JNK通路介导的铁死亡在三阴性乳腺癌细胞增殖及凋亡中的作用

目的：研究c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路介导的铁死亡在三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖及凋亡中的作用。方法：收集2020年1月—2022年5月佳木斯大学附属第一医院肿瘤科手术切除的105例TNBC癌组织和癌旁正常组织，并分别培养TNBC细胞系MDA-MB-231以及非TNBC细胞系MCF-7、SK-BR-3，采用Western blot检测TNBC组织、癌旁正常组织、TNBC细胞系、非TNBC细胞中磷酸化JNK(p-JNK)、铁死亡标志基因转铁蛋白受体1(TFR1)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达水平。另将MDA-MB-231细胞分为对照组、JNK激动剂组(5μmol/L ANISO)、铁死亡抑制剂组(2μmol/L Ferrostatin-1)、激动剂+抑制剂组(5μmol/L ANISO+2μmol/L Ferrostatin-1)。各组细胞分别处理24 h后，采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率，TUNEL法检测细胞凋亡率，分别采用试剂盒检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量；采用荧光定量PCR和Western blo...     

α-常春藤皂苷诱导肝癌Bel-7402细胞铁死亡的作用机制

目的:探讨α-常春藤皂苷(α-Hederin)诱导肝癌Bel-7402细胞发生铁死亡(ferroptosis)的可能机制。方法:采用梯度浓度的α-常春藤皂苷处理肝癌Bel-7402细胞24 h,MTT法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(IC50)。将细胞分为空白对照组、α-常春藤皂苷（25 μmol/L）组和α-常春藤皂苷（50 μmol/L）组。谷胱甘肽试剂盒测定分组后细胞内GSH含量,Western blot检测铁死亡相关蛋白胱氨酸-谷氨酸的反向转运体亚基xCT、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、二价金属转运蛋白1(DMT1)的表达,DCFH-DA探针用以检测细胞活性氧(ROS)水平。利用铁死亡抑制剂进行细胞功能恢复试验,测定了同时使用Ferrostatin-1和α-常春藤皂苷后的细胞活力、GSH含量、铁死亡相关蛋白表达水平以及ROS水平。结果:随α-常春藤皂苷浓度增加Bel-7402细胞的存活率显著降低,24 h对应Bel-7402细胞的IC50为40.32 μmol/L。α-常春藤皂苷能减少细胞内GSH含量,下调xCT和GPX4的表达,上调DMT1的表达和升高ROS水平。Ferrostatin-1可有效抑制α-常春藤皂苷诱导的细胞铁死亡,主要表现为细胞活力、GSH含量恢复以及ROS生成减少。结论:α-常春藤皂苷可通过抑制GPX4和xCT的表达,促进DMT1的表达,诱导ROS大量生成并导致肝癌Bel-7402细胞铁死亡。     

p53 基因相关的细胞非经典死亡

[摘要] 程序性细胞死亡是多细胞生物死亡的重要生物学过程,其调控方式复杂,对维持细胞内环境稳定十分重要。在过去的几年中,除了凋亡之外,对程序性细胞死亡的非凋亡形式的研究也取得了进展。p53 作为经典的肿瘤抑制因子,除了控制细胞增殖和凋亡外,也参与非典型细胞死亡调控。p53 通过对其下游靶点的转录调控以及与关键蛋白的直接作用,直接或间接调节细胞的非典型死亡。本文对p53 在凋亡、铁中毒、细胞程序性坏死、自噬性细胞死亡、有丝分裂灾难、副凋亡等几种非典型细胞死亡模式中的作用作一综述,为肿瘤抑制机制的阐明及癌症药物研制提供相应参考。     

小细胞肺癌组织中p53基因改变的研究

为探讨小细胞肺癌（ＳＣＬＣ）发生的分子机制，应用免疫组化和聚合酶链反应—单链构象多态性分析的方法，对１４例ＳＣＬＣ组织进行ｐ５３基因突变研究。结果显示，有９例出现ｐ５３蛋白阳性，阳性率为６４．３％（９／１４）。ｐ５３基因第５，６，７，８外显子突变率分别为２１．４％（３／１４），１４．３％（２／１４），１４．３％（２／１４），７．１％（１／１４），总突变率为５７．１％（８／１４）。结果表明，ＳＣＬＣ组织中存在较高的ｐ５３基因突变率，故ｐ５３基因可能是人类肺癌发生的关键基因。     

重楼皂苷抗肿瘤作用机制的研究进展

近年来,随着层析柱新填料的发现以及中药分离提纯技术水平的提高,重楼的化学成分以及药理作用机制等方面研究已经有了较大进展。目前认为,重楼皂苷是重楼的主要化学成分,而且已经发现重楼皂苷具有抗肿瘤、抗炎和抑制氧化应激反应等药理作用。其抗肿瘤主要作用机制包括诱导细胞凋亡、调节机体免疫功能、抑制肿瘤组织血管生长、逆转肿瘤耐药等。本文通过对国内外重楼皂苷的相关研究进行系统梳理和归纳,为明确其抗肿瘤作用机制提供参考。     

p53蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 :探讨非小细胞肺癌中p5 3蛋白的表达及意义。方法 :应用SP免疫组化法检测 5 2例肺癌组织中p5 3蛋白的表达。结果 :非小细胞肺癌中p5 3蛋白阳性表达率为 78 8% ,其中鳞癌与腺癌分别为 75 0 %和 82 1% ,p5 3蛋白阳性病人的预后较阴性者差。结论 :p5 3蛋白在非小细胞肺癌中有较高的表达 ,有可能作为评估预后、指导治疗的指标。     

p53抑制干细胞的自我更新能力而增敏奥沙利铂诱导肺癌细胞凋亡的作用及机制

目的:研究p53通过增加肿瘤干细胞不等向分裂的比例而增敏奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)诱导肺癌细胞凋亡的作用及机制,探索影响肺癌化疗效果的因素.方法:用Nutlin-3(N-3)调控肺癌细胞野生型p53的表达,研究p53对L-OHP诱导细胞凋亡及对肺癌干细胞不同分裂模式的影响;使用Akt激活剂及shRNA-GSK3β调控表达的肺癌细胞系,研究p53通过Akt调控奥沙利铂诱导的肺癌细胞凋亡,并抑制肺癌干细胞自我更新能力.在肺癌标本中检测GSK3β与磷酸化Akt1的表达及与预后的关系.结果:Nutlin-3上调了A549及H460细胞中野生型p53的表达,有效抑制了细胞增殖,增强L-OHP诱导细胞凋亡效果.Nutlin-3抑制磷酸化Akt1,促进肺癌干细胞不等向分裂,进而抑制肿瘤干细胞的比例,增敏L-OHP诱导肺癌细胞凋亡.Akt1磷酸化活性在p53介导的下游GSK3β表达增加的调控中起关键作用.50nmol/L的L-OHP通过抑制Akt1活性促进凋亡,10μmol/L的Nutlin-3对L-OHP诱导的肺癌细胞凋亡有协同作用,是通过共同调控Akt1/GSK3β通路的活性实现,Akt1的激活与GSK3β的抑制均显著地抵消了p53对L-OHP诱导的肺癌干细胞比例降低.结论:p53通过抑制磷酸化Akt1的水平调控GSK3β表达,促肺癌干细胞不均等分裂,增敏L-OHP诱导凋亡.肺癌中GSK3β的高表达与磷酸化Akt1的低表达预示较好的临床治疗效果.     

p53基因缺失与非小细胞肺癌的相关研究

为探讨ｐ５３基因缺失在非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）发病机制中的作用，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术检测１７例ＮＳＣＬＣｐ５３基因缺失情况，发现７例（４１．２％）存在ｐ５３基因缺失，发生淋巴结扩散的ＮＳＣＬＣ，其ｐ５３基因缺失率较高。结果提示ｐ５３基因的缺失与ＮＳＣＬＣ的发生、发展相关。     

肺癌中p53和p63 蛋白表达的高通量组织微阵研究

目的探讨p53和p63蛋白在肺癌中的表达及意义,并比较两者之间的表达关系.方法组织微阵(tissue microarray,TMA)技术和免疫组化S-P方法(immunohistochemistry,IHC).结果p53蛋白IHC染色中,TMA有价值的肿瘤标本为234(72.9%),总的表达率(+、++、+++)率为48.3%(113/234).随着肺鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma,SCC)和腺癌(adenocarcinoma,Ad)分级升高,p53蛋白表达增强,与肺SCC及Ad病理分级有明显相关性(P＜0.05).p53蛋白表达与生存期呈明显负相关性(P＜0.05).p53蛋白表达与病理分型和临床分期等无明显相关性(P＞0.05).p53蛋白表达在肺癌原发肿瘤和转移淋巴结之间无明显差异(P＞0.05).p63蛋白IHC染色中,TMA有价值的肿瘤标本为264(82.2%),总的表达率(+、++、+++)为67.8%(179/264).p63蛋白在小细胞肺癌(small cell lung carcinoma,SCLC)表达最低16.0%(4/25),非小细胞肺癌(non-small cell lung carcinoma,NSCLC)与SCLC之间表达存在明显差异(P＜0.05).p63蛋白表达与病理组织分级、临床分期、生存期等无明显相关性(P＞0.05).p63蛋白表达在肺癌原发肿瘤和转移淋巴结之间无明显差异(P＞0.05).结论1.p53是肺癌的独立预后指标;2.p63蛋白在肺癌的不同病理类型的不同表达,说明肺癌的不同病理类型分子机理有所不同;3.p53蛋白和p63蛋白表达之间无明显相关性;4.TMA可以有效分析比较组织中肿瘤标记物的表达情况.     

神经酰胺通过非p53途径诱导鼻咽癌细胞中p21WAF1的表达

[目的]探讨第二信使神经酰胺信号传导诱导鼻咽癌细胞p21^WAF1表达的机理。[方法]Western blot法检测p53,p21,Jun,NFкB基因表达,试剂盒检测SAPK/JNK的活性。[结果]在鼻咽癌CNE2细胞中阿霉素能刺激p53表达,不能上调p21^WAF1的表达,可见在CNE2细胞中p53为功能异常型,C2-神经酰胺处理CNE2细胞后,可见p53蛋白呈现下降趋势;而p21^WAF1蛋白在处理4、16小时时,p21^WAF1表达明显增高,但36小时后p21^WAF1恢复到基础水平,在6.25μmmol/L,12.5μmmol/L,25μmmol/L的C2-神经酰胺处理24小时后p21^WAF1上升,而50μmmol/L的C2-神经酰胺处理24小时后,p21^WAF1开始下降,C2-神经酰胺处理CNE2细胞2小时后,JNK的活性开始增加,6小时时保持激活状态,12小时时下降,c-Jun/AP1蛋白在神经酰胺处理后3小时开始明显增高,持续到12小时,24小时下降至基础水平;C2-神经酰胺对CNE2细胞中NFкB蛋白表达没有明显的变化。[结论]C2-神经酰胺在鼻咽癌细胞CNE2中,通过p53非依赖性途径诱导p21^WAF1的表达,神经酰胺激活JNK,从而激活AP-1因子,可能是其诱导p21^WAF1表达的机理。     

Ⅰ期非小细胞肺癌p53蛋白的表达及其临床意义

目的：研究４８例Ⅰ期非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）ｐ５３蛋白的表达，试图为早期肺癌找到灵敏、特异的指标，以指导术后治疗。方法：收集手术后原发灶的石腊标本及其临床、随访资料，以ｐ５３单抗为探针，采用免疫组化Ｓ－Ｐ（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）法检测原灶ｐ５３蛋白的表达。结果：４８例Ⅰ期ＮＳＣＬＣ患者中２３例（４７．９％）阳性，ｐ５３（＋）组五年生存率为３０．４％（７／２３），ｐ５３（     

氨基末端激酶信号通路在Apoptin基因诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的:探讨肿瘤特异性凋亡基因(Apoptingene)在诱导Hela细胞凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用。方法:用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的Hela;采用流式细胞仪、免疫印迹法(Westernblot)、苔盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下Hela细胞诱导凋亡的作用。结果:Apopin基因瞬间转染的Hela细胞可出现明显的细胞凋亡;而且凋亡细胞的数量与Apoptin的转染时间有关;凋亡细胞内磷酸化型JNK蛋白随凋亡细胞数量的增加而增多,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化。结论:Apoptin基因具有诱导Hela细胞凋亡的作用,JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用。     

非小细胞肺癌p53基因治疗的循证医学评价

[目的]探讨p53基因治疗非小细胞肺癌的临床研究证据。[方法]依照循证医学的文献检索策略检索MEDLNE,应用系统评价专用软件包进行数据处理。[结果]欧、美两个多中心研究共9篇研究报告均不足以证实p53基因治疗非小细胞肺癌的有效性。[结论]大量的体外、体内实验提示p53基因治疗对于非小细胞肺癌的治疗有效,但是目前尚缺乏临床证据证实其有效性,因此当前不推荐p53基因治疗的临床应用,加强p53基因治疗的基础研究,特别是研究如何提高转基因效率,应该是今后工作的重点,开展p53基因治疗非小细胞肺癌的大规模临床试验目前条件也不成熟。     

非小细胞肺癌p53基因突变检测及临床病理分析

目的　探讨ｐ５３基因点突变在非小细胞肺癌中的发生情况及临床病理联系。方法　运用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性分析方法（ＳＳＣＰ）检测原发性非小细胞肺癌的ｐ５３ 基因第５－８外显子点突变。结果　８例良性肿瘤均无点突变发生,４０ 例肺癌中１９例（４７．５％ ）有点突变发生,点突变发生与临床分期和淋巴结累及程度明显相关（Ｐ＜ ０．０２）。结论　ｐ５３基因点突变在非小细胞肺癌的发生和进展中起着相当重要的作用。     

p53、p27、bcl-2在非小细胞肺癌中表达的研究

目的　研究p53、p2 7、bcl 2三种基因蛋白与非小细胞肺癌 (NSCLC)临床病理特征的关系。方法　应用S P免疫组化法检测 76例手术切除NSCLC标本中三种基因蛋白的表达。结果　 76例标本中 2 8例(36 .84% )p53过度表达 ,34例 (44.74% )p2 7过度表达 ,37例bcl 2过度表达 (48.68% ) ,7例患者p53、p2 7、bcl 2均过度表达。p53阳性表达率随分化程度降低而升高 ,bcl 2和p2 7阳性表达率随分化程度降低而降低 ,且高、低分化组间均有显著性差异 (P <0 .0 5)。但是三种蛋白阳性表达率均与肺癌组织学类型、淋巴结转移及病理分期无明显关系 (P >0 .0 5)。结论　p53、p2 7和bcl 2基因过度表达可能与NSCLC的发生、发展有关     

p53反义RNA对人肺癌细胞表型和顺铂敏感性的影响

目的 研究外源p53反义RNA对有p53基因248密码点突变的人肺癌细胞系恶性表型和顺铂敏感性的影响。方法 构建p53反义RNA真核细胞表达载体PEGFP－p53（AS),经酶切图证明反向联结质粒。Lipofectin介导转染有p53基因248密码点突变的人肺癌细胞系801D，经G418筛选获耐受克隆。稀释法建立单细胞克隆系，应用PCR检测外源基因，荧光显微镜检测细胞绿色荧光蛋白表达，p53单抗免疫组化染色检测p53突变蛋白表达，体外集落形成实验检测细胞生长，流式细胞仪检测细胞周期，MTT法检测细胞对顺铂药物敏感性。结果 酶切图证明了p53-cDNA反向联结于质粒，构建了PEGFP－p53(AS),并建立了转染单细胞克隆系PEGFP－p53(AS)-801D及空载细胞系PEGFP－801D。PCR检测外源p53基因和neo基因存在于转染细胞系，而荧光显微镜下发现其胞浆有绿荧光蛋白表达。免疫组化染色p53突变蛋白在801D细胞系为阳性，而PEGFP－p53(AS)-801D为阴性，证明外源反义p53在转染细胞稳定表达并封闭内源突变蛋白表达。与母系相比，PEGFP－p53(AS)-801D集落形成抑制率为61％（P＜0．01），流式细胞检测该细胞系G1期细胞数明显增中，出现G1期阻滞的表现。MTT检测PEGFP－p53(AS）－801D对顺铂比母系更为敏感。结论 有p53基因248密码点突变的801D细胞恶性增殖明显，对顺铂耐药，外源p53反义RNA可封闭突变蛋白表达，抑制细胞体外恶性增殖，增加对顺铂的药物敏感性。转染p53反义RNA可抑制p53突变的恶性表型或恢复野生型p53基因功能。     

血清p53抗体水平与肺癌临床指标关系的研究

目的：通过对肺癌患者血清Ｐ５３抗体水平与肺癌临床指标关系的研究，探讨血清ｐ５３抗体在肺癌中的临床意义。方法对６８例肺癌患者应用ＥＬＩＳＡ法检测血清Ｐ５３抗体滴度，经酶联免疫检测仪测吸光值Ｅ４５０，计算抗体指数，进行统计学分析。结果６８例中阳性３２例，阳性率为４７．１％，血清Ｐ５３抗体水平与肺癌的一般临床特征，如性别、分期、吸烟指数、既往治疗均无关，而与肺癌的病理类型和肿块大小有关。结论Ｐ５３抗体的     

PCR—SSCP法检测非小细胞肺癌p53基因的突变

目的 分析原发性非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中ｐ５３基因５～８外显子点突变发生及意义。方法 动用聚合酶链反应－单链构象多态性分析方法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法）进行检测。结果 发现８例肺良性疾病均无点突变发生,４０例ＮＳＣＬＣ中１９例（４７．５％）有点突变发生,点突变发与性别,年龄,组织学类型和组织发级无明显相关性（Ｐ〉０．０５）,但与临床分期和淋巴结累及状态明显相关（Ｐ〈０．０１,Ｐ〈０．０５）。Ｘ