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肿瘤转移相关基因的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
肿瘤的分化、侵袭和转移等一系列病理过程受多种基因的调控,它们在肿瘤细胞浸润和转移机制中或被激活,或被抑制,相互协同或拮抗,最终影响肿瘤细胞的生物学特性。nm23基因抑制肿瘤转移,而CD44v、S100A4基因和TIAM1基因促进肿瘤的扩散。 相似文献
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目的:应用基因芯片研究人高、低转移肺巨细胞癌细胞株95-D和95-C的基因表达谱的差异,并筛选肺癌转移相关基因。方法:分别提取并纯化两细胞株的mRNA,运用基因芯片技术得到95-D和95-C细胞的差异表达基因谱。用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对部分有差异表达的基因进行分析验证。结果:在95-D和95-C细胞中有表达差异2倍以上的基因共389条,其中表达上调的121条,表达下调的268条。RT-PCR的验证结果与芯片的筛查结果基本相符。结论:人高、低转移肺巨细胞癌细胞株95-D和95-C在基因表达谱上存在显著差异,这种差异表达的意义有待进一步研究。 相似文献
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目的:构建含人DNA聚合酶B(DNA polymerase beta,polβ)基因启动子的萤光素酶报告基因表达载体pGL3polβ/promoter.方法:利用PCR技术扩增人类polβ基因启动子的核心片段,克隆至含新霉素抗性的萤光素酶表达载体pGL3-Neo-enhancer,构建含DNA polβ启动子的萤光素酶表达载体pGLpolβ/promoter,重组子经双酶切、PCR及测序鉴定.将构建的载体用脂质体转染体外培养的食管癌EC-1细胞株,应用萤光素酶测定系统检测萤光素酶的表达活性.结果:测序结果表明,克隆获得的polβ基因启动子序列与GenBank报道的一致,且插入方向正确.pGL3polβ/promoter组萤光素酶的表达活性(2 207 348.000±71 626.763)与空白组(451.670±23.347)和pGL3.Neo-enhancer组(4 884.330±1 623.047)相比,差异有统计学意义(F=5 681.596,P<0.05).结论:成功构建了含人DNA polβ基因启动子的萤光素酶报告基因表达载体pGL3polβ/promoter. 相似文献
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目的 建立一种利用双萤光素酶报告基因系统筛选能有效抑制目的 基因表达的小干扰RNA(siRNA)的方法.方法 以绿色荧光蛋白(GFP)基因为研究对象,构建3个候选的靶向GFP的siRNA表达质粒pSi-GFPsiRNA1、pSi-GFPsiRNA2、pSi-GFPsiRNA3和阴性对照pSi-Negative.构建拥有同一Kozak共有翻译启始序列、翻译启始密码子ATG的GFP与萤光素酶基因(LUC)的融合表达载体pGL3-GFPf.将包含3个GFPsiRNA靶序列的GFP片段插入到改建过的pGL3-promoter载体上LUC的3非翻译区(UTR),构建pGL3-GFPp.将GFP siRNA表达质粒联同内参照质粒pRL-TK分别与pGL3-GFPf、pGL3-GFPp共转化HEK293细胞.利用双萤光素酶检测试剂盒测定各组细胞中萤光素酶的活力水平,用荧光定量PCR检测各组细胞中GFP mRNA的表达水平.结果 同对照组相比,与pGL3-GFPf共转化GFP siRNA 表达质粒的各组细胞中萤火虫萤光素酶/海肾萤光素酶比值明显降低,其中GFPsiRNAl表达组中降低最显著(P<0.01);定量PCR检测也显示,GFPsiRNA1表达组中GFP mRNA的表达水平降低最明显(19<0.01).双萤光素酶活性检测和定量PCR结果还显示,与pGL3-GFPp共转化GFP siRNA表达质粒的各组细胞中,GFPsiRNA1抑制GFP的表达最显著(P<0.01).结论 本文建立了通过双萤光素酶活性检测来筛选有效的siRNA的方法,并为进行多个基因的有效siRNA的筛选提供解决方案.Abstract: Objective To establish an efficient method for screening effective small interference RNA (siRNA) using dual-luciferase reporter assay system. Methods Based on the siRNA expression vector pSilencer-4.1, 3 candidate green fluorescence protein (GFP) gene siRNA expression plasmids, namely pSi-GFPsiRNA1, pSi-GFPsiRNA2, and pSi-GFPsiRNA3, along with the negative control pSi-Negative, were constructed. Using the pGL3-promoter vector, the GFP-luciferase (GFP-LUC) expression plasmid pGL3-GFPf was constructed with the same Kozak consensus translation initiation site and start codon ATG for GFP-LUC coding sequence. The GFP fragment containing the target sequences of 3 GFP siRNAs was introduced into the 3' untranslate region of LUC in the modified pGL3-promoter vector to construct the plasmid pGL3-GFPp. The GFP siRNAs expression plasmids and Renilla luciferase reporter vector pRL-TK were co-transfected with pGL3-GFPf or pGL3-GFPp into the HEK293 cells, respectively. The luciferase activities were determined by dual-luciferase reporter assay, and the GFP mRNA expressions were detected by real-time quantitative PCR. Results In the groups cotransfected with GFP siRNAs expression plasmids and pGL3-GFPf, the luciferase activities were reduced obviously,and the reduction was more significant in cells transfected with GFPsiRNAl compared with the control cells (P<0.01).GFP mRNA levels were also markedly lowered in cells transfected with GFPsiRNAl as shown by real-time PCR (P<0.01). In addition, the results of dual-luciferase reporter assay and real-time PCR showed that among the groups cotransfected with GFP siRNAs expression plasmids and pGL3-GFPp, the GFP expression was inhibited most obviously by GFPsiRNA1 (P<0.01).Conclusion The dual-luciferase reporter assay system provides a useful method for screening effective siRNAs targeting specific genes. 相似文献
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肿瘤转移相关基因的表达谱研究 总被引:3,自引:1,他引:3
目的:运用基因表达谱芯片技术对肿瘤转移相关基因的表达谱进行研究。方法:对临床切除的肝癌和胰腺癌组织及相应的对照正常组织进行总RNA抽提,纯化后的mRNA进行逆转录制备杂交探针,应用BioDoor4096和BioDoor12800的全长基因DNA芯片筛选与肝癌和胰腺癌转移相关的基因。杂交后的信号用ScanArray3000扫描,结果用ImaGene3.0软件分析。结果:对肝癌和胰腺癌基因表达谱进行分 相似文献
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肿瘤转移相关基因mta1和肿瘤 总被引:3,自引:0,他引:3
肿瘤致死的主要原因是瘤细胞从原发灶转移到邻近和远隔器官 ,因此了解肿瘤转移所涉及的基因和基因产物是目前国内外一项重要的研究课题。转移是一个涉及多种基因及其产物的复杂过程 ,包括肿瘤细胞从原发灶脱离 ,侵入血管、淋巴管 ,黏附内皮细胞而停留在远隔部位 ,向外浸润 ,诱导血管形成 ,逃避宿主抗肿瘤反应和在转移部位生长。目前一些转移相关基因已被分离 ,包括nm2 3 ,mts 1 ,WDNM1 ,WDNM2 ,延长因子 1α(elongationfactor 1α) ,stromelysin3和PGM2 1。然而除nm2 3和stromelysi… 相似文献
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目的 克隆新的大肠癌转移相关基因,为进一步阐述大肠癌转移的分子机制提供线索。方法 利用抑制消减杂交技术,以1对来自同一亲本、转移能力不同的大肠癌细胞株SW620和SW480为研究对象,构建2种大肠癌转移促进基因和转移抑制基因的cDNA消减文库。随机挑取文库克隆进行差异筛选,对所得的差异片段进行测序和同源性分析,利用Northern Blot对新基因的表达情况进行验证。结果 两种消减文库分别含有235和232个白色克隆,90%以上的白色克隆含有插入片段。随机挑取约200个阳性克隆进行差异筛选。共获得29个差异片段。测序及同源分析发现15个为未知基因,GenBank登陆号为CD485499-CD485513。其中与5号染色体序列同源的基因有6个。结论 抑制消减杂交技术是筛选、克隆大肠癌转移相关新基因的有效手段;5号染色体上可能存在多个与大肠癌转移相关的新基因位点;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。 相似文献
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机体内有多种细胞可以分泌一种磷酸化蛋白——骨桥蛋白(OPN),依靠整合素的辅助,OPN在不同的生理和病理机制中起着重要的作用。很多种肿瘤组织都可以表达OPN。近来的一些研究表明,肿瘤细胞表达的OPN与肿瘤的侵袭、转移过程关系密切。作者就OPN的一般生物学特点及在肿瘤转移中所起的作用作一简要综述。 相似文献
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目的探讨人血清附睾蛋白4(HE4)和癌抗原125(CA125)在卵巢恶性肿瘤诊断中的检测价值。方法选择59例卵巢恶性病变患者(恶性病变组)、87例良性病变患者(良性病变组)及61例体检健康妇女(健康对照组),采用化学发光免疫法及酶联免疫法测定其血清CA125与HE4水平,并进行分析。结果卵巢癌恶性病变组的CA125与HE4水平均显著高于健康对照组和卵巢良性病变组,差异有统计学意义(P〈0.05);CA125与HE4联合检测的灵敏度(88.14%)明显高于单项检测的CA125(79.66%)或HE4(57.63%),联合检测的阴性预测值(89.86%)明显高于单独检测的CA125(83.78%)和HE4(76.19%)。结论血清CA125与HE4联合检测可提高卵巢恶性肿瘤的灵敏度、诊断及治疗水平。 相似文献
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目的通过检测肿瘤转移相关基因2( MTA2)及p53在结直肠癌中的表达水平,探讨两者与结直肠癌各项临床病理因素之间的关系及临床意义。方法收集手术切除的120例结直肠癌标本,均取其原发病灶,并收集距肿瘤组织5 cm以上的非肿瘤性结直肠黏膜组织30例作为对照。用免疫组织化学法检测其MTA2、p53的表达。并根据不同的临床病理因素进行分组,分别比较两者的阳性表达与年龄、性别、病变部位、病理大体类型、浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移及TNM分期的关系,分析其临床意义。结果免疫组化结果显示结直肠癌组织中 MTA2阳性表达率为59.16%(71/120),p53阳性表达率为61.67%(74/120),两者在正常结直肠黏膜组织表达率均为0,差异有统计学意义(P<0.01)。 MTA2阳性表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期具有显著相关性( P<0.05),与其余各因素无显著相关性(P>0.05)。 p53阳性表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),与其余各因素无显著相关性(P>0.05)。结论 MTA2可作为新的结直肠癌临床标志物及治疗靶点,其临床意义可能优于p53。 相似文献
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用肿瘤转移基因芯片筛查乳腺癌转移相关基因表达谱 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:研究人乳腺癌组织转移相关基因表达谱,观察乳腺癌转移过程中有关基因的功能。方法:挑选399个与肿瘤转移相关的基因克隆,经PCR纯化后,点布于多聚赖氨酸包备的玻片上。提取正常乳腺组织及乳腺癌组织的总RNA,反转录后标记cDNA探针,与cDNA微阵列杂交。使用ScanArray4000共聚焦激光扫描仪扫描芯片。结果:81个基因与乳腺癌组织转移相关,包括癌基因、抑癌基因、运动因子、粘附因子、细胞凋亡调节因子、基质金属蛋白酶、血管形成因子等。结论:多个基因参与乳腺癌转移过程,它们共同作用,调节肿瘤细胞的生物学特性,促使乳腺癌转移和进展。 相似文献
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肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82在不同转移潜能癌细胞中的表达 总被引:12,自引:1,他引:11
目的 探讨新发现的肿瘤转移抑制基因KAI1/CD82与人癌细胞转移潜能的关系,方法 应用Northernblot杂交及聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法,检测3组8种不同转移具有转移性的前列腺癌细胞系PC3和PC3M及高转移性的人肺PG细胞,KAI1mRNA的表达降低(积分吸光度分别为0.0319,0.0266和0.0549)而在无转移性的人肺PAa细胞则为高表达(积分吸光度 相似文献
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通过检测人卵巢癌标本中肿瘤转移抑制基因nm23-H1mRNA的表达,了解其临床意义及其与预防的关系,方法应用原位杂交技术检测43例人卵巢癌标本中nm23-H1mRNA的表达水平。结果nm23-h1mRNA的表达水平与卵巢癌的病理组织学类型无关;与患者术时有淋巴结或大网膜转移呈负相关,且转移灶的阳性表达率低于原发灶。结论nm23-H1基因在人卵巢癌的扩散和转移过程中可能发挥着抑制作用,它在卵巢癌组织 相似文献
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利用基因芯片技术筛选不同转移能力骨肉瘤细胞差异表达基因 总被引:14,自引:0,他引:14
目的:运用基因芯片技术研究骨肉瘤转移相关基因表达.方法:提取具有不同转移特性的骨肉瘤细胞总RNA,反转录制备杂交探针,应用基因芯片筛选与骨肉瘤转移相关的基因.杂交信号用ScanArray3000扫描,结果用ImaCene3.0软件分析.结果:对原位及转移骨肉瘤细胞基因表达诺分析,发现两种肿瘤细胞中存在差异表达基因,其中有抑癌基因、转移相关蛋白基因、细胞周期蛋白基因等,与肿瘤发生发展密切相关.结论:基因芯片技术对肿瘤转移机制研究有重要意义。 相似文献
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目的:探讨血清凝集肿瘤细胞活性与肿瘤转移的相关性及其对恶性肿瘤临床诊断的意义。方法:采用体外细胞凝集实验,通过计算肿瘤细胞凝集率测定血清活性。结果:正常人、良性肿瘤患者、早期及中晚期恶性实体瘤患者的血清均诱导人鼻咽癌细胞凝集,凝集率分别为352%±95%、381%±112%、507%±116%及723%±104%;血清此活性在恶性肿瘤诊断上的灵敏度为906%,特异性为921%,准确性为913%。结论:血清凝集肿瘤细胞活性与肿瘤转移呈正相关,其可能是一新的广谱恶性肿瘤标志,在恶性肿瘤的临床诊断及预后上具有重要应用价值。 相似文献