间皮素siRNA慢病毒对卵巢癌裸鼠移植瘤的治疗效果

目的： 探讨间皮素（mesothelin,MSLN）siRNA慢病毒对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的治疗作用。 方法： 利用人卵巢癌SKOV3细胞建立卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型。实验分为3组：治疗组、阴性对照组和空白对照组。治疗组应用携间皮素siRNA慢病毒液(LV-MSLN-shRNA)对裸鼠模型进行治疗,阴性对照组采用空载体(LV-MSLN-neg)慢病毒液进行治疗,空白对照组注射PBS治疗。从裸鼠生长一般情况、成瘤率、体质量差、瘤体质量和肿瘤转移部位数等方面观察治疗效果, Western blotting法检测移植瘤组织中间皮素蛋白的表达情况。 结果： 用间皮素siRNA慢病毒液对荷瘤裸鼠进行注射的治疗组裸鼠的成瘤率、体质量差、瘤体质量及肿瘤形成部位数均明显低于空白对照组和空载体LV-MSLN-neg治疗组（P<0.01）。注射慢病毒液后瘤体组织中间皮素蛋白表达明显降低（P<0.05）。 结论： 间皮素siRNA慢病毒液对卵巢癌腹腔移植瘤的生长有显著抑制作用。     

EZH2 基因在卵巢癌发生发展中的作用及其临床病理意义*

目的:探讨EZH 2 基因对卵巢癌细胞增殖和转移能力的影响,及其在卵巢癌组织中的表达与临床病理学意义。方法:运用EZH 2 小干扰RNA（siRNA ）转染卵巢癌OVCAR- 3 细胞株,Western blot方法分析OVCAR- 3 细胞中EZH 2 的蛋白表达;MTT 实验检测细胞增殖水平,Transwell 小室实验检测细胞侵袭和转移能力。另外,应用RT-PCR 和免疫组织化学法分别检测EZH 2 在卵巢癌组织中的mRNA 和蛋白表达情况。结果:与阴性对照组相比,EZH 2 siRNA 能明显降低OVCAR- 3 细胞的EZH 2 蛋白表达,并显著抑制肿瘤细胞的增殖能力（P=0.032）;转染EZH 2 siRNA 的OVCAR- 3 穿膜细胞数,在侵袭实验中,siEZH 2 组为29.3 ± 5,与对照组（51± 6.8）比较,差异有统计学意义（P=0.027）;在迁移实验中,siEZH 2 组的迁移细胞数为51.6 ± 7.7,显著低于对照组（72.3 ± 11.7,P=0.036）。 RT-PCR 检测发现,卵巢癌组织中的EZH 2 mRNA 表达水平明显高于正常组织。在免疫组化实验中,61.0%的卵巢癌组织呈EZH 2 蛋白高表达,而且与卵巢癌的T 分期、N 分期以及FIGO分期显著正相关（P<0.05）。 另外,单变量生存分析发现EZH 2 高表达与卵巢癌患者短生存期密切相关（P=0.007）;多变量分析显示EZH 2 是卵巢癌的独立预后参数（P=0.047）。 结论:EZH 2 在卵巢癌的发生与进展中发挥着重要的作用,而且EZH 2 高表达是卵巢癌患者预后不良的独立分子指标。      

活化T细胞核因子5 对人胃癌MGC803 细胞增殖及凋亡能力的影响

目的:探讨活化T 细胞核因子5（nuclear factor 5 of activated T cells, NFAT5）对人胃癌MGC803 细胞增殖及凋亡能力的影响及其可能的机制。方法：设计并合成3 条靶向NFAT5 基因的siRNA（siRNA2567、siRNA2714 和siRNA4562）及1 条与NFAT5 基因无同源性的阴性对照siRNA（NC-siRNA）,脂质体介导转染人胃癌MGC803 细胞后,采用Real-time PCR检测分析细胞中NFAT5 mRNA 表达水平的变化,进而筛选出有效抑制NFAT5 基因表达的siRNA（NFAT5-siRNA）。NFAT5-siRNA 转染MGC803 细胞48 h 后,进一步采用Real-time PCR和Western blotting 验证并检测细胞中NFAT5 和S100A4 mRNA及蛋白表达水平的变化,流式细胞术和CCK-8 法分析抑制NFAT5 表达对细胞增殖及凋亡的影响。结果: 转染siRNA2567 对NFAT5 mRNA的表达抑制最为明显（P<0.01）,siRNA2567 被验证为NFAT5-siRNA。转染NFAT5-siRNA 48 h 后,NFAT5 和S100A4 mRNA及蛋白的表达水平均明显降低（P<0.05）;与NC-siRNA 组相比较,NFAT5-siRNA 组MGC803 细胞的增殖率在72 h 和96 h 均显著降低（P<0.01）;NFAT5 基因沉默48 h 后,MGC803 细胞的凋亡率由（2.7±0.2）%上升至（7.9±0.2）%（P<0.01）。结论: NFAT5-siRNA 能有效沉默人胃癌MGC803 细胞中NFAT5 基因表达,在抑制细胞增殖率的同时能够有效促进细胞凋亡,该作用可能通过调控S100A4 表达实现。     

沉默HMGB1 基因对裸鼠人上皮性卵巢癌移植瘤生长的抑制作用

目的：探讨高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）基因对裸鼠人上皮性卵巢癌移植瘤生长的影响。方法：选取对数生长期的人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3 细胞建立裸鼠人上皮性卵巢癌移植瘤模型,将造模成功的裸鼠随机分成对照组和HMGB1-siRNA 组,分别在接种细胞后第7、9、11、14、16 天于荷瘤鼠腋下注射等量的生理盐水和HMGB1-siRNA。3 周后颈椎脱臼法处死裸鼠、分离肿瘤组织,测量肿瘤的体积并绘制肿瘤生长曲线,以Tunel 染色法检测移植瘤细胞的凋亡情况,Western blotting 检测移植瘤组织中HMGB1、STAT3、p-STAT3 的表达水平,免疫组化染色技术检测移植瘤组织中VEGF-A的表达和微血管形成情况。结果：与对照组相比,HMGB1-siRNA组的肿瘤体积增长速度减缓,第21 天起HMGB1-siRNA组的肿瘤体积显著小于对照组（P<0.05）;HMGB1-siRNA 成功敲降了移植瘤组织细胞中HMGB1 mRNA的表达,移植瘤组织中HMGB1-siRNA组的细胞凋亡率较对照组显著升高[ （34±8）% vs（6±2）%,P=0.04],HMGB1 和p-STAT3 表达显著降低（P<0.05）,VEGF-A表达和微血管数均显著低于对照组（均P<0.05）。结论：敲降HMGB1 基因可能通过抑制HMGB1/STAT3 信号通路降低VEGF-A的表达和微血管形成,从而促进肿瘤组织细胞凋亡和减缓移植瘤生长。     

生长分化因子15 对人肺腺癌SPCA1 细胞增殖与迁移的影响

目的：探讨靶向生长分化因子15（growth differentiation factor 15,GDF15）基因siRNA 对人肺腺癌SPCA1 细胞增殖和迁移的影响。方法：根据基因数据库（GenBank）设计并合成3 条人GDF15 基因siRNA（GDF15-siRNA161、GDF15-siRNA290 和GDF15-siRNA860）和阴性对照NC-siRNA 序列,采用qPCR法测定转染不同GDF15-siRNA 的SPCA1 细胞中GDF15 mRNA表达水平,筛选有效抑制GDF15 基因表达的siRNA。CCK-8 法和划痕实验分别检测转染有效GDF15-siRNA 和NC-siRNA 的SPCA1 细胞增殖和迁移能力。结果：3 条GDF15-siRNA 对SPCA1 细胞GDF15 mRNA表达均有明显抑制（P<0.01）,其中GDF15-siRNA161抑制最为明显。和转染NC-siRNA 的SPCA1 细胞相比,转染GDF15-siRNA161的SPCA1 细胞增殖明显减慢[ （0.46±0.03）vs（0.52±0.01）,P<0.01],转染GDF15-siRNA161的SPCA1 细胞迁移速度明显低于转染NC-siRNA的SPCA1 细胞（P<0.01）。结论：有效沉默人肺腺癌SPCA1 细胞GDF15基因表达能抑制肺腺癌细胞的增殖和迁移,GDF15 可能成为人肺腺癌基因治疗的候选靶点。     

Lewis y高表达对人卵巢癌RMG-I细胞裸鼠体内致瘤性及移植瘤VEGF和VEGFR表达的影响

目的：比较α1,2岩藻糖转移酶基因转染前后卵巢癌细胞株RMG-I的裸鼠体内致瘤性及移植瘤组织血管内皮生长因子及其受体VEGFR1和VEGFR2表达的变化。方法：利用已建立的Lewisy抗原稳定高表达卵巢癌细胞株RMG-I-H及转染前细胞株RMG-I为细胞模型,将转染前后细胞株种植裸鼠皮下建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,观察两组肿瘤生长情况。第5周处死动物,测量移植瘤重量,免疫组织化学方法检测肿瘤组织VEGF及VEGFR1、VEGFR2的表达。结果：转染组及未转染组裸鼠均有荷瘤形成,但转染组的成瘤时间（5.2±0.8d）早于未转染组（8.8±1.3d）,且转染组的瘤重和体积与未转染组相比均明显增加（P〈0.05）。转染组裸鼠移植瘤组织VEGF及VEGFR2表达量明显高于未转染组（P均〈0.05）。结论：Lewisy抗原高表达能增加卵巢癌RMG-I细胞的体内致瘤性,上调裸鼠移植瘤VEGF及VEGFR2的表达。提示Lewisy抗原能提高癌细胞的恶性程度,且该作用与VEGF及VEGFR2表达增高关系密切。     

小干扰RNA沉默CXCR4和CXCR7对人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨针对趋化因子受体基因CXCR4和CXCR7的小干扰RNA(siRNA)对人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长的影响.方法:将子宫内膜癌Ishikawa细胞株注射于裸鼠肩胛背部皮下建立动物模型,待肿瘤最长径达5～7mm后,将所有荷瘤裸鼠随机分组,分别给予CXCR4-siRNA和CXCR7-siRNA单独或联合瘤体内注射,并以阴性对照siRNA和生理盐水作为对照组,每3d治疗一次,共6个治疗周期.观察各组裸鼠移植瘤的生长,比较各组移植瘤的体积和质量的差异,并以实时荧光定量RT-PCR、Western blotting和免疫组化技术验证CXCR4和CXCR7的基因沉默效果.结果:成功建立Ishikawa细胞裸鼠移植瘤模型,与阴性对照siRNA组和空白对照组相比,CXCR4siRNA治疗组、CXCR-siRNA治疗组和CXCR4-siRNA+ CXCR7-siRNA治疗组的肿瘤的生长均明显受到抑制(均P＜0.05);CXCR4-siRNA和/或CXCR7-siRNA瘤体内直接注射能显著下调CXCR4、CXCR7 mRNA(均P＜0.05)和蛋白(均P＜0.01)的表达.结论:siRNA干扰CXCR4和CXCR7表达能够有效抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤的生长.     

四硫化四砷对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长的影响

目的 利用BALB／C裸鼠和人卵巢癌细胞株SKOV3建立裸鼠皮下移植瘤,探讨四硫化四砷在卵巢癌组织中的抑瘤作用及机制。方法 建立卵巢癌SKOV3裸鼠皮下移植瘤模型,按照给药剂量（50mg／kg和100mg／kg）及肿瘤生成大小（3mm×3mm和10mm×10mm）将裸鼠随机分成小剂量早期治疗组、大剂量早期治疗组、小剂量治疗组和大剂量治疗组,分别予四硫化四砷隔日灌胃,并设裸鼠生理盐水对照组。观察四硫化四砷对肿瘤的生长的影响;RT-PCR法及Western blotting法检测四硫化四砷对肿瘤组织中Bcl-2／Bax蛋白和mRNA表达的影响。结果 各组裸鼠一般情况良好。小剂量早期治疗组、大剂量早期治疗组和大剂量治疗组的抑瘤率分别为84.98％、87. 55％和74.25％,与小剂量治疗组的35.19%相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）。RT-PCR显示肿瘤组织Bcl-2 mRNA表达下调和Bax mRNA表达上调,Western blotting显示其Bcl-2蛋白表达降低和Bax蛋白表达增加。结论 四硫化四砷可以抑制卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生长,并诱导卵巢癌细胞凋亡。其作用机制可能与凋亡调控基因Bcl-2／Bax表达的改变有关。     

siRNA干扰CHRNA5基因的表达抑制尼古丁对人肺癌细胞的促增殖作用

目的： 研究siRNA干扰尼古丁乙酰胆碱受体α5（cholinergic receptor nicotinic alpha 5, CHRNA5 ）基因表达后对尼古丁促人肺癌A549细胞增殖作用的影响。 方法： 设计并合成CHRNA5-siRNA片段,并经脂质体介导转染A549细胞。荧光定量PCR、Western blotting检测转染后A549细胞中 CHRNA5 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测CHRNA5-siRNA对尼古丁促A549细胞增殖作用的影响。 结果： 成功构建了CHRNA5-siRNA并成功转染A549细胞。CHRNA5-siRNA转染组A549细胞的 CHRNA5 mRNA 表达量明显低于si-NC转染对照组（0.196±0.044 vs 0.944±0.027, P<0.01）,CHRNA5-siRNA转染组A549细胞的CHRNA5 蛋白表达量明显低于si-NC转染组（0.267±0.031 vs 0.745±0.035,P<0.01）。在无尼古丁作用时,CHRNA5-siRNA的转染不能抑制A549细胞的增殖。在尼古丁作用下,A549细胞增殖显著增加（P<001）,CHRNA5-siRNA转染可明显抑制尼古丁的促增殖作用（P<0.01）。 结论： siRNA下调肺癌A549细胞中 CHRNA5 的表达可以抑制尼古丁促细胞增殖作用, CHRNA5 可能是肺癌治疗的潜在靶点之一。     

HMGA1基因小分子RNAi对卵巢癌转移抑制的实验研究

目的：探讨高迁移率蛋白家族A1（high mobility group A1,HMGA1）基因小分子干扰RNA对卵巢癌转移抑制的机理。方法：RT—PCR一步法检测3种不同的卵巢癌细胞株中HMGA1、E钙黏蛋白mRNA的表达水平;设计并合成HMGA1 siRNA,转染H08910PM细胞：半定量RT—PCR分析法观察HMGA1 siRNA转染对E钙黏蛋白mRNA表达的逆转作用,及对卵巢癌细胞株体外侵袭、运动的抑制作用。结果：RT—PCR半定量分析结果显示：OVCAR-3细胞中HMGA1 mRNA表达量相对较低（0．64±0．13）,而E-钙黏蛋白mRNA仅在OVCAR-3细胞中有表达;H08910PM细胞稳定转染HMGA1 siRNA后,转染组、对照组HMGA1 mRNA表达水平分别为0．16±0．08、0．47±0．11（P〈0．01）,E钙黏蛋白mRNA表达水平分别为0．38±0．07、0．09±0.05（P〈0．01）;体外运动实验显示,跨膜细胞数转染组明显低于对照组（P〈0．05）;重组细胞基底膜侵袭实验显示,穿透基底膜细胞数转染组明显低于对照组（P〈0．01）。结论：HMGA1基因与卵巢癌转移密切相关,HMGA1基因siRNA可上调卵巢癌细胞中E钙黏蛋白的表达,抑制卵巢癌细胞的运动和侵袭,为卵巢癌转移的基因治疗提供新的靶点。     

过表达THBS2对宫颈鳞癌SiHa细胞生物学特性的影响

目的 探讨血小板反应蛋白2（thrombospondin-2,THBS2）对人宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、侵袭、迁移能力及裸鼠成瘤能力的影响。方法 用THBS2过表达慢病毒转染宫颈鳞癌SiHa细胞（THBS2-LV组）、空载病毒转染宫颈鳞癌SiHa细胞（NC组）,以正常培养的宫颈鳞癌SiHa细胞为空白对照组。转染后采用Western blot检测THBS2蛋白的表达,RT-qPCR检测THBS2 mRNA的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力,裸鼠成瘤实验观察各组裸鼠皮下成瘤能力。结果 转染后,与NC组和空白对照组比较,THBS2-LV组细胞THBS2 mRNA和蛋白的表达量升高,细胞增殖、侵袭、迁移能力降低,而细胞凋亡率升高（P＜0.05）。裸鼠体内成瘤实验结果显示,接种THBS2-LV组细胞的裸鼠皮下成瘤能力和平均肿瘤体积均低于接种NC组和空白对照组细胞的裸鼠（P＜0.01）。结论 过表达THBS2能抑制宫颈鳞癌SiHa细胞增殖、侵袭、迁移和裸鼠皮下成瘤能力,THBS2表达上调能抑制宫颈鳞癌发生发展。     

FAM21对绒毛膜癌细胞系JEG-3迁移和侵袭功能的影响

目的 探讨FAM21对人绒毛膜癌细胞系JEG-3迁移和侵袭功能的影响。方法 设计并合成2条FAM21特异性小分子干扰RNA（siRNA 1和siRNA 2）及1条随机序列siRNA（control siRNA）,瞬时转染JEG-3细胞,依次设为siRNA1组、siRNA 2组和control siRNA组。同时选取未行转染的JEG-3细胞作空白对照（空白组）。普通PCR法检测正常胎盘滋养细胞株HTR-8/Sveno和JEG-3细胞中FAM21 mRNA水平。分别于转染后24、48h采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测各组FAM21的mRNA和蛋白水平,Transwell法检测各组转染24h后的细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR检测各组转染24h后的迁移侵袭相关基因（KISS 1、BRMS1和INSL4）的mRNA水平。结果 JEG-3细胞的FAM21 mRNA水平高于HTR-8／Svneo细胞（P＜0.05）。siRNA 1组和siRNA 2组转染24h后的FAM21 mRNA和转染48h后的FAM21蛋白水平均低于control siRNA组和空白组（P＜0.05）,转染24h后的迁移和侵袭能力均低于control siRNA组和空白组（P＜0.05）。siRNA 1组和siRNA 2组转染24h后的KISS-1和BRMS1 mRNA水平降低,而INSL4 mRNA水平升高,与其余两组比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）;control siRNA组和空白组上述指标的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 FAM21在人绒毛膜癌JEG-3细胞中具有调节迁移和侵袭的功能,在绒毛膜癌的病理机制中发挥了重要的作用。     

下调EZH2基因对胃癌细胞株SGC7901增殖作用的影响

目的 探讨下调EZH2基因对胃癌细胞株SGC7901的增殖作用,研究EZH2基因在胃癌发生发展中的作用.方法 针对EZH2基因序列设计合成小干扰RNA片段(siRNA)及无效序列片段,将EZH2 siRNA转染至胃癌细胞株SGC7901中作为干扰组,以转染无效序列片段作为阴性对照组,以未作任何处理组作为空白对照组,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测EZH2基因下调后EZH2 mRNA的表达,采用Western blot法检测EZH2蛋白表达量,采用CCK-8法检测细胞增殖的活性.结果 成功转染EZH2 siRNA至胃癌SGC7901细胞,干扰组的EZH2 mRNA和蛋白相对表达量较阴性对照组及空白对照组下降,且干扰组细胞增殖受到抑制.结论 下调EZH2基因的表达,使胃癌细胞增殖受到抑制,说明EZH2基因在胃癌细胞的增殖发展进程中有很重要的意义,为深入研究胃癌基因治疗提供一定的理论依据.     

RNA干扰沉默AKT基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖与凋亡影响研究

目的：通过小分子干扰RNA（siRNA）技术沉默卵巢癌SKOV3细胞中P13K／AKT信号通路关键基因蛋白激酶B（protein kinase B,PKB／AKT）基因的表达,探讨其对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响。方法：人卵巢癌SKOV3细胞体外培养,随机分为对照组、空白载体组和siRNA干扰组,siRNA干扰组通过脂质体介导AKTsiRNA转染SKOV3细胞。荧光定量PCR法检测AKT在干扰前后AKTmRNA的表达,免疫荧光细胞化学法检测P13K、AKT与PCNA蛋白在各组中的表达,MTT法检测细胞增殖抑制情况,流式细胞仪AnnexinV／pI法检测细胞凋亡率的变化。结果：siRNA干扰组AKTmRNA的表达量为（O．325±0．04）明显抑制,并显著低于对照组,q=58．96,P〈O．001;免疫荧光细胞化学结果示,siRNA干扰组的AKT、PCNA蛋白的荧光强度较对照组与空白载体组明显降低,而P13K蛋白在3组间差异无统计学意义,P=0．637;流式细胞仪AnnexinV／PI法检测结果示,siRNA干扰组细胞凋亡率高达（79．52±2．31）％,较对照组（27．35±2。01）％与空白载体组（28．64±1．96）％明显升高,约是空白载体组（q=60．880,P〈0．001）与对照组（q=58．553,P〈0．001）的3倍,差异有统计学意义。结论：AKTsiRNA可干扰AKT基因的表达,抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,有望成为治疗卵巢癌的新方法。     

泌乳素诱导蛋白表达下调对三阴性乳腺癌细胞裸鼠体内成瘤影响研究

目的：探讨泌乳素诱导蛋白（prolactininducibleprotein,PIP）表达下调对三阴性乳腺癌（triplenegativebreastcancer,TNBC）MDA-MB453细胞在裸鼠体内成瘤的影响。方法：采用脂质体将PIPsiRNA转染至乳腺癌MDA_MB453细胞,蛋白质印迹法检测PIP的表达下调情况。采用4周龄BALB／c雌性裸鼠,建立乳腺癌MDA-MB-453细胞裸鼠皮下种植瘤模型,瘤内注射siRNA-脂质体混悬液,观察PIPsiRNA对肿瘤生长的影响。采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CyclinDl和VEGF的表达情况。结果：PIP表达下调后,其在裸鼠体内成瘤能力明显降低,肿瘤平均体积空白对照组为（1075±65）mm2,阴性对照组为（1095±72）mm2,实验组为（473±56）mm2,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．719,空白对照组与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。空白对照组肿瘤平均体质量为（908士86）mg,阴性对照组为（889±64）mg,实验组为（272±30）mg,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．738,空白对照组与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。肿瘤生长抑制率为71．1％。免疫组化结果显示,PIP表达下调的肿瘤组织中CyclinD1的相对表达量空白对照组为1535±78,阴性对照组为1594±123,实验组为367±72,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．472,空白对照与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈O．001。VEGF的相对表达量空白对照组为4270±558,阴性对照组为4365±324,实验组为1286±292,空白对照组与阴性对照组差异无统计学意义,P=0．758,空白对照与实验组、实验组与阴性对照组差异均有统计学意义,P〈0．001。结论：下调PIP基因表达可明显抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞体内成瘤能力,提示PIP可能在乳腺癌发生和发展中发挥重要作用。     

RNA干扰RSK4基因表达对裸鼠移植瘤生长与转移影响观察

目的：应用慢病毒干扰载体（RSK4-RNAi—LV）干扰RSK4基因在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达,研究RSK4基因被干扰后对裸鼠移植瘤生长及转移的影响。方法：将转染了siRNA（RSK4-RNAi—LV）的MCF-7细胞组（实验组）、转染了siRNA（NC—GFP-LV）的MCF_7细胞组（阴性对照组）和未转染的MCF-7细胞组（空白对照组）分别接种至裸鼠乳腺脂肪垫下,建立裸鼠移植瘤模型,观察每纽裸鼠移植瘤生长情况;应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测3组移植瘤组织中RSK4mRNA及其蛋白的表达;HE染色观察3纽裸鼠内脏转移情况。结果：实验纽的移植瘤平均体积为（2264．08±367．47）mm2,明显大于阴性对照组（843．67±318．13）mm。及空白对照组的（720．45±241．35）mm。差异有统计学意义,F=112．425,P=0．02;实验组瘤体平均体质量为（1．44±0．25）g,明显重于阴性对照组（0．73±0．20）g及空白对照组的（0．70±0．21）g,差异有统计学意义,F=89．54,P=0．01。实验组裸鼠移植瘤肺转移6只,空白对照及阴性对照组各1只。实验组肿瘤组织RSK4mRNA的相对表达量为0．140±0．843,明显低于阴性对照组的1000±0．000（P=0．008）和空白时照组的0．878±0．689（P=0．005）。实验组、阴性对照组和空白对照组RSK4蛋白的表达量分别为0．138±0．023、0．532±0．032和0．465±0．057,3组间差异有统计学意义,F=73．1,P=0．003;实验组RSK4蛋白表达量明显低于阴性对照组（P=0．006）和空白对照组（P=0．012）。结论：慢病毒干扰MCF-7细胞中RSK4基因表达能促进MCF-7细胞裸鼠移植瘤的生长及转移。     

小干扰RNA沉默基质金属蛋白酶-2基因对卵巢癌细胞恶性行为的影响

 目的　探讨靶向基质全属蛋白酶-2（MMP-2）基因的RNA干扰（RNAi）技术对卵巢癌OVCAR-3细胞MMP-2的沉默作用,以及沉默MMP-2基因对OVCAR-3细胞生长、黏附、侵袭和迁移能力的影响。方法　合成特异性靶向MMP-2基因的小干扰RNA（siRNA）并转染卵巢癌OVCAR-3细胞,以非特异性序列转染细胞作为阴性对照组,以培养液代替siRNA转染细胞作为空白对照组,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测转染后24 、48 和72 h MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线,利用Transwell、划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果　与阴性对照组相比,OVCAR-3细胞在转染siRNA-MMP-2后24 、48 和72 h MMP-2 mRNA表达量分别下降了73.8 %、78.8 %和78.4 %（均P＜0.05）,蛋白表达量分别下降了72.6 %、81.2 %和76.4 %（均P＜0.05）,以48 h作用最强;细胞生长曲线显示细胞生长无明显变化（P＞0.05）;60 min和90 min时的黏附抑制率分别为55.0 %和44.8 %（均P＜0.05）;细胞的侵袭和迁移能力分别下降29.7 %和35.8 %（均P＜0.05）。结论　siRNA介导的MMP-2基因沉默能明显抑制OVCAR-3细胞的黏附、侵袭和迁移能力,而对其生长无明显影响,MMP-2基因有可能成为卵巢癌基因治疗的重要靶点。     

下调RRM1基因增强胃癌AGS细胞对奥沙利铂敏感性的实验研究

目的 探讨下调RRM1基因对人胃癌AGS细胞奥沙利铂敏感性的影响。方法 人工构建RRM1 siRNA1、RRM1 siRNA2、RRM1siRNA3 3条特异性干扰片段转染至胃癌AGS细胞,同时设空白对照组和阴性对照组（非特异性干扰片段siRNA）;实时荧光定量PCR及蛋白印迹法检测转染后胃癌AGS细胞RRM1 mRNA及蛋白表达,并筛选出转染效果最佳的干扰片段;CCK-8检测不同浓度奥沙利铂处理后各组胃癌细胞的增殖抑制率并计算半数抑制浓度（IC50）;流式细胞仪检测奥沙利铂处理后各组胃癌细胞的凋亡率。结果 RRM1 siRNA1、RRM1 siRNA2、RRM1 siRNA3 3组胃癌AGS细胞RRM1 mRNA表达水平较空白对照组分别下调28％、40％和82％。干扰效果最佳的RRM1 siRNA3组AGS细胞RRM1蛋白相对表达量为0.135±0.017,明显低于空白对照组及阴性对照组的0.641±0.003、0.636±0.056（P＜0.05）,故选择siRNA3干扰片段用于后续实验。不同浓度奥沙利铂作用于各组AGS细胞24 h,RRM1 siRNA3组的细胞增殖抑制率均显著低于空白对照组及阴性对照组（P＜0.05）,3组胃癌AGS细胞的IC50分别为3.34、5.85和5.13 μmol／L。经3 μmol／L奥沙利铂处理上述3组细胞24 h后,RRM1 siRNA3组的凋亡率为（35.84±2.0）％,显著高于空白对照组和阴性对照组的（27.32±2.6）％和（28.26±1.5）％,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 下调RRM1基因可增加胃癌细胞对奥沙利铂敏感性,为预测胃癌以奥沙利铂为基础的化疗方案的疗效及制订个体化治疗方案提供了一定的理论依据。