寡核苷酸药物及生物标志物的生物分析研究进展

寡核苷酸已成为多种疾病诊断和治疗的候选药物。寡核苷酸药物及其代谢物、生物标志物的定性定量分析是药物开发和评估所必需的,良好的分析方法有利于控制药品质量及准确定量药品浓度。本文主要探讨了逆转录-实时荧光定量PCR (RT-qPCR)、液相色谱-荧光(LC-FL)、液相色谱-质谱联用（LC-MS/MS）、液相色谱-高分辨质谱联用（LC-HRMS）在寡核苷酸药物和生物标志物的应用及各自的优缺点,旨在概述目前现有寡核苷酸药物和生物标志物的生物分析方法,以期为从事寡核苷酸诊断和治疗药物的研发、分析人员及企业提供参考,以期提高此类新药或仿制药一致性评价分析的水平。     

二维液相色谱法测定人血清中万古霉素浓度及不同检测方法的比较

目的 建立全自动二维液相色谱法（2D-LC-UV）测定人血清中万古霉素浓度,并研究不同检测方法对万古霉素测定浓度的影响。方法 建立2D-LC-UV法测定万古霉素血药浓度,方法验证后应用于226份治疗药物监测（TDM）样品的测定,并与液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）和化学发光微粒子免疫检测法（CMIA）测定结果进行对比。采用线性回归和Bland-Altman法分析不同检测方法测定万古霉素浓度的差异。结果 2D-LC-UV与LC-MS/MS、CMIA的相关性良好,回归方程分别为Y_2D-LC-UV=0.88×X_LC-MS/MS+1.38（R²=0.938 3）,Y_2D-LC-UV=1.03×X_CMIA+0.22（R²=0.910 4）,Bland-Altman分析显示2D-LC-UV与LC-MS/MS、CMIA的一致性均良好,平均偏差分别为3.64%和-2.40%。结论 2D-LC-UV法稳定可靠,可作为万古霉素TDM的测定方法。三种方法测定万古霉素浓度的...     

LC-MS/MS法和EMIT法测定人血清中丙戊酸浓度的对比研究

目的:比较液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法与酶放大免疫(EMIT)法测定人血清中丙戊酸(VPA)浓度的差异,为临床治疗药物监测提供参考。方法:分别采用LC-MS/MS法和EMIT法对144份住院或门诊患者血清样品中的VPA浓度进行检测,采用配对t检验、Pearson相关性分析和Bland-Altman偏差图等方法对其检测结果的差异进行评价。结果:LC-MS/MS法和EMIT法的检测结果呈正相关(r=0.924,P<0.05);两者的回归方程为c_(EMIT)=0.920 7c_(LC-MS/MS)-1.114 4(r=0.924);LC-MS/MS法和EMIT法测得的VPA平均血药浓度分别为(49.9±21.2)、(54.9±21.3)μg/m L,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);EMIT法检测结果比LC-MS/MS法偏高8.3μg/mL,95%置信区间为(-13.6,18.7)。结论:LC-MS/MS法和EMIT法测定人血清中VPA的浓度相关性良好,但检测结果有一定的差异,建议同一患者长期监测应选用同一种方法。     

LC-MS/MS技术在蛋白质药物定量分析中的应用

近年来，蛋白质药物已经成为全球制药业的研发热点。建立灵敏、准确、高通量的蛋白质药物定量分析方法，是进行蛋白质药物研究的关键前提，也是蛋白质药物研究的难点。随着液相色谱串联质谱技术（LC-MS/MS）的发展，其在蛋白质药物定量分析中起着越来越重要的作用。本文首先综述了蛋白质药物的分类，然后比较了LC-MS/MS技术与传统配体结合测定方法（LBA）在蛋白质药物分析中的优缺点，以及分析了LC-MS/MS技术在蛋白质药物定量分析中的常见问题、解决方法、应用方向等。最后预测，短时间内LC-MS/MS 不会完全取代传统的LBA方法，随着LC-MS/MS技术和生物化学技术的充分结合，蛋白质药物分析将会得到飞速的发展。     

串联质谱在生物样品手性药物立体选择性定量测定中的应用

液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)的选择性和灵敏度较高,广泛应用于直接拆分或定量测定生物样品中的手性药物.超临界流体色谱(SFC)因其在质谱兼容和分析速度方面优于液相色谱,使得SFC-MS/MS成为一种新的手性药物立体选择性定量测定技术.本文综述了LC-MS/MS法和SFC-MS/MS法在生物样品手性药物立体选择性定量测定中的应用.     

养精种玉汤治疗卵巢储备功能下降的物质鉴定及网络药理研究

目的 基于液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)、网络药理学与动物实验，探讨养精种玉汤治疗卵巢储备功能下降(DOR)的机制。方法 采用LC-MS/MS对化合物进行鉴定，口服生物利用度(OB)筛选。DrugBank、GenCards、OMIM数据库用于收集药物和疾病靶点信息，STRING平台用于获取蛋白相互作用信息，Metascape平台进行基因本体(GO)分析及京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。Cytoscape用于可视化网络，Autodock用于验证分子对接。结果 共鉴定出164个具有良好OB的化合物，预测出239个高度可靠的靶点。药物和疾病共同靶点与IL-8信号通路高度相关。富集分析显示NF-κB、PI3K等途径是潜在的机制，CDK6、GSK3B、INS、PTGS2、RXRA、EGFR、CXCL8、BCL2是潜在靶点基因，芹黄素具有最广泛的靶点信息。分子对接表明预测结果可信度较高(结合能<7.0 KJ·mol^-1)。结论 养精种玉汤可通过多靶点、多途径调控IL-8信号通路，芹黄素是具有潜力的药物单体。     

地高辛血药质量浓度测定在个体化给药中的指导意义

目的比较分析LC-MS/MS和MEIA检测患者地高辛血药质量浓度,为地高辛个体化给药提供指导。方法分别采用LC-MS/MS和MEIA法,检测122例服用地高辛患者的血药质量浓度,验证LC-MS/MS法的准确度、精密度以及定量下限,计算其回归曲线、基质效应指标和提取回收率,考察样本在检测期间的稳定性;同时比较2种方法对质控样本和血浆样本的检测结果。结果采用LC-MS/MS法测定地高辛血药质量浓度,地高辛血药质量浓度在0.05～10.0 ng·mL~(-1)范围内,准确度高,定量限低。样品稳定。与MEIA法比较,LC-MS/MS法虽有较高的准确性,但无显著性差异(P>0.05),而MEIA法与LC-MS/MS法的结果有显著性差异(P<0.05)。结论 LC-MS/MS法是一种较优的地高辛血药质量浓度检测方法,其准确度、精密度均较高,误差范围小,能为临床地高辛的有效使用提供参考依据,促进合理的个体化治疗。     

液相色谱-串联质谱法监测不同负荷方案替考拉宁治疗骨髓炎患者的血药浓度比较

目的建立并验证液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测替考拉宁血浆浓度，并分析我院不同负荷方案骨髓炎患者的替考拉宁谷浓度(C_min)达标情况。方法建立LC-MS/MS法测定替考拉宁的C_min，考察方法的专属性、标准曲线、精密度与回收率、基质效应和稳定性。收集43例接受替考拉宁治疗的骨髓炎患者，根据给药方案不同分为2组：试验组A患者接受3次负荷剂量400 mg,q12h，试验组B患者接受6次负荷剂量400 mg,q12h，同时进行治疗药物监测(TDM)。两组均于第4天维持剂量给药前30 min采样，检测患者替考拉宁C_min值，比较两组替考拉宁C_min达标情况。结果血浆中替考拉宁标准曲线方程为Y=0.032 4X+0.000 886(r=0.996 4)，在0.20～50.00μg·m L^-1内线性关系良好；质控样本的准确度为94.71%～112.50%内；日内、日间RSD为3.17%～15.19%；提取回收率为81.22%～91.26%；基质效应为93.54%～119.78%...     

头孢他啶/阿维巴坦治疗药物监测研究进展

头孢他啶/阿维巴坦(CAZ/AVI)是一种新型头孢菌素/β-内酰胺酶抑制剂复合制剂,为了在不同类型的患者中达到更好的疗效,降低耐药风险和不良反应发生率,临床上常采用治疗药物监测(therapeutic drug monitoring, TDM)来监测CAZ/AVI的体内药物浓度。本文基于近年来国内外的相关文献,对CAZ/AVI实施TDM的意义、目前的TDM方法、药动学/药效学监测指标以及在特殊人群中实施TDM的现状进行了综述,以期为CAZ/AVI的个体化治疗提供建议。     

长春新碱开展治疗药物监测的必要性和可行性

长春新碱通过干扰有丝分裂纺锤体中的微管，抑制肿瘤生长，常应用于急性淋巴细胞白血病、霍奇金和非霍奇金淋巴瘤、肾母细胞瘤等疾病的综合治疗方案。然而，长春新碱患者间个体差异大、治疗窗狭窄，药物不良反应复杂多变，为临床应用带来了挑战。基于体质量或体表面积的传统治疗方案可能导致次优暴露或严重的周围神经病变，实施治疗药物监测(TDM)可以优化治疗剂量，达到最佳治疗效果。本文就长春新碱开展TDM的必要性和可行性进行探讨，以期为临床实施长春新碱的个体化治疗提供参考。     

抑郁大鼠海马组织的比较蛋白质组学研究

目的比较慢性不可预见性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)大鼠与健康大鼠的海马组织,筛选差异表达蛋白质。以期从蛋白质组学角度阐明其发病机制,并为寻找生物标志物提供靶标。方法采用CUMS建立大鼠抑郁模型。运用8标ITRAQ技术,结合2D LC-MS/MS分析CUMS大鼠与健康大鼠的海马组织差异表达蛋白质。结果共鉴定出5 109个蛋白,差异蛋白33个,其中8个蛋白表达上调,25个蛋白表达下调。结论 ITRAQ结合LCMS/MS技术能快速有效地进行蛋白质组学研究,为我们研究抑郁症的发生、发展机制以及发现新的生物标志物提供了有力平台。     

抗肿瘤药物的治疗药物监测研究

尽管治疗药物监测(TDM)已广泛应用于多个疾病治疗领域,但在抗肿瘤药物方面的应用仍较为局限。近年来,抗肿瘤药物的暴露量与其疗效和药物不良反应之间的相关性研究越来越多,这有利于抗肿瘤药物个体化精准给药。本文综述了细胞毒类和靶向性(小分子和大分子)抗肿瘤药物的治疗药物监测现状,为肿瘤药物个体化用药提供参考。     

全国医疗及相关机构治疗药物监测项目开展情况调查

目的 对2021年度全国医疗及相关机构开展治疗药物监测(TDM)的检测项目、检测方法及样本量进行问卷调查和分析,为TDM检测项目开展、试剂盒研发和室间质评等质量控制活动的开展提供参考。方法 基于网络平台发起问卷调查,对回收的问卷双人核对录入Excel建立数据库,并对无效数据进行补充调查或剔除。随后基于锁库的数据采用柱状图结合数据表格方式对开展单位的上报数量、主要检测方法、总体样本量水平及各药物类别下各品种检测量进行汇总、分析。结果 (1)TDM在临床上具备较大开展需求,其中精神类药物、抗菌药物、免疫抑制药和抗肿瘤药为开展量较大的药物类别;(2)TDM临床检测方法多样,其中基于化学发光免疫分析(CLIA)、电化学发光免疫分析(ECLIA)原理的免疫分析方法和基于高效液相色谱法(HPLC)、高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)的色谱分析方法应用普遍。结论 我国医疗机构对TDM检测有着广泛需求。目前各检测单位间存在多种检测方法并行及以色谱分析为代表的实验室自建方法(LDT)大量应用的状况。室间质量评价计划和室内质量控制方法的完善仍是未来TDM质量管理的重点。     

浅谈医院开展治疗药物监测的临床意义

目的:通过对治疗药物监测(TDM)的内容、我国现状的简介和临床意义的阐述,加深临床对TDM的了解,提高认识。方法参阅各种文献报导,全面阐述了医院开展TDM的临床意义。结果显示开展TDM对指导临床合理用药,提供个体化给药方案,避免药物不良反应等具有重大意义。结论医院应重视TDM工作,尽快建立和发展治疗药物监测工作,为临床提供更优质的服务。     

定量系统药理学在抗肿瘤药物研究中的进展

肿瘤是全球死亡率最高的疾病之一。现有临床研究缺乏针对抗肿瘤药物疗效动态变化的定量描述,为给药方案的制订带来了困难。基于定量系统药理学(quantitative systems pharmacology, QSP)的研究,可通过整合肿瘤生长与体内分子、细胞之间的相互作用,定量考察药物与疾病之间的网络关系,预测抗肿瘤药物的疗效、毒性,探索效应机制及筛选生物标志物,为肿瘤患者的精准治疗提供新方法。本文介绍了QSP的定义、研究方法及在抗肿瘤药物中的典型案例,为QSP在抗肿瘤药物中的研发和应用提供参考。     

不同检测系统雌二醇测定结果一致性评价及临床应用

目的比较不同检测系统血清雌二醇浓度结果相关性及一致性。方法收集 2022年 6—11月北京航天总医院检验科剩余血清样本 49份,采用液相色谱串联质谱法( LC-MS/MS)、雅培 i2000SR、罗氏 e601、迈瑞 CL6000i全自动发光免疫分析仪及其配套试剂(标为 A~C)检测 49份临床血清样本。参考美国临床和实验室标准化协会 EP-15A3方案评价方法的不精密度, LC-MS/ MS法为参考系统,系统 A、B、C为待评价系统,以 Passing-Bablok回归分析两种组合方法的相关性,绘制 Bland-Altman图比较医学决定水平处的偏移,通过一致性相关系数( CCC)评估方法之间的一致性。结果 3种检测系统的实验室内不精密度均小于说明书标示值。各化学发光法检测系统雌二醇结果与 LC-MS/MS结果相关性较好,但仅系统 A与 LC-MS/MS法相比的斜率 95%置信区间( CI)包含 1,3种方法截距的 95%CI均不包含 0。与 LC-MS/MS法相比,系统 A和系统 B的平均相对偏差低于生物学变异最低偏移要求( 10.03%)。系统 A和 B在低值医学决定水平处的偏移不可接受,系统 C在所有医学决定水平处的偏移均不可接受。一致性分析表明,系统 A与 LC-MS/MS的一致性极好,系统 B和 C与 LC-MS/MS的一致性好。结论 3种化学发光免疫法检测系统与 LC-MS/MS法一致性良好,但在低浓度水平雌二醇的检测偏差较大。提高免疫试剂特异性,完善雌二醇检测溯源体系,提高血清样本雌二醇检测结果的准确性,为临床精准医疗提供帮助。     

对治疗药物监测工作的思考和建议

治疗药物监测(TDM)在我国的发展已经有近30年,监测的技术、方法、药物类别等已有很大发展,其为临床治疗提供的价值也逐渐被认可。为契合近年来的医疗改革精神,推动TDM工作进一步发展,为临床治疗提供更多的支持与帮助,在总结TDM工作已有成绩和经验的基础上,有以下的思考和建议。     

治疗药物监测的方法学研究进展

治疗药物监测(TDM)指的是在转向药学技术服务,保障患者使用药物安全的前提之下逐渐发展起来。在临床当中,因为人体差异以及其他相关因素,患者通过相同途径采取相同剂量药物以后,临床治疗反应却是存在较大差异。治疗药物监测就是利用定量分析生物样本当中的药物以及代谢产物浓度,正确指导临床使用药物,进而保证使用药物具有安全有效性。群体药动学方法是将药动学参数与疗效联系在一起,有利于正确指导个体化治疗,是治疗药物监测的主要工具。LC-MS在TDM工作当中的作用日趋重要。有限采样法通过有限点的血药浓度值对药物暴露量给予准确估算,进而使TDM更加经济适应,可以在临床当中广泛应用,同时方法学研究的不断进步对TDM的工作发展起到良好的促进作用。     

分子影像技术在抗肿瘤药物研发中的应用进展

目的:为借助分子影像技术提高抗肿瘤药物研发效率、降低研发成本提供参考。方法:以"分子影像技术""药物研发""肿瘤诊断""生物标志物"等为关键词,通过检索和筛选中国知网、中国国家图书馆、PubMed、Web of Science等数据库收录的2017年4月以前发表的分子影像技术用于抗肿瘤药物研发的最新文献,进行整理、归纳和综述。结果与结论:近年来分子影像技术已取得重大进展,正越来越广泛地应用于抗肿瘤药物研发,并在药物生物分布标志物(药物由血液循环运送到体内各脏器的过程)、药效学生物标志物(药物对机体的作用及作用机制)、疾病生物标志物(用于疾病诊断、判断疾病分期或者用来评价新药或新疗法在目标人群中的安全性及有效性)及患者选择生物标志物(识别可能对治疗有反应的患者,指导治疗)等方面发挥重要作用。分子影像技术的成功应用,有望提高抗肿瘤药物开发全链条的效率和收益,其潜在价值有待进一步开发。     

LC-MS/MS法同时测定耐碳青霉烯肠杆菌感染重症患者血浆中替加环素及阿米卡星的药物浓度

目的:建立同时测定重症加强护理病房(ICU)中耐碳青霉烯肠杆菌(CRE)感染患者替加环素及阿米卡星的血浆药物浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法，并将其应用于治疗药物监测(TDM)中。方法:血浆样品加入内标米诺环素及卡那霉素的甲醇溶液及氢氧化钠溶液，采用乙酸乙酯与二氯甲烷混合溶液提取，取上清液氮气吹干，加入甲醇复溶后进样分析。采用Waters Cortecs C₁₈(100 mm×4.6 mm, 2.7μm)色谱柱，流动相A为甲醇，流动相B为甲酸-甲酸铵水溶液，流速0.3 mL·min^-1,进样量2μL。检测以电喷雾离子源，正离子扫描，多反应监测模式进行。结果:替加环素及阿米卡星在ICU患者血浆中的线性范围及定量限均符合测定要求，批内、批间精密度、提取回收率、基质效应及稳定性均<15%。收集到10例同时接受替加环素(50 mg,每12 h服用1次)和阿米卡星(0.8 g,每天服用1次)治疗的CRE感染重症患者样本，2种药物血浆中稳态谷浓度分别为(88.45±98.97)ng·mL^-1及(2.98±1.5...