三七总皂对氧化应激所致心肌细胞凋亡的抑制机制

目的 探讨三七总皂苷对氧化应激所致心肌细胞凋亡的抑制机制。方法培养乳鼠心肌细胞,采用40μM H2O2建立氧化应激损伤导致心肌细胞凋亡模型,使用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况,运用westernblot检测caspase3、Cytochromec在细胞内的表达。结果H2O2作用5h可导致心肌细胞凋亡,三七总皂苷显著抑制心肌细胞凋亡,对照组、模型组和试验组凋亡率分别为（3．58±0．53）％、（26．34±3．00）％、（9．89±1．64）％,并能明显抑制caspase3、CytochromeC在细胞内的表达,对照组、模型组和试验组caspase3表达指数分别为8．48±1．36、41．51±4．68、9．86±1．56,对照组、模型组和试验组Cytochrome c表达指数分别为8．63±0．52、46．06±3．53、10．40±1．12。结论三七总皂苷对H2O2所致的心肌细胞凋亡具有明显的抑制作用,其作用机制可能是减少Cytochromec释放,抑制心肌细胞内caspase 3表达。     

氧化应激和内质网应激在高糖诱导大鼠心肌细胞凋亡中的关系

目的探讨活性氧（ROS）介导的氧化应激（OS）与内质网应激（ERS）在高糖诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用关系。方法采用混合酶一步消化法分离SD大鼠乳鼠心肌细胞,将培养的心肌细胞分为3组,对照组、高糖组和抗氧化剂组,流式细胞术检测细胞凋亡,分别检测各组心肌细胞中ROS的含量和上清液中超氧化物歧化酶（SOD）的含量,以反映心肌细胞的OS水平,再利用免疫组化法和RT-PCR检测心肌细胞中内质网应激标志因子Caspase-12的表达情况。结果与对照组相比,高糖组心肌细胞中ROS含量明显增多（P〈0.01）;SOD含量显著下降（P〈0.01）;与高糖组相比,抗氧化剂组ROS含量明显降低（P〈0.01）,抗氧化剂组较高糖组ROS含量明显降低（P〈0.01）,SOD含量升高（P〈0.05）;免疫组化法检和RT-PCR测心肌细胞中内质网应激标志因子Caspase-12检测结果显示,高糖组明显大于对照组,抗氧化剂组与高糖组比较表达显著下调（P〈0.01）。结论高糖诱导的心肌细胞凋亡中,ROS启动的OS和ERS可能共同参与了心肌细胞凋亡过程。     

氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,分别用10～50mmol/L终浓度的葡萄糖进行干预,MTT测定各组心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、脱氧核糖核酸转移酶原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术用于观察和检测心肌细胞凋亡;将心肌细胞分为3组:对照组、高糖组和抗氧化剂组,分别检测各组上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌细胞的氧化应激水平。结果:MTT结果显示高糖能浓度依赖性地抑制心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、TUNEL染色和流式细胞术均表明高糖能诱导心肌细胞凋亡;与对照组相比,高糖组LDH、MDA含量明显增高,SOD含量显著下降,与高糖组相比,抗氧化剂组LDH,MDA含量明显下降,SOD含量显著升高;流式细胞检测显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而抗氧化剂组细胞凋亡率较高糖组则显著下降。结论:氧化应激是高糖诱导心肌细胞凋亡的一个重要机制。     

内质网应激介导过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的调控机制有关。方法给予乳鼠心肌细胞高低两种浓度(500、100μmol/L)和不同时间(0、4、8、12、24h)过氧化氢(H2O2)刺激。采用流式细胞仪检测各组心肌细胞的凋亡率;苏木精-伊红染色法(HE)观察心肌细胞凋亡的典型形态;通过Western blot检测ERS标志蛋白p-PERK和CHOP的表达变化。进一步采用ERS抑制剂化学伴侣PBA(4-phenylbutyric acid)抑制心肌细胞ERS,Western blot检测p-JNK、p-PERK和CHOP蛋白的表达变化;采用流式细胞仪检测Caspase-12和Caspase-3的活性。结果①低浓度H2O2可显著诱导心肌细胞凋亡,高浓度H2O2则导致心肌细胞发生坏死;100μmol/L H2O2刺激心肌细胞8h时其凋亡率最高。②心肌细胞发生凋亡时ERS标志蛋白p-PERK和CHOP表达显著增高。③ERS抑制剂PBA预处理心肌细胞,可有效抑制H2O2诱导的p-PERK、CHOP表达及Caspase-3、Caspase-12活性的上调,与单纯H2O2处理组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论低浓度H2O2可通过促发ERS整合调控机制介导心肌细胞凋亡。这一结果将从ERS整合调控细胞应激的角度为心血管疾病的防治提供新思路。     

大鼠非心肌细胞对心肌细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠心脏非心肌细胞对心肌细胞凋亡的影响。方法分别培养SD乳鼠心肌细胞(MC)和非心肌细胞(NMC)。制备非心肌细胞条件培养液(NMCM)。培养细胞的分组及药物干预:M组:MC+新鲜培养液;C组:MC+70%新鲜培养液+30%NMCM;L组:MC+新鲜培养液+Losartan;CL组:MC+70%新鲜培养液+30%NMCM+Losartan;P组:MC+新鲜培养液+PD123319;CP组:MC+70%新鲜培养液+30%NMCM+PD123319;LP组:MC+新鲜培养液+Losartan+PD123319;CLP组:MC+70%新鲜培养液+30%NMCM+Losartan+PD123319。用图像分析仪测定各组心肌细胞的面积,用流式细胞仪检测各组心肌细胞凋亡情况。结果用药物干预后,L组、P组及LP组与M组比较,心肌细胞面积无明显变化(P>0.05);C组及CP组细胞面积较M组、L组、P组、LP组明显增大(P<0.01)。C组及CP组细胞凋亡率明显高于其他组(P<0.001),CP组细胞凋亡较C组更为明显(P<0.05)。结论非心肌细胞培养液在促进心肌细胞肥大的同时,也促进了细胞的凋亡。Losartan可抵消非心肌细胞条件培养液促进心肌细胞凋亡的作用,提示AT1受体介导促进心肌细胞凋亡。     

凋亡调控因子XIAP对缺氧诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的建立体外培养新生大鼠心肌细胞缺氧模型,用XIAP进行干预,以探讨XIAP能否抑制细胞凋亡。方法培养新生SD大鼠（1～3天龄）心肌细胞至第4天,脂质体介导转染pDsRed2-XIAP、pDsRed2-N1质粒和不转染的心肌细胞分别设为模型组、对照组和空白组。以物理性缺氧（95%N2＋5%CO2）方式培养,在6h、12h用流式细胞仪AnnexinVFITC及原位末端标记法（TUNEL）检测细胞调亡,结果采用统计学SPSS11.5软件包进行单项方差分析。〈0.05,有显著差异。结果①缺氧后经TUNEL检测,各组均有心肌细胞凋亡;②流式细胞仪检测心肌细胞凋亡随缺氧时间延长而增多;③模型组心肌细胞凋亡率较对照组与空白组明显减少（〈0.01）。结论缺氧能诱导心肌细胞凋亡。XIAP能明显减少缺氧诱导鼠心肌细胞的凋亡。     

牛磺酸抑制肾性高血压大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的：探讨牛磺酸对肾性高血压大鼠左室心肌细胞凋亡的影响。方法：75只大鼠随机分为3组，模型组、假手术组和给药组。其中模型组：采用二肾一夹（2KIC）法建立肾血管性高血压大鼠模型；给药组：高血压模型成功后，于术后4周末开始灌饲牛磺酸50mg／（kg·d）8周。采用末端脱氧核昔酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）进行心肌细胞捌亡原位检测；放射免疫法检测心肌AngⅡ含量；分光光度计法检测心肌细胞DNA含量。结果：进入结果分析的模型组、似手术组及用药组分别为17、30和8只。与假手术组相比，模型组术后第4、12周末心肌细胞凋亡均明显增多（P〈0．01）；心肌细胞DNA含量和AngⅡ含量亦明显增多（P〈0．01）。与4周末模型组相比，12周末模型组血压心肌细胞凋亡增多（P〈0．05），心肌DNA含量明显增多（P〈0．01），AngⅡ含量增多（P〈0．01）。与12周末模型组相比，给药组心肌细胞凋产减少（P〈0.01），心肌DNA和AngⅡ含量明显减少（P〈0．01）。结论：肾性高廊压大鼠心肌细胞凋亡增多，牛磺酸治疗可抑制心肌细胞凋亡。     

慢病毒介导LOX-1基因RNA干扰抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡

摘要：目的构建大鼠凝集素养氧化低密度脂蛋白受体（LOX-1）RNA干扰慢病毒表达载体并观察LOX-1在氧化应激诱导心肌
细胞凋亡中的作用。方法设计针对大鼠LOX-1的shRNA序列,将shRNA序列插入到pLentiLox3.7（pLL3.7）慢病毒载体中,构
建慢病毒载体pLL3.7-LOX1。慢病毒载体及包装载体dR8.9、VSVG共转染293FT细胞包装慢病毒。慢病毒侵染H9C2大鼠心
肌细胞,RT-PCR鉴定对LOX-1抑制效率,CCK-8、Hochest33258染色检测LOX-1对H2O2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响。结
果通过双酶切鉴定,证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,抑制LOX-1能抑制H2O2诱导的细胞活
力下降,减轻H2O2诱导的心肌细胞凋亡,与H2O2组比较均有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建靶向大鼠LOX-1基因RNAi
慢病毒载体,LOX-1激活可能在H2O2诱导心肌细胞凋亡中发挥重要作用。
     

m iR-21对氧化应激诱导的心肌细胞损伤的影响

目的：探讨miR‐21对过氧化氢（H2 O2）诱导的 H9c2心肌细胞损伤的影响。方法体外培养H9c2心肌细胞,实验分为4组,空白对照组、阴性对照组（miR‐21 mimics NC）、H2O2组、H2O2＋miR‐21 mimics组;采用MTT法及AnnexinV‐PI流式双染法检测各组细胞活力和凋亡情况;DCFH‐DA探针负载方法检测各组细胞内活性氧（ROS）水平;分光光度法检测各组丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测程序性细胞死亡因子4（PDCD4）、Bax、Bcl‐2及人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因蛋白（PTEN）／蛋白激酶（AKT）信号通路激活情况。结果与空白对照组及阴性对照组比较,H2 O2组中细胞活力下降（P＜0．01）,ROS荧光强度及MDA水平增加（P＜0．01）,SOD水平下降（P＜0．01）,细胞凋亡率上升（P＜0．01）,Bcl‐2表达及AKT磷酸水平下调（P＜0．01）,Bax、PDCD4及PTEN表达上调（P＜0．01）。与H2 O2组比较, H2O2＋miR‐21 mimics组中细胞活力提高（P＜0．01）,ROS荧光强度及MDA水平降低（P＜0．01）,SOD水平提高（P＜0．01）,细胞凋亡率降低（P＜0．01）,Bcl‐2表达及AKT磷酸水平上调（P＜0．01）,Bax、PDCD4及PTEN表达下调（P＜0．01）。结论 miR‐21过表达能显著抑制 H9c2心肌细胞氧化应激损伤,与清除细胞内氧化应激产物及抵抗细胞凋亡有关,可能是通过PTEN／AKT信号通路实现的。     

牛磺酸抑制肾性高血压大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的:探讨牛磺酸对肾性高血压大鼠左室心肌细胞凋亡的影响。方法:75只大鼠随机分为3组,模型组、假手术组和给药组。其中模型组:采用二肾一夹(2KIC)法建立肾血管性高血压大鼠模型;给药组:高血压模型成功后,于术后4周末开始灌饲牛磺酸50mg/(kg·d)8周。采用末端脱氧核昔酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)进行心肌细胞凋亡原位检测;放射免疫法检测心肌AngⅡ含量;分光光度计法检测心肌细胞DNA含量。结果:进入结果分析的模型组、假手术组及用药组分别为17、30和8只。与假手术组相比,模型组术后第4、12周末心肌细胞凋亡均明显增多(P<0.01);心肌细胞DNA含量和AngⅡ含量亦明显增多(P<0.01)。与4周末模型组相比,12周末模型组血压心肌细胞凋亡增多(P<0.05),心肌DNA含量明显增多(P<0.01),AngⅡ含量增多(P<0.01)。与12周末模型组相比,给药组心肌细胞凋亡减少(P<0.01),心肌DNA和AngⅡ含量明显减少(P<0.01)。结论:肾性高血压大鼠心肌细胞凋亡增多,牛磺酸治疗可抑制心肌细胞凋亡。     

ERK/CT-1通路对氧化应激致H9C2细胞凋亡的影响

目的 观察在氧化应激情况下心肌营养因子-1（CT-1）的表达情况及其对心肌细胞凋亡的影响,探讨其相关机制。方法 以过氧化氢刺激H9C2细胞建立氧化损伤模型,N-乙酰半胱氨酸或CT-1小干扰RNA（siRNA）与过氧化氢共同孵育以确定活性氧类（ROS）对CT-1表达的影响,以及CT-1在细胞凋亡中的作用。以丝裂原活化细胞外信号调节激酶（MEK/ERK）特异性抑制剂PD98059预处理H9C2细胞,以确定过氧化氢诱导CT-1表达的机制。结果 过氧化氢可剂量依赖性地诱导CT-1的过表达,N-乙酰半胱氨酸可显著抑制过氧化氢诱导的CT-1过表达。过氧化氢诱导的H9C2细胞凋亡可被N-乙酰半胱氨酸阻断,但CT-1 siRNA可加重过氧化氢诱导的H9C2细胞凋亡。过氧化氢可剂量依赖性地促进ERK的活化,PD98059预处理明显抑制过氧化氢诱导的CT-1上调。结论 过氧化氢能活化ERK/CT-1通路,从而缓解氧化应激引起的细胞凋亡。     

人OAZ突变基因的克隆构建及重组蛋白表达

目的 构建人鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)突变基因,重组至原核表达载体中并表达出重组蛋白.方法 采用基因定点突变技术在OAZ基因TCCTGATG(199～206)位置造成第202位碱基T碱基缺失,使核糖体的阅读框 1移位,连续表达OAZ基因的ORF2部分.测序鉴定后,重组质粒转化BL21菌,进行突变基因的蛋白表达.结果 重组质粒经测序后确认202位碱基T缺失,其余碱基序列无变化.重组的突变基因转入BL21后在IPTG诱导下表达OAZ全长蛋白,SDS-PAGE分析在相对分子质量45 900左右出现新的蛋白条带.结论 成功构建人OAZ突变基因重组质粒,转化BL21后表达出融合的OAZ全长蛋白,为进一步研究其临床应用打下基础.     

Protective effects and mechanism of Panax Notoginseng saponins on oxidative stress-induced damage and apoptosis of rabbit bone marrow stromal cells

Objective: To investigate the effects and possible mechanism of Panax Notoginseng saponins (PNS) on oxidative stress-induced damage and apoptosis in bone marrow stromal cells (BMSCs).Methods: BMSCs were isolated and cultured from 2-month-old New Zealand rabbits by the density gradient centrifugation combined with adherent method.The third passage cells were used for subsequent experiments.Oxidative stress was induced in cultured BMSCs by H2O2 (0.1 mmol/L).BMSCs were pretreated with 25-200 μg/mL PNS for 4 h before H2O2 treatment.Proliferation of BMSCs was observed using MTT assay.Alkaline phosphatase (ALP) activity,as an index of early osteoblastic differentiation,was determined with an ALP assay kit.Flow cytometry was used to observe the apoptosis of BMSCs by staining with annexinV-FITC/ propidium iodide.Oxidative stress level was examined by reactive oxygen species (ROS) assay.The protein expressions of Bax,Bcl-2 and Caspase-3 in BMSCs were analyzed by Western blotting.Results: PNS had different concentrationdependent effects on proliferation and osteoblast differentiation of BMSCs induced by H2O2.A PNS concentration of 100 μg/mL was determined as the optimal effective concentration.PNS markedly attenuated H2O2-induced apoptosis rate from 41.91% to 14.67% (P0.01).PNS significantly decreased ROS level induced by H2O2 (P0.01).Furthermore,pretreatment with PNS significantly reversed H2O2-induced inhibition of Bcl-2 expression and augmentation of Bax and Caspase-3 expression (P0.01).Conclusion: PNS had a protective effect on oxidative stress-induced damage and apoptosis in cultured rabbit BMSCs through scavenging ROS and regulating the Bcl-2/Bax pathway.     

姜黄素对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡及衰老的影响

目的 探讨姜黄素对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬、凋亡及衰老的影响.方法 体外培养HUVECs,分为对照组(只给予培养基),模型组(给予60 μmol/L H2O2),姜黄素组(给予60μmol/L H2O2+ 10 μmol/L姜黄素),3-MA组[(给予60 μmol/L H2O2+ 10μmol/L姜黄素+1 mmol/L3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine)],培养4d后,DCFH-DA法检测细胞培养液中活性氧(ROS)的含量,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老程度,Western blot技术检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达水平.结果 与对照组相比,模型组ROS含量、凋亡率、SA-β-gal阳性率及p62水平升高(均P＜0.05),而LC3-Ⅱ/Ⅰ比值差异无统计学意义(P＞0.05).与模型组比,姜黄素组ROS含量、凋亡率及SA-β-gal阳性率及p62水平降低(均P＜0.05),但LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高(P＜0.05).与姜黄素组比较,3-MA组ROS含量、凋亡率、SA-β-gal阳性率及p62水平升高(均P＜0.05),但LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低(P＜0.05).结论 姜黄素可减轻H2O2诱导内皮细胞凋亡及衰老,其机制与提高内皮细胞自噬有关.     

补阳还五汤对氧化应激诱导心肌细胞凋亡及5-LOX表达的影响

目的探讨补阳还五汤对氧化应激诱导乳鼠心肌细胞凋亡及5脂氧合酶(5-LOX)表达的影响。方法 SD乳鼠心肌细胞原代培养,不同剂量补阳还五汤预处理24 h后过氧化氢(H2O2)诱导心肌细胞氧化损伤。采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况,Western-blot检测5脂氧合酶(5-LOX)、Bax和Bcl-2的表达。结果 MTT结果显示,与对照组及补阳还五汤组比较,H2O2组心肌细胞活力显著降低(P0.01);与H2O2组相比,补阳还五汤组心肌细胞活力显著提高(P0.01)。流式细胞仪分析显示,H2O2组心肌细胞凋亡率为(19.47±1.31)%,明显高于对照组的(1.36±2.30)%,差异有统计学意义(P0.01);补阳还五汤低、中、高剂量组的细胞凋亡百分率分别为(13.25±2.84)%、(11.50±3.43)%、(9.94±4.01)%,明显低于H2O2组(19.47±1.31)%,差异有统计学意义(P0.01)。Western-blot结果显示,H2O2组心肌细胞Bcl-2蛋白表达比对照组及补阳还五汤组减少,5-LOX及Bax蛋白表达比对照组及补阳还五汤组高,差异均有统计学意义(P0.01)。不同剂量的补阳还五汤组Bcl-2蛋白表达高于H2O2组,5-LOX及Bax蛋白表达比H2O2组少(P0.01)。结论补阳还五汤能显著抑制氧化应激诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,并且呈剂量依赖性,补阳还五汤抑制心肌细胞凋亡的作用可能与抑制5-LOX表达有关。     

大鼠全脑缺血再灌注后皮质和海马中ODC的表达

目的：检测大鼠全脑缺血再灌注不同时相皮质、海马中鸟氨酸脱羧酶（ODC）的表达，探讨脑缺血再灌注后ODC活性增高的机制。方法：采用改良的四血管关闭法复制大鼠全脑缺血再灌注2 h，4 h，6 h，8 h动物模型；用逆转录PCR（RT-PCR）方法检测不同时相皮质、海马标本中ODC mRNA的表达。结果：对照组大鼠皮质、海马中未检测出ODC mRNA的表达；实验组大鼠皮质、海马中检测出有ODC mRNA的表达，且不同时相的表达差异具有统计学意义（P<0.01）。结论：大鼠全脑缺血再灌注后皮质、海马中ODC mRNA表达明显增加，脑缺血再灌注后ODC活性明显增加可能是ODC mRNA表达增加、酶蛋白合成增多的结果。     

中药有效成分抑制氧化应激诱导的神经细胞凋亡机制研究进展

氧化应激诱导的神经细胞凋亡,在神经退行性疾病的发生及发展过程中发挥重要作用,其调控途径主要包括NF-κB通路、p53通路、MAPK通路、PI3K/Akt通路、Nrf2通路等信号通路。大量文献报道,中药有效成分具有显著抑制氧化应激诱导的神经细胞凋亡的生物活性。本文综述近5年来中药有效成分抑制氧化应激诱导的神经细胞凋亡的相关机制研究进展,以期为阐释中药有效成分防治神经退行性疾病的作用机制,更有效地防治神经退行性疾病提供参考依据和线索。     

颗粒细胞氧化应激及凋亡对IVF-ET结局的影响

目的：研究颗粒细胞丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平及凋亡对IVF-ET结局的影响。方法：选取51名首次行IVF-ET的输卵管性因素不孕患者。用GnRH-a长方案超促排卵治疗,密度梯度离心法分离卵泡液中颗粒细胞,硫代巴比妥酸法测定MDA水平,化学发光法测定SOD水平,流式细胞仪法测定凋亡率。结果：妊娠组与未妊娠组相比有较低的MDA水平和凋亡率,较高的优胚率,差异有统计学意义（P<0.05）。MDA与受精率呈中度负相关（r=-0.425,P=0.002）,与获卵数、成熟卵子数、卵裂率、优胚率无明显相关关系;SOD与之均无相关关系;凋亡率与获卵数(r=-286,P=0.042)、成熟卵子数(r=-0.330,P=0.020)、优胚率(r=-0.311,P=0.026)呈低度负相关。MDA与SOD呈中度负相关(r=-0.471,P<0.001);与凋亡率呈中度正相关(r=0.475,P<0.001)。结论：氧化应激可能导致卵巢颗粒细胞凋亡,进而影响卵子的发育潜能及IVF-ET的结局。