干细胞标志物乳腺癌耐药蛋白在舌癌淋巴道转移裸鼠模型中的表达及其意义

目的:探讨干细胞标志物乳腺癌耐药蛋白(BCRP)在舌癌永生化细胞系细胞淋巴道转移裸鼠模型中的表达及其意义。方法:收集裸鼠舌癌淋巴道转移模型中的完整淋巴结进行原代细胞培养、分离、纯化舌癌细胞,并进行连续传代培养建立舌癌永生化细胞系Tca8113-Ml。通过裸鼠爪垫注射Tca8113-Ml细胞建立淋巴结转移实验组,并设爪垫注射0.9%氯化钠注射液为对照组;4周后收集2组完整的淋巴结,采用免疫组织化学染色法检测淋巴结组织中BCRP的表达情况。结果:免疫组织化学染色显示,在爪垫注射癌细胞4周后收集的淋巴结中,BCRP在实验组中阳性率为27%～35%;在对照组中无表达。结论:癌干细胞是癌转移与复发的"种子"细胞,观察舌癌淋巴结转移灶干细胞标志物的表达情况,可为进一步研究癌干细胞与癌转移以及癌耐药的相关性提供理论依据。     

基于TCGA数据库探究膀胱癌关键基因的表达及预后作用

目的探究膀胱癌(BC)中基因的差异化表达及其预后作用。方法从TCGA数据库中下载BC的基因表达数据,利用R软件筛选出肿瘤与正常组织间差异表达基因,并进行富集分析,评估其潜在生物学功能及信号通路。利用在线数据库STRING11.0构建了编码蛋白相互作用网络,进一步筛选关键基因。通过UALCAN、GEPIA数据库验证关键基因在BLCA中的表达水平。随后利用在线工具Kaplan Meier Plotter分析他们的预后情况。结果得到1 538个基因存在差异表达,其中有1 088个上调,450个下调,富集分析发现差异基因主要与信号转导、物质代谢、免疫反应等信号通路相关。10个关键基因中,在BC中白细胞介素-6表达越高预后越好(HR=0.46,P < 0.05),间皮素表达越高预后越差(HR=2.27,P < 0.05)。结论BC中存在众多差异表达的基因,他们对疾病进展存在影响,发现并利用他们在BC个体化治疗存在重要意义。     

血管内皮生长因子及其受体在舌癌细胞中表达及意义

【目的】探讨人舌癌细胞株血管内皮生长因子(VEGF)及其受体KDR、Flt-1的表达,进一步认识VEGF在舌癌生长过程中的作用机制。【方法】以人脐静脉血管内皮细胞ECV304和小鼠成纤维细胞系L929作为对照,应用免疫组化染色和RT-PCR方法,检测体外培养的人舌癌细胞系Tca8113、GNM中VEGF及其受体的表达。【结果】GNM、Tca8113中皆有VEGF表达,Tca8113表达KDR和FLT-1,GNM表达KDR。【结论】在舌癌的生长过程中可能存在VEGF的自分泌机制。     

舌癌组织中MMP-2、9的表达及意义

目的：研究MMP-2、9在人舌鳞癌组织中的表达及意义。方法：应用免疫组化法检测98例舌鳞癌和18例舌正常组织标本中MMP-2,9蛋白的表达,统计分析MMP-2,9的阳性表达与患者临床病理因素的关系。结果：①98例舌鳞癌标本中MMP-2、9的阳性表达率分别是57．1％（56／98）和61．2％（60／98）。正常舌组织中MMP-2,9则均为阴性表达,和舌癌组织相比,差异有显著性（P=0．0000）;有颈淋巴结转移者MMP-2,9的阳性率显著高于无转移者（P=0．015,0．048）;Logistlc回归分析结果表明,MMP-2、9的阳性表达均为影响患者肿瘤复发的独立危险因素（P=0．026,0．002）;MMP-9表达还与隐匿性淋巴结转移相关（P=0．044）。结论：Ⅳ塑胶原酶在舌鳞癌中有较高的阳性表达率。Ⅳ型胶原酶的蛋白表达与舌鳞癌患者的颈淋巴结转移及肿瘤复发密切相关,MMP-9表达还与隐匿性淋巴结转移相关。     

香烟烟雾促进膀胱癌干细胞的自我更新和干性基因的表达

目的: 探讨香烟烟雾对膀胱癌干细胞自我更新能力和干性基因表达的影响。方法: 用不同浓度（0%、0.1%和0.25%）的香烟烟雾悬液处理人膀胱癌细胞UM-UC-3来源的膀胱癌干细胞4 d,显微镜下观察膀胱癌干细胞球大小及数量,蛋白质印迹检测干性基因CD44、ALDH1-A1、OCT-4、Nanog等的蛋白表达。结果： 0.1%和0.25%的香烟烟雾悬液能够促进膀胱癌干细胞细胞球的形成,香烟烟雾处理组的细胞球明显大于对照组;蛋白质印迹结果显示,0.1%和0.25%的香烟烟雾悬液处理的膀胱癌干细胞CD44、ALDH1-A1、OCT-4、Nanog表达显著增加。结论： 香烟烟雾能够促进膀胱癌干细胞的自我更新和干性基因的表达。     

抑癌基因P^53在舌癌及癌前病变中的表达

研究抑癌基因Ｐ＾５３在舌癌及癌前病变中的表达。方法：采用免疫组化技术对正常舌粘膜，单纯性上皮增生，轻，中，重度不典型增生，以及舌鳞癌进行了抑癌基因Ｐ＾５３表达相关分析。结果：正常舌粘膜基底细胞中偶见阳性细胞，单纯性上皮增生中基底层细胞阳性率增加；轻，中，重度不典型增生Ｐ＾５３阳性细胞逐渐增多；舌鳞癌阳性率为８０％。     

胚胎干细胞关键因子Nanog在膀胱癌中的表达及与肿瘤干细胞的关系

目的:检测胚胎干细胞(Embnyonie stem cell,ES)自我更新的关键调节因子Nanog在人膀胱癌组织中的表达,探讨Nanog的表达在膀胱癌发生发展中的意义及与肿瘤干细胞的关系.方法:采用半定量RT-PCR检察32例膀胱癌Nanog的表达,32例癌旁非癌膀胱组织,用免疫组织化学方法在蛋白质水平检测Nanog的表达.结果:Nanog在膀胱癌中的表达率为84.38%(27/32).而在非癌膀胱组织低水平(P<0.01)表达(5/32),免疫组织化学方法分析结果显示:Nanog主要的集中在肿瘤组织的细胞胞核,在非癌组织中没有或低免疫反应性,Nanog表达的阳性细胞率及强度与膀胱癌的分级、复发和转移无明显相关性(P>0.05)>.结论:膀胱癌中有少量细胞表达伞能干细胞标志物Nanog,这些细胞很可能是膀胱癌干细胞,这将为揭示膀胱肿瘤干细胞的存在并分离和鉴定膀胱肿瘤干细胞提供依据,Nanog在膀胱癌中的表达表明胚胎基因与肿瘤的发生发展关系密切.     

基于TCGA和Oncomine数据库前列腺癌关键基因的筛选

目的利用癌症和肿瘤基因图谱（TCGA）和Oncomine数据库筛选前列腺癌（PCa）的关键基因。方法从TCGA数据库中下载PCa的RNA测序数据,包括PCa组织499例,癌旁正常组织52例。利用R软件筛选差异表达基因,采用DAVID、STRING数据库进行基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析并构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络;利用Cytoscape软件筛选PPI网络中连接程度前10位Hub基因,采用Oncomine数据库获取Hub基因与PCa相关数据,通过Meta分析获取关键基因。结果最终筛选出PCa差异表达基因919个,其中表达上调基因424个,表达下调基因495个。GO分析显示,差异表达基因生物学过程主要富集于突触传递、细胞间信号传导、跨膜转运和细胞分化,细胞组成主要富集于细胞外空间、细胞外区域、质膜的组成部分和质膜,分子功能主要富集于序列特异性DNA结合、钙离子结合和结构分子活性;KEGG通路分析显示,差异表达基因主要富集于神经活性配体-受体相互作用、药物代谢-细胞色素P450和细胞色素P450代谢异种生物。PPI网络中前10位Hub基因分别是CDC20、CCNA2、BUB1B、HJURP、AURKB、TTK、KIF4A、MKI67、CENPA、NCAPH。最终筛选出PCa关键基因4个,分别是HJURP、KIF4A、CENPA、NCAPH。结论基于TCGA和Oncomine数据库获取Pca关键基因4个,包括HJURP、KIF4A、CENPA、NCAPH。     

人舌癌细胞株Tca8113中侧群细胞的分离及其ABCG2的表达

目的 通过流式细胞技术分选人舌癌细胞株Tca8113中的侧群细胞(SP细胞)、非侧群细胞(MP细胞),检查ABCG2蛋白在SP细胞、MP细胞、T(Tca8113)细胞中的表达情况,并探讨其意义.方法 用流式细胞仪检测SP细胞、MP细胞、未分选Tca8113细胞中的ABCG2表达情况.结果 人舌癌细胞株Tca8113中存在SP细胞,ABCG2在Tca8113 SP细胞中较高表达(表达率13.16%),在MP细胞中几乎不表达(表达率1.07%)、在Tca8113细胞中少量表达(表达率3.29%).结论 人舌癌细胞株Tca8113中的SP细胞较高表达ABCG2,通过ABCG2+分选侧群细胞,将有可能进一步分选纯化类肿瘤干细胞,为今后分离肿瘤干细胞提供有效手段.     

桑辛素对喉癌干细胞干性表型调控的作用研究

  目的  探索桑辛素对喉癌干细胞干性表型调控的影响。  方法  流式细胞仪分选并检测CD133+喉癌干细胞比例;肿瘤球形成实验检测CD133+喉癌干细胞的自我更新能力;Transwell实验检测CD133+喉癌干细胞的迁移能力;改良MTT实验检测化疗药物对CD133+喉癌干细胞的细胞毒性作用;免疫荧光染色、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）及Western blot检测CD133+喉癌干细胞的干细胞标志物表达;在不同浓度的桑辛素处理CD133+喉癌干细胞后（以桑辛素0 μmol/L为对照）,通过肿瘤球形成实验、Transwell实验、改良MTT实验及Western blot,分别检测CD133+喉癌干细胞的自我更新能力、迁移能力、化疗药物的细胞毒性作用及干细胞标志物表达变化。  结果  流式细胞仪分选结果显示,CD133+喉癌干细胞占喉癌细胞的比例为（3.50±0.34）%;经过培养富集后,其比例可达（93.20±5.23）%。肿瘤球形成实验结果显示,与喉癌细胞相比,CD133+喉癌干细胞具有增强的自我更新能力 (P<0.001);Transwell实验显示,与喉癌细胞相比,CD133+喉癌干细胞的迁移能力增强（P<0.05）;改良MTT实验结果显示,与喉癌细胞相比,CD133+喉癌干细胞抵抗化疗药物（5-氟尿嘧啶及顺铂）的细胞毒性作用（P<0.05）;免疫荧光染色、RT-qPCR及Western blot结果显示,干细胞标志物（CD133、ALDH1、Sox2、ABCG2及N-cadherin）在CD133+喉癌干细胞中呈高表达水平。通过不同浓度的桑辛素处理CD133+喉癌干细胞,其自我更新能力降低（P<0.05）;迁移能力亦下降（P<0.05）;此外,桑辛素处理的CD133+喉癌干细胞对化疗药物的细胞毒性作用更加敏感（P<0.05）;Western blot结果显示,不同浓度的桑辛素处理的CD133+喉癌干细胞,其上述的干细胞标志物表达水平下调（P<0.05）。  结论  CD133+喉癌干细胞具有干性表型特征;桑辛素可减弱喉癌干细胞的干性表型,可能与下调其干细胞标志物表达相关。     

干细胞治疗甲状腺癌的探索

目的:对肿瘤细胞的起源、甲状腺肿瘤细胞表面标记物的表达及与肿瘤恶性程度的关系进行研究,探索干细胞在治疗甲状腺癌的临床应用。结果:甲状腺癌的发生是一个多基因、多因素、多阶段的复杂病理过程。甲状腺癌组织中存在肿瘤干细胞,对肿瘤的产生、发展、复发、转移都发挥着关键的作用。鉴定和识别对肿瘤细胞的发生发展起关键作用的标记物对探索干细胞治疗甲状腺癌至关重要。结论:甲状腺肿瘤的形成是多重基因、多种致瘤通路作用的结果,随着发病率的增加和病情的复杂多样化,传统的治疗方法一直没有突破性的进展。甲状腺癌的发生、转移、以及抗放化疗和具有干细胞特性的细胞的调控密不可分。干细胞已成为治疗甲状腺癌新方法的主要技术手段之一。能否可以通过干预其中具有干细胞特性的细胞来治疗甲状腺肿瘤仍需深入的研究。     

基于TCGA数据库探索POLA2基因在肝癌中的表达及其与预后的相关性

目的 探索DNA聚合酶α亚基B（POLA2）在肝癌中的表达,分析POLA2表达与肝癌患者临床病理特征和预后的关系。方法 利用肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库和qRT-PCR技术分析POLA2在肝癌组织及肝癌细胞中的表达水平,利用人类蛋白表达图谱（HPA）数据库评估POLA2蛋白在肝癌组织中的表达水平;应用ROC曲线评估POLA2对肝癌诊断的敏感性,采用Logistic回归分析POLA2表达与肝癌临床病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier法、单及多因素Cox回归模型分析POLA2的表达与肝癌患者预后的关系。并进一步寻找TCGA数据库中POLA2共表达基因,进行基因本体（GO）生物功能及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。同时通过肿瘤免疫评估资源（TIMER）数据库分析POLA2与肝癌免疫浸润的相关性。结果 POLA2在肝癌组织和肝癌细胞中呈显著高表达（均P<0.05）,ROC曲线下面积为0.954。POLA2表达与肝癌TNM分期、组织学分级和临床分期均密切相关（均P<0.01）,单及多变量Cox分析表明高表达的POLA2可作为肝细胞癌（HCC）的独立生物学标志物。GO生物功能及KEGG通路富集分析提示,POLA2基因可能参与保持解旋酶活性和DNA依赖的ATP酶活性,主要富集于细胞周期、DNA复制和范可尼贫血通路。TIMER数据库分析显示POLA2与免疫浸润细胞（Th2细胞、B细胞、CD4+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞）具有显著正相关（均P<0.01）。结论 POLA2表达与肝癌患者预后及免疫浸润具有相关性,可作为肝癌诊断及预后评估的重要生物学靶标。     

乳腺癌干细胞的检测及Hedgehog信号通路关键分子的表达

目的:探讨乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中是否存在乳腺癌起始细胞(CD44+/CD24-/low)亚群;并分析Hedgehog信号通路在CD44+/CD24-/low乳腺癌起始细胞亚群中的表达.方法:应用荧光激活细胞分选方法检测与分选MCF-7和MDA-MB-231中的CD44+/CD24-/low细胞亚群和非CD44+/CD24-/low细胞亚群,并在激光共聚焦显微镜下进行观察确认.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测CD44+/CD24-/low细胞亚群和非CD44+/CD24-/low细胞亚群中Hedgehog信号通路重要基因PTCH(human patched gene)、SHH(sonic Hedgehog)、Gii-1(glioma-associated oncogene homoglog-1)和SMOH(smoothened homolog)的表达情况.结果:乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中CD44+/CD24-/low亚群,比例分别为(1.70±1.43)%和(94.2±1.2)%.乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231的CD44+/CD24-/low亚群中Hedgehog信号通路处于明显活化状态,其中Hedgehog信号通路中重要下游信号分子Gii-1在MCF-7和MDA-MB-231细胞系CD44+/CD24-/low细胞亚群中的表达要明显高于非CD44+/CD24-/low细胞亚群(P分别为0.007和0.005).结论:乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中存在CD44+/CD24-/low干细胞标志细胞亚群,其中Hedgehog信号通路处于明显活化状态.     

干细胞基因Oct4和Bcl-2在宫颈癌及其癌前病变组织中的表达及意义

目的探讨干细胞基因Oct4及Bcl-2在宫颈癌及其癌前病变中的表达及意义。方法采用HE、免疫组织化学、RT-PCR及Westernblot检测Oct4及Bcl-2蛋白在正常宫颈组织、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、宫颈原位癌及浸润癌(包括高分化、中分化、低分化)中的表达,并进行统计分析。结果 Oct4在正常宫颈组织\CIN\宫颈癌组织中表达逐渐增加,其表达率依次为20%(2/10)、50%(15/30)、90%(18/20)。同样,Bcl-2在正常宫颈组织中的阳性表达率为10%(1/10),在CIN中为40%(12/30),而在宫颈癌中高达70%(14/20)。在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌中Bcl-2的表达呈现逐渐增强的趋势,且在CINⅢ中Bcl-2表达高于CINⅠ/Ⅱ。Oct4和Bcl-2蛋白在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌中的表达两两比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),但与宫颈癌病理类型无关。结论 Oct4与Bcl-2参与了宫颈癌的发生及发展,Oct4和Bcl-2联合检测有助于为宫颈癌及癌前病变的临床诊治提供一定的理论依据。     

基于GEO和TCGA数据库对肺腺癌差异表达基因的生物信息学分析

目的：采用生物信息学方法筛选影响肺腺癌（LUAD）的关键基因,分析其生物学功能及其对LUAD预后的影响。方法：于高通量基因表达（GEO）数据库下载GSE118370和GSE136043芯片数据,癌症基因组图谱（TCGA）数据库筛选LUAD相关数据。采用R软件分析共同表达的差异表达基因（DEGs）。采用clusterProfile R包对DEGs进行基因本体（GO）功能富集分析,DAVID数据库进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析,STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络。采用Cytoscape筛选连接度排名前10位的关键基因,GEPIA数据库和人类蛋白质图谱（HPA）数据库分析正常肺组织和LUAD组织中关键基因mRNA和蛋白表达情况及不同分期LUAD组织中关键基因表达情况。关键基因免疫浸润分析和生存分析获取关键基因表达与患者生存期的相关关系。结果：共筛选DEGs 428个。GO分析,LUAD的DEGs在主要富集于上皮-间质转化（EMT）等生物过程（BP）方面、细胞基部等细胞组分（CC）方面和细胞外基质（ECM）结构形成等分子功能（MF）方面。KEGG分析,...     

舌鳞癌干细胞相关差异表达序列标签的生物信息学分析

目的:对利用抑制消减杂交技术获得的舌鳞癌干细胞相关表达序列标签(Expressed squence tag,EST)进行电子克隆及序列分析.方法:利用互联网上的公共数据库及生物信息学分析软件对获得的舌鳞癌干细胞相关差异表达序列标签进行核酸序列和蛋白质序列分析,探索克隆差异表达基因的研究方法和策略.结果:通过电子延伸得到...     

Nanog mRNA在骨肉瘤类肿瘤干细胞中的表达和意义

目的：观察骨肉瘤类肿瘤干细胞中Nanog基因的表达和意义．方法：用无血清培养法从骨肉瘤细胞株U2-OS和MG-63中分离培养悬浮细胞球,免疫磁珠分选Stro-1阳性细胞,反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测Stro-1阳性细胞、Stro-1阴性细胞及悬浮生长细胞中NanogmRNA的表达．结果：Stro-1阳性细胞和悬浮细胞NanogmRNA表达水平为1．69±0．14和1．56±0．18,均高于Stro-1阴性细胞的表达水平（0．19±0．35,P〈0．05）．随着培养时间的延长,悬浮细胞球NanogmRNA的表达比早期悬浮细胞球有所下降（P〈0．05）．结论：骨肉瘤类肿瘤干细胞高度表达NanogmRNA,该基因可能有助于骨肉瘤类肿瘤干细胞自我更新和维持其未分化状态．     

基于TCGA数据库分析GTSE1基因在肺腺癌中的表达及意义

目的:探究G2/S期表达蛋白1(G2 and S phase-expressed protein1,GTSE1)在肺腺癌中的表达情况以及对预后的影响.方法:从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载肺腺癌患者表达谱数据以及临床信息资料,分析GTSE1表达水平与临床指标信息之间的相关性及对预后的影响,并用Cox 比例风险回...     

人前列腺干细胞抗原基因PSCA的扩增及真核表达

目的：从人前列腺癌细胞系中扩增获得目的基因前列腺干细胞抗原（PSCA）,构建真核表达载体并进行真核表达。方法：从人前列腺癌细胞系LNCaP中扩增目的基因PSCA,构建真核表达质粒plRES-neo—PSCA-His,脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞,用RT—PCR及免疫荧光和流式细胞仪分别检测B16细胞中人PSCA基因的mRNA和蛋白表达。结果：得到372bp人PSCA目的基因片段,序列测定证实与GenBank上登录的序列一致。结论：成功构建pIRES—neo—PSCA—His质粒并验证其真核表达,为PSCA在前列腺癌免疫治疗研究中的应用奠定了基础。     

探索肿瘤干细胞起源的进程

近年来,在肿瘤的瘤体研究中发现了与干细胞具有相似的生物学特性和传导调控途径及机制等的一类细胞群体,科学家们命名这种存在于肿瘤细胞群体中的特殊细胞为肿瘤干细胞(cancer stem cell),又称为肿瘤启始细胞(tumor initiating cell,T-Ic),并对其起源进行了一系列的探索试验,本文就其探索过程作一综述。