三七总皂苷对MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响

目的 探讨三七总皂苷对激素性股骨头坏死的保护作用。方法 采用CCK-8法检测三七总皂苷(1～1 000 mg/L)和地塞米松(10μmol/L)对MC3T3-E1细胞增殖的影响，偶氮偶联法检测三七总皂苷(10、50、100 mg/L)和地塞米松对MC3T3-E1细胞ALP活性的影响，茜素红染色法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞矿化的影响，RT-qPCR法和免疫荧光染色法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞蛋白Col-Ⅰ、OCN、OPN蛋白和mRNA表达的影响，Western blot法检测三七总皂苷和地塞米松对细胞Runx2蛋白和Wnt/β-catenin通路靶蛋白表达的影响。结果 10μmol/L地塞米松能抑制MC3T3-E1细胞增殖。与正常组比较，10～100 mg/L三七总皂苷能促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05),并可降低地塞米松对细胞增殖的抑制作用(P<0.01)。此外，三七总皂苷能降低地塞米松对MC3T3-E1细胞ALP活性和钙沉积的抑制作用(P<0.01),地塞米松可降低MC3T3-E1细胞Col-I、Runx2、OCN、OPN蛋白表达和Wnt/β-ca...     

异鼠李素对H2O2诱导的肠上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:评价异鼠李素对H₂O₂诱导的大鼠肠上皮细胞IEC-6氧化应激损伤的保护作用及机制。方法:MTT实验筛选异鼠李素对IEC-6细胞的安全作用浓度用于评价抗H₂O₂诱导的氧化应激损伤功效。设正常对照组、H₂O₂组、N-乙酰半脱氨酸(NAC)组(10μmol/L)、异鼠李素低剂量组(20μmol/L)、异鼠李素中剂量组(40μmol/L)及异鼠李素高剂量组(100μmol/L)。正常对照组常规培养，H₂O₂组用500μmol/L H₂O₂处理，NAC及异鼠李素组分别用10μmol/L NAC,20、40、100μmol/L异鼠李素预处理细胞相应时间后，用500μmol/L H₂O₂继续培养。流式细胞术检测细胞凋亡及ROS水平，试剂盒检测细胞中MDA含量及SOD活性，Western blot检测细胞中Nrf2/HO-1、PI3K/...     

白芍总苷对小鼠成骨细胞增殖、分化和矿化的影响

目的研究白芍总苷(TGP)对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、分化和矿化的影响。方法采用MTT法和流式细胞术检测TGP对MC3T3-E1细胞增殖和细胞周期的影响;诱导MC3T3-E1成骨分化,通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性和RT-PCR法检测人类相关转录因子2(Runx2)基因表达,分析TGP对成骨分化的影响,采用茜素红染色分析TGP对矿化的影响。结果 3、10μg/L TGP均能促进MC3T3-E1细胞增殖(P0.05,P0.01);10μg/L TGP可使G1期细胞的比例减少,S+G2期细胞的比例增加(P0.05);与对照组比较,TGP处理组细胞的ALP活性和Runx2表达水平显著升高(P0.05,P0.01),且矿化结节量明显增加。结论 TGP具有促进MC3T3-E1细胞增殖和分化成熟的能力,为炎性骨质疏松的治疗策略提供了实验依据和治疗思路。     

新疆塔里木马鹿茸多肽对小鼠前成骨细胞的影响

目的探讨新疆塔里木马鹿茸多肽对小鼠前成骨细胞(MC3T3-E1)的作用机制。方法以BCA蛋白质定量试剂盒测定马鹿茸多肽样品的浓度;体外培养MC3T3-E1细胞,采用BCIP/NBT碱性磷酸酶(ALP)显色试剂盒染色;诱导分化形成矿化结节,进行茜素红染色;将MC3T3-E1细胞置于马鹿茸多肽高、中、低(10、1.0、0.1μg/m L)3个浓度的培养基中培养,采用MTT法和微量酶标法检测马鹿茸多肽不同浓度对MC3T3-E1细胞增殖和ALP合成的影响。结果 BCA蛋白质定量检测结果显示,马鹿茸多肽蛋白浓度为0.07 mg/m L。体外培养MC3T3-E1细胞ALP染色呈淡蓝色,阳性率为90%;矿化结染色呈红色。与对照组比较,第3、7日马鹿茸多肽高、中、低剂量组可促进MC3T3-E1细胞增殖,且呈现剂量依赖效应;第3日马鹿茸多肽高、中、低剂量组均可促进MC3T3-E1细胞分泌ALP(P0.01),且呈现一定的剂量效应。结论塔里木马鹿茸多肽通过促进MC3T3-E1细胞增殖和ALP合成的分泌,达到治疗骨质疏松症的作用。     

基于分子对接的方法探讨桑根酮C对MC3T3-E1细胞的作用

目的:观察桑根酮C(SanC)对地塞米松(DEX)作用下小鼠MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响,并探讨其作用机制。方法:将SanC与同源建模所得的Runt-相关转录因子2(Runx2)蛋白结构进行分子对接。不同浓度SanC(8,16,32μmol·L^-1)和1μmol·L^-1DEX共同作用MC3T3-E1细胞,而后采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测SanC对MC3T3-E1成骨细胞增殖影响。试剂盒测定MC3T3-E1成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性和茜素红染色检测骨矿化结节的形成。采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Runt-相关转录因子2(Runx2),ALP,和锌指结构转录因子(Osterix)mRNA的表达水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Runx2蛋白表达。结果:SanC与Runx2对接打分为-9.78。与正常组比较,DEX组显著降低细胞存活率(P<0.01),其中7 d存活率差异达到最大;与DEX组比较,SanC能显著促进MC3T3-E1的细胞增值(P<0.01),其中32μmol·L^-1SanC作用细胞7 d增殖率差异达到最大。与正常组比较,DEX组Runx2,ALP和Osterix mRNA的表达均有一定程度升高(P<0.05);与DEX组比较,不同浓度SanC组依赖性上调Runx2,ALP和Osterix mRNA的表达(P<0.01)。与正常组比较,DEX组Runx2蛋白表达明显下降(P<0.05);与DEX组比较,SanC干预下细胞Runx2蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:桑根酮C能促进MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化和矿化,其机制可能与上调Runx2表达有关。     

龟甲水提液调控NF-κB炎症微环境对MC3T3-E1成骨分化的影响

目的:探讨龟甲水提液调控核转录因子-κB(NF-κB)炎症微环境促小鼠前成骨细胞系(MC3T3-E1)成骨分化的作用及机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,并进行成骨诱导,龟甲水提液干预。实验分为空白组、成骨诱导组、龟甲水提液(20 mg·L~(-1))联合成骨诱导组。细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测MC3T3-E1增殖能力,并确定最佳干预浓度;碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红(ARS)染色检测MC3T3-E1成骨分化能力;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测NF-κB p65,NF-κB p105,白细胞介素-6 (IL-6),ALP和Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ) mRNA的表达。结果:CCK-8结果显示,随着时间的增长,MC3T3-E1增殖虽无统计学差异,但呈上升趋势,而在20 mg·L~(-1)质量浓度时增殖较其他组明显; ALP和ARS染色结果显示,成骨诱导组和龟甲水提液联合成骨诱导组染色阳性率较空白组明显升高; Real-time PCR结果显示,龟甲干预第7天,与空白组比较,龟甲水提液联合成骨诱导组NF-κB p105和IL-6 mRNA的表达明显降低(P 0. 01),ALP和COL-ⅠmRNA的表达明显升高(P 0. 05);龟甲干预第14天,与空白组比较,龟甲水提液联合成骨诱导组NF-κB p65,NF-κB p105和IL-6 mRNA的表达明显降低(P 0. 01),ALP和COL-ⅠmRNA的表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:龟甲水提液能够促进MC3T3-E1成骨分化,其机制可能与抑制NF-κB炎性微环境有关。     

基于Nrf2/BNIP3信号通路探讨苓桂术甘汤含药血清对心肌细胞线粒体氧化应激的影响

探讨苓桂术甘汤(Linggui Zhugan Decotion)含药血清通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/B淋巴细胞瘤-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路对心肌细胞线粒体氧化应激的影响。制备苓桂术甘汤含药血清与空白血清,构建体外H₂O₂诱导H9c2心肌细胞氧化应激模型,将H9c2细胞分为正常对照组、H₂O₂模型组、20%空白血清组、20%苓桂术甘汤含药血清组。H9c2细胞按照分组分别预处理12 h后,加入100μmol·L^-1 H₂O₂继续培养6 h, DCFH-DA检测各组细胞内活性氧(ROS)的水平,calcein AM荧光探针检测线粒体通透性转换孔道(mPTP)的开放程度,Western blot法检测各组细胞中细胞质细胞色素C(CytC)、线粒体CytC、细胞质及细胞核中Nrf2的表达以及BNIP3的变化水平。siRNA-Nrf2转染制备Nrf2沉默的H9c2细胞,观察Nrf2沉默后苓桂术甘汤含药血清...     

脱氢卡维丁对H_2O_2处理成骨前体细胞MC3T3-E1增殖及凋亡的影响

目的:探讨脱氢卡维丁对过氧化氢(H_2O_2)诱导下MC3T3-E1细胞凋亡和氧化应激损伤的影响及其潜在作用机制。方法:取处于对数生长期的MC3T3-E1细胞,优化H_2O_2氧化损伤细胞模型的工作液浓度,采用500μmol/L H_2O_2作用MC3T3-E1细胞建立体外氧化应激损伤细胞模型,以不同浓度(0.001、0.01、0.1μmol/L)脱氢卡维丁进行干预,1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸作阳性对照组,使用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对于细胞活力的影响,生化法测定细胞中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平,利用流式细胞技术检测细胞氧化损伤的凋亡程度,RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组细胞存活率显著降低,细胞MDA、ROS水平及Bax表达显著升高,Bcl-2表达显著降低。与模型组比较,各给药组对H_2O_2诱导的氧化应激损伤得到有效抑制,Bcl-2表达升高,Bax表达降低。结论:脱氢卡维丁能有效减弱H_2O_2诱导的MC3T3-E1细胞凋亡及氧化损伤,增强细胞清除MDA和ROS的能力,发挥抗H_2O_2氧化损伤的保护作用。     

柚皮苷对小鼠成骨细胞MC3T3 E1增殖、分化和矿化的影响

目的:检测骨碎补有效成分柚皮苷对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响.方法:以成骨细胞株MC3T3-E1细胞为体外药效的试验模型(药物组和对照组),通过CCK-8法观察10,1,0.1,0.01,0.001,0.000 1μmol·L~(-1)的柚皮苷溶液对MC3T3-E1细胞增殖能力的影响;通过乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性试验观察以上浓度的柚皮苷溶液对细胞毒性能力的影响.通过骨形成蛋白-2(BMP-2),碱性磷酸酶(ALP)活性测定和骨钙素(OC)含量测定观察柚皮苷对MC3T3-E1细胞分化能力的影响;通过Von kossa钙化染色法观察柚皮苷对MC3T3-E1细胞钙化能力的影响.结果:高浓度的柚皮苷溶液在12 h和24 h时能促进MC3T3-E1细胞的增殖作用.而低浓度的柚皮苷溶液则无此作用.所测的各个组别细胞毒性百分比都较小,且随着时间的推移(12,24,48 h)变化较小.光镜下观察各个时间点细胞的密度和形态也未发生明显的变化.BMP-2细胞免疫化学结果表明,24,48 h时柚皮苷浓度10,1,0.1μmol·L~(-1)包浆内棕色着色比对照组明显.ALP检测结果表明48 h时,1,0.1μmol·L~(-1)的柚皮苷溶液可提高MC3T3细胞的ALP活性(P<0.05).72 h时,0.1 μmol·L~(-1)的柚皮苷溶液可提高MC3T3细胞的ALP活性(P<0.05).OC检测结果表明12 d时,10,1μmol·L~(-1)柚皮苷溶液作用组与对照组相比OC活性明显提高(P<0.05).Vonkossa染色钙化面积百分比结果表明3组柚皮苷溶液作用组与对照组相比无明显区别.结论:柚皮苷溶液可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖能力和分化能力.     

牛膝甾酮对小鼠MC3T3-E1细胞成骨分化和增殖的影响

目的研究牛膝甾酮(IS)对小鼠成骨细胞系(MC3T3-E1细胞)增殖、分化的影响及其可能的分子机制。方法将MC3T3-E1细胞分为对照组及IS不同浓度组(10~(-4)～10~(-1)ng/μL),24、48 h后采用细胞计数(CCK8)试剂盒检测细胞增殖,7、14天后采用碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测ALP活性,茜素红染色检测矿化结节,原位末端标记(TUNEL)试剂盒检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测成骨分化相关标志物Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、骨保护素(OPG)、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、ALP以及雌激素受体alpha(ERα)、雌激素受体beta(ERβ) mRNA的表达水平。结果与对照组比较,在干预48 h后,10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS能抑制细胞的增殖(P0.05),但对细胞凋亡无明显影响。10~(-4)、10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS均能够促进ALP活性及矿化结节的形成(P0.05),亦能促进ERα、OPG、CollagenⅠ、ALP mRNA表达(P0.05);10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)ng/μL IS均能促进OPN、OCN mRNA表达(P0.05),10~(-1)ng/μL IS能够促进ERβmRNA表达(P0.05)。结论 IS能促进MC3T3-E1细胞的成骨分化,其可能机制与上调成骨分化标志物及提高ERαmRNA表达有关。     

淫羊藿总黄酮胶囊活性成分宝藿苷Ⅱ对MC3T3-E1细胞增殖分化的影响

目的:从淫羊藿总黄酮胶囊中制备分离宝藿苷Ⅱ,检测不同浓度宝藿苷II对体外培养的MC3T3-E1细胞增殖分化的影响。方法:分别用10、20、40nmol/ml的宝藿苷II作用MC3T3-E1细胞,CCK-8法检测细胞存活率;比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活力;ELISA法检测骨钙素(OT)含量;茜素红染色分析并用氯化十六烷基吡啶测定钙沉积量;Western Blot法检测宝藿苷Ⅱ对BMP2信号通路蛋白表达的影响。结果:10、20、40nmol/ml的宝藿苷Ⅱ均可明显促进MC3T3-E1的增殖;提高MC3T3-E1分泌ALP和OT的能力;矿化结节数量明显增多且钙沉积量吸光度值显著增大;明显提高BMP2、Runx2和Osterix蛋白表达量,且呈剂量依赖性。结论:淫羊藿总黄酮胶囊活性成分宝藿苷II可以明显促进MC3T3-E1细胞的增殖分化。     

左归丸通过线粒体途径抗叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡

目的:观察左归丸对叔丁基过氧化氢诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的保护效应,探讨其作用机制是否与其干预线粒体途径有关。方法:以成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,制备左归丸含药血清,建立叔丁基过氧化氢(t-BHP)成骨细胞MC3T3-E1氧化应激模型,实验分为空白组,t-BHP组,左归丸+t-BHP组,补佳乐+t-BHP组。孵育24,48,72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测左归丸含药血清对t-BHP诱导MC3T3-E1细胞存活的影响;孵育48 h后,采用吖啶橙溴乙啶(AO/EB)染色法检测细胞凋亡,采用Hoechst 33342染色法观察凋亡细胞核变化,采用罗丹明123荧光染色法观察线粒体膜电位的改变,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法分析线粒体蛋白家族B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,t-BHP组显著抑制细胞增殖(P0.05,P0.01),细胞凋亡增加,线粒体膜电位降低,Bcl-2蛋白表达明显下调(P0.01);与t-BHP组比较,左归丸加t-BHP组促进暴露于t-BHP诱导的MC3T3-E1氧化损伤细胞的存活(P0.01),48 h者尤佳,逆转细胞凋亡情况,提高细胞线粒体膜电位,上调Bcl-2蛋白表达(P0.05),抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:左归丸含药血清能够抗t-BHP诱导的MC3T3-E1细胞凋亡,其作用机制可能与其干预线粒体途径有关。     

基于SIRT1/FoxO1通路探究小檗碱抑制卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的调节机制

目的：通过观察小檗碱(BBR)对卵巢颗粒细胞衰老的影响,探究其保护作用及调节机制。方法：应用H₂O₂诱导建立人卵巢颗粒样肿瘤(KGN)细胞衰老模型;设置空白组、模型组、BBR高剂量(1μmol·L^-1)组和BBR低剂量(0.5μmol·L^-1)组,模型组与BBR组加入浓度为10μmol·L^-1 H₂O₂,孵育40 min。通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)分析检测BBR对KGN细胞增殖的影响;通过β-半乳糖苷酶染色检测BBR对KGN细胞衰老状态的影响;应用流式细胞术检测BBR对KGN细胞凋亡和ROS含量的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BBR对KGN细胞抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)比值、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、叉头框转录因子O1(FoxO1)及过氧化氢酶(CAT)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BB...     

六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响

目的探讨六味地黄丸含药血清对MC3T3-E1细胞增殖以及对Runx2、FOXO1 mRNA表达的影响。方法制作六味地黄丸混悬液,对成年Wistar大鼠进行灌胃,获取六味地黄丸含药血清。常规培养MC3T3-E1细胞24 h后更换含10%不同浓度含药血清的培养基,分别培养48 h和72 h后用CCK-8法检测MC3T3-E1细胞的增殖;对MC3T3-E1细胞进行诱导培养22天后进行饥饿培养24h,随后更换含10%不同浓度的含药血清,培养72 h后检测Runx2、FOXO1 mRNA表达。结果六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,并且呈现一定的剂量依赖性;同时六味地黄丸含药血清各剂量组均能明显促进Runx2 mRNA的表达(P0.01),高剂量组的表达明显高于低剂量组(P0.01)。高剂量组的FOX01 mRNA表达明显高于其他3组(P0.01)。结论六味地黄丸含药血清能促进MC3T3-E1细胞增殖,同时能促进Runx2、FOXO1 mRNA表达。     

人参皂苷Rg1对心肌细胞氧化应激损伤的抑制作用

目的 通过构建H₂O₂诱导的H9c2细胞氧化应激模型,观察人参皂苷Rg₁对氧化应激的抑制作用,并探讨mi R-499c是否参与人参皂苷Rg₁抑制氧化应激的作用机制。方法 采用600μmol/L的H₂O₂诱导H9c2细胞氧化应激模型,给予人参皂苷Rg₁预处理24 h,检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白表达。采用Lipofiter 3.0将miR-499c转染至H9c2细胞再制备H₂O₂诱导的氧化应激模型,给予人参皂苷Rg     

新疆马鹿角提取物对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

目的 研究新疆马鹿角提取物对体外培养成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响.方法 以MC3T3-E1细胞作为药物筛选模型,用MTT法测定不同浓度的新疆马鹿角提取物促细胞增殖作用,采用碱性磷酸酶活性测定和骨钙素含有量检测,观察不同浓度的新疆马鹿角提取物促细胞分化作用,以Von kossa钙化染色法观察新疆马鹿角提取物溶液对MC3T3-E1细胞钙化能力的影响.结果 MTT检测结果表明5×102、5×101、5 μg/mL新疆马鹿角提取物溶液在24、48、72 h均可促进MC3T3-E1细胞增殖,且呈时间依赖性.ALP检测结果表明5×102、5×101 μg/mL新疆马鹿角提取物溶液在24、48、72 h可提高MC3T3-E1细胞内ALP的活性.BGP检测结果表明5×102、5×101 μg/mL新疆马鹿角提取物溶液在8、12 d可促进MC3T3-E1细胞内BGP的合成和分泌.Von kossa染色钙化面积百分比结果表明3组新疆马鹿角提取物溶液与对照组比较无明显区别.结论 新疆马鹿角提取物可促进成骨细胞株MC3T3-E1的增殖和分化能力.     

黄芪甲苷对MC3T3-E1细胞活性的影响及其机制探讨

目的:探讨黄芪甲苷对小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1细胞活性的影响及其作用机制。方法:体外培养MC3T3-E1细胞,用不同浓度的黄芪甲苷进行预处理后,MTT法测定细胞增殖情况,碱性磷酸酶法(ALP)测定细胞分化情况,Western blotting分析转化生长因子TGF-β1、成骨细胞信号转导蛋白Smad2/3表达水平;应用小干扰RNA(siRNA)转染法观察TGF-β1 siRNA对MC3T3-E1细胞增殖及活性的影响,加入抗Smad2/3抗体,探讨Smad2/3在黄芪甲苷介导的细胞增殖分化中的作用。结果:黄芪甲苷在一定浓度范围内剂量依赖性促进MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力。进一步机制分析表明,黄芪甲苷处理可诱导TGF-β1蛋白表达,TGF-β1siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降;此外,黄芪甲苷可显著性诱导Smad2/3表达,经TGF-β1 siRNA处理后,黄芪甲苷诱导的Smad2/3表达显著下降;加入Smad2/3抗体后,黄芪甲苷诱导的MC3T3-E1细胞的增殖和分化能力明显下降。结论:黄芪甲苷可通过刺激TGF-β1-Smad2/3通路的活化促进成骨细胞的增殖和分化,从而有利于骨形成。因此,本研究将为骨折愈合的治疗提供新的研究方向。     

淫羊藿苷促前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的实验研究

目的探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的机制。方法采用不同浓度(10~(-10)~10~(-5)mol/L)的ICA干预前成骨细胞MC3T3-E1 3、6、9天后采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测试剂盒测定ALP活性,确定ICA最适促分化浓度。最适ICA浓度干预前成骨细胞MC3T3-E1 7天后应用实时定量PCR法(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测骨形态发生蛋白(BMP)和Wnt/β-catenin信号通路相关分子(BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclin D1)基因表达。ICA分别与BMP、Wnt/β-catenin信号通路抑制剂(Noggin、DKK-1)联合干预前成骨细胞MC3T3-E1后,茜素红钙结节染色观察钙化程度以及Western blot检测BMP-2蛋白表达变化。结果 ICA促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化,且10~(-9)mol/L ICA促进分化的能力最强。与对照组比较,ICA能明显上调BMP和Wnt/β-catenin信号通路相关分子(BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclin D1)mRNA表达(P0.01)。Noggin或DKK-1能抑制前成骨细胞MC3T3-E1钙化,且两者联合作用时抑制更加明显。与ICA单独作用比较,ICA与DKK1联合干预后BMP-2蛋白表达水平下降(P0.01)。结论 ICA可能通过Wnt/β-catenin/BMP-2信号通路调控前成骨细胞MC3T3-E1的成骨分化。     

H2O2对北苍术次生代谢影响及机制分析

目的：探讨外源H₂O₂对北苍术次生代谢的影响及其机制。方法：采用5.0、1.0、0.2、0.04 mmol·L^-1 H₂O₂溶液和清水处理北苍术鲜根,比较北苍术内活性氧含量、抗氧化酶活性、次生代谢产物关键酶活性及次生代谢产物含量之间的关系。结果：在外源H₂O₂的作用下,北苍术鲜根中活性氧和丙二醛(MDA)的含量在第4天有显著升高,并在第6～8天恢复至正常水平。超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性均呈现先上升后下降的趋势,SOD、CAT和POD的活性分别在第4、4～6、2～4天达到高峰。北苍术次生代谢产物关键酶羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性均有显著提升,且在不同浓度H₂O₂处理中,0.2 mmol·L^-1 H₂O₂处理组次生代谢产物合成关键酶活性提高幅...     

龙牡壮骨颗粒对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化及矿化的影响

目的:研究龙牡壮骨颗粒对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响。方法:以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的体外模型;采用终浓度分别为1,5,10,25,50μg/ml的龙牡壮骨颗粒溶液干预,MTT法检测细胞增殖率;同时检测药物作用不同时间后的碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色和Von Kossa钙化染色检测不同浓度药物对细胞钙化的影响。结果:龙牡壮骨颗粒溶液在5⁵0μg/ml范围内培养24和48 h可显著促进小鼠成骨细胞增殖;龙牡壮骨颗粒溶液在550μg/ml范围内培养24和48 h可显著促进小鼠成骨细胞增殖;龙牡壮骨颗粒溶液在5⁵0μg/ml范围内培养48和72 h显著提高MC3T3-E1细胞ALP活性。龙牡壮骨颗粒浓度为10μg/ml和50μg/ml时,茜素红染色钙化结节显著增多,药物浓度在1050μg/ml范围内培养48和72 h显著提高MC3T3-E1细胞ALP活性。龙牡壮骨颗粒浓度为10μg/ml和50μg/ml时,茜素红染色钙化结节显著增多,药物浓度在10⁵0μg/ml范围内,Von Kossa染色钙化结节显著增多。结论:龙牡壮骨颗粒可提高MC3T3-E1增殖、分化及矿化的能力。