银杏叶提取物对黄曲霉毒素B1所致大鼠肝癌相关蛋白表达影响的研究

目的:探讨银杏叶提取物(extract761 from Ginkgo giloba,EGb761)对黄曲霉毒素B1(aflatox B1,AFB1)致大鼠肝癌后相关蛋白表达的影响。方法:71只大鼠随机分为AFB1组(28只),AFB1+EGb761组(29只),空白对照组(14只)。第64周观察大鼠肝癌发生率,应用免疫组化法检测硫酸乙酰肝素类蛋白聚糖(MXR7)、环氧化酶(COX-2)以及细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制蛋白(p16)的表达情况。结果:AFB1组肝癌发生率明显高于AFB1+EGb761组(76%vs28%),χ2=10.602,P<0.05,对照组无肿瘤发生。AFB1+EGb761组MXR7蛋白含量明显低于AFB1组〔(1.488±1.178)vs(5.133±2.725)〕,F=18.638,P<0.001;AFB1+EGb761组p16蛋白含量明显高于AFB1组〔(2.456±1.014)vs(1.533±0.856)〕,F=24.091,P=0.03,AFB1组COX-2蛋白含量为3.305±0.566;AFB1+EGb761组为2.704±0.431,F=9.352,P=0.783。结论...     

银杏叶提取物对AFB1所致大鼠肝癌基因P16Ink4a mRNA及蛋白表达的影响

  目的  动态观察银杏叶提取物(ginkgo biloba extract, EGb761)在抑制黄曲霉毒素B1(AFB1)诱发大鼠肝癌过程中对肝组织相关基因P161nk4a mRNA表达水平的影响, 进一步从分子生物学水平揭示银杏叶提取物抗癌的机制及其效果。  方法  将70只4周龄Wistar雄性大鼠随机分为3组: AFB1组(25只), AFB1+EGb761组(25只)及对照组(20只)。在诱发肝癌过程中, 分别于第13、33及53周对大鼠进行肝组织活检; 至第73周处死全部动物取肝组织。应用实时荧光定量PCR和Westernblot技术动态检测肝组织中P16Ink4a mRNA及相应蛋白的表达情况。  结果  AFB1组原发性肝癌发生率为58.8%(10/17);AFB1+EGb761组为29.4%(5/17);对照组为0(0/16) AFB1+EGb761组肝癌发生率显著低于AFB1组(P < 0.05)。AFB1+EGb761组的肝组织P16Ink4amRNA及相应蛋白表达水平在第53周及第73周时均明显高于AFB1组, 差异有统计学意义(P < 0.05)。  结论  银杏叶提取物(EGb761)具有抑制AFB1致大鼠肝癌的作用。其机制可能与调控肝细胞抑癌基因P16Ink4a mRNA表达水平有关。      

银杏叶对黄曲霉毒素B1诱发大鼠肝癌IGF-ⅡmRNA及蛋白表达影响的观察

目的：动态观察银杏叶提取物（EGb761）在抑制黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发大鼠肝癌（HCO）过程中对肝组织相关基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平的影响,从分子生物学水平揭示银杏叶抗癌的机制及其效果。方法：将70只4周龄Wistar雄性大鼠随机分为AFB1组（25只）、AFB1＋EGb761组（25只）及对照组（20只）。在诱发大鼠HCC过程中,分别于第13周、33周及53周对大鼠进行肝组织活检;实验至第73周处死全部动物取肝组织。利用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法动态检测肝组织中IGF-ⅡmRNA及相应蛋白的表达情况。结果：AFB1组原发性HCC发生率为58．8％（10／17）;AFB1＋EGb761组发生率为29．4％（5／17）;对照组为0（o／16）。AFBl＋EGb761组HCC发生率显著低于AFB1组（P〈0．05）。AFBl＋EGb761组肝组织IGF_2mRNA及相应蛋白表达扮平在第53周及73周较AFB1组均显著下降,差异有统计学意义,P％0．05。结论：银杏叶提取物（EGb761）具有抑制AFBl致大鼠HCC的作用。其机制可能与调控肝细胞增殖基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平有关。     

银杏叶对黄曲霉毒素B1诱发大鼠肝癌IGF-Ⅱ mRNA及蛋白表达影响的观察

目的:动态观察银杏叶提取物(EGb761)在抑制黄曲霉毒素B1 (AFB1)诱发大鼠肝癌(HCC)过程中对肝组织相关基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平的影响,从分子生物学水平揭示银杏叶抗癌的机制及其效果.方法:将70只4周龄Wistar雄性大鼠随机分为AFB1组(25只)、AFB1+ EGb761组(25只)及对照组(20只).在诱发大鼠HCC过程中,分别于第13周、33周及53周对大鼠进行肝组织活检；实验至第73用处死全部动物取肝组织.利用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法动态检测肝组织中IGF-ⅡmRNA及相应蛋白的表达情况.结果:AFB1组原发性HCC发生率为58.8％(10/17)；AFB1+EGb761组发生率为29.4％(5/17)；对照组为0(0/16).AFB1+EGb761组HCC发生率显著低于AFB1组(P＜0.05).AFB1+ EGb761组肝组织IGF-2 mRNA及相应蛋白表达水平在第53周及73周较AFB1组均显著下降,差异有统计学意义,P＜o.05.结论:银杏叶提取物(EGb761)具有抑制AFB1致大鼠HCC的作用.其机制可能与调控肝细胞增殖基因IGF-ⅡmRNA及蛋白表达水平有关.     

银杏叶提取物对黄曲霉毒素B_1诱发大鼠肝癌过程中生物标志物的影响

目的:探讨银杏叶提取物(extract 761 from Ginkgo biloba,EGb761)对黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)在大鼠体内代谢的影响.方法:经AFB_1和EGb761不同处理,获得AFB_1组、AFB_1+EGb761组和空白对照组3组大鼠,分别于实验第14、28及42周给予抽血及肝活检,并于第64周全部处死.观察大鼠肝癌发生率,用分光光度法检测肝组织Ⅰ相酶CYP450和Ⅱ相酶GST活性,用高效液相色谱法检测血清AFB_1-赖氨酸加合物水平,以及应用免疫组织化学法检测8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)蛋白表达情况.结果:肝癌诱发率在AFB_1+EGb761组明显低于AFB_1组(P<0.001),而对照组无肿瘤发生;EGb761对Ⅰ相代谢酶CYP450及Ⅱ相代谢酶GST活性无明显影响.血清AFB_1-赖氨酸加合物的最高水平(4 356.01 pg/mg albumin)发生于实验第14周的AFB_1组.在实验第14、42周时EGB761显著抑制了血清AFB_1-赖氨酸加合物的形成,抑制率分别为13.07% (P＝0.033)、73.63% (P＝0.002).在各检测点的8-OHdG蛋白表达强度显示,AFB_1+Egb 761组均显著低于AFB_1组(P<0.05).结论:EGb761阻断AFB_1致肝癌发生的主要机制可能不完全是通过影响肝脏Ⅰ、Ⅱ相代谢酶活性的途径实现的.EGb761能够抑制AFB_1-赖氨酸加合物的形成,降低8-OHdG蛋白的表达,减轻DNA的氧化损伤,这可能是其最终抑制或延缓AFB_1诱发肝癌发生、发展的机制之一.     

柑皮油对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌前病变的抑制

用二乙基亚硝胺致大鼠肝癌前病变实验模型，研究从鲜柑皮提取的挥发性柑皮油对致癌作用的影响。于大鼠接受ＤＥＮ前１０天起，饲以含５％柑皮油饲料。经两次重复实验，结果显示：肝癌前病变Ｇａｍｍａ－谷氨酰转肽酶阳性肝细胞增生灶的发生类，用柑皮细胞明显少于于单给ＤＮＥ。     

银杏叶提取物致突变性研究

银杏叶乙醇提取物为棕黄色粉末，内含槲皮素１０．３１％，山奈素１０．５０％和异鼠李素３．１９％。银杏叶提取物剂量达７．５ｇ／ｋｇ，小鼠微核试验结果阴性。平板渗入法Ａｍｅｓ试验，剂量在１４．９－１８６２．５ｇ／皿时，ＴＡ９８和ＴＡ９７ａ的回变菌落不论加Ｓ９与否，均有依剂量的增加，加Ｓ９者更甚，且有一个或二个剂量的诱发回谱菌落数超过对照值的两倍，提示ＥＧＢＬ含有移码突变的致突变物，主要是槲皮素的山奈素。     

碳酸锂对化学诱导大鼠肝癌的保护作用

目的采用黄曲霉毒素B1（AFB1）诱导的大鼠肝癌模型，以肝组织形态学变化，胎盘型谷胱甘肽硫转移酶（GST-P）及增殖细胞核抗原（PCNA）为观察指标，探讨碳酸锂（Li2CO3）对化学诱导肝癌的保护作用。方法Wistar大鼠144只，随机分为A、B、C、D四组（A组：阴性对照组；B组：阳性对照组；C组：Li2CO3同时给药组；D组：Li2CO3先期给药组），于实验第6、9、10周分批断头处死动物，取动物肝脏进行肝组织学检查，GST-P及PCNA的免疫组化染色。结果C、D两组动物健康状况明显改善，肝癌前期病变程度明显减轻，肝癌标志酶GST-P表达减弱（P〈0．01），PCNA阳性率显著降低；D组动物一般状况明显好于C组，GST-P阳性灶及PCNA阳性率的下降趋势优于C组。结论Li2CO3对化学诱导肝癌有抑制和预防作用。     

胸腺肽α1对大鼠肝癌前病变及癌变的预防作用

机体的免疫状态与肿瘤的发生、发展密切相关 ,免疫监视功能低下和细胞因子网络及其受体间调节失控在肿瘤发病学中的作用日益受到重视。日达仙即胸腺肽α1(Ｔα1)是一种生物反应调节剂 (ＢＲＭ) ,已被用于联合肝动脉化学栓塞 (ＴＡＣＥ)治疗晚期肝癌。本实验以苦参素作对照 ,观察日达仙对二乙基亚硝胺 (ＤＥＮ)诱发大鼠肝癌前病变及癌变期病理改变及其对细胞免疫功能的影响。1　材料与方法1.1　材料ＤＥＮ购自Ｆｌｕｃａ公司 ;ＴＮＦ α和ＩＬ 6放免试剂盒购于北京东亚免疫研究所 ;ＣＤ4 ,ＣＤ8 荧光标记单克隆抗体购自美国ＳａｎｔａＣｒ…     

胸腺肽α_1对大鼠肝癌前病变及癌变的预防作用

机体的免疫状态与肿瘤的发生、发展密切相关 ,免疫监视功能低下和细胞因子网络及其受体间调节失控在肿瘤发病学中的作用日益受到重视。日达仙即胸腺肽α1(Ｔα1)是一种生物反应调节剂 (ＢＲＭ) ,已被用于联合肝动脉化学栓塞 (ＴＡＣＥ)治疗晚期肝癌。本实验以苦参素作对照 ,观察日达仙对二乙基亚硝胺 (ＤＥＮ)诱发大鼠肝癌前病变及癌变期病理改变及其对细胞免疫功能的影响。1　材料与方法1.1　材料ＤＥＮ购自Ｆｌｕｃａ公司 ;ＴＮＦ α和ＩＬ 6放免试剂盒购于北京东亚免疫研究所 ;ＣＤ4 ,ＣＤ8 荧光标记单克隆抗体购自美国ＳａｎｔａＣｒ…     

单剂量黄曲霉毒素B1致大鼠肝癌作用的短期实验模型

本文报告单剂量黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）致大鼠肝癌作用短期实验模型的研究。６周龄、雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，经腹腔一次性注射不同剂量（０、０．５０、０．７５、１．００和１．５０ｍｇ／ｋｇ体重）的ＡＦＢ１，作为启动剂，两周后，饲以含０．０１５％的２－乙酰氨基芴（２－ＡＡＦ）饲料４周，实验第三周末，施行肝大部分切除术（ＰＨ）。所有动物于实验第６周处死，取肝组织作Ｇａｍｍａ－谷氨酰转肽酶（ＧＧＴ）化学染色，     

甘草甜素等对黄曲霉毒素B1致大鼠肝癌作用的影响

应用黄曲霉毒素B_1(AFB_1)致大鼠肝癌作用的短期体内实验模型,研究两种治疗慢性乙肝的中药制剂甘草甜素和水飞蓟素及可食植物柑果之果皮、果汁对AFB_1致肝癌作用的影响。发现甘草甜素具有明显抑制AFB_1诱发肝癌前病变的作用。文中对甘草甜素的抑制机理进行了讨论。     

清肝化瘀方药对大鼠肝癌前病变中卵圆细胞表型的影响

背景与目的:探讨清肝化瘀方药阻断二乙基亚硝胺(Diethylnitrosamine,DEN)Solt_Farber二步法致大鼠肝癌前病变的机制。材料与方法:用DEN建立Solt_Farber二步法肝癌前病变短期动物模型,以不同浓度的清肝化瘀方药进行干预。透射电镜观察此模型中卵圆细胞的超微结构;酶组织化学方法检测γ_谷胺酰转肽酶(γ_GT酶)、葡萄糖_6_磷酸酶(G_6_P酶)的表达变化;免疫组织化学方法检测甲胎球蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)表达的变化。结果:清肝化瘀方药能明显抑制肝癌前病变中肝细胞γ_GT酶的表达,增加G_6_P酶的表达;同时降低卵圆细胞及肝细胞中AFP的表达,增加ALB的表达。结论:清肝化瘀方药可有效阻断肝癌前病变,大剂量组较小剂量组作用明显,其作用机制可能与诱导卵圆细胞向肝细胞主向分化有关。     

银杏叶提取物对AFB1致HepG2细胞毒性保护作用的观察

目的:研究银杏叶提取物(EGb761)对AFB1致HepG2细胞毒性的保护作用。方法:以MTT实验检测AFB1对HepG2细胞的生长抑制率,再以MTT、FCM等实验,观察EGb761预处理后对AFB1诱导HepG2细胞存活率的影响,然后通过硫代巴比妥酸(TBA)法及二氛荧光素双乙酸(DCFH-DA)法检测细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)及氧化代谢产物活性氧簇(ROS)水平,以观察EGb761对AFB1毒性引起的HepG2细胞活性保护作用及对脂质过氧化的抑制作用。结果:AFB1显著降低HepG2细胞活力,IC50为15μg/mL。EGb761能显著增加AFB1处理后的细胞活力,以219μg/mLEGb761预处理在24、48和72h均提高了AFB1(15μg/mL)处理的细胞存活率,分别提高了28%、47%及47%,P值均<0.01;在3个时间点都明显抑制了AFB1诱导的MDA的形成及ROS的水平,P值均<0.01。结论:EGb761对AFB1致HepG2细胞损伤具有保护作用,其机制可能与清除氧自由基、对抗脂质过氧化有关。     

人细胞色素p450IA2基因的构建及其功能检测：——该基因在啮齿类细胞中代谢活

本文首先构建了含人类细胞色素ｐ４５０ＩＡ２ｃＤＮＡ的ｐＺｉｐ－ｐ４５０ＩＡ２的真核表达载体，并分别将其转染到Ｖ７９细胞和原代大鼠肝上皮细胞中，Ｎｏｒｔｈｃｎ杂交和免疫组化实验显示，Ｖ７９转染细胞中有人ｐ４５０ＩＡ２的ＲＮＡ和蛋白水平的表达。细胞毒实验和ＨＧＰＲＴ位点突变率检测结果证明，外源性ｐ４５０ＩＡ２基因可在Ｖ７９细胞中代 谢活化黄曲霉毒素Ｂ１。转染有ｐＺｉｐ－ｐ４５０ＩＡ２质粒的原代大鼠肝细