鼻咽癌细胞鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤模型的建立

目的研究鼻咽癌鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤模型的建立。方法接种梯度递增的鼻咽癌细胞及对照组于鸡胚,对生长出的移植瘤行原位数码摄影,体积测量,组织切片观察。结果鼻咽癌细胞可在鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)形成移植瘤;该移植瘤可模拟鼻咽癌人体内生长模式;鼻咽癌细胞在CAM上适宜成瘤接种细胞数是0.5～1×106。结论成功地建立了鼻咽癌CAM移植瘤模型,为开展鼻咽癌生物学行为研究奠定又一个技术平台。     

CSF-1R在鼻咽癌细胞株中的表达情况及对细胞增殖、凋亡、侵袭转移能力的影响

目的 研究集落刺激因子1 受体(colony-stimulating factor 1 receptor,CSF-1R)在鼻咽癌中的表达,并对其功能进行初步探讨。方法 培养5-8F、6-10B、CNE-2、NP69细胞株,用实时荧光定量PCR 和Western blot法检测4种细胞株中CSF-1R的表达情况,通过比较5-8F、6-10B、CNE-2 鼻咽癌细胞株与NP69 正常鼻咽上皮细胞株中CSF-1R 的表达,筛选出CSF-1R 高表达细胞株和低表达细胞株;通过实时荧光定量PCR 检测两种细胞株的增殖因子Cyclin D1、凋亡因子Bcl-2和Bax、侵袭转移因子MMP-2 的mRNA 表达情况,分析CSF-1R 的表达与鼻咽癌预后的关系。结果 5-8F 鼻咽癌细胞株中CSF-1R 呈现高表达水平(P=0.000),6-10B 鼻咽癌细胞株中CSF-1R 呈现低表达水平(P=0.000、P=0.370),CNE-2鼻咽癌细胞株中CSF-1R 的表达与正常鼻咽上皮细胞株差异无统计学意义(P=0.057、P=0.481)。CSF-1R 高表达细胞株5-8F 的增殖、侵袭转移能力明显强于CSF-1R 低表达细胞株6-10B(P均=0.000),而凋亡能力则弱于6-10B细胞株(P=0.000)。结论 鼻咽癌细胞与正常鼻上皮细胞株之间CSF-1R的表达差异有统计学意义。CSF-1R 的表达与细胞增殖因子Cyclin D1、凋亡因子Bcl-2 及BAX、侵袭转移因子MMP-2 的表达有一定的相关性,CSF-1R 表达水平越高,细胞的增殖、侵袭转移能力越强,凋亡能力越弱。     

酪氨酸激酶Etk的表达与鼻咽癌细胞凋亡之间的关系

目的:观察酪氨酸激酶Etk的表达与放射引起的鼻咽癌细胞株凋亡之间的关系,探讨Etk对放射引起的鼻咽癌细胞凋亡的调节机制.方法:运用免疫荧光技术和流式细胞术检测4株鼻咽癌细胞Etk的表达情况;直线加速器6MV-X射线2 Gy单次剂量照射细胞后,用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,以及与Etk,凋亡相关蛋白Bcl-2及Bak表达的关系.结果:流式细胞仪检测显示4株鼻咽癌细胞Etk表达水平分别为:5-8F(73.3±3.4)%, 6-10B(50.5±6.1)%,CNE-1(47.7±1.9)%,CNE-2(29.5±1.7)%.免疫荧光显示,Etk蛋白主要在鼻咽癌细胞胞质中表达,胞核中表达微弱.统计分析表明,放射线照射后,鼻咽癌细胞株Etk的表达降低,并与细胞的凋亡率及Bak蛋白的表达呈负相关,与Bcl-2的表达无关.结论:Etk蛋白与放射引起的鼻咽癌细胞凋亡有关,它可能通过调节凋亡蛋白Bak的表达参与了放射后鼻咽癌细胞的凋亡.     

CXCR4/SDF-1对鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响

目的 观察鼻咽癌不同恶性程度的细胞中趋化因子受体CXCR4的表达,检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的增殖作用,SDF-1对CXCR4阳性肿瘤细胞的趋化作用,探讨CXCR4/SDF-1生物学轴对人鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响.方法 以鼻咽癌成瘤高转移细胞株5-8F及成瘤不转移细胞株6-10B为研究对象,采用Western blot免疫印迹法检测鼻咽癌细胞株CXCR4蛋白的表达情况,SDF-1及CXCR4阻断剂AMD3100作用于两种细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力,体外迂徙实验检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的趋化作用.结果 5-8F细胞株CXCR4蛋白的表达明显高于6-10B细胞株;SDF-1能明显增强5-8F细胞增殖与迁移能力,CXCR4阻断剂AMD3100作用后,5-8F细胞增殖与迁移能力明显降低;SDF-1对6-10B细胞的迁移及增殖能力无明显影响.结论 CXCR4/SDF-1生物学轴与鼻咽癌细胞株的增殖与迁移有一定的关系,AMD3100可明显抑制鼻咽癌细胞的增殖与迁移能力.     

五没食子酰葡萄糖(PGG)诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的:探讨五没食子酰葡萄糖(PGG)诱导鼻咽癌细胞的凋亡作用。方法:PGG孵育人鼻咽癌5-8F细胞株48h后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态;PGG孵育人鼻咽癌5-8F细胞株24h后,采用流式细胞仪分析细胞早期凋亡。结果:25,50和75μmol/L PGG孵育5-8F细胞48h后,贴壁活细胞减少,漂浮死亡细胞增多。PGG孵育24h后,细胞早期凋亡率分别为(4.00±0.56)%、(6.97±0.25)%和(10.23±0.71)%,与对照组(1.53±0.15)%比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PGG具有诱导鼻咽癌细胞凋亡的生物学作用。     

鼻咽癌细胞株CNE-2及其亚克隆S-18裸鼠皮下移植生长速度比较

目的 研究鼻咽癌细胞株CNE-2及其亚克隆S-18在体内的生长速度差异及其可能机制.方法 体外培养CNE-2和S-18细胞,以6×105细胞/只移植到裸鼠背部皮下,移植后3、7、10、14 d观测肿瘤大小;移植后第14天处死小鼠,称取肿瘤重量并检测肿瘤组织内的HSP27和NF-ΚB转录水平.结果 (1)裸鼠皮下移植后7 d,S-18已明显成瘤,CNE-2尚未成瘤;移植后10 d和14 d,2种细胞均明显成瘤,但S-18肿瘤体积[(223.13±21.32)mm3,10 d;(420.25±24.52)mm3,14 d]明显大于CNE-2肿瘤体积[(113.70±11.70)mm3,10 d;(279.86±25.78)mm3,14 d],P<0.05;移植后14 d S-18所形成的肿瘤的重量(0.521±0.137)g明显高于CNE-2所形成的肿瘤重量(0.449±0.125)g,P<0.05;(2)S-18肿瘤内的HSP27、NF-ΚB的转录水平明显高于CNE-2肿瘤,P<0.05.结论 鼻咽癌细胞株S-18在体内的生长速度明显快于CNE-2细胞,HSP27和NF-ΚB可能参与了鼻咽癌细胞生长速度的调节.     

Maspin基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中表达水平的研究

目的:在mRNA和蛋白水平检测5种不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中Maspin基因表达的差异,探讨Maspin基因与已知转移习性人鼻咽癌细胞株之间的相关性,为鼻咽癌发生转移的可能机制及临床预测转移风险提供理论基础。方法:体外培养SUNE-1-5-8F、SUNE-1、CNE-2Z、CNE-1、SUNE-1-6-10B 5株不同转移习性的人鼻咽癌细胞株。用RT-PCR及Western blot 2种方法在mRNA和蛋白水平检测5种人鼻咽癌细胞株中Maspin基因表达情况。结果:Maspin基因在SUNE-1-5-8F、SUNE-1、CNE-1及SUNE-1-6-10B细胞株均有不同程度表达,差异无统计学意义（P>0.05）,在CNE-2Z细胞株中不表达,且在mRNA和蛋白水平Maspin基因表达具有一致性;Maspin基因在不同转移习性人鼻咽癌细胞株中mRNA和蛋白表达量总体存在差异（P<0.05）,但表达量不随鼻咽癌细胞株转移习性增高而降低（P>0.05）。结论:Maspin基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中mRNA和蛋白表达量不同;Maspin基因可能与人鼻咽癌细胞株的转移潜能无相关性。     

虎杖白藜芦醇对鼻咽癌细胞增殖的抑制效应

目的研究虎杖白藜芦醇对体外培养的鼻咽癌细胞株CNE-1，CNE-2和5-8F增殖的抑制效应及对CNE-1细胞分裂周期特异性。方法MTT法检测活细胞数和白藜芦醇对3种鼻咽癌细胞增殖的抑制率，流式细胞术检测白藜芦醇对体外培养CNE-1细胞株细胞分裂周期的影响。结果白藜芦醇对鼻咽癌细胞株CNE-1，CNE-2和5-8F生长均有明显抑制作用，并表现剂量依赖性特点，IC50分剐为0．161，0．187，0．174mmol／L；发现白藜芦醇对CNE-1癌细胞增殖表现出明显的G1期阻滞。结论白藜芦醇对体外培养鼻咽癌细胞增殖有较强抑制活性，该抑制作用与癌细胞G1期阻滞有关。     

长非编码MALAT1基因在人鼻咽癌细胞株的表达及生物学意义

目的探讨MALAT1在鼻咽癌细胞细胞株中的表达及生物学功能。方法通过Real-time PCR检测MALAT1基因在鼻炎
癌细胞株5-8F、C666-1、CNE-1、CNE-2、HONE-1、6-10B及永生化鼻咽上皮细胞NP69株中的表达;采用RNAi技术和RNA激活
技术,构建MALAT1慢病毒干扰载体和激活载体载体并稳定转染鼻咽癌细胞株CNE-1,采用CCK8、平板克隆、划痕等试验分析
MALAT1基因对CNE-1细胞生物学行为的影响。结果MALAT1在高转移的鼻咽癌细胞株中高表达,在正常鼻咽上皮细胞低
表达;经激活过表达MALAT1 后,CNE-1 细胞的上皮性标志物E-Cadherin 的表达显著下调,间质细胞标志物Vimentin 表达上
调,侵袭转移能力明显增强（P<0.05）。结论MALAT1基因上调能够促进鼻咽癌CNE-1细胞的增殖、侵袭和转移能力。