基于全菌SELEX技术副溶血性弧菌适配体筛选及鉴定

目的筛选并鉴定可用于实验室快速检测副溶血性弧菌的适配体序列。方法利用全菌SELEX技术,通过人工合成全长86 bp、中间含40 bp随机核苷酸序列的单链DNA文库,筛选与副溶血性弧菌高效结合的适配体,对候选适配体序列进行特异性分析,并评估其二级结构和Kd值。结果第4轮筛选即出现比较明显的产物富集,继续筛选至第12轮结束。经克隆和测序后得到5条候选适配体序列(F2、F5、F6、F19、F30),它们与副溶血性弧菌的结合率分别为68.8%,68.8%,73.1%,65.2%和72.7%;特异性实验显示,5条候选适配体均能与副溶血性弧菌高效结合,与5种其它常见致病菌则结合不明显;用DNA folding form对5条候选核酸适配体序列进行二级结构模拟,结果显示,其二级结构以茎环(凸环和圆环)为主,茎环结构中的茎多由G-C配对组成;采用荧光分析法对5条候选适配体的Kd值进行分析测定,其对靶细菌的解离常数分别为15.88、15.24、9.13、4.12和25.39 nM。结论全菌SELEX技术可用于副溶血性弧菌适配体筛选,5条候选适配体与靶细菌结合力强,特异性高。     

适配子压电石英芯片再生性能研究

目的探索适配子压电石英芯片最佳再生试剂,对固定好的适配子型芯片保存性能进行检测。方法用生物素-亲和素法将针对人IgE的适配子探针固定在压电传感器的金膜表面,分别用HCl、NaOH、EDTA、尿素、甲酰胺5种试剂对适配子芯片进行再生实验,选取较好再生试剂;将固定好的适配子芯片保存在PBS缓冲液（0.1%叠氮钠）中,对芯片的保存时间进行测定。结果用EDTA对适配子芯片进行再生效果最好,重复检测5次后芯片响应信号仍在第1次检测的〉90%,此外HCl也可对适配子芯片重复利用3次;固定好的适配子芯片在加入防腐剂的结合缓冲液中可长期保存,保存21d后信号响应无明显下降。结论与抗体压电传感器相比较,适配子压电传感器有一定优势,适配子芯片成本更低,再生能力强,固定好的芯片保存时间长,体现出适配子检测的优越性。     

基于生物学原理的农药残留检测技术研究进展

综述了近年来在农药残留分析中应用的一些基于生物学原理的检测技术 ,包括免疫分析法、生物传感器、酶分析技术和活生物体分析技术等。免疫分析法特异、灵敏 ,但农药抗体的制备并非易事 ;生物传感器具有实时、快速的优点 ,但灵敏度和稳定性仍需提高 ;酶分析技术和活生物体分析技术操作简单、成本低 ,可用于急性中毒定性和污染严重的检测。上述技术的共同特点是 ,一般不需大型设备、检测快速、成本低 ,因此 ,在大规模农药残留监测和实时现场检测方面具有广泛的应用前景。     

肠道细菌Akkermansia muciniphila核酸适配体的筛选

目的筛选能高效特异结合Akkermansia muciniphlia(A.muciniphlia)的核酸适配体,为后续利用适配子进行A.muciniphlia的检测和鉴定奠定基础。方法合成83bp随机ssDNA文库,运用指数富集配体系统进化技术,筛选A.muciniphlia的核酸适配体,并对其进行序列测定、结构分析、解离常数(KD值)测定及特异性验证。结果经8轮筛选后,随机ssDNA文库的亲和力从5.23上升56.99,筛选出的适配体富集库经克隆、测序后得到16条不同的核酸序列,根据同源性分成3个家族,最终筛选到2条对A.muciniphlia有较高亲和力的高频适配体,相应的KD值分别为34.8nmol/L和12.8nmol/L(P0.05)。结论本文首次筛选出了对A.muciniphlia具有较高亲和力和特异性的适配体,有望用于A.muciniphila的鉴定和检测。     

基于全菌消减SELEX技术的体外筛选大肠埃希菌O157:H7适配体研究

目的筛选出能特异性识别大肠埃希菌O157:H7的单链DNA(ss DNA)适配体并进行鉴定。方法利用全菌消减SELEX技术,以完整菌体为靶标菌和消减菌,通过体外筛选方法筛选出大肠埃希菌O157:H7特异性ss DNA适配体。利用荧光分光光度计、激光共聚焦显微镜、克隆测序、Chromas和DNAMAN分析软件,分析适配体的一、二级结构,并对筛选得到的适配体进行特异性鉴定。结果经过7轮全菌消减SELEX筛选,荧光分光光度计检测结果鉴定第六轮文库富集达到饱和;通过测序分析、荧光分光光度计和激光共聚焦显微镜特异性检测,获得1条与大肠埃希菌O157:H7特异性结合的适配体Aptamer1。结论利用全菌消减SELEX技术成功筛选获得大肠埃希菌O157:H7特异性ss DNA适配体。     

利用F_0F_1-ATPase免疫生物传感器快速检测人肠道病毒71型的研究

目的从嗜热菌中提取载色体Chromatophore,利用F0F1-ATPase构建一种生物传感器,用于人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)的快速、简便、特异检测。方法制备F0F1-ATPaseε亚基单克隆抗体,通过亲和素-生物素系统的连接作用,以EV71抗体为检测工具,构建一种新的F0F1-ATPaseε亚基单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-生物素-EV71抗体的免疫生物传感器,通过比较其检测前后ATP催化合成量的不同,实现对EV71病毒的快速检测。同时,合成用于EV71检测的特异性引物探针,比较2种检测方法的结果。结果 RT-PCR检测灵敏度为10-7mg/ml,检测时间约3 h;生物传感器检测灵敏度为10-7mg/ml,但整个实验过程仅需30 min。结论利用F0F1-ATPase构建的免疫生物传感器可用于EV71感染的快速检测,具有一定的应用前景。     

基于金纳米聚集-核酸适配体传感光度法检测铅

目的 基于核酸适配体修饰的AuNPs与阳离子染料MG之间相互作用,以核酸适配体为识别元件,实现对Pb2+高选择性的识别;选用AuNPs及MG作为探针元件,构建快速检测Pb2+的新型核酸适配体生物比色传感器.方法 以柠檬酸三钠为热稳定剂和还原剂制备AuNPs,将核酸适配体PW17吸附在纳米金颗粒表面.当体系中存在Pb2+...     

核酸适配体在真菌毒素检测中研究进展

核酸适配体是指在体外利用指数富集的配基系统进化技术筛选得到的核酸(DNA或RNA)片段。基于核酸适配体的检测方法具有特异性高、稳定性好、易于修饰等优点,在真菌毒素检测领域得到了广泛的关注和应用。本文在传统检测方法的基础上,着重介绍核酸适配体在真菌毒素检测领域中的研究进展,并提出目前存在的问题及发展趋势。     

适配子型压电石英晶体传感器检测人免疫球蛋白E的实验研究

目的研制适配子型压电子石英晶体传感器阵列与常用的免疫分析方法进行比较,以评价压电石英晶体传感器阵列检测灵敏度、特异性与临床检测的可行性。方法以AT切型、基频10MHz的镀金石英晶体作为换能器,将抗人免疫球蛋白E适配子固定在石英晶体电极表面,用2×5检测池阵列构建新型适配子型压电石英晶体传感器;分别进行标准品及人血清免疫球蛋白E的检测,研究了检测灵敏度、特异性等检测指标。结果该传感器可快速完成检测且无非特异性反应,在检测范围内传感器的响应特性良好,压电晶体频率偏移值与免疫球蛋白浓度呈良好的线性关系;将此免疫传感器用于人血清标本的测定,结果与化学发光法符合(r值=0.9924)。结论研制的传感器阵列具有灵敏度高、特异性好,检测通量高,无需标记,操作简便,能实时在线检测等优点,可用于临床实验诊断,具有较高的临床推广应用价值。     

适配子型压电传感器的实验研究

目的建立适配子型压电传感器阵列检测人免疫球蛋白E,对适配子型压电石英传感器的各项参数进行初步探索。方法用生物素-亲和素法将针对人IgE的适配子探针固定在压电传感器的金膜表面,通过压电传感器对适配子与IgE的反应进行实时监测,观察不同浓度IgE的反应趋势及所引起的频率变化,获得IgE检测标准曲线;通过检测BSA、IgG、IgE非特异信号,并与特异性信号相比较对适配子检测的特异性进行检验。结果亲和素法固定适配子对IgE进行检测,最低检出限0.055mg/L,线性范围0.1～2.5mg/L,非特异性信号响应小,不超过同浓度特异性信号的5%。结论构建的适配子压电传感器可检测ng级物质且非特异性信号小,显示该平台在临床检测中有较好的应用前景。     

生物传感器的发展现状及其趋势

生物传感器是由分子识别和信号转换部分组成，其基本构成如图1所示。其中分子识别部分由对物质具有选择性识别功能的酶、微生物、抗原或抗体等生物相关物质组成；信号转换部分由电化学装置、热检测装置、光检测装置等组成，其作用是将生物相关物质同被测物质发生化学反应时所产生的各种变化转换成电信号。按照所采用的生物相关物质来分类，生物传感器可分为酶传感器、微生物传感器、免疫传感器、细胞传感器及组织传感器等。尽管生物传感器形式多样，但都是利用固化技术将能够识别被测物质的生物材料固化，制成生物机能性膜作为其检测的关键…     

肽核酸探针在生物传感器检测中的研究进展

利用生物传感器进行病原微生物的快速检测是近年发展起来的新型检测技术，生物传感器是生物活性材料（如酶、蛋白质、DNA、抗原、抗体、生物膜等）与物理化学换能器有机结合的一中新型检测装置，其原理是利用生物识别和生物学反应，产生的信息被物理或化学换能器转变成可定量和可处理的电信号，且信号的强度与靶标物的浓度成正比比例。     

核酸适配子的研究进展与应用展望

核酸适配子是采用指数富集配体的系统进化(SELEX)技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。核酸适配体由于具有精确识别、易体外合成与修饰等特点,它已在基础研究、临床诊断与治疗以及新药研发等诸多领域展示了广阔的应用前景。鉴于其特有的性质,它们将在环境毒理研究及相关领域,如环境毒素的快速检测、生物体内毒性评价、毒性阻断研究上有着广阔的应用前景。     

核酸适配子在肿瘤诊断和治疗中的应用

核酸适配子是采用SELEX技术从随机寡核苷酸库中筛选出的、能与靶物质高特异性结合的单链寡核苷酸，可用于靶物质的测定或抑制靶物质的生物学功能。本文结合文献，综述核酸适配子在肿瘤诊断与治疗中的应用价值。     

适配体光子晶体传感材料的制备及初步应用

目的制备高度有序稳定的反蛋白石光子晶体材料,并将其应用于黄曲霉毒素B1的快速检测。方法以聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)微球为模板,基于溶液中胶体/模板共组装法制备SiO_2反蛋白石光子晶体材料。以黄曲霉毒素B1(AFB1)为靶标,以适配体作为识别元件,制备适配体光子晶体传感材料,采用间接竞争法,建立黄曲霉毒素B1的快速检测方法。结果该方法可控合成大面积高度有序的三维结构材料,并进一步制备了适配体光子晶体传感材料,初步实现了黄曲霉毒素B1的快速检测,最低检测限达10~(-3)ng/ml。结论该方法可防止硅溶胶过度覆盖和非均匀渗透,减少了随机缺陷,简化了制备步骤。此外,还可修饰某些官能团制备成传感检测材料,如修饰氨基后,可通过戊二醛连接适配体、蛋白、抗体以及受体等,极大地拓展了光子晶体的应用领域。     

金属有机框架材料构建生物传感检测外泌体研究进展

<正>外泌体是由网织红细胞、白细胞、神经元、上皮细胞和肿瘤细胞产生的小型胞外囊泡^[1]，包括脂质、蛋白质和核酸，与癌症的进展和转移有关^[2]，外泌体的检测对早期肿瘤筛查意义重大。传统的外泌体检测方法包括免疫印迹、酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、流式细胞仪和液相色谱-质谱联用(liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS)等技术^[3]。近年来生物传感检测由于其有灵敏度高、操作简单、成本低、可用于大批量人群筛查等优点^[4]受到关注。生物传感器通过生物受体与目标物的特异性结合，将生物信号转化为可以测量的电信号或光信号^[5]。金属有机骨架材料(metalorganic frameworks,MOF)具有高孔隙率、比表面积大等独特的结构特征和优异的光电性能，在传感器和生物医学等领域应用广泛^[6]。但其导电性差、选择性低、在水溶液中不稳定，因此通过与...     

生物传感器在体育科学中的应用

生物传感器是一种新型的分析检测工具，它以其敏感性、准确性、易操作性、能在线在体进行监测等特点可应用于各行各业。生物传感器在体育科学中有着其广阔的市场，能应用于运动训练的适时监控，也将成为体育教育和体育科研的重要方法和技术。     

新进步

<正>便携式微芯片可快速有效诊断1型糖尿病美国研究者通过在微芯片上使用纳米技术,已开发了一种价廉、快捷的便携式1型糖尿病检测技术,而且,这种技术能够达到实验室检测标准。来自斯坦福大学医学院的Brian Feldman教授是这种微芯片检测技术的发明人之一,他表示,这种新的便携式微芯片检测技术不仅对1型糖尿病诊断具有高度敏感性和特异性,而且还可用于发现1型糖尿病未知生物标志物。目前临床上主要使用放射免疫分析法诊断1型糖尿病,这种方法使用放射性材料来检测自身抗体,需要花费数天时间,此外费用也比较昂贵。相比之下,这种新型的微芯片检测技术没有放射     

核酸适配子及其在阿尔茨海默病研究中的应用

核酸适配子是一类寡核苷酸分子,它可由指数级富集配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX)技术筛选寡核苷酸文库而获得。适配子通过与靶分子特异结合,可起到识别或抑制靶分子生物学活性的作用。近年来,越来越多的适配子不断被应用于阿尔茨海默病等中枢神经系统疾病的研究。本文将对近年来核酸适配子在阿尔茨海默病诊断和治疗的研究进展作一综述。     

基于多壁碳纳米管和纳米金修饰的MPO丝网印刷免疫传感器的研究

目的:通过两种纳米材料技术对丝网印刷电极(SPE)的层层修饰和优化,将髓过氧化物酶抗体固载到电极表面,从而研制一种新型快速检测MPO的生物传感器电极纸片。方法:在丝网印刷电极上层层修饰上多壁碳纳米管(MWNTs)与纳米金(Nano-Au),利用纳米金固载髓过氧化物酶抗体(anti-MPO),最后用BSA封闭纳米金上非特异位点,构建了一种用于MPO检测的新型电流型免疫传感器。采用循环伏安法(CV)对修饰过程进行表征。探讨了ph、孵育温度和孵育时间对该免疫传感器性能的影响。结果:新型双纳米传感器在最适条件下对MPO响应良好,其线性为0～80ng/ml,线性相关系数为0.99753,检出限为0.12ng/ml。结论:该方法制备的电流型免疫传感器具有稳定性好、灵敏度高、特异性好、结果准确可靠和可再生等优点,可以用于临床检测的应用。