急性HBV感染期或感染后对肝内HBV特异性细胞毒性T淋巴细胞的分析

背景与目的:由于考虑到常规肝活检后相关并发症的风险性,对急性乙型肝炎病毒(H BV)感染者的肝内病毒特异性T细胞反应的特点尚无明确研究。该研究旨在应用细针抽吸活组织检查(FNAB)法对急性H BV感染者肝脏内的病毒特异性CD8+T细胞反应进行分析。方法:对H LA-A2阳性的急性H BV感染者分别于初次接诊时、H BsA g血清转换时、H BsAg血清转换3个月后进行FNA B。在FNA B抽吸出的细胞和外周血(PB)中应用H LA-A2四聚体识别H BV特异性CD8+T细胞。结果:在初诊时,肝内CD8+T细胞的存在与肝脏损伤的程度具有相关性。在每次FNAB后的…     

慢性HBV携带者接种HBVDNA疫苗后反应性T细胞诱导和增植

虽然有效乙肝疫苗已应用很多年了,约3.7亿人仍不断感染H BV。病毒的持续存活被认为与低的H BV特异性T细胞应答有关。在慢性H BV携带者中进行了1次一期临床试验以观察H BV DNA疫苗是否能够恢复T细胞应答。纳入10例慢性活动性乙肝患者,他们经被认可为针对H BV感染的治疗无效。10例患者均接受4次编码H BV包膜蛋白的DNA疫苗1m g肌注。用扩增、酶联免疫斑点分析和四聚物染色法来检查H BV特异性T细胞应答。次要终点包括安全性、检测H BV病毒血症和血清学标志物。DNA注射后2例患者对乙肝表面抗原的应答增强。在疫苗接种前很少发现分…     

乙型肝炎患者HBcAg特异性细胞毒性T细胞的检测及其与临床疾病状态的关系

目的通过定量分析HLA-A*2402限制性的乙型肝炎病毒(HBV)特异性的细胞毒性T细胞(CTL)来研究急性自限性和慢性持续性乙型肝炎患者体内免疫反应的差异。方法从急性和慢性乙型肝炎感染患者外周血中提取外周血单个核淋巴细胞(PBMC),用HLA-A*2402-HBV肽链四聚体复合体染色后,用流式细胞仪检测HBV特异性CTL细胞。同时使用酶联免疫斑点法来检测部分患者的CTL细胞分泌干扰素(IFN)-1的水平。结果在7例急性乙型肝炎的急性期,可以检测到高水平的HBV特异性的CTL细胞,而在急性乙型肝炎的恢复期,HBcAg特异性CTL细胞的水平可以明显下降。在13例慢性乙型肝炎患者中,除了1例慢性肝炎急性暴发患者之外,均不能检测到HBcAg特异性CTL细胞。IFN-γ的分泌与这些结果相一致。结论HBcAg特异性CTL细胞在急性肝炎患者清除乙型肝炎病毒的过程中可能起到至关重要的作用。     

不同类型HBV感染者T细胞对HBV抗原蛋白的免疫应答研究

目的:探讨不同临床表现形式HBV感染者T细胞免疫应答功能.方法:分离外周血单核细胞,流式细胞术检测患者T细胞亚群,酶联免疫斑点技术检测患者T细胞对HBV抗原的免疫应答反应.结果:与急性乙型肝炎患者(A组)比较,慢性肝炎感染患者(B组)和无症状携带者(C组)CD4+ T细胞亚群频率均显著降低(P<0.01),而3组CD8+ T细胞亚群频率差异无统计学意义(P>0.05);与A组比较,B组和C组CD4+/CD8+比值均明显下降(P<0.01);A组斑点形成细胞显著少于B组和C组(P<0.01);B组斑点形成细胞亦显著少于C组(P<0.01).结论:不同临床表现形式的患者T细胞免疫存在不同,而T细胞亚群之间的平衡失调可能导致机体免疫紊乱,不能清除病毒,是HBV感染患者表现不同临床症状的原因.     

调节性T细胞可促进慢性乙型肝炎患者损伤性免疫应答

慢性乙型肝炎病毒(H BV)具有减弱机体对H BV免疫应答的特点。调节性T细胞(Treg)可抑制效应性T细胞的功能,从而在损伤性免疫应答中发挥重要作用。在慢性H BV患者中,Treg通过其功能和数量的变化减弱抗病毒反应。为了研究在慢性H BV感染中Treg的作用,对50例慢性H BV患者、23例健康对照者及9例H BV感染已恢复者的外周血中Treg比例及功能进行了比较分析。与健康对照组和H BV感染已恢复组相比,慢性H BV感染者外周血总的CD4+细胞中,发现CD4,CD25,CD45RO和细胞毒性T淋巴细胞相关性抗原4阳性细胞的比例明显增高。因此,慢性H BV患者…     

HBV感染对人体T细胞免疫功能影响的研究

目的:通过检测乙型肝炎病毒(HBV)感染后外周血及感染肝组织内CD4 T和CD8 T细胞的数量及功能,探讨HBV对人体T细胞免疫的影响及其可能机制.方法:(1)用流式细胞仪检测36例HBV感染者和20例正常人外周血中T细胞亚群的数量.(2)用免疫组化S-P法检测64例慢性肝病的肝脏标本的HBsAg和HBcAg,将HBsAg和(或)HBcAg阳性的50例作为HBV感染组,而将肝组织HBsAg和HBcAg及血清病原学检查均为阴性的10例作为非HBV感染组(HBV阴性组).检测其中CD4、CD8、CD25表达情况.结果:(1)HBV感染组外周血T细胞亚群测定值中,CD4 T细胞和CD4 T/CD8 T比值明显低于对照组(Pb＜0.05);CD8 T细胞升高,明显高于对照组(Pb＜0.05);(2)肝组织内浸润的淋巴细胞主要聚集在汇管区和小叶坏死区,免疫组化结果显示HBV感染组肝组织内的CD8 T和CD4 T细胞数量多于非HBV感染组,统计学上其差异有非常显著意义(Pc＜0.01).HBV感染组肝组织内与T细胞活性有关的CD25 T细胞数量与对照组相比有所减少,但统计学上无显著意义.结论:乙型肝炎病毒感染者外周血和肝内的T细胞亚群紊乱,且活性可能有下降,免疫功能受损.     

HIV/HBV混合感染者免疫功能及肝功能损伤研究

目的 定量分析HIV、HIV/HBV混合感染者CD3 、CD4 、CD8 T淋巴细胞水平和肝功能改变情况.方法 采用流式细胞技术(FCM)对46例HIV感染者,14例HBV/HIV混合感染者及10例正常对照组分别检测CD3 、CD4 、CD8 淋巴细胞绝对计数和CD4 /CD8 比值和肝功能相关指标.结果 HIV/HBV混合感染组、HIV感染组及健康对照组各项指标间差异有统计学意义(F=50.67,F=46.06,F=92.51,P＜0.01);CD3 细胞计数呈现为HIV/HBV组＜HIV组＜正常组(P＜0.01),CD4 细胞计数表现为HIV/HBV组＜HIV组＜正常组(P＜0.01),CD8 细胞计数表现为HIV组＞正常组(P＜0.01).CD4 /CD8 比值降低,HIV/HBV组、HIV组＜正常组(P＜0.01).结论 CD4 细胞绝对计数减少和CD4 /CD8 比值的改变在评价HIV感染者的免疫状况、进展和预后等方面具有重要作用.HIV/HBV混合感染有可能加重机体免疫功能和肝功能的损害.     

长期不进展者与艾滋病患者HIV-1 nef特异性CD8+ T细胞应答的初步研究

目的　探讨我国HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的特点及其免疫保护作用。方法以长期不进展组 (LTNP) 7例和艾滋病组 9例为研究对象 ,以覆盖HIV 1nef全长的 2 6个重叠肽段组成的 3个肽段库作为刺激原 ,用IFN ELISPOT方法检测LTNP组与艾滋病组患者HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答 ,并测定其CD4 T细胞、CD8 T细胞和病毒载量 ,观察两组间HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的差异及其与CD4 T细胞和病毒载量的相关性。结果　LTNP组和艾滋病组HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的强度分别为 4 0 4± 334和 5 9± 12 1SFC/ 10 6外周血单个核细胞 (PBMC) ,LTNP组显著高于艾滋病组 ;HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答的强度与CD4 T细胞计数呈正相关 ,但与病毒载量没有显著的相关性。结论　HIV 1nef特异性CD8 T细胞应答在艾滋病发病中具有一定的保护作用 ,欧美流行株与我国流行株之间具有免疫交叉反应性     

慢性HBV感染者外周血T细胞亚群研究

目的分析健康人及慢性HBV感染者T细胞亚群特点,探讨宿主细胞免疫功能与慢性HBV感染临床转归的关系。方法使用流式细胞仪检测30名健康人及137例各型HBV感染者外周血T细胞亚群。结果1．对照组与各型HBV感染者的外周血T细胞亚群比较：从慢性HBV携带（CHBVC）组、慢性乙型肝炎（CHB）组到肝炎后肝硬化（PHBC）组,患者外周血CD3^＋T、CD4^＋T和CD8^＋T绝对值呈逐渐下降趋势,显著低于对照组（P〈0．05）。PHBC组CD4^＋T/CD8^＋T比值显著高于对照组和CHBVC组（尸〈0．05）。2．不同程度CHB组间外周血T细胞亚群比较：从CHB（轻度）组、CHB（重度）组到慢性重型乙型肝炎（CSUB）组,患者CD3^＋F、CD4^＋T、CD8^＋T绝对值和CD4^＋T／CD8^＋T比值逐渐下降。CSHB组CD3^＋T、CD4^＋T和CD8^＋T绝对值显著低于CHB（轻度）组（P〈0．05）。结论HBV慢性感染机制复杂,不同的临床转归患者T细胞亚群状态不同。慢性HBV感染后,肝脏损害程度严重的患者T细胞亚群功能低下及紊乱程度明显。     

程序性死亡因子1高表达影响急性乙型肝炎患者体内乙肝病毒特异性CD8+T细胞凋亡的研究

目的 观察急性乙型肝炎发病过程中患者体内病毒特异性CTL细胞上免疫抑制性分子程序性死亡因子1(programmed death 1,PD-1)的表达与凋亡的关系.方法 针对HBV不同表位合成2种pentamer,同时针对CMV表位合成pentamer作为对照.采集15例HLA-A2阳性的急性乙型肝炎患者(AHB)的外周血,流式细胞仪分析各病毒特异性CTL细胞表面PD-1分子表达水平及其凋亡水平;同时进行体外实验验证PD-1表达与凋亡的关系.结果 AHB患者发病早期HBV特异性的CD8+T细胞表面PD-1表达水平明显增高,增高的PD-1水平与HBV特异性CD8+T细胞自发凋亡呈明显正相关;体外共培养HepG2.215细胞与AHB患者CD8+T细胞,可明显诱导CD8+T细胞凋亡.结论 在HBV急性感染早期,HBV特异性CD8+T细胞PD-1表达明显升高,并明显诱导了病毒特异性CD8+T凋亡,从而避免了AHB患者肝脏遭受更为严重的免疫损伤.     

慢性HCV感染者IL-2分泌性CD4~+T辅助细胞的选择性缺失

在大多数丙型肝炎病毒(H CV)感染个体中,病毒持续存在并逃避宿主的适应性免疫反应,但目前还不清楚其免疫逃避机制。已有数个研究小组使用细胞增殖法及最近的二级四聚体方法证实H CV特异性CD4+T细胞在慢性H CV感染中反应减弱或缺乏。然而,目前对感染消退期和持续感染的H CV特异性CD4+T细胞的功能状态了解还很少。本研究采用酶联免疫斑点法检测干扰素γ(IFN-γ)和白介素-2(IL-2),分析了慢性感染患者细胞因子分泌模式,并将其与感染消退期进行比较。在自限性感染组中,IL-2高分泌与IFN-γ分泌有关。但是在持续感染组中与IFN-γ分泌…     

HBV感染者外周血T细胞亚群的研究

目的:分析HBV感染者外周血T细胞亚群的特征及病程不同阶段的变化及意义.方法:采用流式细胞仪对112例HBV感染者的外周血T细胞亚群进行检测,分析其差异及意义并与正常对照组相比较.结果:慢性乙肝、肝硬化患者的外周血CIM T细胞、CD8 T细胞百分比及CD4 T/CD8 T较急性肝炎组及正常对照组明显减少;HBV-DNA阳性组、HBeAg 阳性组外周血CD4 T细胞、CD8 T细胞百分比及CD4 T/CD8 T较正常对照组明显减少.结论:HBV感染者体内存在T淋巴细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱.外周血T淋巴细胞亚群与乙肝病毒感染的慢性化及肝病的临床发生、发展有关.     

HBV感染者外周血T淋巴细胞亚群分析

目的：探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血T细胞亚群CD3^ ，CD4^ ，CD8^ ，CD4^ ／CD8^ 变化规律，为临床制订治疗策略提供实验依据。方法：ELISA方法确定待检对象中HBsAg阳性与阴性，HBsAg阳性血清中HBeAg、HBeAb阳性与阴性；流式细胞仪技术同时检测55例HBV感染者和17例正常人群外周血T淋巴细胞亚群。结果：HBsAg携带者、HBsAg和HbeAg双阳性患者外周血CD3^ ，CD4^ ，CD4^ ／CD8^ 比例均明显低于正常人；而HBsAg和HBeAb双阳性患者外周血CD3^ ，CD4^ ，CD4^ ／CD8^ 比例则明显高于正常人。结论：HBV感染导致机体T细胞免疫反应，T细胞亚群的变化与病情呈现一定的相关性。     

慢性乙肝患者PBMC中HBV感染及其对T细胞亚群的影响

目的 :探讨乙肝病毒 (HBV)感染外周血单个核细胞 (PBMC)对T细胞亚群的影响。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)检测了 6 0例慢性乙肝患者PBMC中HBVDNA ,同时应用直接致敏红细胞花环法检测患者T细胞亚群。结果 :慢性乙肝患者PBMC中HBVDNA总检出率为 6 8.3% ,与PBMC中HBVDNA阴性组相比 ,HBVDNA阳性组患者CD8细胞增加 ,CD4 /CD8细胞比值显著下降。结论 :慢性乙肝患者T细胞亚群变化与HBV感染PBMC有关 ,这种变化可能是PBMC中HBV得以继续感染并长期存在的原因之一     

HBV感染孕妇T淋巴细胞亚群检测结果分析

目的观察HBV感染孕妇体内T淋巴细胞亚群的变化情况,以了解其体内的细胞免疫状态。方法用流式细胞仪检测HBV感染孕妇的外周血T淋巴细胞亚群,并和正常妊娠者进行对照。结果HBV感染孕妇的CD3 细胞和CD4 细胞均比正常妊娠者明显偏低(t值分别为3.031和4.011,P<0.01),而CD8 细胞无明显差异(t=1.918,P>0.05)。结论HBV感染孕妇的细胞免疫功能可能出现异常,在围产期保健中应引起注意。     

CD4~+、CD25~+Treg表达水平对Th1/Th2类细胞免疫平衡的作用及与HBV宫内感染的相关性

目的:探讨孕妇外周血以及新生儿脐血中CD4~+、CD25~+Treg表达水平对Th1/Th2类细胞免疫平衡的作用及与HBV宫内感染的相关性。方法:选取102例2015年2月至2016年10月在我院妊娠为临产的孕妇和102例新生儿,本组孕妇均为HBsAg阳性但是肝功能正常,对本组新生儿的脐血进行检验,根据检验结果将10例出现HBV宫内感染的新生儿极其母亲纳入观察组(n=20),将其余92例未出现HBV宫内感染的新生儿极其母亲纳入对照组(n=184)。采用流式细胞仪对所有孕妇外周血以及新生儿脐血中CD4~+、CD25~+Treg表达水平进行检测,并采用ELISA检测法对各组干扰素-r和白介素-4的水平进行检测。结果:观察组干扰素-r和白介素-4的水平低于对照组,差异明显(P0.05),并且观察组白介素-4、CD4~+、CD25~+Treg表达水平所占CD4~+淋巴细胞的百分比均高于对照组,差异明显(P0.05);两组CD4~+、CD25~+Treg表达水平与干扰素-r呈负相关,与白介素-4呈正相关。结论:当出现HBV宫内感染时,孕妇和新生儿的Th1型特异性反应降低,但是Th2型特异性反应增强,Th1/Th2类细胞之间的免疫失衡可能是导致HBV宫内感染的因素。而HBV宫内感染与孕妇外周血以及新生儿脐血中CD4~+、CD25~+Treg表达水平的升高有着非常重要的联系。     

慢性乙肝患者及HBV携带者CD8^＋T细胞表面活化分子CD38和HLA-DR表达研究

目的研究慢性乙肝（CHB）患者阿德福韦酯治疗前后及HBV携带者CD8＋T细胞表面活化分子CD38和HLA-DR表达情况,并探讨其与疾病进展的关系。方法收集32例经阿德福韦酯治疗的CHB患者,31例HBV携带者和28例正常对照,采集CHB患者治疗前后及HBV携带者和正常对照外周血。采用流式细胞术检测CD4＋和CD8＋T细胞数量和比例,以及CD8＋CD38＋和CD8＋HLA-DR＋T细胞比例,HBV DNA和生化由本院检验室检测。结果 CHB患者治疗前CD8＋CD38＋T细胞比例显著高于HBV携带者和正常对照组,阿德福韦酯治疗后显著降低（P〈0.05）。HBV携带者CD8＋CD38＋T细胞比例高于正常对照组（P〈0.05）。CHB患者治疗前CD8＋HLA-DR＋T细胞比例显著高于正常对照组（P〈0.01）,但与HBV携带者无明显差异,阿德福韦酯治疗后显著下降,仍高于正常水平（P〈0.05）。结论 HBV感染可以引起CD8＋T活化水平显著升高,阿德福韦酯抗病毒治疗能够降低CD8＋T的活化。CD8＋T活化水平是良好的HBV感染病情评价指标。     

全血涂片免疫酶染法检测T细胞亚群

采用全血涂片免疫酶染法建立了检测T细胞亚群的新方法。该法具有良好的敏感性、特异性、稳定性与重复性。经与传统的间接免疫荧光法及单个核细胞涂片免疫酶染法作对比研究,证明该法具有需血量少、省时、经济和简便等优点。应用该法检测了48例EHF患者及32例慢性HBV感染患者的外周血T细胞亚群。结果显示EHF患者极期CD8~+T细胞百分比明显升高,CD4~+/CD8~+比值下降或倒置。慢性HBV感染患者也显示CD8~+细胞百分比升高,CD4~+/CD8~+比值下降。本文还对EHF和慢性HBV感染患者T细胞亚群变化的意义进行了讨论。     

HIV／AIDS合并HBV／HCV感染病毒载量水平及与T淋巴细胞相关性的探讨

目的：探讨人类免疫缺陷病毒（HIV）／艾滋病（AIDS）合并乙型肝炎病毒（HBV）／丙型肝炎病毒（HCV）感染后病毒载量水平变化及对机体T淋巴细胞免疫机制的影响。方法分别测定 HIV／AIDS单纯感染组,HIV／HBV合并感染组,HIV／HCV合并感染组3组的 HIV RNA、HBV DNA、HCV RNA、CD4＋ T淋巴细胞频数、CD8＋ T淋巴细胞频数、CD4／CD8比值,并分析各组T淋巴细胞与HIV RNA的关系,HBV DNA／HCV RNA与HIV RNA、CD4＋ T淋巴细胞、CD8＋ T淋巴细胞、CD4／CD8比值的相关性。结果 HIV／AIDS单纯感染组、HIV／HBV合并感染组及 HIV／HCV合并感染组的CD4＋ T 淋巴细胞与各自组的HIV RNA呈负相关,差异有统计学意义（P＜0．05）;HIV／AIDS单纯感染组、HIV／HBV合并感染组的CD8＋ T淋巴细胞与各自组的HIV RNA呈负相关,差异有统计学意义（P＜0．05）;HIV／AIDS单纯感染组、HIV／HBV合并感染组及 HIV／HCV合并感染组的CD4／CD8与各自组的HIV RNA呈负相关,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论合并感染 HBV后,HIV／AIDS患者T细胞的数量下降更明显,致HIV RNA、HBV DNA高载量,加速了 HIV病情进展;感染 HBV后CD4＋ T细胞的数量下降比感染HCV更明显。     

HIV感染者合并HBV及HCV感染情况分析

目的分析人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)感染者合并乙型肝炎病毒(hep-atitis B virus,HBV)和(或)丙型肝炎病毒(hepatitis virus,HCV)感染的情况。方法对260例HIV感染者的HBV和(或)HCV合并感染情况进行回顾性分析,对HIV单独感染者、HIV/HBV合并感染者、HIV/HCV合并感染者及HIV/HBV/HCV合并感染者的CD4+T细胞数、CD4+/CD8+细胞比值及HIV-RNA载量水平进行比较分析。结果在260例HIV感染者中,60例(23.1%)为HIV/HCV合并感染,29例(11.2%)为HIV/HBV合并感染,8例(3.1%)为HIV/HBV/HCV合并感染;男性的HIV/HCV合并感染率显著高于女性(P<0.01);HIV/HBV和HIV/HCV合并感染者的CD4+/CD8+细胞比值均显著低于HIV单独感染者(P<0.05);HIV/HCV合并感染者的CD4+细胞数显著低于HIV单独感染者(P<0.05);3组合并感染者的HIV-RNA载量与HIV单独感染者之间差异无显著性。结论HIV/HCV合并感染率...