TNBS诱导的大鼠炎性肠病模型的建立

目的 建立2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的炎性肠病动物模型,以用于相关药物评价.方法 雄性Wistar大鼠50只随机分为TNBS造模组、对照组及正常组,各组大鼠分别用2% TNBS、50%乙醇及生理盐水灌肠.观察各组大鼠的粪便、精神状态和进食情况,并每日称量体重及食重.分别在造模后第3、6和14天处死大鼠,分离结肠组织,制作病理切片,HE染色后显微镜下观察结肠组织病理变化.结果 TNBS造模组在造模后第1天即表现出明显的肠道稀便和血便,并持续约8天;造模后体重和进食明显下降,持续7~10天后缓解;造模后第3天可观察到明显的肠道病理改变,并逐渐加重,至第6天时可见黏膜的大量炎性细胞浸润以及肠壁的透壁性坏死.造模对照组大鼠在造模后第1天部分稀便,第2天即恢复正常,造模后第3天肠道可见轻度病理改变.正常组大鼠一切均正常.结论 TNBS诱导的大鼠造模后表现出明显的炎性肠病症状,可作为IBD病因及治疗药物研究的有效模型.     

不同浓度乙醇对TNBS诱导小鼠克罗恩病模型的影响

建立2,4,6-三硝基苯磺酸( TNBS)小鼠克罗恩病( CD)模型,通过观察小鼠每日表现、存活率、疾病活动指数( DAI)、结肠肉眼观和组织学变化及肠道纤维化情况,筛选出造模所需最佳乙醇浓度。各模型组小鼠均不同程度出现CD的一般表现。随着乙醇浓度增加,小鼠 DAI评分、肠道病理及纤维化评分逐渐增高,以 TNBS/50%乙醇组最为显著,最类似人类CD病理改变。50%为造模所需最佳乙醇浓度,其配比2．0 mg TNBS诱导的模型成模率高且小鼠生存率适中,较适宜用作CD发病机制研究和新靶点的探索。     

Pim-1 抑制剂对TNBS 诱导的小鼠炎症性肠病的疗效

目的：观察莫洛尼小鼠白血病病毒的前病毒插入点激酶1(provirus integration site for Moloney murine leukemia virus kinase 1,Pim-1)抑制剂对2, 4, 6-三硝基苯磺酸(2, 4, 6-trinitrobenzenestdfonic acid,TNBS)诱导的小鼠炎症性肠病的治 疗作用,同时研究Pim-1抑制剂对肠黏膜中T细胞分化的影响。方法：将45只BALB/c小鼠随机分成5组(n=9)：溶媒对 照组、TNBS模型组、小剂量Pim-1抑制剂组、大剂量Pim-1抑制剂组、激素治疗组。用TNBS和乙醇混合液灌肠诱导小 鼠炎症性肠病模型,小剂量Pim-1抑制剂组、大剂量Pim-1抑制剂组造模后分别采用5,10 mg/kg Pim-1抑制剂每天1次腹 腔注射,激素治疗组给予0.1 mg泼尼松每天1次灌胃,共5 d。观测各组小鼠的一般情况、疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分、小鼠结肠长度、结肠大体标本评分及病理学评分,评估Pim-1抑制剂对小鼠炎症性肠病的治疗作 用,并与激素治疗组比较。运用RT-PCR、Western印迹分别检测Th 1,Th 2,Th 17,免疫调节性T细胞(T regulatory cell, Treg)的特异性转录因子T细胞表达的T盒(T-box expressed in T cells,T-bet)、GATA连接蛋白3(GATA binding protein3, GATA-3)、维甲酸相关孤儿受体γ(RA orphan receptor γ,RORγt)、叉头蛋白P3(forkhead box P3,Foxp3)基因及蛋白的表 达。结果：溶媒对照组小鼠无腹泻、便血,体重平稳增加,TNBS模型组小鼠逐渐出现便血、腹泻、体重减轻;与溶 媒对照组比较,TNBS模型组结肠长度明显缩短,DAI评分、结肠大体标本评分、病理学评分明显升高(P<0.05);小 剂量Pim-1抑制剂组、大剂量Pim-1抑制剂组、激素治疗组小鼠便血、腹泻、体重减轻较TNBS模型组明显好转,DAI 评分、结肠长度的缩短、结肠大体标本评分、病理学评分较TNBS模型组明显降低(P<0.05);小剂量Pim-1抑制剂组、 大剂量Pim-1抑制剂组、激素治疗组比较,差别无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR和Western印迹结果显示：与溶媒对照 组比较,TNBS模型组GATA3和RORγt表达升高,Foxp3表达明显下降(P<0.05),而T-bet无明显差异;与TNBS模型组比 较,小剂量Pim-1抑制剂组、大剂量Pim-1抑制剂组、激素治疗组结肠组织中GATA3,RORγt的表达明显下降,Foxp3 的表达明显升高(P<0.05),小剂量Pim-1抑制剂组、大剂量Pim-1抑制剂组、激素治疗组之间比较,差别无统计学意义 (P>0.05)。RT-PCR结果显示：与TNBS模型组比较,小剂量Pim-1抑制剂组、大剂量Pim-1抑制剂组、激素治疗组结肠 组织中T-bet的表达明显下降(P<0.05);小剂量Pim-1抑制剂组、大剂量Pim-1抑制剂组、激素治疗组之间比较,差别无 统计学意义(P>0.05)。Western印迹结果显示：与TNBS模型组比较,小剂量Pim-1抑制剂组、大剂量Pim-1抑制剂组结 肠组织中T-bet的表达稍下降,差别无统计学意义(P>0.05),但激素治疗组表达明显下降(P<0.05);小剂量Pim-1抑制剂 组、大剂量Pim-1抑制剂组、激素治疗组之间比较,差别无统计学意义(P>0.05)。结论：Pim-1抑制剂能抑制BALB/c小 鼠炎症性肠病模型Th2特异性表达因子GATA3,Th17特异性表达因子RORγt的表达,促进Treg细胞的特异性表达因子 Foxp3的表达,从而发挥抑制以Th 2和Th 17为主的免疫炎症反应,促进向Treg细胞分化的作用,对小鼠炎症性肠病具有 一定的治疗作用。     

小鼠骨髓间充质干细胞移植后在炎症性肠病模型的定位

目的 探讨小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) 移植治疗小鼠炎症性肠病(IBD) 模型后其在结肠的定位情况.方法 将骨片培养法培养的雄性BALB/C 小鼠BMSCs,用羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFDA SE) 进行荧光标记后经尾静脉注射于雌性大鼠IBD 模型体内,并设立对照组.分别于移植后第2、5、9 天后取远端结肠组织,一部分制成冰冻切片于荧光显微镜下观察结肠荧光分布情况,另一部分经PCR 检测Y 染色体的性别决定区段(SRY) 基因作为标志,以确定BMSCs 的肠道定位情况.结果 BMSCs 生长迅速、纯度高,可诱导成为脂肪细胞及骨细胞;2,4,6- 三硝基苯磺酸(TNBS) 造成的IBD模型部分肠段缩窄,溃疡形成,黏膜及黏膜下层有大量中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞及纤维细胞浸润;荧光显微镜下可见移植BMSCs 的模型组结肠组织存在荧光;SRY 检测显示TNBS-MSCs 移植组及雄性小鼠对照组均能检测到SRY基因.结论 移植后的BMSCs 能在IBD 模型的损伤肠道组织中定位.     

日本血吸虫卵对TNBS诱导小鼠结肠炎肠黏膜表达NOD2/CARD15的影响

 目的 研究日本血吸虫卵对2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzesulfonic acid,2,4,6-TNBS）诱导小鼠结肠炎肠黏膜表达NOD2/CARD15的影响。方法 实验小鼠（n=50）随机分成3组:正常对照组（n=10）、TNBS+生理盐水组（n=20）和TNBS+日本血吸虫卵组（n=20）,后两组用TNBS溶液灌肠（100 mg/kg）建立结肠炎模型,TNBS+日本血吸虫卵组在造模前第14天和第3天分别给予腹腔注射冰冻灭活血吸虫卵10 000个（1 mL冰生理盐水混悬液）,TNBS+生理盐水组同时给予相同体积的冰生理盐水腹腔注射,建模后第7天处死存活小鼠,用荧光定量RT-PCR（Real time PCR）法测定结肠组织的NOD2的mRNA基因表达,Western blot方法测定结肠组织NOD2蛋白表达水平。结果 TNBS+日本血吸虫卵组死亡率明显下降,结肠肉眼及组织病理炎症程度明显减轻;荧光定量RT-PCR分析显示,TNBS+生理盐水组较正常组结肠黏膜NOD2 mRNA相对表达量显著增加（P<0.01）,TNBS+日本血吸虫卵组较TNBS+生理盐水组NOD2 mRNA相对表达量显著下降（P<0.05）;Western blot分析显示,TNBS+生理盐水组NOD2的蛋白表达量较正常组增加了近3倍（P<0.01）,TNBS+日本血吸虫卵组较TNSB+生理盐水组下降52.8%（P<0.01）,差异有显著统计学意义。结论 结肠炎时,黏膜NOD2/CARD15表达明显升高,日本血吸虫卵抗原可能通过下调NOD2/CARD15表达改善结肠炎症状态。     

大鼠炎症性肠病模型的复制及中药的干预作用

目的：应用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)复制炎症性肠病动物模型,观察中药肠康饮（CKY）对炎症性肠病的干预作用。方法：60只大鼠随机分为乙醇对照组、模型组、柳氮磺吡啶（SASP）组及CKY低、中、高剂量组,应用TNBS复制炎症性肠病动物模型,药物干预21 d后,观察大体形态学及组织病理学改变。结果：模型组体重明显低于乙醇对照组（P<0.01）,CKY低、中、高剂量组及SASP组体重均高于模型组（P<0.01）,CKY高剂量组体重高于SASP组（P<0.01）。模型组大体形态学及组织病理学评分明显高于乙醇对照组（P<0.01）,CKY低、中、高剂量组及SASP组大体形态学及组织病理学评分均较模型组明显降低（P<0.01或P<0.05）,CKY高剂量组与SASP组差异无显著性（P＞0.05）。结论：TNBS可诱发出大鼠结肠炎,类似人类炎症性肠病改变,是进行炎症性肠病发病机制研究和药物疗效观察的理想模型,中药CKY对炎症性肠病大鼠模型具有较好的治疗作用。     

别旁茶提取物对实验性炎症性肠病大鼠的作用

目的 探讨别旁茶(BPC)提取物对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠炎症性肠病的保护作用.方法 采用TNBS灌肠建立炎症性肠病动物模型,造模结束后处死动物检测大鼠结肠组织形态学改变,检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、白介素27(IL-27)、过氧化物酶(MPO)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平.结果 TNBS成功诱导急性实验性肠炎大鼠,与对照组相比,别旁茶提取物可显著改善TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-27、MPO、SOD的水平(P＜0.05),别旁茶高剂量组大鼠结肠组织学损伤明显改善(P＜0.05).结论 别旁茶提取物对实验性炎症性肠病大鼠具有显著的保护作用.     

不同浓度葡聚糖硫酸钠对小鼠炎症性肠病模型建立及其致病相关免疫因子表达的影响

目的 探讨饮用不同浓度的葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)对于建立小鼠炎症性肠病(inflammatory bowel disease, IBD)模型及其致病相关免疫因子表达的影响。方法 雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组和不同浓度的DSS饮用组(3%、5%、7%)。观察小鼠的大便性状,体重和生存时间。饮用后的第6天处死各组小鼠,观察结肠大体形态并评分;取病变处进行石蜡包埋病理切片,苏木素伊红染色并进行病理组织学评分;定量PCR检测各组脾细胞免疫因子表达情况。结果 饮用3%、5%、7%浓度DSS的小鼠在第6天均有不同程度溃疡形成,成模率随着DSS浓度提升而增加,但是小鼠死亡率也相应增加。定量PCR结果表明促炎因子(TNF-α、IFN-γ和IL-17A)的表达水平与DSS浓度成正相关,而抑炎因子(IL-4和IL-10)以及调节性T细胞相关的转录因子Foxp3的表达水平与DSS浓度成负相关关系。结论 给予小鼠5%浓度的DSS溶液饮用有助于高效经济地建立小鼠IBD模型,为进一步研究IBD的发病机理、生物学特性、干预因素等打下了重要基础。     

不同浓度葡聚糖硫酸钠对小鼠炎症性肠病模型建立及其致病相关免疫因子表达的影响

目的 本研究旨在探讨饮用不同浓度的葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium ,DSS)对于建立小鼠炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）模型及其致病相关免疫因子表达的影响。方法 雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组和不同浓度的DSS饮用组（3%、5%、7%）。观察小鼠的大便性状,体重和生存时间。饮用后的第6天处死各组小鼠,观察结肠大体形态并评分;取病变处进行石蜡包埋病理切片,苏木素伊红染色并进行病理组织学评分;定量PCR检测各组脾细胞免疫因子表达情况。结果 饮用3%、5%、7%浓度DSS的小鼠在第6天均有不同程度溃疡形成,成模率随着DSS浓度提升而增加,但是小鼠死亡率也相应增加。定量PCR结果表明促炎因子（TNF-α、INF-γ和IL-17A）的表达水平与DSS浓度成正相关,而抑炎因子（IL-4和IL-10）以及调节性T细胞相关的转录因子Foxp3的表达水平与DSS浓度成负相关关系。结论 给予小鼠5%浓度的DSS溶液饮用有助于高效经济地建立小鼠IBD模型,为进一步研究IBD的发病机理、生物学特性、干预因素等打下了重要基础。     

口服环丙沙星对三硝基苯磺酸诱导小鼠肠炎的影响

目的评价口服环丙沙星在小鼠三硝基苯磺酸（TNBS）肠炎模型中的作用,探讨Toll样受体4 （TLR4）在肠炎发生中的作用。方法40只BALB／c小鼠随机分成正常对照组（10只）;TNBS肠炎组（2t）只）;环丙沙星干预组（10只）。评价下列指标：小鼠一般情况,肠黏膜病理学改变,远段结肠内容物细菌培养,结肠黏膜TLR4表达（免疫组化和RT-PCR法）和血清TNF-α（ELISA法）水平。结果环丙沙星干预组小鼠死亡率、肠道炎症（Ameho criteria结肠组织学评分）明显减轻,低于了NBS肠炎组（70％vs 20％,4．21±0．61 vs 1．54±0．71,P〈0．01）。菌落计数（×10^9 CFU／mL）环丙沙星组低于正常组及TNBS肠炎组（1．36±0．23 vs 1．83±0．28 vs 2．54±0．42,P〈0．01）。结肠TLR4表达情况（tlr4／β-actin光密度比值）：TNBS肠炎组〉环丙沙星干预组〉正常对照组（0．76±0．05 vs 0．40±0．03 vs 0．24±0．02,P〈0.01）。小鼠血清TNF-α水平（pg／mL）：TNBS组〉对照组（40．50±12．48 vs 20．41±2．11,P〈0．01）,环丙沙星干预组0．05）。结论环丙沙星可以减轻小鼠TNBS肠炎,机制可能与其减少肠道细菌、下调结肠TLR4表达有关。     

炎症性肠病发病诱因探究

目的:探究炎症性肠病发病的诱因。方法:选取2005-2010年间在我院确诊为炎症性肠病的患者80例为病例组、正常对照组80例,对其生活环境和餐饮情况进行记录,进行统计学分析。结果:不吸烟者、食用辣椒者,职业紧张者在病例组所占的比例均明显高于正常对照组(P<0.05),有统计学意义。结论:不吸烟(溃疡性结肠炎患者)、经常食用辣椒、精神紧张可能导致IBD发病的高危因素。     

BALB／c mice model of cytomegalovirus-induced myocarditis

INTRODUCTION Cytomegalovirus(CMV)isawidelydistributedher pesvirus,whichhadlatentinfectionafterprimary infection.Mosthumancytomegalovirus(HCMV)infec tionsaresubclinicalbutitcancausesubstantialmorbidity andmortalityfollowinginfectionorreactivation,espe ciallyforimmunosuppressedorimmunocompromisedin dividuals[1].Thecardiovasculardiseasemyocarditiswas associatedwithvariousviralpathogens.Althoughen terovirusinfectionswasrecognizedasaleadingcauseof myocarditis,therecentstudyshowedthatcy tome…     

DNCB致敏诱导BALB/c小鼠特应性皮炎模型的建立

目的探索建立1-氯-2,4-二硝基苯（DNCB）经皮肤致敏诱导BALB／c小鼠特应性皮炎（AD）模型的方法。方法将6只7周龄BALB／c小鼠随机分为3组（n=2）,常规饲养。3组小鼠分别接受1％＋0．2％DNCB溶液（A组）、1％＋0．1％DNCB（B组）和基质（橄榄油：丙酮=4：1）溶液（正常对照c组）处理。用上述溶液反复刺激小鼠的背部和耳廓皮肤,观察皮炎症状和皮肤病理等指标,并检测血浆总igE浓度。结果在首次致敏后的4周中,B组小鼠出现明显皮炎症状,A组小鼠出现轻微皮炎症状后恢复正常,C组无明显皮炎症状。B组小鼠的抓挠动作次数、皮炎症状评分显著高于A组和c组。皮肤病理观察显示B组棘层细胞增厚、炎症细胞浸润,其嗜酸性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞和肥大细胞较其它两组有显著差异。B组血浆总IgE浓度高于A、c两组,但样本例数过少,尚未得到统计学支持。结论先后用含1％和0．I％DNCB的丙酮一橄榄油溶液涂拭BALB／c小鼠皮肤能够成功建立AD模型。     

性别对两种溃疡性结肠炎模型的影响

目的：分别建立由噁唑酮（oxazolone,OXZ）及2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎模型,并探讨性别因素对小鼠模型的影响。方法：30只健康成年昆明种小鼠,雌雄各半,随机分为6组,正常雌性对照组（A组,n=5）,正常雄性对照组（B组,n=5）,OXZ雌性模型组（C组,n=5）,OXZ雄性模型组（D组,n=5）,TNBS雌性模型组（E组,n=5）和TNBS雄性模型组（F组,n=5）。OXZ模型组（n=10）给予皮肤涂抹2.4% OXZ （100%乙醇溶剂）0.2 mL 2 d,5 d后以0.8% OXZ （40%乙醇溶剂） 0.1 mL灌肠;TNBS模型组（n=10）于d 1及d 6给予1.8 mg TNBS（40%乙醇溶剂）灌肠,灌肠之前均进行禁食不禁水24 h处理,正常组不作处理。造模24 h之后记录小鼠精神状态、毛色、进食、大便情况并检测小鼠疾病活动指数（disease activity index,DAI）值。造模后d 2处死,分离结肠,测定小鼠结肠组织大体评分（Colon Macroscopic Damage Index,CMDI）值以及结肠湿重指数（Colon Index,CI）,并取病变部位检测HPS（histopathological score,HPS）指标以及白细胞介素-4（interleukin 4,IL-4）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的水平。结果：两种溃疡性结肠炎小鼠模型诱导成功,OXZ模型组IL-4及TNF-α 水平与正常组均有显著性差异,但TNBS模型组差异较小。除OXZ雌性组结肠指数与正常组没有显著差异外,模型组小鼠各项指标与正常组均有显著性差异。结论：性别对于小鼠溃疡性结肠炎模型的诱导有着重要的影响。     

维甲酸诱导BALB／c近交系小鼠腭裂动物模型的实验研究

目的分析维甲酸（RA）在胚胎发育期间对胎鼠的致畸作用,建立维甲酸诱导腭裂动物模型的最佳剂量。方法将特定妊娠期BALB／c近交系小鼠分为对照组和实验组。实验组小鼠一部分在妊娠8d,10d,12d管饲RASOmg／kg,一部分在妊娠10d给予40mg／kg、50mg／kg和60mg／kg三种不同剂量RA;对照组小鼠在妊娠8d,10d,12d管饲等剂量玉米油。观察胎鼠腭裂比率,确定诱导腭裂形成的最佳作用条件。结果RA在不同的发育阶段均可诱导腭裂,妊娠第10天50mg／kgRA诱导腭裂的比率为93．75％（P〈0．05）,诱导腭裂形成的比率最高。结论RA诱导BALB／c近交系小鼠腭裂是一种较为理想的腭裂动物模型,其最佳剂量为妊娠第10天给予50mg／kgRA。     

炎症性肠病患者压力知觉及影响因素调查

目的:调查炎症性肠病患者压力知觉现状,探讨影响炎症性肠病患者压力知觉的主要因素。方法:采用便利抽样方法,应用一般资料调查表、压力知觉量表、匹兹堡睡眠质量指数、简单应对方式问卷、炎症性肠病自我效能量表、医院焦虑抑郁量表,对天津市某三级甲等医院消化内科就诊的164例炎症性肠疾病患者进行横断面研究。结果:炎症性肠病患者知觉压力得分为（30.72±4.75）分,不同文化程度、人均月收入的炎症性肠病患者压力知觉水平差异具有统计学意义（P＜0.05）。多元线性回归分析显示,炎症性肠病患者睡眠质量、自我效能、应对方式、心理状态是影响患者压力知觉水平的主要因素。结论:医务人员应了解炎症性肠病患者压力知觉水平及其主要影响因素,关注患者的心理状态,引导患者以积极的心态面对问题,减轻压力知觉,提高生活质量。