血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的：建立血清蛋白质组双向凝胶电泳（2-DE）技术。方法：对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化。结果：建立了稳定的2-DE技术。结论：已建立的血清蛋白质2-DE技术，将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础。     

血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立

目的建立血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术.方法对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化.结果建立了稳定的2-DE技术.结论已建立的血清蛋白质2-DE技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.     

血清双向凝胶电泳体系的建立

目的:建立血清双向凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)技术体系.方法:用Proteoprep blue albumin depletion kit将血清中高峰度蛋白去除.预冷丙酮沉淀蛋白质后,加入样品溶解液充分溶解,进行等电聚焦电泳(isoelectric focusing,IEF)和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel elecrophoresis,SDS-PAGE),行硝酸银染色后,运用ImageMaster软件行初步分析.结果:通过调整,优化2-DE技术条件,建立了稳定的2-DE技术.结论:建立了相对稳定的人血清蛋白质2-DE技术,其稳定性、重复性好,为开展疾病蛋白质组学的研究奠定了基础.     

慢性肾小球肾炎肾阴虚证血浆蛋白质双向凝胶电泳分析

目的 初步观察慢性肾小球肾炎肾阴虚证患者血浆蛋自质组的变化与表达差异,为进一步探讨肾阴虚证的发生机制奠定基础.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离慢性肾小球肾炎肾阴虚证患者、肾阳虚证患者和正常人的血浆总蛋白,银染显色;PDQest软件对凝胶图像进行定性定量差异表达分析;从中选取差异表达蛋白质斑点,通过基质辅助激光...     

冠心病中医证侯特点的研究进展

冠心病是严重危害人类健康的常见病、多发病,包括心绞痛、急性心肌梗死(AMI)、心律失常及心功能不全等临床亚型,是导致人类死亡的第一杀手。中医药在防治冠心病方面凸显出良好的效果,有着广阔的的前景,尤以基于辨证论治的个体化治疗为特色。证候在中医辨证论治中起着承上启下的作用,它由结合病因病机而启,承引着诊断与治则。现代中医的辩证分析应结合现代医学理论进行宏观和微观相结合的辩证对于提高冠心痛的中医辨治水平具有重要意义。     

结核病患者和正常人血清蛋白质双向凝胶电泳差异比较

目的 初步探讨结核病患者与正常人之间血清蛋白质的差异,以期筛选出新的结核病实验诊断标志物。 方法 对10例菌阳肺结核（+组）、10例菌阴肺结核（－组）、10例肺外结核（肺外组）及10例正常人（正常组）分组混合血清应用17cm pH4-7 IPG胶条进行双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis, 2-DE）,每组平行电泳3块胶条。电泳结束后对2-DE胶条进行考马斯亮蓝染色,染色后用Umax powerlook2000扫描仪以投射方式、300dpi分辨率扫描获取2-DE图谱,然后用2-DE分析软件ImageMaster 2D Platium5.0进行分析。 结果 在正常组、＋组、-组、肺外组中,分别平均可以检测到310±64、307±33、296±54、267±23个清晰可见的蛋白质点。正常组与＋组、-组、肺外组的匹配率分别为(74±2)%、(76±2)%和(68±5)%。通过对4组2-DE图谱比较,＋组与正常组间有21个差异蛋白质点（其中9个上调）,-组与正常组间有18个差异蛋白质点（其中8个上调）,肺外组与正常组间有24个差异蛋白质点（其中7个上调）。将＋组、-组、肺外组合并为结核组与正常组比较有3个差异蛋白质点（其中2个上调）。 结论 结核病患者和正常人血清蛋白质存在差异,有望从血清中筛选出新的结核病实验诊断标志物。本研究建立了两者间血清蛋白质组差异蛋白质的初步模型,但有待进一步验证并进行差异蛋白质鉴定。     

冠心病冠状动脉搭桥术后患者的中医证侯分析

在邓铁涛教授指导下,观察了冠状动脉搭桥手术配合中医辩证治疗冠心病患者１８例。发现搭桥术后气虚痰瘀是基本病机,气阳虚衷、气阴不足多见,且多夹瘀夹痰。出现肺部并发症多辩为痰浊壅肺。认为冠脉搭桥术后结合中医辩证论治,能够为进一步探讨病变规律,防治并发症、提高成功率打好基础。     

先天性巨结肠组织蛋白质组成分的双向凝胶电泳分析

目的 分析先天性巨结肠(HD)狭窄段及正常段肠管组织双向凝胶电泳的蛋白质表达图谱,寻找差异表达的蛋白质.方法 采用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)分离20例HD患者配对狭窄段及正常段肠管组织的总蛋白,银染显色,ImageMaster 2D Platinum 6.0软件分析差异表达的蛋白质点.结果 获得了重复性较好的2-DE银染图谱.图像分析显示,狭窄段和正常段肠管组织凝胶的平均匹配率分别为78.1%和86.7%.差异分析共获得103个差异表达的蛋白质点.结论 采用2-DE分离HD肠管组织的总蛋白可获得重复性较好的结果.获得的差异蛋白质点为寻找HD早期诊断的分子标记物提供了基础资料.     

人结肠腺癌Lovo细胞系蛋白质双向凝胶电泳技术的建立及其优化

目的优化人结肠癌Lovo细胞系的蛋白质样品制备方法,建立人结肠癌Lovo细胞系的双向凝胶电泳(2-DE)图谱.方法分别用磷酸盐缓冲液和等渗蔗糖溶液冲洗细胞,胰酶酶解后裂解和皿上直接裂解的方法提取所培养Lovo细胞的总蛋白质,利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术进行分离,凝胶经银染显色后,用Melanie 4软件分析2-DE图谱.结果以等渗蔗糖缓冲液冲洗细胞并经皿上直接裂解的方法所提取Lovo细胞总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人结肠癌Lovo细胞系2-DE图谱.结论以等渗蔗糖溶液冲洗细胞结合皿上直接裂解是一种较好的细胞蛋白质双向电泳样品制备方法,初步建立了分辨率较高且重复性好的人结肠癌Lovo细胞系蛋白质双向凝胶电泳图谱.     

慢型克山病患者血清蛋白质双向凝胶电泳图谱分析

目的 分析克山病(KD)患者差异表达的血清蛋白质。 方法 以慢型KD和正常血清标本为研究对象,利用双向凝胶电泳(2-DE)分离KD和健康人血清蛋白质,银染显色,PowerLook2100XL扫描仪(Umax)透射扫描获取图像,ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析图像。并通过与ExPASy-SWISS-2DPAGE数据库关联,推测KD相关的差异蛋白。 结果 建立了稳定的慢型KD和健康人血清蛋白质2-DE图谱,分别检测到808和814个蛋白质点,匹配率96.5475%。软件分析显示2组样本共有44个差异蛋白质点,11个仅在KD组血清中表达,12个仅在正常血清组出现,21个为共有蛋白但在表达量上存在差异(KD组14个上调、7个下调,差异倍数 ≥ 3倍,P<0.01)。将差异蛋白与ExPASy-SWISS-2DPAGE数据库关联,在匹配值范围内出现的353个蛋白中,仅比对出KD 2-DE图谱胶内编号为1177的蛋白点在属性上与数据库中的P02774 2-D0004T6名为维生素D结合蛋白(VDBP)匹配度最高,推测编号为1177的差异蛋白是VDBP。 结论 KD患者与正常人血清蛋白质组存在明显差异。推测VDBP可能通过炎症免疫反应途径参与了KD的心肌损伤。     

人胃癌细胞株SGC-7901蛋白质组双向电泳图谱的建立及优化

目的建立以双向电泳技术结合质谱鉴定的蛋白质组学研究方法,对β3GnT8（GalT7）基因中度表达的人胃癌细胞株SGC-7901进行研究,构建差异蛋白质组学研究平台。方法使用双向电泳、图像扫描系统及图像分析软件,选择合理pH范围及长度的固相pH梯度（IPG）胶条,对样品裂解方法、电泳上样量、电泳条件、染色方法进行优化。结果使用24cm、pH4～7的IPG胶条,得到重复性及分辨率均较好的蛋白质点,对此等电点范围的蛋白质点分布有了初步了解。结论建立了以双向电泳技术结合质谱鉴定的蛋白质组学研究方法,为下一步进行SGC-7901β3GnT8（GalT7）基因敲减亚细胞群的差异蛋白质组学研究奠定了基础。     

双向电泳结合质谱法分析双相情感障碍患者血浆差异表达蛋白

目的 应用比较蛋白质组学分析静息相双相情感障碍(bipolar disorder,BD)患者和健康对照血浆的差异表达蛋白质,以期找到与情感发作无关但和疾病发生相关的蛋白质.方法 收集BD静息相患者(n=12)和健康对照者(n=20)空腹血浆,MARS柱去除7种高丰度蛋白质,运用2-DE分离血浆蛋白,PD-Quest分析后MALDI-TOF/TOF鉴定差异表达的蛋白点,MetaCore软件进行生物信息学分析,Western blot验证部分差异蛋白结果.结果 经2-DE分析在静息相BD患者血浆中找到45个差异蛋白点,质谱鉴定出27个非冗余蛋白质,生物信息学分析显示差异蛋白主要与免疫调节相关,Apo A1和A2M经Western blot验证差异与2-DE结果一致且有统计学意义(P＜0.05).结论 与健康对照相比,BD静息相患者存在蛋白质谱的异常表达.差异表达蛋白提示BD静息相患者存在免疫功能异常及脂质代谢紊乱.     

Proteomic analysis of the alteration of protein expression in the placenta of Down syndrome

Background  Down syndrome (DS) is the most common form of human aneuploidy, and there is no effective therapy for the chromosomal abnormalities. We aimed to unravel the molecular mechanisms underlying DS and to provide clues to prenatal screening.

Methods  A series of proteomics-based experiments was conducted using 19 patients with DS fetuses and 17 normal pregnancies. The proteome of placenta was investigated as displayed by two-dimensional difference gel electrophoresis (2D-DIGE), and comparisons were made between placentas that developed under DS and normal pregnancy conditions. Multivariate analysis of the resulting protein patterns revealed DS-specific protein expression. Matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) time-of-flight/time-of-flight (TOF/TOF) high-resolution tandem mass spectrometer (MS)-based identification was successful for 12 out of 17 selected protein spots.

Results  Among those, three proteins involved in the resist of reactive oxygen species (ROS) and neurogenesis were more abundant in the DS placenta (superoxide dismutase 1, endoplasmic reticulum protein 29 and heat shock protein beta-1), while peroxiredoxin-6 involved in cell defense mechanism against ROS was expressed at a higher level in the normal pregnancies.

Conclusion  Knowledge of the DS placenta proteome emphasizes the role of proteins involved in anti-oxidation during DS, and may form the basis of a potential approach to minimize the incidence of DS in the clinical setting.

     

脑脊液双向电泳中去除高丰度蛋白技术的研究

目的 建立一种去除脑脊液高丰度蛋白的方法并进行双向电泳分析评价。方法 采用超滤法浓缩脑脊液样品至适当体积,用商业化血清白蛋白和免疫球蛋白G（IgG）去除试剂盒处理,得到含低丰度蛋白的脑脊液,再用丙酮沉淀法除盐并进行二维凝胶电泳（2-DE）分析和2-DE Western blot鉴定。结果 此法可有效去除脑脊液中的白蛋白和IgG,2 DE图谱分析显示,去除高丰度蛋白后脑脊液低丰度蛋白富集明显,与2-DE Western blot结果对比,四连接素的三个不同片段去除高丰度蛋白后可全部显现。结论 本研究建立的脑脊液高丰度蛋白去除方法简便易行,有利于双向电泳中低丰度蛋白的检出。     

前列腺素E1对原发性肾病综合征患者尿蛋白、血浆白蛋白的影响

目的　观察前列腺素E1(PGEl)对原发性肾病综合征(PNS)患者尿蛋白、血浆白蛋白的影响。方法　40例PNS患者分为观察组(n＝20)和对照组(n＝20)，比较观察组静脉推注PGE1治疗前、后PNS患者的24h尿蛋白、血浆白蛋白及平均动脉压的差异，同时与对照组进行比较。结果　治疗2周后，两组患者24h尿蛋白均较治疗前显著降低(P＜0．01)，观察组24h尿蛋白明显低于对照组(P＜0．05)；PGE1对两组患者血浆白蛋白和平均动脉压无明显影响(P＜0.05)。结论 PGE1可以减少PNS患者尿蛋白流失。     

应用MALDI-TOF-MS分析大肠癌血浆相关蛋白差异表达

目的 通过对大肠癌患者血浆蛋白质组学表达差异的研究,以期寻找大肠癌早期诊断及新相关特异的性标志物.方法 采用弱阳离子(MB-WCX)磁珠结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF-MS)技术检测样品血浆蛋白质质谱,运用Ciphergen ProtemChip Software 3.2.1软件及Biomark Wizard 5.0软件进行数据分析筛选,并对差异表达显著的质谱峰于Swiss-Prot及TrEMBL蛋白数据库进行检索.结果 通过对比研究大肠癌组、大肠腺瘤组及正常对照组血浆差异表达质谱峰,共发现23个差异表达蛋白质谱峰,其中在大肠癌组中4个显著差异高表达(P＜0.05),荷质比(M/Z)分别为6 683、8 700、9 187、9 342;虽在大肠腺瘤组与正常组蛋白质谱峰表达无显著性差异(P＞0.05),但三组间荷质比为6 683、8 700蛋白表达呈一定递进性趋势;检索Swiss Prot蛋白质数据库结果:M/Z 6 683是成纤维细胞生长因子受体-l(FGFRl),其余均为未知蛋白,有待进一步鉴定.本研究通过表达差异蛋白建立诊断模型对大肠癌预测的准确率、敏感性、特异性分别为89.19％、83.33％、84％.结论 运用MALDI-TOF-MS技术分析大肠癌血浆蛋白质差异表达对大肠癌早期诊断以及发现或寻找新的肿瘤标志物可能具有一定的临床价值.     

人类精浆蛋白质组学研究进展

随着男性生殖基础研究和蛋白质组学技术的发展,人类精浆蛋白的蛋白质组学研究飞速发展,为未来男性生殖疾病的诊断和治疗奠定基础.     

霍乱弧菌O1群稻叶型流行株和非流行株的蛋白质谱特征分析

目的探讨霍乱弧菌O1群稻叶型流行株和非流行株的蛋白表达的差异。方法利用裂解液处理霍乱弧菌,提取全菌蛋白;采用pH梯度等电聚焦对菌蛋白进行双向电泳;考马斯亮蓝染色后获得的双向电泳图谱,并利用ImageMaster2DElite5.0图象分析软件进行分析,找出差异蛋白;在此基础上,胰蛋白酶消化这些特殊差异蛋白,并进行质谱(MALDI-TOF-MS)分析。结果获得了(1081±16)个蛋白斑点,蛋白主要集中在pI4.00～7.20之间,重复胶的匹配点数为(1057±28),匹配率为97.85%;发现了有明显差异的21个蛋白点,并进行了质谱鉴定。结论获得了霍乱弧菌O1群稻叶型流行株和非流行株的差异表达蛋白。     

基于2-DE蛋白质组学的气虚血瘀慢性心肌缺血模型的能量代谢紊乱及心肌损伤研究

Objective: To inquire the characteristic proteins in chronic myocardial ischemia by testing two-dimensional electrophoresis (2-DE) map to explore the possible inherent pathological mechanism and the therapeutic intervention of qi deficiency and blood stasis syndrome. Methods: Ameroid constrictor ring was placed on the first interval of left anterior descending coronary artery to prepare chronic myocardial ischemia model on Chinese miniature swine. Animals were randomly divided into sham group and model group with 10 animals in each group, respectively. The dynamic symptoms observation of the four diagnostic information was collected from 0 to 12 weeks. Echocardiography was employed to evaluate cardiac function and the degree of myocardial ischemia, 2-DE and matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS) were used to carry out proteomics research on animals. Enzyme-linked immunosorbent assay was applied to identify the relevant differential proteins on chronic myocardial ischemia with qi deficiency and blood stasis syndrome. Results: The preliminary study found that at the 12th week, chronic myocardial ischemia with qi deficiency and blood stasis syndrome model was established stably. Compared with the sham group, there were 8 different proteins down-regulated, 22 proteins up-regulated significantly. After validated by MALDI-TOF-MS/MS, 11 protein spots were identified. Distinct proteins were mainly associated with energy metabolism and myocardial structural injury, including isocitrate dehydrogenase 3 (NAD+) alpha, NADH dehydrogenase (NAD) Fe-S protein 1, chain A (crystal structure of aldose reductase by binding domain reveals a new Nadph), heat shock protein 27 (HSP27), oxidoreductase (NAD-binding protein), antioxidant protein isoform, cardiac troponin T (cTnT), myosin (myosin light polypeptide), cardiac alpha tropomyosin, apolipoprotein A-Ⅰ and albumin. Conclusion: Down-regulated energy metabolism disorder mediated by NADH respiratory chain and myocardial injury may be the pathogenesis of myocardial ischemia with qi deficiency and blood stasis syndrome. These proteins may be the potential diagnostic marker(s) for qi deficiency and blood stasis syndrome, finally provided new clues for new therapeutic drug target of Chinese medicine.     

血浆置换在产后HELLP综合征治疗中的作用

目的 探讨血浆置换对产后HELLP综合征的临床治疗效果.方法 选取2014年1月至2015年12月,该院收治的44例产后HELLP综合征患者作为治疗组,在常规治疗的基础上联合应用血浆置换;同时选取该院2012年1月至2013年12月收治的47例产后HELLP综合征患者作为对照组,进行常规治疗.在治疗前、治疗后检测血红蛋白(Hb)、血小板(PLT)、凝血酶原时间(PT)、血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清总胆红素(TBIL)、结合胆红素(DBIL)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平变化情况;同时比较两组患者住ICU时间,PLT、ALT、AST和LDH恢复时间.结果 治疗后,治疗组患者PLT、AST、ALT、LDH的水平与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);治疗组患者住ICU时间,PLT、ALT、AST和LDH的恢复时间均低于对照组(P＜0.05).结论 血浆置换可以明显改善产后HELLP综合征患者的临床症状,提高治愈率.