喀斯特地区树栽与棚栽铁皮石斛中多糖重金属含量比较

目的：分析贵州喀斯特地区仿野生活树附生栽培与大棚栽培铁皮石斛中多糖、5种重金属[铅（Pb）、镉（Cd）、砷（As）、铜（Cu）、汞（Hg）]含量差异及相关性。探讨国内主产区铁皮石斛中4种重金属（Pb、Cd、As、Cu）的分布特征,为铁皮石斛品质评价及食用安全性提供参考。方法：采用苯酚-硫酸法测定铁皮石斛中多糖含量;采用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定Pb、Cd、As、Cu含量;采用原子荧光光谱法测定Hg含量。查阅国内近10年有关ICP-MS测定铁皮石斛中4种重金属含量的文献报道,对文献中4种重金属含量数据进行整理、分析和归纳。采用SPSS 26.0对数据进行相关性和差异性统计分析。结果：研究区内树栽和棚栽铁皮石斛中多糖质量分数均大于25%,棚栽铁皮石斛中多糖含量显著高于树栽铁皮石斛;棚栽铁皮石斛中Cu含量与多糖含量呈显著正相关;树栽铁皮石斛中Cd含量高于棚栽铁皮石斛。研究区内铁皮石斛中5种重金属及全国主产区铁皮石斛中4种重金属平均含量均在安全限量范围内。结论：活树附生栽培与大棚栽培铁皮石斛中多糖和Cd含量差异有统计学意义。重金属对铁皮石斛的污染风险较低。     

铁皮石斛非传统药用部位叶中多糖及5种重金属含量的测定

目的:测定铁皮石斛叶中多糖及5种重金属元素的含量,了解铁皮石斛叶中多糖及重金属含量情况,为更深入研究开发铁皮石斛叶提供实验依据。方法:采用微波消解法进行样品前处理;电感耦合等离子体质谱法测定5种重金属元素的含量;紫外分光光度法测定多糖的含量。结果:9个铁皮石斛叶样品中的多糖含量在9%~19%之间;铁皮石斛叶对重金属元素具有一定的蓄积作用,除1号、8号和9号样品符合限量标准外,其余6个样品均超标。结论:铁皮石斛叶中含有一定量的多糖,对拓宽铁皮石斛的药材来源具有重要的参考价值,但部分样品中重金属含量超标,在进一步开发利用铁皮石斛叶时,应重视重金属元素含量的控制。     

铁皮石斛茎段原球茎的诱导增殖与分化

目的:探讨植物生长调节剂、基本培养基、蔗糖质量浓度以及相关添加物对铁皮石斛茎段原球茎的诱导、增殖、分化以及根部生长等方面的影响。方法:通过正交试验方式,要求没有添加激素下,对铁皮石斛茎段原球茎进行消毒处理、试验培养基的配备、对原球茎进行诱导、对原球茎进行增殖和分化处理、生根的培养等,分析不同植物生长调节剂、基本培养基配比对于茎段原球茎的诱导影响,不同基本培养基、马铃薯泥以及蔗糖浓度增殖分化原球茎效果,以及香蕉泥、萘乙酸(NAA)和马铃薯泥对铁皮石斛茎段原球茎生根效果。结果:1)最适宜诱导铁皮石斛茎段原球茎的培养基组合是NAA 0.1 mg/L+1/2MS(Murashige and Skoog)培养基+6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)4 mg/L。2)铁皮石斛茎段原球茎增殖最佳的培养基是:MS+蔗糖30 g/L;分化的最佳培养基是:马铃薯泥10%+蔗糖10 g/L+1/2 MS。3)铁皮石斛茎段原球茎的生根最佳培养基组合是马铃薯泥10%+1/2 MS+NAA 1 mg/L+香蕉泥10%。结论:在没有添加激素的前提下,基于正交试验方式发现变化蔗糖含量和基本培养基能够对铁皮石斛茎段原球茎增殖和分化效果进行调节,并找出了最理想的组合模式。     

真菌诱导子对铁皮石斛组培物生长的影响

目的:探索真菌诱导子对铁皮石斛组织培养物生长的影响.方法:以1/2MS为基本培养基,加入不同兰科内生菌根真菌的菌丝提取物对铁皮石斛的愈伤组织、拟原球茎以及不定芽等进行诱导培养.结果:四个不同菌株对石斛组织培养物生长的促进作用依次为:P15＞P10＞P01＞P05.结论:四种真菌诱导子均可不同程度地促进铁皮石斛的生长,在四种真菌诱导子中,P15的诱导效果最好.P01和P05对铁皮石斛根的分化有抑制作用.     

丹霞种、云南广南种铁皮石斛中主要黄酮苷的分离鉴定

目的:对2个道地种源(丹霞种、云南广南种)铁皮石斛中的黄酮苷成分进行提取分离、纯化及结构鉴定,为确认铁皮石斛的共性黄酮苷成分提供实验依据。方法:(1)采用70%乙醇提取两个产地铁皮石斛叶的总黄酮成分,依次采用有机溶剂石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取粗提物,运用大孔吸附树脂AB-8,LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)以及ODS柱色谱对水饱和正丁醇萃取部位进行分离纯化,通过化合物的理化性质结合HPLC,ESI-MSn,1H-NMR,13C-NMR等现代波谱学方法鉴定黄酮苷结构。(2)利用HPLC分析比较不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛的黄酮苷共有成分。结果:从2个产地铁皮石斛叶中共分离得到了5个黄酮苷化合物,经鉴定为芦丁,新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ,佛莱心苷,异佛莱心苷。4个不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)铁皮石斛茎中均能检出新西兰牡荆苷Ⅱ,新西兰牡荆苷Ⅰ特征峰,其中新西兰牡荆苷Ⅱ丰度相对较大,而佛莱心苷、异佛莱心苷在云南广南种、广西铁皮兰种中出峰明显,芦丁则在丹霞种中尤为突出。结论:新西兰牡荆苷Ⅱ为铁皮石斛不同道地种源(丹霞种、云南广南种、广西铁皮兰种、浙江本地种)的共性黄酮苷成分,可作为铁皮石斛特征图谱的参照物。     

典型喀斯特地区石栽铁皮石斛岩土植物系统的重金属分析及评价

目的 系统评价仿野生岩缝附生栽培铁皮石斛及其根际土壤、基岩中重金属的安全性;剖析研究区碳酸盐岩-黑色石灰土-铁皮石斛系统中重金属的分布特征。方法 采集贵州喀斯特地区岩缝附生栽培2年生铁皮石斛、黑色石灰土和碳酸盐岩样品。采用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定铁皮石斛中Cu,Pb,As,Cd含量,以及土壤和基岩中Cu,Pb,As,Cd,Cr含量,检测条件为等离子体功率1 550 W,反馈功率2 W,采样深度9 mm,雾化室温度2 ℃,分析模式全定量,双电荷<1.5%。运用原子荧光光谱法测定铁皮石斛中Hg含量,利用测汞仪测定土壤和基岩中Hg含量。使用SPSS 26.0软件对测试数据进行统计分析。结果 铁皮石斛中Cu,Pb,As,Cd和Hg含量均在安全阈值内。黑色石灰土中Pb,As,Cd,Hg,Cr含量均高于相应的中国土壤背景值（P<0.05,P<0.01）;黑色石灰土中Cd为轻度污染,Cr,Cu,As,Pb,Hg均为清洁水平。碳酸盐岩中Cu,As,Pb,Cd,Hg,Cr含量均显著低于黑色石灰土（P<0.01）。黑色石灰土中重金属受母岩影响强弱顺序为Hg>Cd>Cu>As>Cr>Pb。铁皮石斛中重金属的生物富集系数按大小排序为Cu>Cd>Pb=Hg>As,但5种重金属生物富集系数均较小（均<10%）。铁皮石斛中Cu,Pb,Cd,Hg含量随根际土壤中重金属含量的增加而略微增加,而As含量则随根际土壤中As含量的增加而减少。除Cu含量在铁皮石斛中表现出差异性外,碳酸盐岩-黑色石灰土-铁皮石斛系统中Pb,As,Cd,Hg的迁聚特征表现出一致性。结论 研究区岩土植物系统中重金属分布特征呈明显的继承性。黑色石灰土中重金属较高含量、低活性、低污染风险的特征及铁皮石斛低生物富集系数是影响铁皮石斛中5种重金属在安全阈值内的主要因素。     

铁皮石斛野生转家栽规范化种植(GAP)研究与产业化基地建设

目的:建立铁皮石斛规范化、产业化生产基地.方法:(1)观察与描述原植物形态特征;(2)以优良植株的茎段为外植体,运用组织培养技术研究建立铁皮石斛无性快繁体系,并研究探讨纳米材料TiO2、SiO2及TiO2-SiO2组合对铁皮石斛离体再生培养的影响;(3)研究探讨移栽基质与移栽方法对铁皮石斛试管苗移栽的影响.结果:(1)初步将铁皮石斛归为软脚与硬脚,矮杆种与高杆种;(2)建立了铁皮石斛离体再生系统;纳米TiO2及SiO2对铁皮石斛侧芽及丛芽的诱导有较明显促进作用,但不同浓度对离体培养的作用不同.低浓度的纳米TiO2(5g·L-1)和纳米SiO2(5g·L-1)组合可显著提高侧芽及丛芽的发芽数,促进芽的生长,较适宜侧芽及丛芽诱导阶段,不同浓度组合均对试管苗壮苗生根有抑制作用,不适于壮苗生根阶段使用;(3)组培苗出瓶第2d直接移栽定植,成活率达95%以上;移栽45d分蘖长新芽率达到90%以上,18个月长度达到采收规格.结论:为铁皮石斛优质、高产栽培及产业化基地建设提供技术支撑.     

铁皮石斛野生转家栽规范化种植(GAP)研究与产业化基地建设

目的:建立铁皮石斛规范化、产业化生产基地.方法:(1)观察与描述原植物形态特征;(2)以优良植株的茎段为外植体,运用组织培养技术研究建立铁皮石斛无性快繁体系,并研究探讨纳米材料TiO2、SiO2及TiO2-SiO2组合对铁皮石斛离体再生培养的影响;(3)研究探讨移栽基质与移栽方法对铁皮石斛试管苗移栽的影响.结果:(1)初步将铁皮石斛归为软脚与硬脚,矮杆种与高杆种;(2)建立了铁皮石斛离体再生系统;纳米TiO2及SiO2对铁皮石斛侧芽及丛芽的诱导有较明显促进作用,但不同浓度对离体培养的作用不同.低浓度的纳米TiO2(5g·L-1)和纳米SiO2(5g·L-1)组合可显著提高侧芽及丛芽的发芽数,促进芽的生长,较适宜侧芽及丛芽诱导阶段,不同浓度组合均对试管苗壮苗生根有抑制作用,不适于壮苗生根阶段使用;(3)组培苗出瓶第2d直接移栽定植,成活率达95%以上;移栽45d分蘖长新芽率达到90%以上,18个月长度达到采收规格.结论:为铁皮石斛优质、高产栽培及产业化基地建设提供技术支撑.     

铁皮石斛原球茎的诱导与增殖影响因素研究

目的:研究铁皮石斛原球茎诱导与增殖的最适培养基配方。方法:以铁皮石斛种胚为材料,以MS培养基为基本培养基,研究不同植物激素6-苄基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)和激动素(KT)或其组合及马铃薯提取液(PE)、香蕉提取液(BE)、苹果提取液(AE)和椰乳(CM)等有机添加物对铁皮石斛原球茎诱导和增殖的影响。结果:6-BA与NAA配比不利于种胚萌发,萌发度均低于MS培养基;添加10%的PE、CM有利于原球茎诱导;2,4-D对原球茎的生长和增殖不利,一定浓度的BA、KT和NAA有利于原球茎的增殖;KT浓度为1.0 mg/L时,原球茎40 d增殖倍数最高,达9.0;PE、CM、AE都能不同程度的促进原球茎的增殖,以10%的CM效果最好。结论:适宜铁皮石斛原球茎的诱导培养基为MS+10%CM+1.0 g/L AC;适宜铁皮石斛原球茎增殖的培养基为MS+1.0mg/L KT+0.2mg/L NAA+10%CM。     

人工栽培铁皮石斛多糖含量变异规律

目的:全面了解人工栽培铁皮石斛药材多糖质量分数,以及种质、采收年限等因素与多糖质量分数的关系,为优质铁皮石斛药材培育提供依据.方法:采集浙江铁皮石斛人工设施栽培骨干基地(产量占全国90%以上)11个种质一至三年生(生理年龄)的33个样品,并分别记载其形态特征;采用苯酚-硫酸比色法测定铁皮石斛多糖质量分数.结果:全国铁皮石斛骨干企业生产的二年生铁皮石斛其多糖平均质量分数达34.47%(25.63%～41.65%);不同种质、生理年龄的铁皮石斛多糖质量分数存在显著差异,5号种质多糖质量分数最低,一年生、二年生、三年生多糖质量分数分别为19.77%,25.63%,11.83%,10号种质最高,一年生、二年生、三年生多糖质量分数分别为33.31%,41.35%,28.39%.结论:全国人工栽培骨干基地生产的铁皮石斛,其多糖质量分数普遍高于野生药材,种质与生长年限显著影响多糖质量分数;铁皮石斛品种选育与采收年限的控制可提高多糖质量分数,浙江产区铁皮石斛最佳采收时间为两年生冬季至三年生开花前.     

不同产地铁皮石斛水提物的免疫调节作用研究

目的探讨不同产地铁皮石斛水提物的免疫调节作用。方法取4个产地铁皮石斛制备水提取物,复制环磷酰胺免疫低下小鼠模型,观察铁皮石斛提取物对小鼠巨噬细胞炭末廓清、溶血素抗体生成的影响。结果铁皮石斛水提取物显著提高炭末廓清指数及溶血素抗体含量。结论铁皮石斛水提取物增强机体免疫调节作用。     

5种不同种质来源铁皮石斛茎含水量、总黄酮及多糖含量分析

目的比较来自福建连城(LC)、浙江(ZJ)、厦门(XM)、厦门集美(JM)、云南(YN)5种不同来源铁皮石斛茎含水量、总黄酮和多糖含量。方法采用中国药典附录IX H水分测定法,测定新鲜铁皮石斛茎含水量;采用比色法对不同来源铁皮石斛茎中总黄酮和多糖含量进行测定。结果不同来源新鲜铁皮石斛茎含水量都在70%以上,以云南产地的含水量最高(84.26%,RSD 0.13%);福建连城、浙江、厦门、厦门集美、云南5种不同来源铁皮石斛茎的总黄酮含量分别是0.401%、0.474%、0.442%、0.449%和0.501%;福建连城、厦门集美、厦门、浙江、云南的多糖含量分别是26.56%、29.27%、28.56%、15.46%、17.43%。结论 5种不同来源铁皮石斛茎含水量、总黄酮和多糖含量均存在一定的差异。     

几种人工栽培“枫斗类”石斛的多糖含量分析

目的:对比不同产地栽培铁皮石斛及其他3种"枫斗类"石斛药材的质量,为药用石斛资源的评价和开发利用提供依据和参考。方法:采用苯酚-硫酸法测定不同来源石斛的多糖含量。结果:来自7个不同产地的人工栽培铁皮石斛多糖含量在24.32%-38.55%之间,以云南普洱样品多糖含量最高,贵州遵义样品多糖含量最低;采用植株分生苗栽培的齿瓣石斛多糖含量要高于组培苗栽培的样品;人工栽培不同品种石斛的平均多糖含量分别为:铁皮石斛29.30%、兜唇石斛50.12%、齿瓣石斛41.89%及晶帽石斛27.98%。结论:栽培在不同地区的铁皮石斛多糖含量有明显差异;以石斛多糖含量为指标,齿瓣石斛和兜唇石斛具有较大开发价值和应用前景。     

美花石斛和铁皮石斛试管苗物质含量比较

目的:研究比较美花石斛试管苗和铁皮石斛试管苗物质组分差异,揭示有效物质动态累积与生长规律的关系,为石斛培养提供参数支持。方法:观测2种石斛不同时期生长发育情况,用HPLC测定糖类、氨基酸及内源激素含量,进行比较分析。结果:两者动态积累生物量趋势基本一致;多糖/总糖值均较大,美花石斛多糖含量较高,铁皮石斛单糖种类多且含量高;氨基酸总量均呈降低趋势;赤霉素及玉米素含量差异有统计学意义,生长素及脱落酸变化趋势一致。美花石斛赤霉素含量与苗高、根长及干物质积累速率呈正相关,生长素含量与分蘖数呈负相关;赤霉素/脱落酸值高利于植株生长,生长素/玉米素值低可促进分蘖发生。结论:铁皮石斛进入生物量快速增长期较美花石斛早,且持续时间长。铁皮石斛生长量高于美花石斛是由于多时期同时测到多种糖类。美花石斛氨基酸总量高于铁皮石斛,说明美花石斛营养价值更高。美花石斛赤霉素低而脱落酸高、赤霉素/脱落酸及生长素/玉米素低可能是导致生长慢、纤弱及分蘖多的重要原因。     

响应面法探究铁皮石斛种子一步成苗

目的:为简化铁皮石斛种苗生产工艺流程,降低生产成本,利用响应面法对铁皮石斛种子一步成苗培养基组合进行研究。方法:通过预试验选出铁皮石斛培养基中影响种子一步成苗的3个关键因素,进行单因素试验,在单因素试验的基础上利用Box-Behnken试验设计和响应面曲面法对各因素进行优化组合,寻找出一种优良的铁皮石斛种子一步成苗培养基组合。结果:铁皮石斛最佳的一步成苗培养基组合为:1/2MS+12%香蕉汁+8%马铃薯汁+0.30 mg/L NAA,经过240 d的培养,铁皮石斛种子可不经任何转接长成8～10 cm的带根茎叶的完整植株。结论:通过响应面法建立的模型预测性良好,可用于铁皮石斛种子一步成苗培养基组合的优化。     

5种石斛对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

该文旨在研究比较霍山石斛、铁皮石斛(霍山)、铁皮石斛(云南)、铜皮石斛和河南石斛等5种石斛对四氯化碳急性肝损伤的保护作用。实验将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、5种石斛高(7.5 g·kg~(-1))和低(1.25 g·kg~(-1))2个剂量组。各组连续给药2周,末次给药2 h后,除对照组腹腔注射橄榄油外,其余各组腹腔注射0.5%CCl4橄榄油溶液。16 h后,采集小鼠血清及肝组织,测定小鼠血清中ALT,AST的活性;并检测肝组织中SOD和MDA的水平;计算肝脏指数并观察肝组织病理学变化,荧光定量PCR技术检测肝组织中IL-1β,IL-6和TNF-α的mRNA的表达水平。结果显示,与模型组相比,各石斛组均能降低小鼠血清指标ALT和AST水平,使肝组织中MDA含量下降,SOD活性升高,减轻CCl4对肝脏的病理损伤。此外,霍山石斛肝组织中IL-1β,IL-6和TNF-α的mRNA表达水平显著下调。结果表明,5种石斛对四氯化碳急性肝损伤具有保护作用。但不同产地石斛和不同种石斛的保肝效果有所不同,其中霍山石斛效果最为显著,其他几种石斛保肝效果依次为铁皮石斛(云南)、铁皮石斛(霍山)、河南石斛和铜皮石斛,这可能与不同基源品种石斛化学成分不同有关。     

铁皮石斛中11种金属元素含量的研究

目的:全面了解不同种质、采收年龄以及市场销售的石斛类药材中11种金属含量与变异规律,为铁皮石斛药材质量评价与优质药材培育提供依据.方法:采集浙江人工栽培骨干基地一至三年生铁皮石斛11个种质32个样品,购买市场销售的石斛类药材11个样品;经湿法消化后采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)、原子吸收光谱法(AAS)测定11种金属元素含量.结果:铁皮石斛中钾、钙、镁、锰、锌、铬、铜平均质量分数分别为1205.23,766.82,158.25,31.06,4.28,8.28,0.97mg·kg(-1),砷、汞、铅、镉4种重金属元素含量除1个样品镉元素超过限量指标0.07 mg·kg(-1)外,均在规定限度范围内;种质与生理年龄对金属元素的积累存在显著的影响.结论:铁皮石斛含有丰富的人体必需金属元素,浙江产的铁皮石斛与市场销售的石斛类药材重金属限量指标整体上是安全的;通过品种选育可望增加人体必需的金属元素含量,降低有害金属元素含量;生理年龄对金属元素的影响与各种元素承担的生理生化作用有关.     

利用气升式生物反应器培养铁皮石斛原球茎

目的:探明影响反应器内铁皮石斛原球茎生长及物质合成的因素,为铁皮石斛原材料的大量生产提供一种新方法.方法:利用3L气升式生物反应器,以组培原球茎为材料,研究了接种量、光照强度和通气量对原球茎增殖生长和多糖及石斛碱积累的影响.结果:当接种量为10g· L-1时,培养30 d后原球茎颜色深绿,生长健壮.多糖含量在接种量处理间无差异,但石斛碱含量有差异(接种量10g· L-1处理最高),多糖和石斛碱生产量在10g·L-1接种密度中最高.光照强度1600lx条件下原球茎生长最旺盛,光照对铁皮石斛原球茎多糖的积累起到促进作用,但对石斛碱的积累则有抑制作用,多糖含量和生产量在1 600,2 400 lx光照处理下好于暗条件处理;石斛碱的含量虽然在暗处理中最高,但因原球茎生长不佳,石斛碱的生产量在1 600 lx的光照强度处理中出现最大值.通气量为0.2(空气体积/培养体积/min)时原球茎生长健壮,颜色鲜绿,生长优于0.1,0.3处理,且多糖和石斛碱含量和产量均达最大值.结论:在工作体积为2L的气升式球型生物反应器内,接入10g·L-1原球茎外植体,光照强度调节为1 600 lx,通气量为0.2有利于原球茎生长和多糖及石斛碱的生产,铁皮石斛原球茎生物反应器培养是大量快速生产多糖和石斛碱的有效途径.     

铁皮石斛总生物碱含量变异规律

目的:全面了解不同种质、不同采收年限铁皮石斛药材总生物碱含量及其变异规律,为铁皮石斛真伪鉴别与优质药材培育提供依据。方法:采集铁皮石斛人工栽培骨干基地一至三年生铁皮石斛17个种质41个样品,以及市售不同价位枫斗药材11个样品;采用酸性染料比色法测定总生物碱含量。结果:人工栽培的铁皮石斛与市场购买的铁皮枫斗药材总生物碱在0.019 0%～0.043 0%;浙江省11个铁皮石斛种质一年生、二年生、三年生样品平均总生物碱为0.025 3%,0.027 0%,0.032 6%,云南产一年生铁皮石斛平均总生物碱为0.034 3%。结论:不同种质、年龄的铁皮石斛总生物碱含量差异很大,并且总生物碱含量随着生长年限的增加而增加,云南产铁皮石斛总生物碱明显高于浙江产铁皮石斛,但正宗的铁皮石斛总生物碱含量具有明显限量范围,总生物碱含量明显偏离限量范围的样品可以基本确定为非铁皮石斛,总生物碱含量在此范围的样品必须结合多糖含量与其他活性化学组分才能真正辨别铁皮石斛药材的真伪与优劣。     

GC-MS法检测铁皮石斛茎中挥发性成分△

目的:研究铁皮石斛茎中挥发性化学成分。方法:采用正己烷蒸馏法从铁皮石斛中提取挥发性成分,并用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术,对铁皮石斛茎中的挥发性成分进行了测定。结果:共鉴定出31种化学成分,其中含量较高的主要有亚油酸甲酯(5.852%)、二十五烷(10.132%)、22,23-二氢豆甾醇(11.093%)和己二酸二辛酯(21.115%)等。结论:铁皮石斛茎的挥发性成分中含有多种化学成分,主要包括烷烃、酸、烯烃、酯、甾醇、二萜、蒽醌等类化学成分。该研究为进一步开发利用铁皮石斛茎资源提供了科学依据。