自藜芦醇苷对缺血再灌注脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：探讨白藜芦醇苷（P0lydatin，PD）对缺血再灌注脑损伤的保护机制。方法：采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，观察PD对缺血再灌注脑损伤凋亡的影响。结果：再灌注2h己开始发生部分神经细胞的凋亡，随着再灌注时间的延长，凋亡细胞逐渐增多，24h达高峰，以后逐渐减少。PD组在各个观察时间点凋亡细胞数明显低于模型组（P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注的迟发性损伤阶段，细胞凋亡是神经元死亡的主要方式。PD可通过抑制缺血再灌注脑损伤后神经元的凋亡发挥保护作用。     

脑血管内皮细胞损伤对大鼠脑缺血再灌注神经元凋亡的影响

目的:探讨脑缺血再灌注脑血管内皮细胞损伤、内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)与神经元凋亡的关系。方法:采用4血管夹闭法制作大鼠脑缺血再灌注模型,观察缺血再灌注不同时间内皮素、一氧化氮及脑血管内皮细胞超微结构变化对神经元凋亡的影响。结果:脑缺血再灌注组缺血10m in血浆ET-1含量显著升高,再灌注24h有所下降,于72h又开始升高,血浆NO于再灌注24h有所下降,48h时间点又恢复到缺血时水平。全脑缺血10m in内皮细胞部分缺损,凋亡神经元数量较少,缺血再灌注24h内皮损伤加重,凋亡神经元数量明显增加,至48h达到高峰,再灌注72h,凋亡神经元数量明显减少。结论:脑缺血再灌注ET-1含量升高,NO水平下降,内皮损伤加重可导致神经元进一步损害。     

全脑缺血再灌注后磷酸化ERK蛋白的表达及应用PD98059后对其表达的影响

目的:全脑缺血再灌注后磷酸化ERK(p-ERK)蛋白的表达与细胞凋亡的关系及应用ERK通路抑制剂PD98059后对其表达的影响,以探讨ERK通路在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:健康雄性SD大鼠90只,随机分为三组:缺血再灌注组(IR,n=30):采用4-VO法建立全脑缺血再灌注模型,6min缺血后给予再灌注。假手术组(PO,n=30):只暴露血管而不夹闭,PD98059组(PD,n=30):缺血前20min经尾静脉注入PD98059,另两组予以生理盐水行干预。各组动物于再灌注后2h、6h、12h、24h、48h、72h处死,将脑组织切片进行HE染色、免疫组化染色和TUNEL检测。结果:HE染色结果PD组变化显著,细胞破坏更严重,于各时间点细胞形态变化较IR组更为明显;IR组p-ERK在海马CA1区锥体细胞未见表达,CA3区于再灌注后2h有弱表达,于再灌注6h达高峰后逐渐下降,至再灌注后48h未见表达,PD组表达弱于IR组(P<0.05);IR组中CA1区2h即有散在的凋亡细胞,24h～48h达峰值,PD组各时点于各区凋亡细胞计数多于IR组(P<0.05)。结论:ERK信号转导通路在脑缺血再灌注中参与了缺血后神经元的保护,发挥抗凋亡作用。     

夏天无、钩藤生物碱抗脑细胞凋亡作用及急性毒性

目的观察钩藤总碱(RHA)、夏天无总碱(COAMTA)对脑缺血损伤诱发凋亡的保护作用.方法采用小鼠断头张口喘气模型,大鼠大脑中动脉缺血2h/再灌注22h模型,观察RTA、COAMTA抗脑缺血/再灌注损伤的效应.结果两药合用可延长小鼠张口喘气时间,降低大鼠脑缺血/再灌注后细胞凋亡.结论两药合用对脑缺血/再灌注损伤有保护作用.     

阿托伐他汀对沙鼠脑缺血再灌注损伤后c-fos表达的影响

目的:观察阿托伐他汀对沙鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织中c-fos表达的影响及相应的保护机制.方法:健康雄性蒙古沙鼠制作脑缺血再灌注模型,缺血10 min,再灌注6 h、1 d、3 d、7 d.采用HE染色法观察脑组织的病理变化,免疫组织化学染色法观察脑组织c-fos的表达情况.结果:(1)HE染色:脑缺血再灌注组根据时间点的不同可见胶质细胞增生、肥大,细胞间质和细胞水肿,神经元坏死.(2)免疫组化:缺血再灌注损伤后c-fos的表达上调,于第1天达到高峰,与对照组比较有显著差异,随后逐渐减少.阿托伐他汀干预组中c-fos表达趋势同缺血再灌注组,但各时间点阳性细胞数明显低于缺血再灌注组,相同时间点差异有显著性.结论:沙鼠前脑缺血再灌注后脑组织c-fos表达上调,阿托伐他汀下调c-fos表达,推测阿托伐他汀可能通过抑制c-fos的活性而起到凋亡负性调节的作用,从而减轻脑组织损伤程度.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注时神经细胞凋亡的动态变化

目的:观察大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的动态变化.方法:采用健康雄性大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)模型,阻断大脑中动脉(MCA)血流2h后再灌注,在0.5h,6h,12h,24h和48h不同时间点断头取脑,连续取脑进行TuNEL染色。结果:①假手术组、缺血再灌注组非缺血侧大脑半球未见阳性的凋亡细胞。②脑缺血再灌注早期部分神经细胞发生了凋亡。随着再灌注时间的延长,凋亡细胞数目逐渐增多,12h～24h达到高峰。③凋亡细胞主要分布在梗死灶的边缘区,梗塞灶中心区和正常区无凋亡细胞。结论:神经细胞凋亡在脑缺血再灌注损伤时起着重要作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后P-erk表达及神经元凋亡的变化

目的 研究磷酸化细胞外信号调节激酶(phospho-excelluar signal-regulated kinase,P-erk)在局灶性脑缺血再灌注中的作用. 方法 建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型;HE染色观察脑组织形态病理学变化;免疫组化法检测大鼠脑缺血再灌注不同时间磷酸化ERK的表达;TUNEL染色检测神经元凋亡. 结果在脑缺血再灌注大鼠检测到磷酸化ERK在梗死中心灶和缺血半暗带都存在阳性表达,于再灌注6 h达到峰值,12 h后逐渐下降;而凋亡细胞于再灌注24 h开始有明显的阳性细胞增加,48 h细胞凋亡达到高峰(P<0.01). 结论 局灶性脑缺血再灌注后磷酸化ERK表达增加,提示缺血再灌注损伤可能导致ERK活性上调,参与缺血后神经细胞凋亡和非程序性死亡过程.     

白藜芦醇苷对体外缺血再灌注脑损伤中NF-κB的保护作用

目的 探讨体外缺血再灌注(isehemia-reperfusion,I-R)脑损伤中NF-KB的表达及白藜芦醇苷(polydatin,PD)的保护作用.方法 将体外培养7 d的大鼠大脑皮层神经元分为3组:对照组、模型组和PD组.AO/EB及DAPI染色观察细胞凋亡的形态学变化,同时测定再灌注0、6、12、24、48 h细胞调亡率、Bcl-2/Bax、NF.KB p65的动态变化.结果 模型组可见凋亡细胞的特征性变化;与对照组相比,模型组细胞凋亡率、NF-KB p65的表达量随再灌注时间的延长而明显增加(P＜0.05),24 h达高峰,随后渐降低,Bel-2/Bax的高峰点位于6 h,之后降低(P＜0.05);PD组细胞凋亡率及NF-KBp65的表达量较模型组均明显降低(P＜0.05),Bcl-2/Bax值则明显升高(P＜0.05).结论 NF-KB p65的活化参与了体外I-R脑损伤的病理过程,PD可能通过抑制NF-kB p65的表达,上调Bcl-2/Bax值,阻止神经元凋亡,从而减轻I-R脑损伤.     

ERK抑制剂PD98059对SD大鼠全脑缺血再灌注后海马Caspase-3表达的影响

目的 研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)抑制剂对大鼠全脑缺血再灌注后海马caspase-3表达的影响,以探讨ERK在全脑缺血再灌注损伤中的作用机制.方法 健康雄性SD大鼠90只,随机分为三组:假手术组(sham,n=30),缺血再灌注组(IR,n=30),PD98059组(PD,n=30),采用4-VO法建立全脑再灌注模型.分别于再灌注后2,6,12,24,48,72 h给予处死,标本行HE染色、免疫组化染色观察SD大鼠海马CA1区细胞形态、细胞凋亡计数及P-ERK和Caspase-3表达.结果 HE染色显示PD组损伤较IR组轻.免疫组化结果表明,PD组海马CA1区12-72 h P-ERK表达和各时间点Caspase-3表达均较IR组明显减少(P<0.05).TUNNEL染色显示,PD组各时间点凋亡指数显著小于IR组(P<0.05).结论 PD98059抑制全脑缺血再灌注后SD大鼠海马CA1区Caspase-3表达,减少了细胞凋亡.提示全脑缺血再灌注损伤中,ERK表达参与了损伤机制.     

短暂性脑缺血再灌注损伤对老年大鼠海马脑组织水通道蛋白4表达及神经元凋亡的影响

目的 探讨短暂性脑缺血再灌注损伤对老年大鼠海马脑组织水通道蛋白4表达及神经元凋亡的影响.方法 健康老年Wistar大鼠160只按Pnsinelli方法建立四动脉阻断法全脑缺血模型,随机分为脑缺血1 min组、脑缺血3 min组、脑缺血5 rain组和假手术组,每组40只.每组又按再灌注时间分为再灌注12 h、1 d.2 d.3 d和7 d 5个亚组,每个亚组8只.应用干湿重法计算脑含水量、组织病理学染色观察神经元微观结构,免疫组化方法观察AQP4的表达,TUNEL法检测神经元凋亡.结果 缺血1 rain及3 min组各再灌注时间点脑组织含水量及AQP4表达与假手术组比较差异无统计学意义(P0.05),而缺血5 min组各再灌注时间点脑组织含水量及AQP4表达与假手术组比较差异有统计学意义(P<0.05).假手术组及缺血1 min组有少量神经元凋亡,缺血3 min及缺血5 min后海马区神经元凋亡明显增加.神经元凋亡在缺血后再灌注12 h即有表达,在1 d达高峰,持续至第3天开始下降.结论 老年脑对缺血再灌注损伤的敏感性增加,短暂的脑缺血即可造成老年大鼠脑组织的水肿和AQP4表达及神经元凋亡的增加,神经元的凋亡较脑水肿或AQP4表达对缺血更为敏感;再灌注后神经元凋亡高峰出现得早,持续时间长.