异位hCGβ-CTP37基因疫苗的抗肿瘤作用

目的 :研究异位hCGβ CTP37基因免疫诱导的肿瘤特异性免疫应答及其抗肿瘤作用 ,为肿瘤的免疫生物治疗寻求新途径。方法 :分离获取异位hCGβ CTP37的编码基因 ,并将 4拷贝基因以头尾串联形式克隆于真核表达载体TR42 1构建重组质粒TR42 1 CTP37.4,以PCR、酶切和DNA序列测定进行鉴定 ;肌内注射法对BALB/c小鼠实施 3次基因免疫 (1 0 0 μg/ 1 0 0 μl) (每只小鼠 ) ,间隔 3周 ,并以空载质粒为对照。ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗hCGβ IgG抗体 ;免疫小鼠脾细胞经特异性抗原hCGβ刺激后 ,用3H TdR掺入法和同位素释放法分别检测其特异性淋巴细胞增殖活性和CTL细胞毒活性 ;皮下接种SP2 / 0 hCGβ细胞攻击免疫小鼠 ,以成瘤率及实体瘤重量评估体内抗瘤效果。结果 :TR42 1 CTP37.4质粒免疫小鼠产生了较高水平的抗hCGβ IgG抗体 ,与空载质粒组有显著差异 ;hCGβ蛋白刺激TR42 1 CTP37.4质粒免疫小鼠脾细胞生产了高水平的特异性淋巴细胞增殖活性 ,且明显高于空载质粒免疫小鼠 ;特异抗原诱导的TR42 1 CTP37.4质粒免疫小鼠脾细胞对SP2 / 0 hCGβ细胞的CTL活性明显高于SP2 / 0 preS2 /S细胞 P <0 .0 1 ) ;空质粒免疫小鼠接种SP2 / 0 hCGβ细胞后成瘤率为 1 0 0 % ,瘤重达 3 .37g,而TR42 1 CTP37.4质粒免     

肿瘤内DC原位靶向治疗诱导有效抗肿瘤免疫应答

肿瘤免疫逃逸成为当今有效肿瘤免疫治疗的主要障碍 ,树突细胞 (DC)在抗肿瘤免疫应答过程中发挥重要作用。荷瘤宿主中的T细胞在能够识别并对肿瘤抗原作出反应的情况下仍不能组织起有效免疫应答 ,其主要原因之一在于 :肿瘤微环境阻止了肿瘤内DC有效的抗原提呈。鉴于DC在免疫应答启动过程中的核心作用 ,人们设计出一系列以DC为基础的肿瘤生物治疗方案。研究分别以小鼠CT2 6结肠腺癌和B16黑色素瘤为肿瘤模型 ,选用CCL2 0(M炎症蛋白 - 3α趋化因子 ,一种有效的表达于人和小鼠的DC趋化因子 )引导血液循环中的DC向肿瘤部位聚集 ,从而提高…     

ehCGβ肿瘤基因疫苗诱生抗体的抗肿瘤作用

目的：探讨ehCGβ肿瘤基因疫苗诱生抗hCGβ抗体的抗肿瘤作用。方法：以TR421ehCGβ质粒实施基因免疫、空载质粒为对照，ELISA法检测免疫小鼠血清中特异性抗hCGβIgG抗体；以3HTdR掺入法检测灭活补体前后免疫血清对ehCG+肿瘤细胞增殖活性的抑制作用；倒置显微镜和FACS分别观察Hela细胞的形态变化及细胞凋亡情况。结果：TR421ehCGβ质粒诱导小鼠产生高水平抗hCGβIgG抗体；抗hCGβ免疫血清对Hela细胞的抑制增殖作用明显强于对照血清，灭活补体后抑制率无明显变化；免疫血清的抑制作用与肿瘤细胞的hCGβ表达水平有一定的相关性；Hela细胞与免疫血清孵育后细胞死亡明显增多，但其中凋亡细胞为3.42%，与对照血清孵育细胞的凋亡（1.88%）比较无明显差异。结论：ehCGβ肿瘤基因疫苗诱生的抗hCGβ抗体以不依赖补体方式抑制ehCGβ+肿瘤细胞的增殖。     

双特异性抗体与T淋巴细胞抗肿瘤免疫

导向免疫效应细胞的双特异性抗体可以同进结合靶细胞的肿瘤相关抗原和效应细胞２表面的触发分子，能引发正常的细胞防御机制到肿瘤细胞上来，是一种新型高铲的肿瘤免疫制剂。其中根据Ｔ细胞活化的双信号识别理论发展而来的导向Ｔ淋巴细胞的双特异性抗体用于某些肿瘤的免疫治疗临床前研究报告了令人瞩目的抗肿瘤免疫效应。     

联合自杀基因与IL-2基因转移疗法的抗肿瘤效果及其抗肿瘤免疫应答的诱导作用

单用自杀基因疗法或单用细胞因子基因疗法抗肿瘤效果不理想,本研究中我们观察了大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶(CD)基因与白细胞介素2(IL-2)基因联合转移对荷瘤小鼠的治疗效果及其对抗肿瘤免疫的诱导作用。复制荷瘤小鼠模型后在荷瘤部位注射表达CD基因的重组腺病毒(AdCD)及表达小鼠IL-2基因的重组腺病毒(AdIL2),并连续10天、每天1次腹腔注射5氟胞嘧啶(5FC)对荷瘤小鼠进行治疗。结果表明,AdCD/5FC/AdIL2联合基因治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长,并明显延长其生存期(P<0.01)。联合基因治疗组小鼠肿瘤细胞发生明显的坏死,瘤内及瘤周有大量的炎性细胞浸润,瘤内CD4~ 和CD8~ T细胞明显增加,脾细胞NK和CIL杀伤活性明显高于单用AdCD/5FC、对照病毒AdLacZ/5FC或PBS组。实验结果表明,联合应用自杀基因与细胞因子基因治疗可更有效诱导机体的抗肿瘤免疫反应,从而更显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长。     

β-榄香烯诱导的抗肿瘤免疫保护作用机理初探

目的 探索中药莪术有效成分β－榄香烯的抗肿瘤作用及其分子机理。方法 用免疫荧光法和流式细胞仪检测不同因素处理的小鼠肝癌Ｈ２２细胞膜ＨＳＰ７０蛋白表达的变化,并用处理后的Ｈ２２细胞作为抗原进行体仙抗肿瘤免疫保护实验。结果 各实验组Ｈ２２细胞胞膜ＨＳＰ７０蛋白的表达率及表达强度均较对照组细胞有显著增加。     

共刺激分子及其在特异性免疫应答中的调节

特异性免疫应答主要包括抗原递呈、免疫细胞相互作用、免疫效应3个阶段,是一个由多种免疫细胞和分子(膜分子和可溶性因子)参与并受到严格调控及制约的复杂生理过程,它涉及抗原递呈细胞(antigen presenting cells,APC)对抗原的特异性识别及记忆。APC与T细胞等兔疫细胞间相互作用及多种免疫分子构成有序的调控网络,免疫效应分     

B7基因转染的肿瘤细胞诱导的抗肿瘤免疫反应的特异性和持续性

肿瘤免疫治疗的目的之一是诱导特异性的T细胞反应以清除体内散在的肿瘤细胞，近年来的研究表明T细胞的激活除需要特异性抗原／MHC Ⅰ类分子复台物信号外，还需要共激活分子与T细胞表面的受体结台作为第二信号来完成整个过程，这类共激活分子中作用最明显的是BT分子，它与T细胞表面抗原CD28分子结合后，使T细胞分泌如IL-2等淋巴因子     

HeLa细胞HSP-70体外诱导抗瘤免疫活性细胞的研究

背景与目的:近来的研究证实,动物肿瘤细胞表达的热休克蛋白(heatshokproteinHSP)可携带肿瘤抗原,并能诱导抗瘤特异性T淋巴细胞的免疫应答。本文旨在探讨用HeLa细胞HSP-70多肽诱导的免疫活性细胞(immunecompetentcell,ICC)及其特异性抗肿瘤机制。方法:用热休克处理的HeLa细胞提取的HSP-70多肽剌激正常人外周血单个核细胞(PBMCs),在剌激扩增前后测定T淋巴细胞表型,并测定扩增的免疫活性细胞对HeLa细胞的杀瘤活性。结果:在扩增前后CD3+淋巴细胞百分率为(57.68±1.46)%和(85.73±1.44)%(P<0.002),CD8+淋巴细胞百分率为(23.56±1.86)%和(48.06±1.66)%(P<0.002)。该免疫活性细胞对HeLa细胞和来源于病人的宫颈癌细胞都具有较高的杀伤活性犤(82.69±1.97)%和(62.11±1.61)%犦,而对经HSP-70单抗封闭后的HeLa细胞的杀伤活性犤(31.05±2.09)%犦则明显下降。结论:HeLa细胞HSP-70多肽能有效刺激PBMCs诱导活化免疫活性细胞,该免疫活性细胞具有特异性抗肿瘤作用。     

HLA-KIR-MICA基因及其NK受体免疫应答与子宫颈癌的相关性

目的探讨广州市汉族人群HLA-KIR-MICA基因及其NK受体免疫应答与子宫颈癌的相关性。方法收集500例子宫颈上皮细胞癌(鳞状细胞癌和腺癌)的初诊患者(宫颈癌组)和100例与宫颈癌组在区域、年龄、种族、婚姻生育史、个人史等方面差异无统计学意义的健康人群(对照组)。采用PCR-SBT法,对所有样本进行HLA等位基因检测、KIR基因和MICA基因检测;采用realtime PCR法进行HPV-E1、HPV-E2、HPV-E4、HPV-E5、HPV-E6、HPV-E7、HPV-L1、HPV-L2的转录水平监控,以及对HPV蛋白表达差异样本进行MICA表达量检测。结果宫颈癌组患者HLA-KIR*1003、HLA-KIR*14、HLA-KIR*17、HLA-KIR*02、HLA-KIR*12等位基因的分布与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组患者MICA*13、MICA*20、MICA*04、MICA*15等位基因的分布与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论广州市汉族人群HLA-KIR*02、HLA-KIR*12、HLA-KIR*0801和MICA*04、MICA*15、MICA*17、MICA*0601等位基因可能与宫颈癌的发生相关。     

转染趋化因子MCP-3基因诱导抗小鼠大肠癌主动免疫

背景与目的:趋化因子对于免疫细胞在肿瘤组织中的浸润起重要作用,转染趋化因子基因在许多类型的肿瘤中诱导了抗肿瘤免疫反应,本研究的目的是通过将趋化因子单核细胞趋化蛋白-3(monocytechemotacticprotein-3,MCP-3)基因转染小鼠大肠癌CMT93瘤细胞,探讨MCP-3用于诱导抗大肠癌主动免疫的可行性。方法:用脂质体将小鼠MCP-3基因导入小鼠大肠癌细胞CMT93,G418筛选抗性克隆,RT-PCR检测MCP-3的表达,趋化实验检测MCP-3的活性,体内实验观察野生型及MCP-3基因修饰瘤细胞的致瘤性,组织病理学检测肿瘤中免疫细胞的浸润及肿瘤的转移。结果:RT-PCR检测发现G418筛选得到的转染MCP-3的抗性克隆(CMT93/MCP3)表达MCP-3,而野生型CMT93不表达MCP-3。趋化实验显示CMT93/MCP-3的培养上清具有良好的趋化活性,趋化指数达5.57(P<0.05),对照组培养上清均无趋化活性。体内成瘤实验显示:与野生型瘤细胞相比,CMT93/MCP-3的成瘤率没有显著性下降,但源于CMT93/MCP-3的肿瘤生长速度与对照组相比显著减慢(P<0.05)。在CMT93/MCP-3所形成肿瘤中有明显的免疫细胞浸润,对照组肿瘤中免疫细胞的浸润较少。接种CMT93/MCP-3瘤细胞的小鼠,肿瘤的转移受到了显著性的抑制,转移率为0%(0/5),与对照组CMT93(100%,4/4)和CMT93/mock(80%,4/5)相比均有显著     

B7-1基因转染骨肉瘤细胞诱导抗骨肉瘤主动免疫的实验研究

目的:探讨B7-1基因转染骨肉瘤细胞能否诱导抗骨肉瘤主动免疫作用。方法:利用脂质体将B7-1真核表达载体pcDNA3-B7-1和空载体pcDNA3分别导入骨肉瘤细胞株LM8中,G418筛选出阳性克隆(分别命名为LM8/B7-1和LM8/pcDNA3),通过RT-PCR、Western blot和流式细胞仪检测B7-1基因与蛋白的表达;通过软琼脂克隆形成实验观察转基因细胞株LM8/B7-1的体外增殖能力;用LM8、LM8/B7-1和LM8/pcDNA3分别经腹腔免疫小鼠,得到腹腔浸润淋巴细胞和致敏脾细胞,MTT法检测其体外杀伤活力;将LM8、LM8/B7-1和LM8/pcDNA3细胞分别接种到C3H雄性小鼠前腋下,观察其致瘤能力;观察LM8/B7-1致敏的小鼠对骨肉瘤细胞LM8是否具有免疫保护作用。结果:B7-1基因在转基因细胞LM8/B7-1中能得到高表达;LM8/B7-1体外增殖能力与LM8和LM8/pcDNA3无明显差异(P>0.05);LM8/B7-1诱导的CTL的杀伤活力显著高于LM8和LM8/pcDNA3诱导的CTL对相同靶细胞的杀伤活力,LM8/B7-1诱导的CTL对LM8/B7-1的杀伤活力也明显高于对LM8和LM8/pcDNA3的杀伤活力(P<0.05);LM8/B7-1致瘤能力较LM8和LM8/pcDNA3细胞明显下降(P<0.01);LM8/B7-1致敏的小鼠对骨肉瘤细胞LM8具有免疫保护作用。结论:B7-1基因转染骨肉瘤细胞能诱导抗骨肉瘤主动免疫作用,为利用B7-1基因进行骨肉瘤免疫基因治疗提供了实验依据。     

Cloning and expression of a gene associated with HL60 cell apoptosis induced by inhibition of polyamine biosynthesis

Objective: To clone the gene associated with apoptosis induced by an inhibitor of polyamine biosynthesis, α-difluoromethylornithine (DFMO). Methods: The differential subtraction screening was used for gene cloning from cDNA library of HL₆₀ cells treated by DFMO. Northern blot, morphological observation, FCM assays and ladder map of DNA electrophoresis were performed. Results: The transfecting gene expression and activity of inducing apoptosis in the cells transfected from recombinant plasmid containing the cloned fragment df4 was proved. Conclusion: It is suggest that df4 gene cloned in the study could be a gene regulating apoptosis of HL₆₀ cells.