不同浓度重组登革病毒1型病毒样颗粒免疫效果的评价

目的评价毕赤酵母表达的登革病毒1型(DENV-1)病毒样颗粒(VLPs)不同浓度条件下的免疫效果,为登革多价疫苗的研究奠定基础。方法采用毕赤酵母系统构建两种DENV-1 VLPs(即DENV-1 prME-VLPs和DENV-1CprME-VLPs),鉴定、纯化后比较其表达量,选择表达量高的VLPs以不同剂量免疫BALB/c小鼠(试验组分别注射经弗氏佐剂乳化的VLPs 10、25、50μg;对照组分别注射PBS和弗氏佐剂)。通过间接ELISA及中和试验测定免疫小鼠血清特异性抗体效价和中和抗体效价;用VLPs体外刺激免疫小鼠的脾淋巴细胞,MTT法测定其增殖指数;ELISPOT检测IL-4、IFN-γ及TNF-α的抗原特异性淋巴细胞数量。结果以电镜下观察到成功表达的直径约为30nm、形态无明显差异的两种VLPs。两种表达体系中,以DENV-1 prME-VLPs表达量较高。经较高表达量的VLPs免疫小鼠后发现,初次免疫后1周,即可检测到针对DENV-1的抗体,随着时间延长,抗体效价逐渐上升,5周达峰值;其中,VLPs 25μg剂量组与50μg剂量组特异性抗体效价及中和抗体效价均显著高于PBS组、佐剂对照组及VLPs 10μg剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。VLPs 25μg剂量组与50μg剂量组免疫后的小鼠淋巴细胞增殖指数及其分泌IL-4、IFN-γ及TNF-α抗原特异性淋巴细胞数目,均显著高于对照组及VLPs 10μg剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。结论毕赤酵母表达的DENV-1 VLPs免疫剂量为25μg时即可诱导高效价的中和抗体和显著的细胞免疫效应。     

利用α-胞衬蛋白免疫诱导建立小鼠干燥综合征模型

目的 应用α-胞衬蛋白(α-Fodrin)免疫BALB/C小鼠,以期建立干燥综合征的实验动物模型.方法 应用α-胞衬蛋白100μg(50μl)配合等体积佐剂,于0、14、35、51 d进行尾根部皮下注射给药免疫4周龄的BALB/C小鼠,以颌下腺匀浆作为阳性对照,GST及PBS作为阴性对照.小鼠每周计饮水量,每2～3周取血,检测不同时间点小鼠血清中的α-胞衬蛋白抗体、M3受体蛋白多肽(M3RP)抗体、SSA抗体、SSB抗体、类风湿因子(RF)以及抗核抗体(ANA)等自身抗体,ELISA方法测定小鼠血清中的细胞因子白介素(IL)-2,IL-10和干扰素(IFN)-γ.检测小鼠颌下腺病理改变及α-胞衬蛋白的抗原表达情况.结果 (1)免疫前小鼠血清中的自身抗体均为阴性,而自初次免疫后35 d开始,经颌下腺匀浆及α-胞衬蛋白免疫的BALB/C小鼠出现α-胞衬蛋白抗体、M3RP抗体和ANA,而上述抗体在PBS和GST对照组为阴性.(2)自初次免疫后56 d开始,予颌下腺匀浆及α-胞衬蛋白免疫的BALB/C小鼠的腺体中出现少量淋巴细胞浸润,且随时间的延长,淋巴细胞浸润逐渐加重;而应用PBS和GST免疫的小鼠腺体无明显的病理改变.应用α-胞衬蛋白多抗免疫组化的方法检测颌下腺匀浆、α-胞衬蛋白免疫的BALB/C小鼠的颌下腺组织中有α-胞衬蛋白表达,而PBS和GST组为阴性.(3)IFN-γ在予α-胞衬蛋白、颌下腺匀浆、GST及PBS免疫后分别为(81.6±7.1)、(90.5±4.9)、(30.1±5.9)、(19.3±6.4)ps/ml;IL-2在上述各组免疫后分别为(18.7±2.3)、(19.8±0.9)、(4.9±1.1)、(3.5±1.6)pg/ml,与GST及PBS组相比,α-胞衬蛋白及颌下腺匀浆免疫可明显提高小鼠血清IFN-γ和IL-2水平(P<0.05).(4)α-胞衬蛋白免疫对各组小鼠饮水量无明显影响.结论 (1)建立了应用α-胞衬蛋白诱导的SS动物模型.(2)免疫后小鼠血清中出现的多种抗体可能与抗原扩展有关.(3)干燥综合征的发病可能与Thl参与有关.     

多房棘球绦虫重组BCG-Em14 -3-3疫苗不同接种途径诱导小鼠细胞因子的研究

目的探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞因子的变化。方法将疫苗通过皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有PBS对照。结果疫苗接种组的IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低;鼻腔内接种组的TNF-α水平高于皮下注射组。结论多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠产生一个TH1型反应,从而对抗Em原头节攻击感染;疫苗鼻腔内接种是一种较好的免疫途径。     

补阳还五汤对致脑炎性T细胞的免疫调节作用研究

目的:探讨补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)致脑炎性T细胞的免疫调节作用。方法:C57BL/6雌性小鼠,采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)诱导建立EAE模型,免疫后第9天分离脾脏T淋巴细胞,并培养。设补阳还五汤组和PBS对照组(对照组)。48 h后流式细胞术检测T细胞亚群的变化,检测CD~4+CD25~+、CD4~+IL-10~+、CD4~+IFN-γ~+的表达。ELISA法测定上清中IL-10、IL-1β、IL-17、TNF-α的水平;Western blot法检测T细胞CCL-20、MIP-1α、IFN-γ的表达。结果:与对照组比较,补阳还五汤组可以减少CD4~+IFN-γ~+T细胞,增加CD4~+CD25~+、CD4~+IL-10~+T细胞;抑制炎性细胞因子IL-1β、IL-17、TNF-α、IFN-γ的释放,同时促进抗炎性细胞因子IL-10的释放,抑制化学趋化因子CCL-20、MIP-1α的表达。结论:补阳还五汤具有转化炎性Th1型为抗炎的Th2型及调节性T细胞,抑制炎性反应,降低T细胞趋化因子的表达,提示补阳还五汤具有治疗EAE的潜能。     

重组登革病毒1-4型包膜蛋白EDIII的融合表达和免疫学特性研究

目的：构建含登革病毒（DENV）1-4型包膜蛋白（E蛋白）EDIII区的融合蛋白,并通过动物实验分析该融合蛋白的免疫机制。方法：通过生物信息学分析获得具有广泛代表性的DENV 1-4型EDIII区的氨基酸序列;将编码DENV 1-4型EDIII区的基因序列通过GS linker进行串联后插入原核表达载体pColdIII的多克隆位点,并将构建的重组质粒pColdIII-EDIII转化至大肠杆菌BL21（DE3）;通过SDS-PAGE及Western blot法鉴定目的蛋白表达,采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。将纯化的蛋白免疫BABL/c小鼠,初次免疫之后再加强免疫2次。通过ELISA法检测血清中的抗体效价和细胞因子的分泌情况来评价其免疫效应。结果：重组蛋白EDIII免疫小鼠后可以诱导产生高滴度的特异性抗体,抗体效价为1:40 000。抗原刺激小鼠脾淋巴细胞可以诱导Th1和Th2细胞免疫应答。结论：成功表达了含DENV 1-4型E蛋白EDIII的融合蛋白,并通过动物实验证实该融合蛋白能诱导小鼠产生特异性的体液和细胞免疫应答,为DENV四价重组疫苗的研制奠定了基础。     

多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠脾细胞因子变化的研究

目的:探讨多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗免疫和Em原头节攻击后小鼠脾细胞冈子的变化.方法:将疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠.免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周杀鼠取脾,分离脾细胞,用EmAg或ConA刺激培养,收集脾细胞培养上清液,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、TNF-α和IL-4水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果:疫苗接种组的IFN-γ和TNF-α水平升高,IL-4水平降低;鼻腔内接种组的TNF-α水平高于皮下注射组.结论:多房棘球绦虫重组BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠产生一个THl型反应,从而对抗Em原头节攻击感染.     

人β防御素-2联合HPV16E7c免疫小鼠的免疫学效应实验研究

目的 探讨以人β防御素-2为佐剂的HPV16 E7c免疫功能及细胞免疫应答.方法 将30只小鼠按随机数字表法分为3组:PBS组、pcDNA3.1(+)/E7c组、pEGFP-C1/HBD2-E7c组,每组10只.PBS组采用PBS 100 μg·只-1 行股四头肌肌内注射,进行初次免疫;pcDNA3.1(+)/E7c组采用pcDNA3.1(+)/E7c质粒100 μg·只-1 行股四头肌肌内注射,进行初次免疫;pEGFP-C1/HBD2-E7c组采用pEGFP-C1/HBD2-E7c联合质粒100 μg·只-1行股四头肌肌内注射,进行初次免疫.3组初次免疫后,再间隔2周,以上述方法和剂量加强免疫2次.共免疫3次.3组小鼠免疫1周后,断颈处死小鼠,取小鼠脾脏称重,计算脾脏脏器指数及计数脾淋巴细胞数量,流式细胞仪检测淋巴细胞亚群CD4+、CD8+细胞数量及比值;采用摘眼球采血法收集小鼠血清,采用ELISA法检测小鼠血清E7抗体水平.结果 pcDNA3.1(+)/E7c组、pEGFP-C1/HBD2-E7c组小鼠脾脏脏器指数均明显低于PBS组(均P＜0.01).pEGFP-C1/HBD2-E7c组、pcDNA3.1(+)/E7c组小鼠CD4+、CD8+阳性细胞比例、绝对数均明显高于PBS组(均P＜0.05),pEGFP-C1/HBD2-E7c组、pcDNA3.1(+)/E7c组小鼠CD4+/CD8+比值均明显低于PBS组(均P＜0.05),pEGFP-C1/HBD2-E7c组、pcDNA3.1(+)/E7c组小鼠血清E7抗体水平均明显高于PBS组(均P＜0.01),pEGFP-C1/HBD2-E7c组小鼠血清E7抗体水平明显高于pcDNA3.1(+)/E7c组(P＜0.05).结论 人β防御素-2可明显改善HPV16 E7c基因的免疫原性,提高HPV16E7特异性抗体水平,升高免疫小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞数量.     

应用α-胞衬蛋白鼻黏膜免疫治疗干燥综合征的实验研究

目的 探讨α-胞衬蛋白鼻黏膜给药对干燥综合征自发鼠模型NOD小鼠SS病变的抑制作用及其机制.方法 以NOD小鼠作为干燥综合征自发鼠模型,8只1组,自4周龄开始分别鼻吸入法给予α-胞衬蛋白1 μg和1O μg,隔天给药1次,对照组分别给予磷酸盐缓冲液(PBS)10 μl及谷胱甘肽转移酶(GST)10 μg,观察小鼠饮水量的改变.测定血清中的抗α-胞衬蛋白及M3受体蛋白多肽(M3RP)抗体,抗干燥综合征抗原(SS)A抗体、SSB抗体、类风湿因子(RF)及抗核抗体(ANA)等自身抗体.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定白细胞介素(IL)-10和干扰素-γ,流式细胞仪检测脾细胞FoxP3+ T细胞的表达,应用HE染色和免疫组化方法 分别检测小鼠颌下腺、腮腺的病理学改变及α-胞衬蛋白的表达.结果 (1)鼻吸入α-胞衬蛋白可以抑制NOD小鼠自身抗体的产生.α-胞衬蛋白鼻黏膜免疫组的α-胞衬蛋白抗体和M3RP抗体滴度较对照组减低.差异有统计学意义(P＜0.05).至小鼠17周龄,对照组分别有5只鼠出现ANA阳性,而1 μg组和10 μg组分别有2只和3只鼠ANA阳性.(2)鼻吸入α-胞衬蛋白可使NOD小鼠血清IFN-γ水平降低.α-胞衬蛋白1 μg组、10 μg组、PBS组及GST组小鼠血清干扰素-γ水平,分别为(42±16)、(37±15)、(87±18)及(72±11)pg/ml,α-胞衬蛋白给药组明显低于对照组(P＜0.05),而IL-10在各组间差异无统计学意义.(3)鼻吸入α-胞衬蛋白可上调NOD小鼠Foxp3+ T细胞的数量:1 μg、10 μg、PBS及GST组小鼠脾细胞的表达Foxp3+的CD4+ CD25+ T细胞占CD4+CD25+ T细胞的比例分别为(4.0±1.7)%、(4.3±1.0)%、(2.2±0.6)%、(2.3±0.7)%,α-胞衬蛋白治疗组较对照组明显提高(均P＜0.05).(4)鼻吸入α-胞衬蛋白可以抑制NOD小鼠腺体淋巴细胞浸润和α-胞衬蛋白的表达.α-胞衬蛋白给药组淋巴细胞浸润较对照组少,且应用α-胞衬蛋白多抗免疫组化的方法检测,α-胞衬蛋白给药组的α-胞衬蛋白表达明显减少.(5)鼻吸入α-胞衬蛋白可以降低NOD小鼠的饮水量.α-胞衬蛋白1 μg、10 μg、PBS及GST组的小鼠于16周龄时饮水量分别为(39.2±2.1)、(40.4±2.5)、(49.3±3.1)及(51.6±2.8)ml,与对照组相比,α-胞衬蛋白免疫诱导后可减少患鼠的饮水量(P＜0.05).结论α-胞衬蛋白是SS的致病性抗原,利用该蛋白鼻黏膜免疫可以上调调节性T细胞的数量,抑制SS动物自身抗体的产生及腺体中淋巴细胞浸润.     

寨卡病毒非结构蛋白1对小鼠免疫应答的影响

目的 利用原核系统表达并纯化得到寨卡病毒(ZIKV)非结构蛋白1(NS1),观察NS1对小鼠免疫应答的影响,探讨NS1成为ZIKV疫苗的可能性。方法 通过pET28a-ZIKV-NS1原核质粒表达得到重组蛋白NS1,利用NS1对小鼠进行免疫,酶联免疫吸附法检测小鼠血清中免疫球蛋白G的效价,流式细胞术及酶联免疫斑点测定法检测小鼠脾脏中CD4⁺、CD8⁺细胞数量及干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)的分泌水平。结果 成功构建原核表达质粒pET28a-ZIKV-NS1,纯化得到并鉴定为ZIKV-NS1;NS1免疫2次和3次后小鼠血清IgG效价升高,且随接种次数的增加而升高,与空白对照组比较,P<0.001;小鼠脾脏CD4⁺和CD8⁺细胞数量及IFN-γ、IL-4分泌水平上升,与空白对照组比较,P<0.001。结论 ZIKV-NS1能够激活小鼠体液免疫和细胞免疫,具有成为ZIKV疫苗的可能性。     

自体灭活T细胞免疫后诱导Treg下调的机制

目的 探讨自体灭活T细胞免疫注射后诱导体内调节性T细胞(Treg)下调的机制.方法 自体T细胞体外用刀豆蛋白(ConA)刺激活化,照射灭活T细胞给小鼠进行皮下和腹腔免疫(每只小鼠5×106/次),每隔5 d免疫一次,免疫3次后检测小鼠体内Treg的数量及功能;对照组小鼠皮下注射PBS.ELISA法检测血清中抗鼠CD25抗体.免疫小鼠血清分离后经尾静脉注入未免疫小鼠体内,检测受体小鼠Treg的数量及功能变化.结果 免疫小鼠体内CD4+CD25+Foxp3+Treg数量较对照组减少(P<0.01),抑制功能也显著降低(P<0.01),但血清中抗CD25的抗体增加(P<0.01).正常小鼠接受免疫小鼠血清后,Treg的数量和抑制功能下调(P<0.01).结论 采用ConA 活化的自体灭活T细胞免疫,可诱导抗CD25抗体增加,进而减少体内CD4+CD25+Foxp3+ Treg 细胞数量和功能.     

肝细胞生长因子对异基因骨髓移植小鼠血清TNF-α、IFN-γ、IL-4水平的影响

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对小鼠异基因骨髓移植(allo BMT)后血清TNF- α、IFN- γ、IL -4的影响。方法:BALB/c小鼠接受60钴 11Gy全身照射,将昆明小鼠骨髓移植给该BALB/c小鼠。随机将BALB/c小鼠分A、B两组,A组移植后 0~7d皮下注射HGF,B组皮下注射PBS,移植后第 8天取血检测TNF -α、IFN -γ和IL- 4水平。结果:A组的TNF- α、IFN -γ均低于B组(P<0. 01);A组的IL -4高于B组(P<0. 05)。结论:HGF对小鼠allo BMT后的细胞因子失衡具有调节作用。     

雷帕霉素对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤后脾γδT淋巴细胞与肺巨噬细胞相互作用的影响

目的 探讨雷帕霉素(RAPA)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤后脾γδT淋巴细胞与肺巨噬细胞相互作用的影响.方法 6～8周龄健康雄性C57BL/6小鼠24只,随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、LPS组、RAPA组及LPS+RAPA组.气管内注射LPS构建小鼠急性肺损伤模型,采用免疫磁珠法提纯给药1 d后处死的小鼠脾γδT淋巴细胞和肺巨噬细胞,调整细胞浓度为106 个/ml;24孔板分成PBS、LPS、RAPA及LPS+RAPA共4组,每组又分为以下3个复孔:单独培养的脾γδT淋巴细胞、单独培养的肺巨噬细胞及按1:1混合培养的脾γδT淋巴细胞和肺巨噬细胞.24 h后采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定培养上清液中干扰素γ(IFN-γ),肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度;采用实时定量聚合酶链反应法测定培养的细胞中IFN-γ及TNF-α mRNA的表达.结果 LPS组支气管肺泡灌洗液的总细胞和淋巴细胞浓度明显大于PBS组和LPS+RAPA组(P＜0.05).脾脏γδT淋巴细胞与肺组织巨噬细胞按1:1昆合培养时,LPS组上清液IFN-γ高于其他3组(P＜0.05),而TNF-α只高于RAPA组和LPS+RAPA组(P＜0.05).混合培养时LPS组IFN-γmRNA的表达明显高于PBS组和RAPA组(P＜0.05).结论 RAPA能显著抑制小鼠LPS诱导急性肺损伤后脾脏γδT淋巴细胞和肺组织巨噬细胞混合培养时IFN-γ和TNF-α的分泌.

Abstract：

Objective To explore the influences of rapamycin (RAPA) upon the cytokine changes of activated spleen γδT lymphocytes and lung tissue macrophages in acute lung injury of mice induced by lipopolysaccharide (LPS).Methods A total of 24 healthy male C57BL/6 mice,6 -8 weeks old,were randomly divided into phosphate buffered saline (PBS),LPS,RAPA and LPS + RAPA groups.Acute lung injury was induced by a single intratracheal instillation of LPS in mice.And spleen γδT lymphocytes and lung macrophages were purified by immunomagnetic beads at Day 1.The purified spleen γδT lymphocytes and lung macrophages were adjusted to 106 cell/ml.And 24-well plates were used for 4 groups.Each group were further separated with spleen γδT lymphocytes alone,lung tissue macrophages alone and co-culturing.Supernatant fluid was collected after 24 hours.The expressions of IFN-γ and TNF-o were analyzed by ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay).And the expressions of mRNA were analyzed by real-time quantitative PCR (polymerase chain reaction).Results The total cells numbers and lymphocytes numbers of bronchoalveolar lavage fluid were significantly higher in LPS group than those in PBS and LPS + RAPA groups (P＜0.05).And the level of IFN-γwas significantly higher in LPS group than that in PBS,RAPA and LPS + RAPA groups by co-culture (P ＜ 0.05).The level of TNF-α was significantly higher in LPS group than that in RAPA gaud LPS + RAPA groups by co-culture (P ＜ 0.05).However,the mRNA of IFN-γ was higher in LPS group than that in PBS and RAPA groups (P ＜ 0.05).Conclusion RAPA inhibits the secretion levels of IFN-γ and TNF-α in spleen γδT lymphocytes and lung tissue macrophages in acute lung injury of mice induced by LPS.     

登革病毒HLA-A*0201限制性T细胞表位诱导免疫反应的研究

目的：探讨登革病毒（DENV）HLA-A*0201限制性T细胞表位诱导DENV血清型间交叉反应性T细胞的效应。方法：基于已鉴定DENV-1中HLA-A*0201限制性CD8+ T细胞表位（NS4b40-48TLYAVATTI）序列,合成在其他血清型中相似的候选表位,采用MHC-肽复合物稳定性实验检测候选表位与HLA-A*0201结合力。采用酶联免疫斑点（ELISPOT）实验研究已鉴定表位及候选表位免疫HLA-A*0201转基因小鼠产生的CD8+ T细胞识别相同及相似表位能力;采用ELISPOT实验研究不同DENV血清型感染HLA-A*0201转基因小鼠是否产生能识别已鉴定表位及候选表位的T细胞反应。结果：DENV-3中NS4b39-47TLYAVATTV与HLA-A*0201具高结合力,但DENV-2中NS4b39-47TLYAVATTF与HLA-A*0201结合力弱。DENV-1-NS4b40-48和DENV-3-NS4b39-47免疫的转基因小鼠脾、淋巴结和外周血中存在可识别DENV-1-NS4b40-48、DENV-2-NS4b39-47和DENV-3-NS4b39-47的交叉反应性CD8+ T细胞。在DENV-1,-2,-3感染的转基因小鼠体内也存在类似的T细胞反应。结论：DENV-3中NS4b39-47TLYAVATTV为新的CD8+ T细胞表位,该表位及已报道表位NS4b40-48TLYAVATTI均可诱导DENV血清型间交叉反应性CD8+ T细胞反应,二者有助于我们研究DENV血清型间交叉反应性CD8+ T细胞的功能以及用于评估DENV候选疫苗的T细胞免疫效应。     

不同型别登革热病例细胞因子及肝功能表达水平研究

目的 通过检测不同型别输入性登革热患者血中细胞因子及肝功能的水平,探讨细胞因子与肝功能的相关性。方法 对2012—2018年昆明市第三人民医院收治的登革热病例进行回顾性分析。采用实时荧光PCR法进行登革热核酸检测及分型;采用流式细胞术检测IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、INF-γ,采用循环酶法检测肝功能;进行同型别早期与恢复期的比较及不同型别之间早期的比较。分析不同型别登革热患者细胞因子、肝功能的表达差异及指标的相关性。结果 78例登革热患者均来自南亚、东南亚,41例DENV1,9例DENV2,13例DENV3,15例DENV4;主要临床表现均为发热、头痛、肌肉关节痛、眼眶痛、出血、皮疹。与DENV1相比,DENV4的肌肉关节疼痛差异有统计学意义（P<0.05）,DENV2及DENV4的出血差异有统计学意义（P<0.05）。四型登革热早期的细胞因子、肝功与恢复期比较差异有统计学意义（P<0.05）;DENV3及DENV4早期的AST值及DENV2、DENV3、DENV4早期的ALT值,与DENV1早期比较差异均有统计学意义（P<0.05）;DENV1中IL-2、IL-4、IL-6和AST、ALT呈正相关,IL-10与AST呈负相关。结论 四型登革热病例均来自南亚、东南亚,以DENV1流行为主。四型早期细胞因子均与免疫损伤有关;DENV1比其他型别造成的肝损伤更明显,DENV1的IL-2、IL-4、IL-6与肝损伤呈正相关。     

鱼王浆对免疫功能低下模型小鼠相关免疫细胞因子影响的实验研究

目的研究鱼王浆对环磷酰胺致免疫功能低下模型小鼠相关免疫细胞因子的影响及量效关系。方法通过腹腔环磷酰胺（Cy）强化注射制造免疫功能低下模型小鼠,模型小鼠随机分为鱼王浆高、中、低剂量组及模型组,另设1组为空白对照组。观察比较鱼王浆高、中、低剂量对模型小鼠相关免疫因子的影响,检测外周血CD3^＋、CD4^＋,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及干扰素-γ（IFN-γ）含量,脾脏组织TNF-α蛋白表达的变化。结果鱼王浆高、中剂量组CD3^＋、CD4^＋的含量明显高于模型组（P〈0.01）,鱼王浆低剂量组CD3^＋的含量与模型组比较有所升高（P〈0.05）;鱼王浆各剂量组TNF-α、IFN-γ的含量明显高于模型组（P〈0.01）;鱼王浆各剂量组脾组织中TNF-α蛋白的表达明显高于模型组（P〈0.01）。结论鱼王浆能明显提高免疫功能低下模型小鼠外周血中相关免疫细胞因子CD3^＋、CD4^＋及TNF-α、IFN-γ的含量,增强免疫组织器官中TNF-α的表达,并且其作用具有明显的量效关系。     

肿瘤坏死因子-α在铜绿假单胞菌肺炎中的变化及意义

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在铜绿假单胞菌肺部感染发病中的作用。方法：90只小鼠随机分成对照组、模型组与抗体组,每组30只。通过气管插管,在气管内注入铜绿假单胞菌建立小鼠肺部感染模型,抗体组手术前6h静脉内注入0．2mL／kgTNF-α抗体,对照组注入相同剂量的PBS液,分别在0、3、6、12、24h不同时间点收集支气管肺泡灌洗液,用ELISA法检测各组不同时间点支气管肺泡灌洗液中TNF-α的含量,并观察小鼠1周后的死亡率。结果：模型组和抗体组支气管肺泡灌洗液中TNF-α含量在3h时已开始升高,6h达到高峰,12、24h逐渐降低,模型组明显高于抗体组（P〈0．05—0．01）,而两组均显著高于对照组（P〈0．01）。1周后模型组小鼠死亡率（73．3％）明显高于抗体组（43．3％）（P〈0．01）,两组死亡率均显著高于对照组（3．3％）（P〈0．01）。结论：TNF-α在铜绿假单胞菌肺炎发病过程中起着非常重要作用,抑制其过度释放可减缓病情。     

脂质体包裹CpGODN和肿瘤抗原治疗肝癌的免疫效应

目的探索脂质体、CpG寡核苷酸（ODN）以及Hepa1-6肝癌细胞裂解物联合应用治疗肝癌的免疫效果。方法建立C57BL／6小鼠肝癌模型,以PBS、ODN＋rtep（肝癌细胞Hep）,Lip（Lipofectamine脂质体）＋HDN＋Hep荷瘤鼠背部皮下注射,各组小鼠肝脏HE染色,FCM检测小鼠脾脏CD3-FITC、CD4-FITC、CD8-FITC、NKl．1-FITC的组成,ELISA法测免疫小鼠血清中IFN-Y、IL-4水平。结果脂质体包裹CpGODN＋Hepa1-6肝癌细胞裂解物中CD3-FITC、CD4-FITC、CD8-F1TC、NKl．1-FITC的体外杀伤活性以及荷瘤小鼠血清中IFN-7、IL-4水平均显著高于CpGODN＋Hep组以及PBS组。结论脂质体包裹CpGODN＋Hep能显著提高机体的免疫功能,尤其是特异性细胞免疫功能。     

小鼠皮肤着色真菌病TNF—α和IFN-γ水平研究

目的观察小鼠皮肤着色真菌病模型发病过程中TNF-α和IFN-γ基因表达的动态变化,并进一步探讨其在宿主防御机制中的作用。方法ICR小鼠分为4组,A组为健康小鼠足垫皮下接种卡氏支孢霉悬液组;B纽为免疫抑制小鼠足垫皮下接种卡氏支孢霉悬液组;C组为免疫抑制小鼠足垫皮下接种灭活卡氏支孢霉悬液组;D组为健康小鼠足垫皮下接种生理盐水做对照。接种后第7、30、60d时RT—PCR法检测小鼠皮损组织TNF—α、IFN—γ的mRNA表达水平。结果A组TNF-α基因表达水平在接种后第7、30、60d分别为2．552±0．5342、1．6740±0．4106、1．4900±0．5612．第30d较第7d显著下降（P〈0．05）,但较第60d无显著差异（P〉0．05）。B纽在接种后第7、30d分别为1．8120±0．3725、1．4620±0．3142,两者无显著差异（P〉O．05）,第60d为1．5420±0．4280,与第30d无显著差异（P〉0．05）。C组在接种后第7、30d分别为1．8800±0．3697、1．3100±0．4594,两者无显著差异（P〉0．05）,第60d为1．4000±0．3595,与第30d无显著差异（P〉0．05）。A组IFN-γ基因表达水平在接种后第7、30d分别为0．5160±0．1126、0．9680±0．1946,后者较前者显著上升（P〈0．005）,第60d为1．2100±0．2107,较第30d无显著差异（D0．05）。B纽在接种后第7d、30d分别为0．2920±0．1482、0．7640±0．1823,后者较前者显著上升（P〈0．005）,第60d为1.0920±0．5102,较第30d无显著差异（P〉0．05）。C组在接种后第7、30d分别为0．2780±0．1937、0．8900±0．3580,后者较前者显著上升（P〈O．05）,第60d为1．100±0．3808,与30d相比无显著性差异（P〉0．05）。D组TNF-α和IFN-γ则无显著改变（P〉O．05）。结论在卡氏支孢霉所致的着色真菌病模型的发病过程中有TNF-α和IFN-γ的参与。感染早期TNF-α、IFN-γ可能协同加强Th1型反应清除感染部位的真菌,从而起对机体保护作用。