.pCMV-S2S组小鼠CTL活性为(32.10±1.93)%,明显高于各对照组(P＜0.05).pCMV-S2S组小鼠8周后Anti-HBs阳性率最高为42.9%.HBsAg组小鼠4周时Anti-HBs阳性率即达到100%.pCMV组及NS组小鼠血清中均未检测出Anti-HBs.结论 乙肝核酸疫苗pCMV-S2S能在小鼠体内表达preS2S蛋白,并能在小鼠体内诱生较强的特异性CTL活性,也能诱生一定程度的特异性体液免疫应答.     

SARS病毒S蛋白的B细胞表位预测

目的预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位.方法基于SARS 蛋白基因组序列,采用Kyte-Doolittle的亲水性方案,Emini方案和Jameson-Wolf抗原指数方案,辅以对S蛋白的二级结构中的柔性区域的分析,预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位.结果推测最有可能的B细胞表位位于S蛋白N端第91～98区段、第1 121～1 153区段和第185～193区段内或它们的附近.其它,如S蛋白N端第1 050～1 059、752～765、41～50、666～674、264～287、340～348、408～416区段和第424～439区段内或附近也可能存在B细胞表位.结论用多参数预测SARS病毒S蛋白的B细胞表位,为分子免疫学的深入研究提供线索.     

HPV-6，11表位多肽疫苗对Balb／c小鼠体液免疫应答的实验研究

目的评估设计的人乳头瘤病毒HPV-6，11表位多肽疫苗的免疫原性，并探讨预防尖锐湿疣的可能性。方法采用以50pg／只的剂量在0、2、4周免疫Balb／c小鼠，于免疫后的2、4、6周采集血清测定抗体应答。结果首次免疫后的第2周，血清抗体均呈阴性：第4周表位多肽Ⅳ和Ⅰ组出现阳性，与阴性对照组具有显著性差异（P〈0．05）；第6周时，均出现阳性结果，Ⅲ和Ⅱ组与阴性对照组具有显著性差异（P〈0．05），而表位多肽Ⅳ和Ⅰ组与阴性对照组具有非常显著性差异（P〈0．01）。结论设计出的HPV-6，11表位多肽疫苗能够诱导产生免疫应答，可望对尖锐湿疣的预防提供积极有效的帮助。     

HBsAg核酸疫苗诱导H-2b小鼠体液免疫应答的初步研究

目的：观察adw和adr亚型HBV PreS2 S核酸疫苗单一或联合HBcAg核酸疫苗诱导的小鼠体液免疫反应。方法：C57BL／6小鼠23只随机分为4组;pJW4303组（P组）,pJW4303/S2 S(adw亚型）组（W组）、pJW43/3S2 S(adr亚型）组（R组）,pJW4303/S2 S(adr) pJW4303/HBc组（R＋C组）。免疫方法为每只小鼠每次肌注相应质粒DNA100μg(100μl)。免疫程序为0、2、4周。于第3次免疫后4周W组、R组、R＋C组小鼠血清全部检出抗－HBs,抗体含量随免疫次数增多而增加,抗－HBs浓度最高达22329IU／L,与P组（对照质粒组）相比差异有显著性（P＜0．01）,但各核酸疫苗组之间差异无显著性（P＞0．5）。抗－HBs浓度最高达22329IU／L,与P组（对照质粒组）相比差异有显著性（P＜0．01）,但各核酸疫苗组之间差异无显著性（P＞0．5）。而抗－HBc在第一次免疫后2周即在R＋C组全部出现,抗－HBs和抗－HBc在P组始终未检出。结论：adw和adr亚型HBV PreS2 S核酸疫苗和HBc核酸疫苗能诱导H－2^b小鼠产生较强的体液免疫反应,联合HBc核酸疫苗有助于抗－HBs的早期产生。     

流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg的构建与细胞转染研究

目的设计并构建含分子内佐剂的流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg,初步研究其在HEK293T细胞中的转染效率。方法通过生物信息学软件设计并合成了含分子内佐剂的流感病毒多表位基因CTB-Eg,将其插入真核载体pEGFP-C2中,获得了重组质粒pEGFP-C2/CTB-Eg;用脂质体法转染HEK293T细胞,通过荧光显微镜观察和PCR法检测其转染效率。结果成功构建了真核表达质粒pEGFP-C2/CTB-Eg,且该重组质粒能在HEK293T细胞中瞬时转染,转染效率在50%~70%之间。结论本研究成功设计、构建了CTB-Eg融合基因,其在HEK293T细胞中转染效率较高,为流感病毒多表位核酸疫苗CTB-Eg在小鼠体内的抗病毒作用研究奠定了坚实基础。     

SARS病毒S蛋白部分片段B-细胞表位的多参数预测

目的预测SARS病毒S蛋白(spike glycoprotein)部分片段(aa No.400～600 & aa No.1 100～1 195)的B-细胞表位.方法应用多种参数和方法进行综合分析,包括跨膜分析、保守区分析、同源性比较、Hopp ＆ Woods亲水性参数、抗原性参数、可及性参数、β-转角、万氏法等综合预测方法.结果显示B-细胞识别的表位可能在436～456和1 136～1 146残基或其附近,这两个被预测的表位均含有β-转角和不规则卷曲结构.结论本研究为应用合成肽抗原制备抗SARS病毒S蛋白抗体、诊断非典型肺炎(severe acute respiratory syndrome, SARS)提供了依据.     

应用因特网对SARS病毒M蛋白B细胞抗原表位的预测

目的：预测SARS冠状病毒M蛋白的B细胞表位。方法：采用EMBOSS软件结合Hopp＆woods亲水性参数、Janin可及性参数、极性参数、柔韧性参数及二级结构方案对SARS冠状病毒M蛋白的B细胞表位进行了预测，并用吴玉章等已建立的B细胞表位预测方法进行评述。结果：SARS冠状病毒M蛋白B细胞识别的表位可能位于第3～13和153～166位氮基酸等区域内或附近，这2个被预测的表位均含有β—转角和无规卷曲结构。结论：该研究对应用合成肽抗原进行SARS早期诊断研究及相关抗体的制备具有重要指导意义。     

重组SARS-CoV S1蛋白抗原表位分析及抗原性检测

目的对严重急性呼吸系统综合征冠状病毒(SARS-CoV)刺突蛋白(Spike,S)S1段进行原核重组表达,并检测表达产物的抗原性。方法对S1中的HLA抗原表位进行预测分析,根据分析结果选定用于重组表达的区段,利用pET21b载体进行原核表达,将产物纯化后利用SARS抗血清进行抗原性检测。结果抗原表位分析表明,S1中包含有多个能够被HLA分子有效提呈的抗原表位,综合考虑表位肽的分布、重组表达的效率、重组蛋白的空间构象以及引物设计的优化等因素,选取S1中的关键区域259~565 aa进行原核重组表达,得到了包涵体形式的重组蛋白,经过纯化和复性,获得了纯度较高的可溶性S1蛋白;用SARS抗血清对此重组蛋白进行免疫学鉴定,表明该蛋白具有SARS特异的抗原性。结论重组表达的S1蛋白具有较强的抗原性,为进一步的疫苗研究和抗体筛选奠定了基础。     

HSV-1糖蛋白B和糖蛋白D的T细胞表位重组核酸疫苗的构建及其免疫原性

目的 构建Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)糖蛋白B(gB)和糖蛋白D(gD)的T细胞表位重组核酸疫苗,并研究其作为核酸疫苗的免疫原性.方法 登录免疫表位数据库(IEDB),查阅已发表的无症状表位,联合运用SYFPEITHI、IEDB等生物信息学软件,预测潜在的HSV-1 gB和gD的T细胞表位.将已知表位和预测表位串联,...     

HIV多抗原表位疫苗的构建

以CD8^＋的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）和CD4’的辅助性T淋巴细胞（HTL）为介导的细胞免疫应答是有效地控制和清除包括HIV在内的多种病毒病原体的必备条件。因而，人们对于能够诱导CTL和HTL免疫应答的HIV-1疫苗的研究兴趣浓厚，使HIV疫苗很快由学术研究向商品开发和工业生产等领域过渡和延伸。     

HCV核心蛋白DNA疫苗诱导的小鼠体液免疫应答

目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶ ＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ核心蛋白重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＨＣＶｃｏｒｅ，肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＨＣＶ抗体。以此重组质粒转染小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞，以ＨＣＶ抗体阳性小鼠血清为捕获抗     

MUC1基因疫苗和GM-CSF对小鼠的细胞免疫和体液免疫应答

目的:观察MUC1基因疫苗和GM-CSF共免疫对小鼠特异性细胞免疫和抗体水平的影响.方法:采用股四头肌肌肉注射,将构建的MUC1基因疫苗pcDNA3.1-MUC1免疫雌性Balb/c小鼠,每3 wk 1次,共3次.MUC1基因加GM-CSF组于每次基因免疫后1,3,5 d,皮下注射GM-CSF 100 μL.最后1次基因免疫后第3周接种表达MUC1的EMT6小鼠乳腺癌细胞.2 wk后观察、记录肿瘤的生长情况.流式细胞仪检测外周血CD4 和CD8 淋巴细胞亚群的百分比和比值.ELISA方法检测小鼠血清MUC1特异性抗体的水平.4 h 51Cr释放法检测小鼠脾特异性CTL的杀伤活性.结果:淋巴细胞亚群:与pcDNA3.1对照组相比,MUC1基因疫苗预防组的CD8 T淋巴细胞升高,差异有统计学意义(P《0.01),CD4 T淋巴细胞升高,差别无统计学意义;加GM-CSF佐剂预防组与单独MUC1疫苗预防组相比,CD4 T淋巴细胞升高,差异有统计学意义(P《0.01),CD8 T淋巴细胞升高差别无统计学意义.小鼠血清MUC1抗体水平:与对照组相比,MUC1基因疫苗预防组抗体水平升高,差异有统计学意义(P《0.05);加佐剂组与预防组相比,抗体水平升高但差别无统计学意义.在不同效靶比时, MUC1基因疫苗加GM-CSF组与单独MUC1基因免疫组相比较,特异性CTL对EMT6靶细胞的杀伤率差异显著(P《0.05).结论:MUC1基因疫苗可诱导小鼠产生特异性CD8 T淋巴细胞及体液免疫应答, GM-CSF对小鼠CD4 T淋巴细胞具有一定的调节作用.     

SARS相关冠状病毒M基因片段的克隆及其DNA疫苗诱导的体液免疫

目的：构建含有SARS相关冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus，SARS—CoV)M基因片段的核酸疫苗，观察其免疫小鼠后病毒特异性抗体产生情况。方法：将合成的M基因片段克隆到核酸疫苗真核表达载体pVAX1中，免疫小鼠后，用SARS—CoV抗体ELISA检测试剂盒定期检测免疫小鼠血清中抗SARS—CoV的病毒特异性抗体水平。结果：构建了重组核酸疫苗质粒pVCo—M，免疫小鼠后可诱导产生出病毒特异性抗体。结论：以M为抗原基因的DNA疫苗能诱导SARS病毒特异性抗体，为进一步改进或探索同类DNA疫苗提供有益启示。     

乙肝病毒表面抗原基因疫苗诱导小鼠细胞及体液免疫应答的研究

为观察乙肝病毒 Ｈ Ｂｓ Ａｇ 基因疫苗免疫小鼠后的细胞及体液免疫应答,将该疫苗定向克隆于质粒ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 巨细胞病毒启动子下游,构建能在真核细胞内表达的重组基因疫苗ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ Ｈ Ｂｓ Ａｇ 。将此疫苗通过多点肌肉注射免疫 Ｂａｌｂ／ Ｃ 小鼠后第六周,实验组小鼠均出现抗－ Ｈ Ｂｓ Ｉｇ Ｇ 阳性,其抗体水平明显高于对照组,同时 Ｔｈ１ 免疫应答相关的细胞因子 Ｉ Ｌ２ 及γ干扰素水平也明显高于对照组,表明本文构建的基因疫苗ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ Ｈ Ｂｓ Ａｇ 能诱导 Ｂａｌｂ／ Ｃ 小鼠产生良好的细胞及体液免疫应答。     

新型呼肠病毒S基因DNA疫苗在小鼠体内的免疫原性

目的 探讨新型呼肠病毒R4株S片段免疫小鼠后引发的免疫应答。方法 构建4个不同S基因节段的重组真核表达质粒，并免疫小鼠；ELISA检测血清以研究R4特异性抗体升高水平，并对其抗体亚型进行鉴定；ELISPOT检测小鼠淋巴细胞INF-γ的表达情况。结果 与对照组相比，4个重组质粒免疫的小鼠血清都有明显的R4特异性抗体升高，尤其以S1和S3基因免疫后抗体水平较高，且均以IgG2a占绝对优势；S1基因免疫组小鼠的细胞免疫应答最强。结论 S1基因重组质粒免疫小鼠后可同时引发较强的体液免疫和细胞免疫应答，是较为理想的疫苗备选基因片段。     

乙肝病毒表面抗原基因疫苗诱导小鼠细胞及体液免疫应答的 …

为观察乙肝病毒ＨＢｓＡｇ基因疫苗免疫小鼠后的细胞及体液免疫应答,将该疫苗定向克隆于质粒ｐｅＤＮＡ３巨细胞病毒启动子下游,构建能在真核细胞内表达的重组基因疫苗ｐｃＤＮＡ－ＨＢｓＡｇ。将此疫苗通过多点肌肉注射免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠后第六周,实验组小鼠均出现抗－ＨＢｓＩｇＧ阳性,其抗体水平明显高于对照组,同时Ｔｈ１免疫应答相关的细胞因子ＩＬ－２及γ干扰素水平显高于对照组,表明本文构建的基因疫苗ｐｃＤＮＡ３     

重组蛋白CTB表位对HCV多表位DNA疫苗的小鼠中免疫应答的影响

将一12aa的CTB表位连接于丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV)复合多表位抗原基因PCX的5'端,再克隆于真核表达载体pcDNA3中,获得重组质粒pcDNA3/CTB-PCX,利用表达IL-12的pWRG/mIL-12作为佐剂,肌注免疫小鼠后6W,用重组蛋白GZ-PCX加强免疫1次,第6W时可检测到较高水平的抗GZ-PCXIgG,最高滴度达1：10^3,与对照pcDNA3/PCX相比无显升高,提示CTB表位并无明显的增强PCX基因特异性体液免疫应答的作用。重组蛋白GZ-PCX可有效提高抗体水平,促进CD^8 T细胞增殖。免疫小鼠可诱发针对GZ-PCX融合蛋白的迟发性超敏反应（DTH）,免疫后小鼠体重正常,肝脾未见明显肿大。具有良好安全性。     

微小隐孢子虫子孢子表面蛋白基因诱导小鼠产生免疫应答的研究

目的　探讨微小隐孢子虫子孢子表面蛋白CP15重组质粒pCR3 1- 15DNA疫苗诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。方法　用重组的DNA疫苗于BALB/c小鼠后腿胫骨前肌注射免疫 ,于 0、3、6w共免疫 3次 ,10 0 μg/次。免疫后不同时间检测体液和细胞免疫应答指标。并用 1× 10 6卵囊进行攻击感染试验。结果　pCR3.1- 15可诱导机体产生相应的特异性抗体 ,对C .parvum卵囊攻击具有保护作用。结论　微小隐孢子虫子孢子表面蛋白CP15重组质粒pCR3.1- 15有可能作为侯选的隐孢子虫DNA疫苗 ,值得进一步深入研究。     

Epitope DNA vaccines against tuberculosis: spacers and ubiquitin modulates cellular immune responses elicited by epitope DNA vaccine

Cell-mediated immune responses are crucial in the protection against tuberculosis. In this study, we constructed epitope DNA vaccines (p3-M-38) encoding cytotoxic T lymphocyte (CTL) epitopes of MPT64 and 38 kDa proteins of Mycobacterium tuberculosis. In order to observe the influence of spacer sequence (Ala-Ala-Tyr) or ubiquitin (UbGR) on the efficacy of the two CTL epitopes, we also constructed DNA vaccines, p3-M-S(spacer)-38, p3-Ub (UbGR)-M-S-38 and p3-Ub-M-38. The immune responses elicited by the four DNA vaccines were tested in C57BL/6 (H-2b) mice. The cytotoxicity of T cells was detected by LDH-release method and by enzyme-linked immunospot assay for epitope-specific cells secreting interferon-gamma. The results showed that DNA immunization with p3-M-38 vaccine could induce epitope-specific CD8 CTL response and that the spacer sequence (AAY) only enhanced M epitope presentation. The protein-targeting sequence (UbGR) enhanced the immunogenicity of the two epitopes. The finding that defined spacer sequences at C-terminus and protein-targeting degradation modulated the immune response of epitope string DNA vaccines will be of importance for the further development of multi-epitope DNA vaccines against tuberculosis.