TGF-β增强rhBMP-2诱导成骨中Ⅰ, Ⅱ型胶原及碱性磷酸酶的表达

目的 对β转化生长因子（TGF-β）增强人重组骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2)诱成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及碱性磷酸酶（ALP）的表达进行研究。方法 BALB/c小鼠110只随机分为2组，每组55只，设立rhBMP-2/TGF-β为实验组，rh-BMP-2为对照组，分别于3-21d共8个时间点取材，采用免疫组织化学方法对新生骨组织中的Ⅰ，Ⅱ型胶原进行检测；对ALP活性进行定量分析。观察2组在诱导成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达情况。结果 Ⅱ型胶原的出现是和成软骨，软骨细胞的出现相伴随的，但是，肥大，变性的软骨细胞并不表达Ⅱ型胶原，作为成骨细胞成熟标志物的Ⅰ型胶原，ALP在软骨形成期即有表达，但是随着成骨细胞的出现，骨组织的形成Ⅰ型胶原仍表现为高表达，而ALP的表达则呈下降趋势。实验组CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达早于对照组。结论 TGF-β增强了rhBMP-2诱导成骨中CollagenⅠ，Ⅱ及ALP的表达。     

微波加热后脱钙骨基质诱导成骨中Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA及碱性磷酸酶的表达

目的对微波加热后脱钙骨基质异位诱导成骨中I、II型胶原mRNA及碱性磷酸酶(ALP)的表达进行研究,探讨微波加热对脱钙骨基质诱导成骨的影响。方法将36只Wister大鼠随机分为3组,每组12只。A组为阳性对照组,不加热;B组为实验组,60℃微波加热15min;C组为阴性对照组,100℃水浴加热30min。A、B、C三组均取大鼠左胫骨约0.5cm作为实验材料,将B、C二组骨块分别加热,然后A、B、C三组骨块均制成脱钙骨基质后自体植入大鼠的腹内斜肌,分别于术后6d,12d取材,用原位杂交法对新生骨组织中的I、II型胶原mRNA进行检测,定量分析ALP的活性,观察微波加热脱钙骨基质诱导成骨中I、II型胶原mRNA及ALP的表达。结果(1)术后6d,A、B组随着成软骨细胞、软骨细胞的出现,II型胶原mRNA表达阳性,而C组II型胶原mRNA表达阴性。(2)术后12d,随着成骨细胞出现及骨组织的形成,A、B组I型胶原mRNA出现高表达现象,ALP较术后6d明显增高(P<0.05)。而C组未发现软骨细胞及成骨细胞,仅形成纤维结缔组织。结论B组I、II型胶原mRNA及ALP在成软骨细胞、软骨细胞及成骨细胞内表达,与A组相似,而C组I、II型胶原mRNA及ALP在上述细胞内无表达,表明微波加热后仍可保存骨的诱导性。     

rhBMP-2对成纤维细胞成骨表型的影响

目的：研究rhBMP－2对成纤维细胞成骨表型的影响,探讨成纤维细胞成骨条件,方法：向体外培养的成纤维细胞（NIH3T3细胞）内加入不同浓度的rhBMP-2,在第3日和第6日检测碱性磷酸酶（ALP）活性和骨钙素表达,绘制生长曲线,结果：rhBMP-2可增加成纤维细胞ALP活性,促进骨钙素表达,在rhBMP－2浓度为800ug.mL^-1和1200ug,mL^-1作用最强,rhBMP-2对细胞增殖规律无明显影响,结论：rhBMP－2可促进成纤维细胞成骨表型表达。     

重组人BMP-2骨诱导中神经生长因子的表达

目的通过观察重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异位诱导成骨过程中神经生长因子(NGF)的表达,探讨NGF在BMP骨诱导中的作用。方法采用ICR小鼠48只,随机分为实验组和对照组,行右侧股后部肌袋异位成骨模型,实验组植入含0．125mg rhBMP-2胶原海绵复合物,对照组仅植入相同体积胶原海绵,分别于术后3、7、14、21d取材,进行放射学、组织学及免疫组化检测。结果放射学和组织学检测均证实,rhBMP-2胶原海绵复合物具有良好的诱导成骨能力;术后第7d,在软骨大量形成期,NGF阳性染色达到高峰．在成纤维细胞、软骨前体细胞、软骨细胞、肥大软骨细胞和成骨细胞中均有阳性表达;术后14、2ld,阳性细胞数量和染色强度有所回落。对照组未见成骨现象。结论首次证实在外源性BMP诱导成骨过程中有明显的NGF表达,提示NGF可能通过直接或间接的方式参与并协同BMP的诱导成骨过程。     

重组人BMP-2骨诱导中神经生长因子的表达

目的通过观察重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)异位诱导成骨过程中神经生长因子(NGF)的表达,探讨NGF在BMP骨诱导中的作用.方法采用ICR小鼠48只,随机分为实验组和对照组,行右侧股后部肌袋异位成骨模型,实验组植入含0.125 mg rhBMP-2胶原海绵复合物,对照组仅植入相同体积胶原海绵,分别于术后3、7、14、21 d取材,进行放射学、组织学及免疫组化检测.结果放射学和组织学检测均证实,rhBMP-2胶原海绵复合物具有良好的诱导成骨能力;术后第7 d,在软骨大量形成期,NGF阳性染色达到高峰,在成纤维细胞、软骨前体细胞、软骨细胞、肥大软骨细胞和成骨细胞中均有阳性表达;术后14、21 d,阳性细胞数量和染色强度有所回落.对照组未见成骨现象.结论首次证实在外源性BMP诱导成骨过程中有明显的NGF表达,提示NGF可能通过直接或间接的方式参与并协同BMP的诱导成骨过程.     

TGF—β诱导骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化

目的 通过研究转化生长因子－β（TGF－β）对骺板软骨细胞分化的作用,揭示TGF－β软骨内成骨的作用机制。方法 采用鸡胚股骨无血清培养、酶组化检测碱性磷酸酶（ALP）、免疫组化检测Ⅰ型胶原、纤维粘连蛋白（FN）等方法,观察TGF－β在不同作用时间和剂量时对骺板肥大区软骨细胞分化的作用。结果 TGF－β可使肥大区软骨细胞表达Ⅰ型胶原和FN,使ALP表达增加,并存在着量效和时效关系。结论 TGF－β可以诱导鸡胚股骨骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化,与TGF－β的作用剂量和时间密切相关。     

人骨形态蛋白-3基因真核表达载体(PcDNA3-hBMP3)构建

０引言人骨形态蛋白－３（ｈＢＭＰ－３）可诱导多种来源的未分化间充质细胞向软骨细胞和成骨细胞转化,进而形成新骨,而且对软骨细胞也有促进分裂和增殖的作用,促进后者Ⅱ型胶原和氨基多糖（ＰＧ）的分泌．转基因技术和真核表达载体的产生为软骨细胞库建立和开展软骨组...     

复合rhBMP2的异种骨的研制及成骨活性

目的：研制新型具有诱导成骨活性的异种骨植骨材料。方法：在重组合异种骨（RBX）基础上,以基因重组人BMP2（rhBMP2）取代从牛皮质骨中提取的牛BMP,与去抗原牛松质骨载体（BCB）复合,制成复合rhBMP2的异种骨（rhBMP2/BCB）,并采用小鼠股部肌袋模型,通过组织学、骨计量学方法检测rhBMP2/BCB的诱导成骨活性。结果：实验组（rhBMP2/BCB组）术后7d在小鼠肌袋可诱导软骨生成,14d形成纺织骨,21d改建成板状骨并形成大量骨髓;对照组（BCB组）于术后各时间点均未见有软骨成骨形成。实验组的碱性磷酸酶活性和钙含量均高于对照组,有非常显性差异（P＜0．01）。结论：rhBMP2/BCB具有较好的骨诱导能力,是一种较理想的植骨材料。     

胶原涂层煅烧骨—成骨细胞复合物的体内成骨作用

目的：观察胶原涂层煅烧骨－成骨细胞复合物入体内后成骨性能，探讨治疗骨缺损的新方法。方法：以牛松质骨制成煅烧骨（TBC），并涂以胶原制成胶原涂层煅烧骨（TBCc），培养兔骨膜成骨细胞（POB），构建复合物TBCc-POB; 将该复合物移植到BALB／c裸小鼠背部右侧皮下，4周取材；同时将该复合物植入兔背部右侧肌袋内，8周取材。两种动物均在对侧相应部位植入单纯TBCc作为对照，并在相应时间内取组织块常规处理后光镜、电镜观察。结果：植入材料在皮下及肌袋处均有成骨 细胞大量生长、增殖，并有软骨组织、骨组织形成， 而对照组则没有。结论：将TBCc-POB材料植入体内后，成骨细胞能够存活并产生软骨组织和骨组织。     

下颌牵张成骨中髁突软骨Ⅲ型胶原的变化

目的：观察下颌牵张成骨中髁状突胶原的变化特征，探讨牵张成骨对关节软骨的影响．方法：采用SABC免疫组化方法检测犬在下颌双侧牵张成骨固定期的不同阶段(0，2，4和8wk)Ⅲ型胶原分布及含量的变化．结果：Ⅲ型胶原的表达随时问的延长逐渐增加，至4wk达到顶峰，随后逐渐减弱．结论：在下颌双侧牵张成骨中，颞下颌关节软骨发生适应性改建，软骨细胞合成及分泌胶原的能力发生改变．     

人重组骨形态发生蛋白-2和β转化生长因子在诱导成骨中的协同作用

目的:对人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和β转化生长因子(TGF-β)在诱导成骨的协同作用进行探讨. 方法:210只BALB/c小鼠随机分为3组,每组70只,试验侧均位于右后肢,设立rhBMP-2/牛松质骨载体、单纯牛松质骨载体为对照组. 分别于术后12 h～21 d共11个时间点取材,观察其诱导成骨过程. 结果:rhBMP-2/TGF-β/牛松质骨载体组在诱导间充质细胞增殖、分化,软骨细胞及新生骨形成方面均早于rhBMP-2/牛松质骨载体组,成骨量优于rhBMP-2/牛松质骨载体组,其碱性磷酸酶水平高峰较对照组提前,其组织钙含量明显高于对照组(P<0.05). 而单纯牛松质骨载体组在21 d 仅出现了少量增殖的间充质细胞. 结论:rhBMP-2和TGF-β在诱导成骨调节中存在着协同作用.     

骨形态发生蛋白-2、-3对胚胎小鼠椎间盘细胞的成软骨及成骨作用

目的探索成骨作用的骨形态发生蛋白-2（BMP-2）及抑制成骨作用的骨形态发生蛋白-3（BMP-3）对胚胎小鼠椎间盘细胞
的成软骨及成骨作用,为BMPs临床治疗椎间盘相关疾病提供实验依据。方法运用腺病毒介导的BMP-2和BMP-3在胚胎小
鼠椎间盘细胞中表达,RT-PCR检测Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅱ型胶原（ColⅡ）、蛋白多糖（ACAN）、骨钙素（OC）、骨保护素（OPG）和
骨桥蛋白（OPN）成软骨及成骨相关指标mRNA水平的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨基质的表达,碱性磷酸酶（ALP) 读数及
ALP染色检测ALP的活性。结果BMP-2和BMP-3表达对于椎间盘纤维环（AF）细胞的成软骨和成骨均没有作用。对椎间盘
髓核（NP）细胞的软骨相关指标ColⅠ、ColⅡ、ACAN mRNA的表达同样没有影响,但可促进NP细胞的成骨,其中BMP-2 和
BMP-3均可促进OC mRNA的表达升高,而仅BMP-2可促进其OPG和OPN的mRNA表达升高。甲苯胺蓝染色证明BMP-2和
BMP-3对椎间盘细胞软骨基质分泌的影响并不显著。NP细胞在BMP-2和BMP-3腺病毒感染后ALP活性明显增强,在AF细
胞中则未观察到这种变化。结论BMP-2和BMP-3均可促进胚胎小鼠NP细胞的成骨作用,但对AF细胞的成骨及成软骨作用
及对NP细胞的成软骨作用没有影响。
     

重组合异种骨移植局部白细胞介素-8 mRNA和蛋白质的表达

目的：探讨在重组合异种骨(RBX)移植局部白细胞介素—8(IL-8)mRNA和蛋白质的表达规律．方法：将重组人骨形成蛋白(rhBMP2)复合于牛松质骨中制成RBX并植入小鼠股部肌肉内，于术后4，7，14和21d取材，应用原位杂交和免疫组织化学技术检测植骨局部IL-8 mRNA及蛋白的表达与细胞定位．标准对照组动物植入单纯牛松质骨，并另设空白对照．结果：术后4，7，14和21d，实验组和标难对照组动物植骨局部均可检测到IL—8mRNA及蛋白的表达．叫主要定位于单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和成纤维细胞以及部分软骨细胞、成骨细胞和新生骨髓中部分骨髓细胞．结论：在RBX移植局部多种细胞表达IL—8，提示RBX可能通过新生骨中的多种细胞成分表达IL—8，参与异种骨移植的局部免疫反应。     

机械牵张力对小鼠成骨细胞形态及BMP-2、碱性磷酸酶和胶原表达的影响

目的: 在正畸治疗过程中,牙齿在正畸力和机械牵引力下的移动必然伴随着积极的牙槽骨改建。骨形成蛋白-2（BMP-2）,ALP（碱性磷酸酶）和COL-I（I型胶原蛋白）是骨改建过程中非常重要的细胞因子,但目前对机械牵张力与BMP-2 ,ALP和COL-I之间的关系仍不甚了解。本实验的目的是研究不同大小机械牵张力对成骨细胞形态及其BMP-2,ALP和COL-I表达的影响。 方法: 对小鼠成骨样细胞分别施加0％、6％、12％和18％形变率的机械牵张力后,用RT-PCR方法检测BMP-2,ALP和COL-I的mRNA表达。其结果经SPSS13.0统计软件进行方差分析。 结果: 加力后细胞基本呈长梭形,排列更加有序,与加载牵张力的方向相一致;各实验组比对照组的BMP-2,ALP和COL-I mRNA表达量有明显增加,差别有统计学意义（p<0.05）,其中 12％拉伸形变组的增加量最大。 结论: 一定大小的机械牵张力可以促进成骨细胞BMP-2,ALP和COL-I的表达,并引起细胞的形态和排列方式发生改变,调控骨的形成,从而影响正畸治疗中的骨改建。     

TGF-β诱导骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化

目的　通过研究转化生长因子 - β(TGF- β)对骺板软骨细胞分化的作用 ,揭示 TGF- β软骨内成骨的作用机制。方法　采用鸡胚股骨无血清培养、酶组化检测碱性磷酸酶 (AL P)、免疫组化检测 型胶原、纤维粘连蛋白 (FN)等方法 ,观察 TGF- β在不同作用时间和剂量时对骺板肥大区软骨细胞分化的作用。结果　 TGF- β可使肥大区软骨细胞表达 型胶原和 FN,使 AL P表达增加 ,并存在着量效和时效关系。结论　 TGF- β可以诱导鸡胚股骨骺板肥大区软骨细胞向成骨样细胞分化 ,与 TGF- β的作用剂量和时间密切相关。