TNNT3突变转基因小鼠筛选及肌钙蛋白表达的研究

目的:研究TNNT3(R69H)突变转基因小鼠快反应骨骼肌肌钙蛋白表达和组织结构的变化。方法:将杂合TNNT3(R69H)突变转基因小鼠与野生型C57BL/6J小鼠杂交,选同窝阳性杂合后代鼠进行交配,再用野生型C57BL/6J小鼠对后代进行检测,得到TNNT3(R69H)突变转基因纯合个体。取野生型C57BL/6J小鼠、杂合转基因小鼠、纯合转基因小鼠的快反应骨骼肌进行RT-PCR和WESTERN实验并制备透射电镜切片。结果:RT-PCR和WESTERN电泳条带从亮到暗依次为纯合转基因小鼠、杂合转基因小鼠、野生型C57BL/6J小鼠。电镜结果显示转基因小鼠快反应骨骼肌明暗带不清、出现肌纤维间水肿和线粒体空泡等现象。结论:TNNT3(R69H)突变纯合转基因小鼠快反应骨骼肌中TNNT3的mRNA和蛋白质量高于杂合转基因小鼠、杂合转基因小鼠高于野生型C57BL/6J小鼠,并且转基因的表达使快反应骨骼肌结构异常。     

敲除SLC39A5基因对4-NQO诱发C57BL/6小鼠食管癌模型建立的影响

目的 探索敲除SLC39A5基因对4-NQO诱导的C57BL/6小鼠食管癌模型的影响。方法 选取10只C57BL/6野生型小鼠作为阴性对照组,饮用浓度为100 μg/ml的丙二醇空白溶液;选取140只野生型小鼠与80只SLC39A5基因敲除小鼠,采用饮水法摄入诱癌剂,即浓度为100 μg/ml的4-NQO（4-nitroquinoline 1-oxide）,实验时间为28周,实验结束后处死三组小鼠。结果 阴性对照组小鼠、野生型小鼠和SLC39A5基因敲除小鼠在实验结束时其存活率分别为100%、92.96%、91.25%;三组小鼠食管癌诱癌成功率分别为0、61.36%、28.77%,两实验组小鼠诱癌成功率差异有统计学意义（χ²=19.98, P<0.001）。结论 成功建立了C57BL/6小鼠及SLC39A5基因敲除小鼠的食管癌模型,同时验证了SLC39A5基因在食管癌发生发展中的促进作用。     

C57BL/6小鼠微小残留白血病模型的建立

目的 探讨构建C57BL/6小鼠FBL-3微小残留白血病(MRL)模型的方法.方法 将5×106个FBL-3红白血病细胞经尾静脉接种至C57 BL/6小鼠,接种后第3天经尾静脉注射不同剂量环磷酰胺(CTX),观察小鼠生存时间与药物剂量间的关系;根据白血病小鼠生存时间与CTX剂量和与接种FBL-3细胞数量的关系,确定构建小鼠MRL模型所需的化疗药物剂量.结果 C57BL/6白血病小鼠对CTX敏感,随CTX剂量增加白血病小鼠的生存时间逐渐延长,药物剂量与生存时间有较好的回归关系.移植生物试验显示,接种500个FBL-3细胞的小鼠生存时间与接受100 mg·kg-1 CTX化疗白血病小鼠相当.结论每只C57BL/6小鼠经尾静脉接种5×106个FBL-3细胞3d后给予100 mg·kg-1 CTX化疗可以建立MRL动物模型.     

移植性C57BL/6小鼠FBL-3红白血病模型的建立及其生物学特性

目的探讨利用国内传代培养的FBL-3细胞建立H-2相合C57BL/6小鼠FBL-3红白血病模型的可行性,并观察模型的生物学特性。方法把FBL-3小鼠红白血病细胞经尾静脉接种C57BL/6小鼠,观察小鼠的生存时间和染色体变化,并对濒死小鼠的肝、脾、肺和肾进行病理检查,部分进行电镜检查。结果静脉接种1&#215;10^3-1&#215;10^7个白血病细胞,C57BL/6小鼠发病率分别为100%;接种细胞的数量与存活时间呈线性关系;白血病细胞主要侵及肝、脾、骨髓、肺和肾组织,糖原染色阳性、氯醋酸染色部分阳性,过氧化物酶、碱性磷酸酶、丁酸染色均阴性。电镜下观察到细胞内病毒样颗粒。脾脏和骨髓细胞染色体多数为非二倍体,只表达H-2b。结论经尾静脉接种FBL-3细胞可建立C57BL/6小鼠红白血病模型。     

两种肺纤维化模型小鼠肺组织胶原含量定量分析方法的比较研究

目的利用两种肺纤维化小鼠模型,对肺组织中胶原表达定量分析的两种方法——天狼猩红染色图像分析和羟脯氨酸测定法进行比较。方法采用20Gy^60Coγ射线胸部局部照射C57BL／6J和C3H／HeN两种小鼠分别建立敏感性／抗性肺纤维化模型,照射后3m活杀取肺组织,左肺连续切片,根据均匀系统随机抽样的原则,在连续切片中均匀随机抽取一组切片,进行天狼猩红染色及图像分析;右肺采用碱水解法进行羟脯氨酸含量测定。结果两种分析方法结果均表明,γ射线照射后3mC57BL／6J小鼠肺组织胶原含量较照射前明显增高,且显著高于C3H／HeN小鼠肺组织中胶原含量。天狼猩红染色图像分析法显示,C57BL／6J小鼠肺组织胶原面密度为C3H／HeN小鼠的2．29倍,而羟脯氨酸测定法显示,C57BL／6J小鼠肺组织羟脯氨酸含量为C3H／HeN小鼠的1．34倍。结论天狼猩红染色图像分析法较羟脯氨酸含量测定法能较理想地反映肺泡壁胶原含量的变化,且能更客观反映敏感性／抗性肺纤维化小鼠胶原表达的差异。     

基因枪在基因治疗中应用的初步研究

为研究基因枪对体外培养的哺乳动物肿瘤细胞系和经小鼠皮肤转移基因效率及转基因的表达量和表达时间,探讨作为一种新的基因转移工具,基因枪在基因治疗中应用的可能性.其方法:①用Helios基因枪分别对体外培养的4种人肿瘤细胞系:肺腺癌GLC-82、结肠癌HCF、膀胱癌EJ、肝癌QSG-7701和1种小鼠黑色素瘤细胞系B16,转携带报告基因Lac-Z的质粒pAdEldCMV-LacZ和携带报告基因ECFP(绿色荧光蛋白突变体)的质粒pEGFPC1,分别用x-gal染色法(Lac-Z)和直接荧光显微镜观察法检测基因转导效率和报告基因的表达.②用Helios基因枪直接对C57BL/6小鼠腹部皮肤转pAdE1dCMV-LacZ,3d后,断颈法处死小鼠,取转基因部位皮肤做冰冻切片,x-gal染色观察转基因的表达深度和表达量.③用Helios基因枪直接对C57BL /6小鼠腹部皮肤转携带鼠GM-CSF基因的质粒pWRG3142,转基因后6h,1,2,3,4,     

小鼠放射性肺纤维化模型的建立与检测北大核心CSCD

目的构建C57BL/6小鼠放射性肺纤维化动物模型,并从功能学、影像学及病理学等方面检测鉴定及分析。方法C57BL/6雄性小鼠30只随机分为对照组、16 Gy照射组、20 Gy照射组。照射组小鼠接受单次16 Gy或20 Gy胸部X线照射,于照射后3个月及6个月行功能学、影像学与病理学检测。结果在照射后6个月时,小鼠胸背部被毛变白脱落,气道阻力显著增加,影像学检查显示肺内广泛的斑片影、实变影,三维重建提示小鼠肺扭曲形变、体积显著缩小,病理学证实出现了广泛的肺纤维化。结论照射小鼠胸部6个月后出现显著肺纤维化,成功构建C57BL/6小鼠放射性肺纤维化动物模型。     

小鼠放射性肺纤维化模型的建立与检测

目的构建C57BL/6小鼠放射性肺纤维化动物模型, 并从功能学、影像学及病理学等方面检测鉴定及分析。方法 C57BL/6雄性小鼠30只随机分为对照组、16 Gy照射组、20 Gy照射组。照射组小鼠接受单次16 Gy或20 Gy胸部X线照射, 于照射后3个月及6个月行功能学、影像学与病理学检测。结果在照射后6个月时, 小鼠胸背部被毛变白脱落, 气道阻力显著增加, 影像学检查显示肺内广泛的斑片影、实变影, 三维重建提示小鼠肺扭曲形变、体积显著缩小, 病理学证实出现了广泛的肺纤维化。结论照射小鼠胸部6个月后出现显著肺纤维化, 成功构建C57BL/6小鼠放射性肺纤维化动物模型。     

利用组织芯片技术研究C57BL/6J和C3H/HeN小鼠放射性肺损伤进程差异及其机制

目的建立C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠放射性肺损伤进程相关组织芯片,并应用其研究FN、LN和a-SMA的表达变化及意义。方法采用20Gy60Coγ射线照射C57BL/6J和C3H/HeN两种小鼠复制动物模型,测定肺组织中羟脯氨酸含量,制备组织芯片,应用免疫组织化学(im-munohistochemistry,IHC)染色方法与图像分析技术定量检测纤连蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和a-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,a-SMA)在放射性肺损伤进程中的表达变化。结果组织芯片制备成功,其HE和免疫组织化学染色结果与普通切片具有良好一致性。照射后1~6mC57BL/6J小鼠肺组织病变经历炎症期、增生期和纤维化期,胶原沉积增多,照后1~3mFN表达明显高于正常对照组,照后6m逐渐减少至正常,LN表达在照射后呈渐进性增加,a-SMA表达强于C3H/HeN小鼠;照射后1~6mC3H/HeN小鼠肺组织主要表现为间质性炎症改变,FN表达于照射后1~6m与正常对照组相比无明显变化,LN表达于照射后1~3m明显增强,6m逐渐减少。结论γ射线照...     

小鼠放射性肺纤维化模型的建立与检测

目的 构建C57BL/6小鼠放射性肺纤维化动物模型,并从功能学、影像学及病理学等方面检测鉴定及分析。方法 C57BL/6雄性小鼠30只随机分为对照组、16 Gy照射组、20 Gy照射组。照射组小鼠接受单次16 Gy或20 Gy胸部X线照射,于照射后3个月及6个月行功能学、影像学与病理学检测。结果 在照射后6个月时,小鼠胸背部被毛变白脱落,气道阻力显著增加,影像学检查显示肺内广泛的斑片影、实变影,三维重建提示小鼠肺扭曲形变、体积显著缩小,病理学证实出现了广泛的肺纤维化。结论 照射小鼠胸部6个月后出现显著肺纤维化,成功构建C57BL/6小鼠放射性肺纤维化动物模型。     

自体致敏的T淋巴细胞增强3LL肿瘤的生长

将C 57 BL/6小鼠脾细胞悬液体外培养在同系的成纤维细胞上,4天后,回收脾细胞,作为经自体抗原致敏的淋巴细胞。淋巴细胞以50:1的比例和5×10~4 3 LL瘤细胞(系C 57 BL/6小鼠自发的肺癌细胞株)一起接种于免疫机构完整的和免疫受损的(胸腺切除后一周,~(60)钴一次全身照射750R)同系小鼠。对照组只接种3LL瘤细胞。结果实验组的两种小鼠的肿瘤生长都比对照组显著增强。既然免疫系统完全损坏的小鼠也出现肿瘤生长的增强,那么,这种增强显然不需要宿主自身的淋巴细胞参与。     

β-胡萝卜素增强小鼠对同基因肿瘤的免疫应答

给接种 B_(16)黑色素瘤的 C57BL/6小鼠行β-胡萝卜素灌胃,每日10mg/kg。20天后,取小鼠脾细胞和B_1~6黑色素瘤细胞混合注入健康 C57BL/6小鼠皮下,观察肿瘤生长情况并检测脾细胞增殖活性和腹腔巨噬细胞的细胞毒活性。实验组和对照组小鼠肿瘤大小无显著性差异,但实验组肺部瘤转移灶数明显低于对照组;实验组脾细胞增殖活性和巨噬细胞细胞毒活性明显高于对照组。提示β-胡萝卜素可增强小鼠的抗肿瘤免疫功能。     

C57BL／6J小鼠海马神经元数目及体积的无偏估计

目的观察4月龄C57BL／6J小鼠海马CA1区、CA3区锥体细胞层及齿状回颗粒细胞层细胞数目及体积。方法雄性4月龄C57BL／6J小鼠12只。应用Optical Disector方法观察海马CA1区、CA3区锥体细胞层及齿状回颗粒细胞层细胞数目;Nucleator方法观察细胞平均体积;应用Cava-lieri方法计算CA1区、CA3区锥体细胞层及齿状回颗粒细胞层体积。结果4月龄雄性C57／6J小鼠海马CA1区锥体层体积为（577．6±45．15）×10^6μm^3;锥体细胞数目为（179．0±9．64）×10^3;锥体细胞平均体积为（（1344．4±175．69）μm^3。海马CA3区锥体层体积为（471．1±29．01）×10^6μm^3;锥体细胞数目为（139．8±5．91）×10^3;锥体细胞平均体积为（1458．5±138．94）μm^3;海马DG区颗粒细胞层体积为（467．4±18．74）×10^6μm^3;颗粒细胞数目为（316．5±14．4）×10^3;颗粒细胞平均体积为（449．0±36．43）μm^3。结论本实验应用体视学技术及国际先进的体视学系统对C57BL／6J小鼠海马神经元数目与体积进行了无偏估计,为相关研究提供参考与借鉴。     

组胺联合LAK/IL-2疗法治疗转移性黑色素瘤

目的： 研究组胺对C57BL/6小鼠脾源性LAK细胞体内杀伤活性的调控作用及可能的机理。方法： 以B16恶性黑色素瘤肺转移的C57BL/6小鼠作为治疗对象,比较LAK/IL-2/组胺疗法与LAK/IL-2疗法导致的近期疗效和远期疗效之间的差异。结果: 组胺可明显增强LAK/IL-2疗法的体内抗肿瘤转移活性,产生明显的肿瘤消退,近期疗效优于LAK/IL-2疗法;组胺与单纯LAK/IL-2治疗相比,LAK/IL-2/组胺疗法显著提高了荷B16恶性黑色素瘤小鼠的生存时间和生存率,具有较好的远期疗效; 组胺的这一协同效应可被H2受体拮抗剂雷尼替丁完全阻断,H2受体激动剂dimaprit则可模拟这一效应。结论: 用组胺和LAK/IL-2联合应用在C57BL/6小鼠体内具有较强的协同效应,对B16恶性黑色素瘤细胞的杀伤效果明显优于传统的LAK/IL-2疗法;组胺的这一效应是通过体内单核巨噬细胞上的组胺H2受体介导的。     

东亚钳蝎毒素ITX对C57BL/6小鼠Lewis肺癌组织生长的影响

目的 观察东亚钳蝎毒素ITX对C57BL/6小鼠Lewis肺癌(LLC)组织生长的影响.方法 32只C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照rIL-2组和ITX组.将LLC细胞接种至模型组、阳性对照rIL-2组和ITX组C57BL/6小鼠的有前腋下.各组按不同的处理因素连续干预16 d.实验期间观察各组小鼠的一般状态,监测瘤重和瘤体积的变化.末次给药24 h后处死小鼠,剥取肿瘤,摘取双肺叶,在光学显微镜下观察肿瘤和肺脏的炎性细胞浸润情况.结果 与模型组相比,ITX组和rIL-2组小鼠的生存质量有一定程度的下降,但差异无统计学意义(P>0.05);各组肿瘤体积比较差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤问质和肺泡间隔的炎细胞数增多(P<0.05).随着时间延长,模型组、ITX组和rIL-2组肿瘤体积均有明显增长(P<0.05).结论 ITX能够通过加强肿瘤微环境中以炎症为代表的非特异免疫促进C57BL/6小鼠LLC的生长.     

腹腔注射分泌GM-CSF的重组痘苗病毒的抗肿瘤肺转移作用及其免疫机理初步研究

通过同源重组，用小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因代替野生型痘苗病毒胸苷激酶(TK)基因，得到可稳定表达GM-CSF的重组痘苗病毒。我们用此痘苗毒(VVGM-CSF)治疗肺转移荷瘤小鼠模型。给C57BL／6小鼠尾静脉注射2X10^5B16细胞3天后开始注射腹腔内VVGM-CSF10^6／0．1ml，每两次，     

羟基红花黄色素A对小鼠Lewis肺癌移植瘤的抑制作用

目的 研究羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤的血管抑制作用.方法 C57BL/6近交系小鼠30只,造模后,分为5组,每组6只,分别使用生理盐水、环磷酰胺(CTX)及HSYA(分低、中、高3个剂量)作用于动物模型.观察各组肿瘤体积大小,分析小鼠生长曲线,并在造模第22天处死所有小鼠,无菌条件下剥取瘤组织进行HE染色,观察不同浓度HSYA在不同视野下对肿瘤血管的抑制情况.结果 HSYA中、小剂量组对小鼠移植瘤血管生成有一定抑制作用.结论 中药羟基红花黄色素A(HSYA)对Lewis肺癌小鼠移植瘤血管生成有一定的抑制作用.     

木鳖子提取物对羟基桂皮醛对小鼠黑色素瘤移植瘤生长和转移的影响及其作用机制

目的:体内外实验探讨木鳖子单体化合物对羟基桂皮醛[Momordica cochinchinensis(Lour.)Spreng.p-hydroxycinnamaldehyde,CMSP]对小鼠黑色素瘤移植瘤生长和转移的影响及其作用机制.方法:建立荷瘤小鼠动物模型,并将18只C57BL/6小鼠随机分成3组(每组6只):对...     

TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽粘膜上皮细胞增殖与p16 c-jun基因表达的关系

目的:研究TgN(p53mt-LMP1)/HT转基因小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖与p16、c-jun基因表达的关系.方法:TgN(p53mt-LMPI)/HT小鼠和野生型C57BL/6J小鼠分别分为诱癌组和对照组,即TgN(p53mt-LMP1)/HT诱癌组(TI)、TgN(p53mt-LMP1)/HT对照组(TC)、C57BL/6J诱癌组(CI)和C57BL/06J对照组(CC)4组,H-E染色法观察各组小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖特征,比较癌前病变率;免疫组织化学染色法检测各组小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织中p16、c-jun基因的表达水平.结果:TI组小鼠鼻腔或鼻咽黏膜上皮细胞非典型性增生明显,TI、TC、CI和CC组小鼠鼻腔和/或鼻咽黏膜上皮癌前病变卒分别为90%、10%、0和0.与TC、CI和CC组相比,TI组鼻腔和鼻咽上皮细胞p16基因表达水平显著降低(P＜0.01)和c-jun基因表达水平显著增高(P8＜0.01);与CC组相比,TC组两基因的表达也具有同样的变化趋势(P＜0.01).结论:TgN(p53mt-LMPI)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖活性增加,二亚硝基哌嗪可提高TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞的增殖活性,而细胞增殖活性增加与p16基因表达水平下调和c-jun基因表达水平上调密切相关.     

MHC半相合脾加骨髓细胞诱发H22荷瘤鼠的抗肿瘤效应

目的：观察MHC半相合脾加骨髓细胞移植抗小鼠H22实体瘤的效果。方法：以皮下接种H22肝癌细胞的BALB/c×C57BL/6杂交F1代雌性小鼠为受鼠,以健康雌性F1、雄性C57BL/6、雄性C3H小鼠为MHC全相合、半相合、不相合供鼠,观察移植后的抑瘤情况；观察供鼠细胞经~(60)Co照射的MHC半相合移植对WBC、生化和嵌合体的影响；比较供鼠细胞经与不经~(60)Co照射的MHC半相合移植的GVHD情况。结果：供鼠细胞经/不经~(60)Co照射的MHC半相合移植小鼠的肿瘤明显较小,与单纯化疗未进行移植者比较,差异具有统计学意义(P＜0．05)；但受鼠未经化疗预处理的MHC半相合细胞输注没有出现抗肿瘤效应；供鼠细胞经7．5 Gy ~(60)Co照射的MHC半相合移植能明显降低GVHD反应,且对外周血白细胞、生化无不良影响。结论：经7．5 Gy~(60)Co照射的MHC半相合脾加骨髓细胞移植能对H22肝癌细胞产生移植物抗肿瘤效应并降低GVHD反应。