验方祛斑汤含药血清对A375人黑素瘤细胞黑素合成的影响

目的用血清药理学方法研允验方祛斑汤对A375人黑素瘤细胞株细胞增殖、酪氨酸酶活性和黑素合成的影响，并探讨本方治疗黄褐斑的作用机制。方法用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）测定验方祛斑汤对细胞增殖的影响，酶学方法测定其封酪氨酸酶活性的影响，475nm比色法测定其对黑素含量的影响。结果验方祛斑汤含药血清封体外培养的A375人黑素瘤细胞具有抑制细胞增殖，降低酪氨酸酶活性和黑素含量作用。结论验方祛斑汤能抑制黑素细胞黑素合成，这可能是其治疗黄褐斑的作用机制之一。     

黑素再生中药对酪氨酸酶活性的影响

目的:研究治疗白癜风黑素再生中药对酪氨酸酶活性的影响。方法:采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法测定酪氨酸酶活性。结果:黑素再生中药能显著提高酪氨酸酶的活性,与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01);与常用几种中成药相比,上调酪氨酸酶活性最强。结论:黑素再生中药能显著上调酪氨酸酶的活性,且比临床常用治疗白癜风的几种中成药及药材上调酪氨酸酶活性要高。     

中药对酪氨酸酶活性的影响

酪氨酸酶是皮肤黑素生物合成的关键酶、限速酶，其活性与某些色素障碍性皮肤病有关。综述了中药对酪氨酸酶活性的影响研究现状。     

4种美白剂对B-16细胞内酪氨酸酶活性抑制的研究

目的 探讨4种常用皮肤美白剂（熊果苷、曲酸衍生物、BL-99和氢醌酯）对皮肤黑素细胞内酪氨酸酶活性的抑制作用。方法 选用B-16小鼠黑素瘤细胞株，分别加入不同剂量美白剂（BL-99和曲酸衍生物的实验终浓度分别为0．5、1．0、5．0、10．0、50．0μg／mL；熊果苷为10、30、50、70、100μg／mL；氢醌酯为0．1、0．5、1．0、5．0、10．0μg／mL）3d后，采用台盼蓝排斥法计数活细胞数，参照Hideya Ando等的方法测定酪氨酸酶活性，探讨美白剂对培养细胞内酪氨酸酶活性的影响。结果 4种美白剂均可抑制B-16细胞生长，以氢醌酯对细胞生长数量的作用最大，熊果苷对细胞生长的抑制作用最弱。熊果苷对酪氨酸酶活性具有抑制作用；氢醌酯虽可导致B-16细胞的酪氨酸酶活性呈下降趋势，但与对照组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）；曲酸衍生物和BL-99均可致B16细胞中酪氨酸酶活性呈波动性变化。结论 4种皮肤美白剂中除了熊果苷对酪氨酸酶的活性具有抑制作用外，其它3种美白剂均对酪氨酸酶抑制不明显，提示美白剂的美白机制是多方面的，可能不仅仅与酪氨酸酶的活性有关。     

56味中药乙醇提取物对酪氨酸酶活性影响的研究

通过对中药拆方分析,从文献报告治疗白癜风的常用中药,选出５６种,测定其乙醇提取物对酪氨酸酶活性的影响,结果显示２７种中药的乙醇提取物对酪氨酸酶具有激活作用,其中１１种对酪氨酸酶的激活率与可激活酶氨酸酶活性的单体化合物补骨脂素无统计学差异（Ｐ〉０．０５）。进一步从对酪酸酶具有激活作用的中药中选用１９味中药,测定它们和补骨脂素的酶动力学曲线,结果显示：７种对酪氨酸酶具有竞争性激活作用,６种具有非常争性     

三氧化二砷对人恶性黑素瘤A375细胞抑制机制的探讨

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人恶性黑素瘤A375细胞的生长抑制作用,以及对Caspase-3活性表达以及肿瘤细胞凋亡的影响,为临床治疗恶性黑素瘤提供理论和实验依据。方法:将不同浓度的As2O3作用于人恶性黑素瘤A375细胞,荧光染色观察A375细胞的凋亡变化,流式细胞术检测A375细胞的凋亡率;用免疫组织化学染色法检测不同浓度As2O3作用于A375细胞后Caspase-3蛋白的表达;半定量RT-PCR法检测Survivin蛋白的表达。结果:荧光染色后镜下可见As2O3可致A375细胞的细胞核呈致密浓染的不规则黄绿色颗粒状或块状荧光的凋亡现象;As2O3能诱导A375细胞的凋亡,用5、10、20μmol/L的As2O3诱导A375细胞24 h:检测其细胞的凋亡率依次为7.07%、38.66%和4.34%,可诱导Caspase-3蛋白的表达,抑制Survivin蛋白的表达。结论:As2O3能致A375细胞形态改变,诱导细胞凋亡;As2O3可诱导A375细胞表达Caspase-3蛋白,抑制Survivin蛋白的表达。     

熊果苷对A375与HACAT共培养模型中黑素细胞酪氨酸酶活性的影响

目的体外构建黑素瘤细胞(A375)与人永生角质形成细胞(HACAT)直接接触共培养模型,观察熊果苷对该模型酪氨酸酶活性的影响同时观察熊果苷对该模型黑素合成及细胞的增殖的影响。方法分别培养A375与HACAT,体外构建黑素瘤细胞与人永生角质形成细胞直接接触的共培养模型;将不同浓度熊果苷作用于此模型,用MTT法、多巴氧化法及NaOH裂解法检测酪氨酸酶活性、黑素合成以及细胞增殖的。结果 A375与HACAT能共同存活;分别用1mg/ml,0.5mg/ml和0.2mg/ml的熊果苷对共培养细胞的增殖、黑素细胞酪氨酸酶活性及黑素合成均有较强的剂量相关的抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论熊果苷对A375与HACAT共培养模型中细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素合成均呈浓度依赖性抑制作用。     

复方黄黛片人含药血清对MV4-11细胞增殖和凋亡的影响

目的 探索复方黄黛片人含药血清对FMS样酪氨酸激酶3内部重复突变(FLT3-ITD)急性髓系白血病MV4-11细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集口服复方黄黛片治疗的急性早幼粒细胞性白血病患者的含药血清和健康志愿者的健康血清,分别采用20%、40%、60%的血清浓度培养FLT3-ITD阳性的MV4-11和FLT3-ITD阴性的HL60细胞48 h后,采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 含药血清的血砷浓度(0.47±0.06)μmol/L,明显高于健康血清(未检出),差异有统计学意义(t=13.035,P<0.001)。MV4-11细胞的存活率随着含药血清浓度的增高而降低,各血清浓度间比较差异均有统计学意义(40%vs. 20%:t=7.137,P=0.002;60%vs. 20%:t=10.150,P<0.001;60%vs. 40%:t=3.282,P=0.030);且20%、40%、60%含药血清浓度时均明显低于健康血清,差异均有统计学意义(t=6.476、10.450、11.110,P均<0.05)。HL60细胞...     

和厚朴酚对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨和厚朴酚在体外对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测不同浓度的和厚朴酚对A375细胞增殖的影响,相差显微镜观察和厚朴酚作用后A375细胞的形态学改变,流式细胞仪测定和厚朴酚对A375细胞凋亡率的影响。结果和厚朴酚可明显抑制A375细胞增殖,抑制作用呈明显的浓度和时间依赖性。相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变。和厚朴酚可使A375细胞凋亡率明显升高。结论和厚朴酚可抑制A375细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

Effects of histamine on growth and apoptosis of human melanoma cells A375

Histamine,as a biogenic amine,exists in bod-ies diffusely.Like other neural transmitters,his-tamine can play various physiological roles whencombining with special receptors on plasma mem-brane of target cells.Previous studies suggestedinconsistent results that histamine promoted or in-hibited growth of primary or metastatic melanomacells.The mechanism has not been elucidated ful-ly.The present research is aimed at investigatingwhether histamine has effects on growth and apop-tosis of human me…     

软坚清脉颗粒含药血清对血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用

目的:探讨软坚清脉颗粒含药血清对血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用。方法:SD大鼠随机分为对照组和软坚清脉颗粒低、中、高剂量组,分别灌胃给予0.9%NaCl溶液和0.275 g·kg~(-1)·d~(-1)、0.550 g·kg~(-1)·d~(-1)、1.100 g·kg~(-1)·d~(-1)软坚清脉颗粒剂溶液,每天2次,连续灌胃10 d。末次给药后心脏采血,制备含药血清。人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)分为空白组、模型组和软坚清脉颗粒低、中、高剂量组。空白组细胞加入不含大鼠血清的完全培养基,并置于正常环境下(21%O_2)培养;模型组细胞加入制备的对照组含药血清;软坚清脉颗粒各剂量组细胞分别加入制备的相应组别的含药血清。除空白组外,其他各组置于含95%N_2+5%CO_2混合气体的培养箱中,诱导缺氧损伤模型。MTT法检测细胞活力;Hochest33342和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡;Rho123染色后流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP);PCR和Western blot分别检测细胞中TL1A和Caspase-3的mRNA和蛋白表达水平。结果:①缺氧诱导48 h后,与空白组相比,模型组HUVECs细胞活力显著降低(P0.01);与模型组相比,软坚清脉颗粒中、高剂量组的细胞活力显著升高(P0.01),且中、高剂量组的细胞活力明显高于低剂量组(P0.01)。②缺氧诱导24 h后,模型组细胞核固缩碎裂并出现凋亡小体,细胞凋亡率较空白组明显升高(P0.01);软坚清脉颗粒各剂量组的核固缩和凋亡小体明显减少,细胞凋亡率较模型组均显著降低(P0.05,P0.01),且中、高剂量组的细胞凋亡率明显低于低剂量组(P0.01)。③与空白组相比,模型组细胞MMP显著降低(P0.01);与模型组相比,软坚清脉颗粒各剂量组细胞MMP显著升高(P0.05,P0.01),且中、高剂量组细胞的MMP明显高于低剂量组(P0.01)。④与空白组相比,模型组细胞TL1A和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.01);与模型组相比,软坚清脉颗粒各剂量组细胞TL1A和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05,P0.01),且中、高剂量组细胞TL1A和Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平明显低于低剂量组(P0.01)。结论:软坚清脉颗粒含药血清可通过稳定MMP抑制缺氧诱导的HUVECs细胞凋亡,其作用机制可能与抑制TL1A和Caspase-3表达有关。     

维A酸对人类恶性黑色素瘤A375细胞增殖的影响

目的:研究维A酸(RA)抑制人类恶性黑色素瘤A375细胞增殖的作用. 方法:用RA(at-RA, 13-cis-RA和9-cis-RA)、MA(RXR激动剂)及TTNPB(RAR激动剂)处理培养的人类恶性黑色素瘤A375细胞. 用MTT法研究这些试剂对细胞增殖的影响,用流式细胞仪研究这些试剂对细胞周期的影响. 结果:RA和TTNPB均可抑制A375细胞的增殖,而MA无此作用. 在作用24 h时的不同浓度(10-5, 10-6和10-7 mol/L)以及作用48和72 h的10-5 mol/L浓度时,TTNPB的抑制增殖作用均强于其它试剂处理组(P<0.05). 细胞周期分析结果显示RA和TTNPB均可诱导A375细胞G0/G1期阻滞,而MA无此作用. 在作用24和48 h时的10-5 mol/L浓度时,TTNPB的诱导G0/G1期阻滞作用均强于其它试剂处理组(P<0.05). 结论:RA可抑制人类恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,并诱导G0/G1期阻滞. RA的这些作用与RXR的激活无关,而可能与RAR的激活有关.     

NF-κB抑制剂PDTC对人黑素瘤A375细胞增殖的影响

目的研究核转录因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲盐酸(PDTC)对人黑素瘤A375细胞的生长抑制作用。方法不同浓度的PDTC作用于A375细胞不同时间后,MTT法测定其对A375细胞增殖的抑制率,免疫细胞化学方法检测PDTC作用下A375细胞增生细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.05,P<0.01),呈时间和剂量依赖性;与对照组相比,PDTC作用后A375细胞PCNA表达降低(P<0.01),且呈明显的剂量依赖关系。结论 PDTC具有显著抑制人黑素瘤A375细胞生长及PCNA表达的作用,是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。     

三氧化二砷对恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用.方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的三氧化二砷诱导A375细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率.结果:As2O3浓度分别为5 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L时,A375细胞的早期凋亡率分别为9.75%、50.9%和43.7%,晚期凋亡率分别为2.10%、4.61%和11.2%,总凋亡率分别为11.85%、55.51%和54.9%.结论:As2O3可诱导A375细胞早期凋亡和晚期凋亡,10 μmol/L和20μmol/L的As2O3可明显增加A375细胞总凋亡率.     

补中益气汤含药血清干扰A549/DDP生长作用的实验研究

目的从细胞水平探讨补中益气汤含药血清改善A549/DDP耐药作用并选择最佳含药血清的浓度。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备高、中、低剂量补中益气汤的含药血清,分别以5%和10%的浓度作用于人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP 48 h,观察补中益气汤含药血清对A549/DDP生长的影响并通过MTT法检测各组细胞的抑制率,以此筛选出最佳含药血清浓度,计算出最佳浓度含药血清对A59/DDP的耐药逆转倍数。结果补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度依赖关系。5%高剂量组对A549/DDP的抑制率高于5%中剂量组和5%低剂量组,并与5%空白血清组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。10%各剂量组对A549/DDP的抑制率与10%空白血清组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。经筛选,10%中剂量含药血清作用48 h为最佳干扰浓度,在此浓度下,A549/DDP对顺铂的IC50明显下降（P〈0.05）,对A549/DDP细胞的逆转倍数为2.46。结论 10%中剂量含药血清干扰48 h可作为后期药物实验的含药血清加药浓度及观察时间筛选的实验依据,补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP的耐顺铂作用。