BRCA1、hENT1和Topo1mRNA水平与新鲜胃癌组织三维培养药物敏感性关系

目的:分析胃癌石蜡组织BRCA1、hENT1、Topo1 mRNA水平与新鲜胃癌组织多西紫杉醇、吉西他滨、伊立替康体外药物敏感性的关系.方法:收集36例经病理确诊的新鲜胃癌标本,采用三维微组织块培养法(HDRA)行三种药物的体外药物敏感试验.实时荧光定量PCR检测对应胃癌石蜡组织中BRCA1、hENT1、Topo1 mRNA水平.结果:新鲜胃癌组织对三种药物的敏感性均与临床特征无明显相关性.对应胃癌石蜡组织中BRCA1、hENT1、Topo1 mRNA水平与临床特征无明显相关性.在胃癌组织中,hENT1 mRNA水平最高,BRCA1 mRNA水平最低.胃癌石蜡组织BRCA1 mRNA 水平与新鲜胃癌组织的多西紫杉醇敏感性正相关(7.927 vs 3.464,P=0.001);hENT1 mRNA 水平在吉西他滨敏感组高于耐药组( 15.710 vs 10.145,P=0.243),Topo1 mRNA水平在伊立替康敏感组高于耐药组(10.024 vs 6.038,P=0.124),但均未达统计学差异.结论:胃癌石蜡组织BRCA1mRNA水平与新鲜胃癌组织对多西紫杉醇的敏感性呈正相关.     

hENT1 mRNA表达与非小细胞肺癌吉西他滨化疗临床预后的相关性

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCLC）石蜡组织中平衡型核苷转运载体（human equilibritive nucleosidetransporter 1,hENT1）mRNA表达水平与接受吉西他滨方案化疗的患者临床病理关系及预后意义。方法：采用实时荧光定量RT-PCR方法检测福尔马林固定-石蜡包埋的非小细胞肺癌组织中hENT1 mRNA表达水平,并比较其表达水平与接受吉西他滨化疗的患者临床病理及生存期之间的关系。hENT1 mRNA表达水平与非小细胞肺癌患者的临床及肿瘤病理特征无相关性。结果：hENT1 mRNA高表达组患者经含吉西他滨方案化疗后中位无进展生存期17.5月、总生存期36月,两组间无进展生存期（P=0.420）、总生存期（P=0.707）。但是从生存曲线分析,hENT1 mRNA高表达的NSCLC患者可能从吉西他滨治疗中获益,可能获得更长无进展生存期的趋势。COX多因素回归分析显示TNM分期与肺癌患者总生存期（P=0.02）、无进展生存期（P=0.008）显著相关。hENT1 mRNA表达水平与非小细胞肺癌肿瘤病理特征无相关性,可能与肿瘤恶性生物学行为无关。结论：hENT1 mRNA的表达水平可能是含吉西他滨药物化疗的NSCLC患者预后的影响因素,肿瘤组织的分期可能是影响NSCLC患者预后的独立预测因素。     

胃癌中胸苷酸合成酶与培美曲塞／雷替曲塞敏感性的初步研究

目的 探讨胃癌组织中胸苷酸合成酶（TS）mRNA表达与培美曲塞或雷替曲塞药物敏感性之间的关系。方法 收集50例经病理确诊的新鲜人胃癌标本,采用三维微组织块培养法（HDRA）进行两种药物的体外敏感试验;实时荧光定量PCR检测对应胃癌石蜡组织中TS mRNA水平。结果 新鲜胃癌组织对培美曲塞或雷替曲塞的敏感性以及胃癌石蜡组织中TS mRNA水平均与临床病理特征无明显相关性。培美曲塞敏感组与耐药组的TS mRNA相对表达量分别为6.72 ±1.34和15.39 ± 2.43（P=0.002）;雷替曲塞敏感组与耐药组的TS mRNA相对表达量分别为7.96 ± 1.70和14.14 ± 2.37（P=0.028）。结论 胃癌石蜡组织TS mRNA水平与新鲜胃癌组织对培美曲塞或雷替曲塞的敏感性呈负相关,TS在胃癌应用新型抗叶酸代谢类药物个体化治疗中具有潜在的指导价值。     

恶性胸腹水中肿瘤细胞BRCA1和β-tubulin Ⅲ的表达与多西紫杉醇药物敏感性的关系

目的：疗效相关分子生物标记的探索是实现个体化治疗的关键所在。由于肿瘤原发灶与转移灶肿瘤细胞在分子水平的显著差异及转移性恶性肿瘤的难治性,本研究旨在探索肿瘤特殊转移灶即恶性胸/腹水中肿瘤细胞的BRCA1和β-tubulinⅢmRNA表达水平与多西紫杉醇（TXT）药物敏感性的关系。方法：前瞻性地收集41例进展期肿瘤的恶性胸水/腹水,分离肿瘤细胞后ATP-TCA方法检测TXT敏感性;实时荧光定量RT-PCR检测的BRCA1和β-tubulinⅢmRNA表达。结果：在非小细胞肺癌（NSCLC）组（P=0.008）和胃癌组（P=0.032）的恶性胸/腹腔积液中肿瘤细胞的BRCA1 mRNA表达与TXT体外药物敏感正相关。β-tubulinⅢmRNA表达仅在NSCLC患者的恶性胸腔积液中肿瘤细胞与TXT药物敏感负相关（P=0.022）。联合检测BRCA1和β-tubulinⅢ对于TXT药物敏感性的预测没有交互作用（P〉0.05）。结论：在NSCLC和/或胃癌患者的恶性胸/腹腔积液中,BRCA1和β-tubulinⅢ表达与TXT敏感性相关且前者可能比后者更有意义。对于伴有恶性积液的进展期NSCLC和/或胃癌患者,恶性积液有可能成为一合适的标本进行分子生物标记的检测。     

Survivin、CTNNB1和 hTERT mRNA 水平与胃癌药物敏感度的关系

目的：初步探讨 Survivin、CTNNB1、hTERT 表达与胃癌药物敏感度的关系。方法：采用三维立体组织培养药物反应性试验检测20例胃癌组织多西紫杉醇、异长春花碱、伊立替康和奥沙利铂四种药物的敏感度, RT －PCR 方法检测胃癌组织 Survivin、CTNNB1和 hTERT mRNA 表达水平。结果：异长春花碱、伊立替康和奥沙利铂三种药物最佳检测浓度分别为20μg／ml、80μg／ml 和40μg／ml。CTNNB1 mRNA 表达用于判断多西紫杉醇和异长春花碱敏感度的准确率为70％、Survivin mRNA 表达用于判断奥沙利铂敏感度的准确率为70％。结论：CTNNB1表达水平和多西紫杉醇与异长春花碱敏感度相关,Survivin 表达水平与奥沙利铂敏感度有关。     

恶性胸腔/腹腔积液RRM1 mRNA表达水平和吉西他滨体外药敏的关系

目的：分析恶性胸腔/腹腔积液中肿瘤细胞核糖核苷酸还原酶M1亚基（ribonucleotide reductase M1,RRM1）基因的表达水平与吉西他滨体外药物敏感性的关系。方法：收集24例经病理确诊的Ⅳ期恶性肿瘤患者的恶性胸腔/腹腔积液,分离原代肿瘤细胞,采用CCK8（cell counting kit8）法体外药物敏感试验检测原代肿瘤细胞对吉西他滨药物敏感性;实时荧光定量PCR检测原代肿瘤细胞RRM1 mRNA的相对表达水平。结果：在恶性胸腔/腹腔积液中,肿瘤细胞的RRM1 mRNA的相对表达水平与恶性肿瘤患者的临床特征无明显相关性,但是与吉西他滨药物敏感性呈负相关（r=-0.497,P=0.013）;既往曾使用化疗药物的恶性肿瘤患者恶性胸腔/腹腔积液原代肿瘤细胞对吉西他滨敏感性低于未化疗患者（42.94%vs67.88%,P=0.006）。结论：恶性胸腔/腹腔积液中肿瘤细胞RRM1 mRNA的相对表达水平与吉西他滨体外药物敏感性相关。     

恶性胸腹水中肿瘤细胞BRCA1和β-tubulin Ⅲ的表达与多西紫杉醇药物敏感性的关系

目的:疗效相关分子生物标记的探索是实现个体化治疗的关键所在。由于肿瘤原发灶与转移灶肿瘤细胞在分子水平的显著差异及转移性恶性肿瘤的难治性,本研究旨在探索肿瘤特殊转移灶即恶性胸/腹水中肿瘤细胞的BRCA1和β-tubulinⅢmRNA表达水平与多西紫杉醇(TXT)药物敏感性的关系。方法:前瞻性地收集41例进展期肿瘤的恶性胸水/腹水,分离肿瘤细胞后ATP-TCA方法检测TXT敏感性;实时荧光定量RT-PCR检测的BRCA1和β-tubulinⅢmRNA表达。结果:在非小细胞肺癌(NSCLC)组(P=0.008)和胃癌组(P=0.032)的恶性胸/腹腔积液中肿瘤细胞的BRCA1 mRNA表达与TXT体外药物敏感正相关。β-tubulinⅢmRNA表达仅在NSCLC患者的恶性胸腔积液中肿瘤细胞与TXT药物敏感负相关(P=0.022)。联合检测BRCA1和β-tubulinⅢ对于TXT药物敏感性的预测没有交互作用(P>0.05)。结论:在NSCLC和/或胃癌患者的恶性胸/腹腔积液中,BRCA1和β-tubulinⅢ表达与TXT敏感性相关且前者可能比后者更有意义。对于伴有恶性积液的进展期NSCLC和/或胃癌患者,恶性积液有可能成为一合适的标本进行分子生物标记的检测。     

eIF5A1对非小细胞肺癌细胞系化疗药物敏感性的影响

目的:探讨eIF5A1对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系化疗药物敏感性的影响及可能的机制。方法:应用RT-PCR法检测不同NSCLC细胞系eIF5A1 mRNA表达水平。MTT法检测其对吉西他滨的敏感性,并分析二者的关系。构建真核表达载体pEGFP-C1-eIF5A1并通过脂质体介导法转染肺腺癌LTEP-a-2 细胞。荧光显微镜、RT-PCR和Western blot方法评估转染效率。MTT法检测转染后细胞化疗药物敏感性变化。流式细胞仪检测转染后细胞周期及凋亡变化。结果:肺鳞癌细胞系eIF5A1 mRNA表达水平及对吉西他滨的敏感性均显著高于肺腺癌细胞系（P<0.001）。pEGFP-C1-eIF5A1转染eIF5A1表达水平最低的LTEP-a-2细胞后eIF5A1 mRNA及蛋白表达水平显著升高（P<0.001）。与对照组细胞比较,eIF5A1转染组细胞对吉西他滨、顺铂、紫杉醇、多西紫杉醇的敏感性显著增加（P<0.001）。S期和G2/M期细胞比例显著增加（P<0.001）。在化疗药物作用下,细胞凋亡率显著增加（P<0.001）。结论:在非小细胞肺癌中上调eIF5A1的表达可能增加细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与eIF5A1高表达增强化疗药物的促凋亡作用及影响细胞周期分布有关。     

卵巢上皮癌组织中hMSH2的表达及其与化疗耐药的关系

目的 检测不同化疗敏感程度的卵巢上皮癌组织中hMSH2基因的表达,分析其与化疗耐药及预后的关系。方法 80例新鲜卵巢上皮癌组织均由手术中取得,采用ATP-TCA技术检测卵巢癌组织对八种药物：紫杉醇、卡铂、拓泊替康、多西他赛、吉西他滨、环磷酰胺体内代谢产物、依托泊苷及博来霉素的体外敏感性。采用Real-time PCR及Western blot法分别检测80例卵巢上皮癌组织中hMSH2 基因mRNA和蛋白水平的表达情况。结果 对紫杉醇耐药的卵巢上皮癌组中,hMSH2基因在mRNA及蛋白水平的表达均明显高于敏感组（P<0.01）,在对卡铂、拓泊替康、多西他赛耐药组中hMSH2表达水平也明显高于敏感组（P<0.05）;hMSH2基因的相对表达值与卡铂、拓泊替康、多西他赛的敏感度系数有显著相关性（P≤0.05）。早期卵巢癌患者组织的hMSH2表达水平明显低于晚期卵巢癌组织（P<0.05）。高、中分化卵巢癌组织hMSH2蛋白表达水平明显低于低分化卵巢癌组织（P=0.000）。原发卵巢癌患者组织的hMSH2表达水平明显低于复发卵巢癌患者组织（P<0.01）。结论 hMSH2基因的高表达与卵巢癌化疗耐药及预后相关,化疗可能诱导hMSH2基因的高表达;下调hMSH2基因的表达或许是逆转肿瘤耐药的新途径。     

BRCA1基因和RAP80 mRNA表达水平与胃癌铂类化疗预后的相关性研究

目的探讨肿瘤石蜡组织中BRCA1基因和RAP80 mRNA表达水平与接受铂类药物化疗的胃癌患者生存时间之间的关系。方法提取福尔马林固定-石蜡包埋胃癌组织RNA,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测BRCA1基因和RAP80 mRNA的表达水平,比较其表达水平与接受铂类化疗患者的临床病理与生存时间之间的关系。结果 74例胃癌患者中,BRCA1 mRNA低表达患者生存时间为19.3个月,高表达患者生存时间为13.3个月（P=0.17）。RAP80 mRNA低表达患者生存时间为18.2个月,高表达患者生存时间为10.9个月（P=0.07）。BRCA1和RAP80均低表达的患者生存时间为20.3个月,均高表达的患者生存时间为9.1个月（P=0.015）。结论 BRCA1和RAP80 mRNA的表达水平可以作为以铂类为基础药物化疗的胃癌患者的生存时间的预测分子,结论需更大样本的临床研究进一步验证。     

恶性胸腔和腹腔积液中ERCC1和BRCA1 mRNA的表达水平与顺铂敏感性的关系

目的:本研究旨在探讨肿瘤特殊转移灶恶性胸腔/腹腔积液中核苷酸切除修复交叉互补组1(excision repair cross-complementing group 1, ERCC1)基因和乳腺癌易感基因1(breast cancer 1, BRCA1)的表达水平与顺铂体外药物敏感性之间的关系.方法:前瞻性收集46例Ⅳ期恶性肿瘤患者的恶性胸腔/腹腔积液,分离出肿瘤细胞后,采用体外药敏试验三磷酸腺苷生物荧光法检测(adenosine triphosphate-bioluminescence assay, ATP-TCA)法检测肿瘤细胞对顺铂的药物敏感性,实时荧光定量PCR检测ERCC1和BRCA1 mRNA的相对表达水平.结果: 在非小细胞肺癌患者的恶性胸腔/腹腔积液中,肿瘤细胞的ERCC1 mRNA相对表达水平与顺铂抗药性呈正相关(P=0.001,r=0.685).非小细胞肺癌患者(P=0.014,r=0.541)和胃癌患者(P=0.002,r=0.625)恶性胸腔/腹腔积液中肿瘤细胞的BRCA 1 mRNA相对表达水平与顺铂抗药性呈正相关.ERCC1和BRCA1对顺铂药物敏感性的影响存在交互作用(所有患者P=0.010;胃癌患者P=0.027).结论:恶性胸腔/腹腔积液中肿瘤细胞的ERCC1和BRCA1 mRNA的相对表达水平与顺铂体外药物敏感性相关.联合检测ERCC1和BRCA1这2种基因较只采用其中一种基因在预测顺铂药物敏感性方面的价值更大.     

83例结直肠癌体外药物敏感性及临床病理参数相关性

目的：通过结直肠癌体外药物敏感性实验，分析临床病理因素与7种化疗药物体外药敏结果相关性，从而为临床选择化疗药物提供理论依据。方法：收集100例新鲜人结直肠癌标本，均经病理证实为癌。采用三维微组织块培养法（ HDRA）比较7种化疗药物的体外敏感性。成功完成83例，同时评价体外药敏结果与临床病理参数之间的相关性。结果：7种化疗药物的体外敏感性结果依次为：5-FU 43.93%、奥沙利铂52.00%、伊立替康25.39%、培美曲塞33.13%、雷替曲塞32.01%、多西紫杉醇16.73%、吉西他滨23.14%。体外药敏结果与患者年龄、性别、部位、淋巴结转移、分期没有明显相关性，而与分化程度呈负相关。结论：体外药敏实验对临床用药具有一定指导意义，结直肠癌分化水平与化疗药物体外药敏结果具有一定相关性。     

转移性恶性胸腹腔积液患者肿瘤细胞中乳腺癌易感基因1mRNA的表达与铂类敏感性的关系

目的 研究乳腺癌易感基因1(BRCA1)在转移性恶性胸腹腔积液肿瘤细胞中的表达,并探讨BRCA1基因表达在铂类化疗疗效中的预测作用.方法 收集31例经病理确诊的恶性胸腹腔积液标本,分离原代肿瘤细胞.采用细胞计数试剂盒(CCK8)体外药物敏感性试验,检测顺铂(DDP)对原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用,采用实时荧光定量PCR法检测肿瘤细胞中BRCA1 mRNA的相对表达水平.结果 BRCA1 mRNA在原代肿瘤细胞中的表达水平为0.618(0.014～18.063),DDP对原代肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)为2.809 μg/ml (0.118～19.439 μg/ml).BRCA1 mRNA的表达及DDP对原代肿瘤细胞的IC50值与患者的年龄、性别、原发肿瘤类型、是否接受化疗以及积液类型均无关(均P＞0.05).BRCA1 mRNA的表达水平与DDP抵抗正相关,BRCA1 mRNA低表达者对DDP的敏感性高(r=0.786,P＜0.001).结论 检测BRCA1 mRNA的表达水平可以为转移性胸腹腔积液患者应用铂类药物化疗提供理论依据.

Abstract：

Objective To explore the mRNA expression of breast cancer susceptibility gene 1 (BRCA1) in tumor cells isolated from malignant pleural and peritoneal effusions, and the predictive role of BRCA1 related to the efficacy of cisplatin-based chemotherapy. Methods Tumor cells were isolated from malignant pleural and peritoneal effusions of 31 cancer patients. The response of these tumor cells to cisplatin was determined by CCK8 assay. Real time quantitative RT-PCR was used to examine the BRCA1 mRNA level in the primary culture cancer cells. Results The expression level of BRCA1 mRNA was 0.618(0.014-18.063)in primary culture tumor cells. The IC50 of DDP was 2.809 μg/ml in the primary culture tumor cells (0.118-19.439 μg/ml). Both BRCA1 mRNA expression and the tumor cells IC50 of DDP were not significantly related with patient age, gender, the type of primary tumor, whether to accept the chemotherapy and effusion type (P>0.05). The level of BRCA1 mRNA was negatively correlated with the chemosensitivity in terms of IC50 of cisplatin (P<0.001). Conclusion Assessment of expression level of BRCA1 mRNA may be useful in predicting the efficacy of cisplatin-based chemotherapy in patients with metastatic malignant effusions.     

胃癌BRCA1基因甲基化与BRCA1 mRNA表达的关系研究

目的：探讨乳腺癌易感基因1（BRCA1）启动子CpG岛甲基化与BRCA1 mRNA表达的相关性及其意义。方法采用甲基化特异性PCR技术检测37例胃癌组织和对应癌旁组织及6例正常胃组织中BRCA1基因启动子CpG岛甲基化状态;采用逆转录PCR技术检测37例胃癌组织和对应癌旁组织及6例正常胃组织中BRCA1 mRNA 表达水平。结果胃癌组织中 BRCA1基因启动子 CpG 岛总甲基化率为48.6%（18/37）,显著高于癌旁组织[5.4%（2/37）]和正常胃组织[0.0%（0/6）],差异有统计学意义（χ2=17.541、5.021,P均〈0.05）。胃癌组织中BRCA1 mRNA阳性表达率为48.6%（18/37）,显著低于癌旁组织[94.6%（35/37）]和正常胃组织[100.0%（6/6）],差异有统计学意义（χ2=19.215、5.520,P均〈0.05）。BRCA1基因启动子CpG岛甲基化与BRCA1 mRNA表达成负相关（ r=-0.515,P〈0.05）。结论 BRCA1基因启动子CpG岛甲基化可能是导致BRCA1 mRNA失表达的主要原因之一。     

三维培养药敏实验测定的胃癌药物敏感性与多药耐药基因蛋白表达的关系

背景与目的：目前胃癌化疗疗效尚不理想,通过预测个体肿瘤对药物的敏感性来指导临床治疗,以提高疗效,早已成为化疗界瞩目的问题。本研究通过三维培养药敏实验测定胃癌的药物敏感性,并通过测定多药耐药基因表达产物水平,分析两者之间的关系。方法：应用三维培养体外药敏实验技术,测定表阿霉素、顺铂、草酸铂、5-FU、泰素帝、伊立替康6种单药和5-FU＋表阿霉素＋顺铂、5-FU＋伊立替康、5-FU＋草酸铂、5-FU＋泰素帝＋顺铂4组联合用药对22例胃癌组织的抑制率,并计算敏感率;应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组化法检测胃癌组织中MDR1、MRP1、ABCG2基因蛋白的表达。结果：单药组中5-FU对胃癌组织的抑制率和敏感率最高,分别为29．8％和50．0％：联合用药组抑制率最高为5-FU＋泰素帝＋顺铂（59．8％）,敏感率最高为5-FU＋表阿霉素＋顺铂（77．3％）;联合用药组抑制率和敏感率均高于单药组（P〈0．05）。胃癌组织中MDR1、MRP1、ABCG2 mRNA的阳性率分别为90．9％、54．5％、77．3％,MDR1、MRP1、ABCG2蛋白的阳性率分别为36．4％、54．5％、36．4％;多药耐药蛋白高表达与胃癌对表阿霉素的耐药有相关性（P〈0．05）。结论：胃癌组织中多药耐药基因MDR1、MRP1、ABCG2蛋白高表达与胃癌组织对表阿霉素的耐药有关。提示这三种耐药基因可能参与介导表阿霉素的耐药。     

REIC基因在胃癌中的表达及其意义

目的：研究REIC基因在胃癌发生发展中的作用。方法：应用反转录聚合酶链反应（R-PCR）方法检测REIC基因在50例胃癌癌灶、癌旁组织中的表达。结果：26例（52％）胃癌组织中REIC基因mRNA的表达明显低于胃癌癌旁组织（P〈0.05），且REIC基因的低表达与胃癌组织浸润深度有关．结论：REIC基因的低表达可能在胃癌的发生、发展中起一定作用，可能是一种潜在的抑癌基因。