小檗碱联合miR-328-3p对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响

目的:探讨小檗碱对骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化的影响及可能机制.方法:体外培养人骨髓间充质干细胞,分为对照组、不同剂量(低、中、高)小檗碱组、miR-NC组、miR-328-3p组、高剂量+anti-miR-NC组和高剂量+anti-miR-328-3p组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况,实时...     

银杏内酯B调控PAX6基因表达对人骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力的影响

目的:探讨银杏内酯B(GB)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖和成骨分化的影响及可能机制.方法:不同浓度(10,20,40 mg·L-1)的GB作用hBMSCs细胞后,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)检测细胞增殖,实时定量聚合酶链式反应PCR(RT-qPCR)检测细胞中配对盒基因6(PAX6)的mRNA表达,蛋白印迹...     

新型CPC-PCL-PRP组织工程骨对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的 探讨新型CPC-PCL-PRP组织工程骨对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响.方法 选取年龄2～4周的SPF级SD大鼠作为本次研究对象,采用新型CPC-PCL-PRP组织工程骨与SD大鼠骨髓间充质干细胞体外共培养并进行成骨诱导,于诱导进行1周、2周、3周时采用实时荧光定量PCR分析、并采用细胞计数分析、...     

二苯乙烯苷对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响及其机制研究

目的：探究二苯乙烯苷（TSG）对体外骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖和分化的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法：利用全骨髓培养法从1月龄SD大鼠中提取BMSCs进行体外培养,然后给予药物干预。采用MTT法检测药物对BMSCs体外增殖的影响;PNPP法检测碱性磷酸酶（ALP）活性;ELISA法检测细胞培养上清液中骨钙素（OCN）含量;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）观察Col1a1、Runx2和β-catenin的mRNA表达情况。结果：TSG在1×10^-6,1×10^-5,1×10^-4 mol·L^-1浓度下对BMSCs的增殖有明显的促进作用;经1×10^-6,1×10^-5,1×10^-4 mol·L^-1 TSG处理3 d后,BMSCs中ALP的表达增加;经1×10^-6,1×10^-5,1×10^-4 mol·L^-1 TSG处理7 d后,OCN表达也明显升高;此外,与对照组相比,经Wnt3a和TSG处理后,BMSCs中Col1a1、Runx2和β-catenin的mRNA表达上调。结论：TSG能在一定程度上促进BMSCs的增殖和成骨分化能力,其机制可能与提高Col1a1、Runx2和β-catenin相关成骨分化基因的表达有关。     

诱导兔骨髓间充质干细胞定向分化为成骨细胞和软骨细胞的研究

目的：探讨兔骨髓间充质干细胞(MSC)体外分离培养、增殖，以及向成骨细胞和软骨细胞定向诱导分化的条件，为骨、软骨缺损的修复和重建提供种子细胞。方法：抽取兔髂骨及胫骨的骨髓液，经密度梯度离心法及塑料板贴壁培养法分离纯化出MSC，并增殖。对第二代MSC进行成骨矿化诱导，测定其碱性磷酸酶(ALP)活性及成骨矿化情况。并对第二代MSC进行诱软骨特定培养液诱导，对诱导细胞进行甲苯胺蓝染色，测定诱导后的软骨细胞表型。结果：MSC为梭型的成纤维细胞样贴壁生长，增殖能力强。在成骨诱导剂作用下，MSC具有成骨能力，诱导后ALP活性明显提高，并且出现矿化结节沉积。在成软骨诱导剂作用下，可见细胞由成纤维样的梭形变为椭圆形及肾形，并分泌基质，甲苯胺蓝染色呈阳性，表现为软骨细胞分化特点。结论：在特定诱导条件下，兔骨髓MSC体外可定向诱导分化为成骨细胞和软骨细胞，可用于组织工程骨和软骨组织的修复和重建。     

小檗碱对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的探讨小檗碱对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法应用MTT法检测不同浓度小檗碱对骨髓间充质干细胞增殖情况的影响,以对硝基苯磷酸盐法检测碱性磷酸酶活性,等离子体直读光谱仪检测钙沉积,放射免疫法检测骨钙素含量,茜素红法染色观察钙化结节形成。结果小檗碱在1×10-9～1×10-5mol.L-1浓度范围对骨髓间充质干细胞增殖无明显影响。小檗碱浓度为1×10-7和1×10-6mol.L-1培养3～7d能明显提高骨髓间充质干细胞内碱性磷酸酶活性。小檗碱在1×10-7～1×10-5mol.L-1浓度范围培养22d能明显促进骨髓间充质干细胞骨钙素合成和分泌。小檗碱在浓度为1×10-6和1×10-5mol.L-1培养28d时钙盐沉积量和钙化结节形成增加。结论小檗碱可促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化,增强骨钙化。这可能为其防治骨质疏松的机制之一。     

体外诱导兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的 探讨体外成骨诱导的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的形态和功能特征.方法 体外培养获取生长状态良好的兔BMSCs,进行成骨诱导,观察并检测成骨细胞的生物学特性.结果 BMSCs可在成骨条件培养液下诱导为成骨细胞.经鉴定,碱性磷酸酶和矿化结节染色阳性,激光共聚焦显微镜下成骨细胞鬼笔环肽显示骨架F-actin为红色荧光.结论 BMSCs在体外可定向诱导为成骨细胞,有希望成为理想的种子细胞应用于临床.     

间充质干细胞成骨和成脂分化调控机制研究

间充质干细胞（MSCs）是人体内参与免疫平衡、维持组织器官的稳态和功能以及组织损伤修复的一类重要成体干细胞。MSCs具有自我更新能力和多向分化潜能,国际干细胞协会将MSCs向脂肪、成骨等细胞分化的能力作为其重要的检测标准。作为骨细胞和脂肪细胞的共同来源,MSCs在成骨和成脂分化之间相互协调和相互竞争,并在多种调控因素作用下保持着微妙的平衡。对MSCs成骨、成脂分化的信号通路、调控因素进行分析,并对其分化诱导方法以及鉴定方法进行总结,以期为MSCs基础研究及临床应用提供参考依据。     

红景天苷对人骨髓间充质干细胞增殖及分泌的影响

目的探讨红景天苷对人骨髓间充质干细胞(hMSC)增殖及分泌的影响。方法观察红景天苷对hM-SC系统(hMSCs)的形态学特征的影响及对hMSCs增殖的影响;比较不同浓度红景天苷对hMSCs分泌VEGF的影响。结果不同浓度红景天苷的OD570细胞相对活力比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同浓度红景天苷对hMSCs分泌VEGF的水平比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论红景天苷在体外对hMSCs增殖分化以及分泌功能有影响。     

红景天苷对人骨髓间充质干细胞增殖及分泌的影响

目的 探讨红景天苷对人骨髓间充质干细胞(hMSC)增殖及分泌的影响.方法 观察红景天苷对hMSC系统(hMSCs)的形态学特征的影响及对hMSCs增殖的影响;比较不同浓度红景天苷对hMSCs分泌VEGF的影响.结果 不同浓度红景天苷的OD570 细胞相对活力比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).不同浓度红景天苷对hMSCs分泌VEGF的水平比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 红景天苷在体外对hMSCs增殖分化以及分泌功能有影响.     

诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化

目的探讨人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)向成骨细胞诱导分化的能力。方法选用不同代次的MSCs,使用条件培养基,观察细胞的形态变化,采用细胞化学和免疫组化的方法检测碱性磷酸酶、钙盐沉积及Ⅰ型胶原的表达。结果MSCs在条件培养基中,15d后可见细胞变为多边形,碱性磷酸酶和Ⅰ型胶原染色阳性,形成钙结节,表现成骨细胞分化特点。结论在一定培养条件下成功诱导人MSCs向成骨细胞分化。在骨组织工程学方面MSCs作为种子细胞具有潜在的应用价值。     

成人骨髓间充质干细胞多向分化潜能特性

目的 探讨体外不同诱导条件下成人骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞、脂肪细胞分化的能力.方法 采用地塞米松、胰岛素、β-磷酸甘油、抗坏血酸等诱导培养液对体外分离培养的成人骨髓MSCs进行成骨细胞及脂肪细胞的定向诱导并进行鉴定.结果 成人骨髓MSCs向成骨细胞诱导后可见钙盐分泌,茜素S与钙盐结合成红色,四环素标记后可见到黄色发光的钙化结节;而向脂肪细胞诱导后则可见含有多量脂滴的脂肪细胞,苏丹Ⅳ染色脂滴呈红色,苏木精染色细胞核呈蓝色.结论 成人骨髓MSCs在体外一定条件下可以诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞,具有多向分化潜能.     

柚皮苷对兔骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的影响

目的观察柚皮苷(骨碎补的有效成分)对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为成骨细胞的影响。方法将体外培养的兔BMSCs分为对照组(标准培养液)、柚皮苷组(不同浓度柚皮苷+标准培养液)、普通组(地塞米松10-8mol/L+β-甘油磷酸钠10 mmol/L+维生素C 50μg/L+标准培养液)和联合组(不同浓度柚皮苷+普通组)。倒置相差显微镜观察生长情况,MTT法检测不同浓度柚皮苷对兔BMSCs增殖的影响;扫描电镜、茜素红染色法和von Kossa银染色法观察各组细胞钙化情况。结果柚皮苷10-5mmol/L明显促进兔BMSCs增殖。培养3周后,联合组钙结节增多、钙化面积扩大最明显,柚皮苷组可见钙结节;对照组未见钙化。结论柚皮苷可促进兔BMSCs向成骨细胞分化。     

促进骨髓间充质干细胞增殖方法的研究进展

目的:寻求促进骨髓间充质干细胞增殖更加安全、有效的方法。方法:以骨髓间充质干细胞种子细胞组织工程学细胞增殖等的中、英文词汇为关键词,组合检索2000-2013年中国知网、万方数据库、Pub Med等的相关文献,综述有关促进骨髓间充质干细胞增殖的方法。结果与结论:共查询到文献106篇,其中有效文献27篇。经分析表明,目前促进骨髓间充质干细胞增殖的方法主要包括中药诱导、电磁场刺激、细胞外基质结合、机械刺激、生长因子调节、基因转染等。其中,中药诱导、电磁场刺激相比其他几种方法具有价格低廉、操作简便等优点,已形成产品并应用于临床。但每种扩增方法均还或多或少存在着作用机制不够明确、成本较高、技术难度较大等问题,尚需进一步深入研究,以寻求更加安全、高效的方法。     

低剂量X线照射对诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的 研究低剂量X线照射对离体培养的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响.方法 由大鼠骨髓中提取间充质干细胞(BMSCs),分别以0 Gy、25 mGy、50 mGy、75 mGy、100 mGy、1000 mGy不同剂量的X线照射后,诱导BMSCs向成骨细胞方向分化,以RT-PCR法检测成骨相关基因OPG、COL-1、BGP的表达情况.结果 RT-PCR结果显示OPG、COL-1、BGP经低剂量X线照射后表达量均有明显增高,以以75 mGy与100 mGy组最为明显(P<0.05),而1000 mGy高剂量照射则会抑制相关成骨基因的表达.结论 低剂量X线照射可增强BMSCs的分化能力,照射后BMSCs成骨潜能明显增强,而高剂量照射起到相反的作用.     

合成成骨生长肽对人骨髓间充质干细胞的促成骨作用

目的研究合成成骨生长肽（sOGP）对人骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化的影响。方法分离BMscs进行体外培养,加入不同浓度的sOGP,观察细胞形态变化,RT-PCR法检测3种主要成骨标志物[碱性磷酸酶（ALP）、Ⅰ型胶原、骨钙素]的表达,组织化学染色检测ALP、Ⅰ型胶原的表达及钙质的沉积并进行图像分析。结果sOGP在mRNA和蛋白水平均能促进各成骨标志物的表达,定量分析结果显示,sOGP在10^-9mol／L浓度组促成骨的作用最强。结论sOGP能促进入BMSCs向成骨方向转化。这种促成骨能力与其浓度密切相关,以10^-9mol／L浓度促成骨能力最强。     

转染bFGF基因对人骨髓间充质干细胞增殖特性的影响

目的 探讨作为组织工程种子细胞的人骨髓间充质干细胞,在体外培养条件下转染bFGF基因对其增殖特性的影响.方法 利用脂质体将含人pcDNA3.1-bFGF质粒转染到生长良好的P3代人BMSCs,G418筛选获得抗性克隆.采用荧光定量PCR和免疫荧光检测转染bFGF的骨髓间充质干细胞bFGF基因及其产物的表达,MTY法检测和流式细胞仪检测细胞的增殖情况和细胞增殖周期,并将转染和非转染BMSCs分别成骨诱导分化,对其碱性磷酸酶活性进行测定.结果 脂质体介导pcDNA3.1-bFGF重组表达质粒转染BMSCs,经荧光定量PCR和免疫荧光检测.证实转染细胞表达bFGF.转染细胞增殖活力加强,处于增殖周期的细胞比例更高（P〈0.05）.碱性磷酸酶活性检测结果表明转染细胞的碱性磷酸酶活性高于非转染细胞（P〈0.05）.结论 用脂质体转染法能将pcDNA3.1-bFGF成功导入体外培养的hBMSCs,bFGF基因改良的BMSCs可以改善其生存状态、促进其增殖,并可促进向成骨细胞分化.     

BoneCeramic和Bio-Oss骨粉对狗骨髓间充质干细胞体外成骨分化能力影响的比较研究

目的比较BoneCeramic和Bio-Oss骨粉对狗骨髓间充质干细胞(DBMSCs)的增殖、黏附和体外成骨分化能力的影响。方法体外分离培养DBMSCs并进行成骨、成脂分化鉴定;CCK-8检测BoneCeramic和Bio-Oss两种骨粉浸提原液对DBMSCs活力的影响;SEM观察细胞在骨粉表面的黏附情况;ALP定量检测细胞在骨粉表面的成骨分化能力,RT-PCR检测OPN、OCN、RUNX-2和ALP基因的相对表达情况。结果从狗骨髓中分离培养的细胞符合间充质干细胞的特征;CCK-8结果显示两种骨粉浸提液均对DBMSCs没有明显的细胞毒性作用;SEM结果显示,与Bio-Oss相比,DBMSCs在BoneCeramic的表面分布更广;ALP定量检测显示DBMSCs在BoneCeramic表面比Bio-Oss更有利于其成骨分化,同时使OPN、OCN、RUNX-2和ALP基因的表达升高。结论体外研究表明,Bio-Oss和BoneCeramic均具有良好的生物相容性,与Bio-Oss骨粉相比,BoneCeramic更加有利于DBMSCs的成骨分化。