缺氧诱导因子1α对肝癌细胞HepG2干细胞特性及表阿霉素敏感性的影响

目的探讨缺氧诱导因子(HIF)1α对肝癌细胞HepG2干细胞特性及表阿霉素敏感性的影响。方法以肝癌细胞为研究对象,肝癌细胞HepG2脂质体转染过表达HIF-1α的质粒作为实验组,转染pcDNA3.1空质粒作为对照组,单独HepG2细胞为HepG2组。实时荧光定量PCR检测HIF-1αmRNA表达,Western Blot检测HIF-1α蛋白表达;流式细胞术检测细胞表面CD133表达。不同浓度表阿霉素(0、6.25、12.5、25、50μmol/L)作用3组细胞24 h,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测表阿霉素(50μmol/L)处理后细胞凋亡情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用t检验。结果相较于HepG2组及对照组,实验组HIF-1αmRNA的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P值均<0.001);Western Blot结果显示实验组HIF-1α蛋白高表达。HepG2组、对照组和实验组细胞的CD133比例分别为0.040%±0.003%、0.030%±0.010%、20.110%±0.600%,实验组的CD133阳性率显著高于HepG2组和对照组(P值均<0.001)。表阿霉素浓度为25、50μmol/L时,HepG2组和对照组的细胞活性明显受到抑制,显著低于实验组(P值均<0.05)。50μmol/L表阿霉素作用48 h后,实验组的细胞凋亡率(67.9%±2.5%)较HepG2组(93.6%±1.5%)和对照组(93.0%±1.2%)明显降低(P值均<0.001)。结论过表达HIF-1α的质粒成功转染至HepG2细胞,HIF-1α可提高肝癌细胞干细胞比例使其对表阿霉素耐药。     

通天草提取物对大鼠肝纤维化的影响和机制

目的探讨通天草提取物(AEWH)对CCl_4诱导大鼠肝纤维化(LF)的影响和机制。方法 SD大鼠随机分成对照组,模型组,治疗组(秋水仙碱0.001 g/kg),AEWH高、中、低剂量组(AEWH 3、1.5、0.75 g/kg)。采用40%CCl_4(1 ml/kg)腹腔注射诱导LF大鼠模型。放射免疫法检测大鼠血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(CⅣ)水平。生化分析法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)水平。电子显微镜观察大鼠肝组织镜下形态结构并计算肝脏脏器指数。酶联免疫法检测肝脏中转化生长因子(TGF)-β1和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。结果与模型组比较,AEWH高、中剂量组大鼠血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ、ALT和AST明显降低(P0.05),TP和ALB明显升高(P0.05),大鼠肝脏病理纤维化明显减轻,肝脏脏器指数明显降低(P0.05),肝TGF-β1和TNF-α明显降低(P0.05)。结论 AEWH可减轻CCl4诱导LF大鼠肝脏损伤,降低LF程度。AEWH治疗LF的机制与抑制大鼠肝脏TGF-β1和TNF-α表达有关。     

肿瘤坏死因子α对急性肝坏死小鼠肠道分泌型IgA变化的影响

据报道,重型肝炎患者血清中肿瘤坏死因子(TNF)α明显升高~([1-2]),因此,有学者认为TNF α在急性肝坏死时对肝损伤起重要作用,是导致肝坏死的重要介质之一~([3]).我们用脂多糖(LPS)/D-氨基半乳糖(GalN)建立急性肝坏死模型,并用抗小鼠TNF α-IgG抗体和抗小鼠肿瘤坏死因子受体1(TNF α-R1)抗体进行阻断,同时用TNF α代替LPS建立急性肝坏死动物模型,以观察TNF α是否是影响分泌型IgA(SIgA)变化的一个因子,从而探讨TNF α是否在急性肝坏死时对肠道SIgA的变化起作用,并验证SIgA变化是否可导致腹膜炎.     

Pim-3对暴发性肝功能衰竭大鼠的肝组织修复效应及机制分析

目的 探讨Pim-3基因对暴发性肝功能衰竭(FHF)大鼠的肝组织修复效应.方法 将32只大鼠分为4组,健康对照组和3组处理组,每组8只.3组处理组分别以林格液、空载质粒(pEGFP-N2)和重组质粒(pEGFP-N2/Pim-3)溶液预处理大鼠,1 d后予脂多糖(LPS)/D-半乳糖胺(D-GalN)腹腔注射诱导FHF.8 h后或濒死期处死大鼠,采集血清和肝组织标本,检测血清转氨酶水平,RT-PCR和ELISA分别检测TNF-α和IL-1β基因表达及其血中浓度,原位末端凋亡(TUNEL)分析评估肝细胞凋亡水平,检测肝组织损伤程度.组间比较采用方差分析.结果 重组质粒注射能诱导目的 基因Pim-3和报告基因绿色荧光蛋白(GFP)在肝内高表达;与其他处理组相比,重组质粒组大鼠的生存率显著提高,血清转氨酶水平明显降低,且肝组织内出血坏死和炎性细胞浸润程度也明显减轻;重组质粒组肝凋亡指数为(10.2±6.9)%,显著低于林格液组的(83.1±12.6)%和空载质粒组的(79.9±13.4)%(P＜0.01);外源Pim-3基因的应用显著降低了肝组织内TNF-α和IL-1β mRNA的表达,以及血清TNF-α和IL-1β蛋白的分泌水平.结论 Pim-3基因有助于保护大鼠免于LPS/D-GalN诱导暴发性FHF的发生,其机制可能是抑制肝内炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的表达和分泌.     

肿瘤坏死因子-α对人胰腺癌细胞CXCL8及其受体表达的影响

目的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可以促进多种细胞因子和化学趋化因子的分泌,从而参与肿瘤的进展和转移。为探讨胰腺癌微环境调节机制,本课题研究了TNF-α对于胰腺癌细胞CXCL8基因表达和蛋白分泌及其受体CXCR1和CXCR2的影响。方法应用real-timePCR和ELISA方法检测4株胰腺癌细胞株PANC-1、CFPAC-1、Aspc1和Bxpc3。结果①Real-timePCR结果显示TNF-α刺激胰腺癌细胞后CXCL8mRNA相对表达量呈浓度依赖性。而从时间曲线分析,CXCL8mRNA的相对表达量以12h为显著,随后逐渐下降。②选取12h为时间点,检测10ng/mlTNF-α对PANC-1、Aspc-1、BxPc3细胞CXCL8mRNA相对表达量,结果显示PANC-1(14.31±4.80),Aspc-1(13.01±3.11)和Bxpc3(116.74±37.33)细胞CXCL8mRNA相对表达量较对照组显著增高(P<0.05)。③10ng/mlTNF-α刺激胰腺癌细胞72h后,胰腺癌细胞上清液中CXCL8浓度较阴性对照组(0ng/mlTNF-α)显著增加(P<0.05)[CFPAC-1细胞为(2689.95±79.40)ng/mlvs(2048.51±62.25)ng/ml;Bxpc3细胞为(1866.07±869.83)ng/mlvs(1308.92±850.29)ng/ml;Aspc-1细胞为(2077.19±344.13)ng/mlvs(1861.17±427.74)ng/ml;PANC-1细胞为(1624.10±420.77)ng/mlvs(1179.27±273.84)ng/ml]。④Real-timePCR检测10ng/mlTNF-α刺激BxPc3细胞CXCR1(0.68±0.056)和CXCR2(0.38±0.051)mRNA相对表达量下降(P<0.01),CF-PAC-1、PANC-1和Aspc-1细胞CXCR1和CXCR2表达未见明显改变(P>0.05)。结论 TNF-α通过促进CXCL8mRNA表达和分泌参与胰腺癌微环境的调节。     

TRAIL诱导大鼠肝星状细胞系HSC-T6凋亡及机制研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导肝星状细胞凋亡情况及调控机制。方法用RT-PCR检测大鼠肝星状细胞（HSC-T6）中α-SMAmRNA和DR5mRNA的表达;MTT比色法和流式细胞术检测外源性TRAIL对HSC-T6细胞增殖和诱导细胞凋亡的影响;采用Western blot检测Bax、Caspase3蛋白的表达。结果培养的HSC-T6细胞表达α-SMA mRNA和DR5mRNA随作用时间的延长逐渐增加,TRAIL可以抑制其细胞增殖。TRAIL与对照组比较可以诱导活化的HSC-T6细胞凋亡明显增加（P〈0.05）,Western-blotting分析显示TRAIL作用下,HSC-T6细胞中的线粒体Bax蛋白、细胞浆Caspase3蛋白表达均上调。结论外源性TRAIL可诱导活化的HSC-T6细胞凋亡,可能与DR5及线粒体Bax表达上调有关。     

肥大细胞在肝纤维化发生发展过程中的作用及其与TNFα的关系

目的对肥大细胞在实验性肝纤维化过程中形态与功能变化进行动态观察并初步探讨其作用。方法通过组织化学、电镜技术、图像分析及免疫组织化学等方法对肥大细胞数量、组化性质及超微结构改变、肝纤维化程度进行动态观察，并对ＴＮＦα的分布进行定位研究。采用荧光生化测定肝脏组胺含量，酶联免疫法测定血浆ＴＮＦα浓度。结果随肝纤维化程度逐渐加重，各组肥大细胞数目和肝组织组胺浓度均逐渐增高，与正常对照组相比增高显著（Ｐ＜００５），且二者均与血浆ＴＮＦα浓度变化正相关。结论肥大细胞在肝纤维化的发生发展中起重要作用，其作用通过功能与结构变化而实现。     

脂质体法转染人肿瘤坏死因子-α基因对裸鼠人肝癌移植瘤的抑制效应及其机制

背景：外源性肿瘤坏死因子（TNF）-α联合化疗药物对肿瘤的疗效较单独应用更佳,为肿瘤治疗提供了新的方向。目的：对裸鼠人肝癌移植瘤模型行脂质体介导的TNF-α基因瘤内转染,研究肝癌移植瘤的生长抑制情况及其机制。方法：经脂质体介导,以真核表达质粒pSVK3-TNF-α分别转染人肝癌细胞株SMMC-7721和裸鼠皮下SMMC-7721细胞移植瘤。测定SMMC-7721细胞的TNF-α浓度,甲基噻唑基四唑（MTT）法测定细胞杀伤率,流式细胞仪和原位末端标记（TUNEL）法检测细胞周期和凋亡情况。结果：TNF-α转基因治疗裸鼠人肝癌移植瘤结束第5d,移植瘤体积为（75.28±35.35）mm^3,显著低于对照组的（326.45±103.64）mm^3（P〈0.05）。TNF-α基因体外转染SMMC-7721细胞24、48、72h后,基因转染组每106个细胞的TNF-α表达量分别为（1680±187）pg、（1702±205）pg和（1650±164）pg,细胞杀伤率分别为（37.1±2.4）%、（79.4±4.3）%和（84.2±4.6）%。基因转染72h后,SMMC-7721细胞增殖指数为（30.5±3.2）%,显著低于对照组的（46.1±3.9）%（P〈0.05）;凋亡指数为（10.0±2.1）%,显著高于对照组的（2.7±0.4）%（P〈0.01）。结论：脂质体介导的TNF-α基因转染裸鼠人肝癌移植瘤可明显抑制肿瘤生长,其机制可能为影响肿瘤细胞生长周期以及诱导肿瘤细胞凋亡。     

辛伐他汀对肿瘤坏死因子α诱导CX3CL1表达的影响

目的通过研究辛伐他汀对肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导血管平滑肌细胞CX3CLl表达的影响,进一步探讨辛伐他汀的抗炎机制。方法采用体外培养的SD大鼠血管平滑肌细胞;免疫荧光法检测核因子(NF)-κB的活化;RT-PCR法检测CX3CLl mRNA表达。结果 TNF-α可诱导血管平滑肌细胞NF-κB活化,并增加CX3CLlmRNA的表达;辛伐他汀可抑制TNF-α对血管平滑肌细胞NF-κB活化及CX3CLl mRNA的表达。结论辛伐他汀可能通过抑制NF-κB的活化,而下调TNF-α诱导的CX3CLl的表达。     

细胞因子对感染日本血吸虫小鼠肝纤维化的影响

目的探索细胞因子对日本血吸虫病肝纤维化的影响。方法用免疫组化技术，观察１１０只昆明鼠（其中９０只为感染日本血吸虫鼠）肝内肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）α和细胞外基质的量及分布，和注射ＴＮＦ及白细胞介素（ＩＬ）１后它们的变化。结果感染后１２周小鼠肝内ＴＮＦ达高峰，主要分布在虫卵肉芽肿内及其周围。纤维连接素、层连素、Ⅰ及Ⅲ型胶原分别于感染后１６及２０周达高峰，由细线状增宽变厚，呈条索状沉积在肉芽肿内及其周围。注射ＴＮＦ后，感染鼠肝内Ⅰ型胶原明显增加（Ｐ＝００１）；注射ＩＬ１使Ⅰ及Ⅲ型胶原略多于同期未注射组；联合注射ＴＮＦ和ＩＬ１，肝内ＴＮＦ及Ⅰ型胶原显著高于同期非注射组（Ｐ＜００５，Ｐ＝００１）。结论ＴＮＦ可刺激昆明鼠肝内胶原增加，ＩＬ１具有协同ＴＮＦ的作用。     

肿瘤坏死因子α对急性肝坏死小鼠血脑屏障通透性的影响

研究拟通过建立急性肝坏死（ALF）动物模型，探讨肿瘤坏死因子α（TNFα）在肝坏死时血脑屏障（BBB）通透性改变中的作用。     

罗格列酮对小鼠急性肝衰竭的保护作用及其机制

罗格列酮为过氧化物酶增殖物活化受体- γ(PPAR-γ)的合成型配体,对PPAR-γ有高度选择性.研究表明肝组织也有PPAR-γ的表达,且PPAR-γ的功能状态与脂肪肝、肝脏炎症与纤维化,甚至肝癌的发生有密切关系.     

半枝莲醇提物对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1和TNF-α表达的影响

目的观察半枝莲治疗实验性肝纤维化大鼠对转化生长因子-β1(TGF-β1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法采用CCl4复合因素制作大鼠肝纤维化模型,通过免疫组化法和ELISA法分别检测TGF-β1、TNF-α在肝组织和血清中的含量;采用酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测单个细胞分泌TNF-α的含量。结果正常对照组动物肝组织无TNF-α和TGF-β1表达,而模型组表达增强(P0.05);高剂量半枝莲处理能降低两细胞因子的表达(P0.05)。结论半枝莲能抑制TGF-β1和TNF-α的分泌,因而有抗肝纤维化作用。     

内毒素对实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2的影响

目的探讨内毒素对早期实验性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的影响及其在肝纤维形成过程中的作用机制。方法建立实验性肝纤维化大鼠模型,采用免疫组化染色法半定量测定MMP-2、α-SMA在肝纤维化过程中的时序动态表达,网状纤维法判定肝纤维化程度,同时采用ELISA法测定血浆内毒素和TNF-α的水平。结果有内毒素血症发生,不同时期（0、2、4、6周）血浆内毒素水平呈梯度增加,组间差异明显,血浆内毒素与TNF-α及肝组织MMP-2、α-SMA表达有较好的相关性。MMP-2表达的部位、时序、量的变化都与α-SMA的表达大致平行,以中央静脉周围、汇管区、纤维间隔内为明显,提示MMP-2主要由活化的肝星状细胞（HSC）合成。肝纤维化程度与α-SMA、MMP-2在肝脏的表达呈正相关。结论内毒素可能通过细胞因子TNF-α,介导肝组织MMP-2、α-SMA的表达,而后者又与肝纤维化的程度密切相关。     

大黄对急性胰腺炎患者炎性递质的影响

[目的]探讨大黄汤剂灌胃对急性胰腺炎（AP）患者炎性递质的影响。[方法]36例AP患者，随机分为2组，治疗组在西医综合治疗的基础上加用大黄汤剂灌胃；对照组仅予西医综合治疗。观察比较2组临床疗效，血、尿淀粉酶，血肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、单核细胞趋化因子1（MCP-1）等变化。[结果]治疗组临床疗效优于对照组（P〈0．05）；治疗后治疗组血、尿淀粉酶值，血TNF-α、IL-6、MCP-1水平均低于对照组（均P〈0．05）。[结论]大黄汤剂灌胃治疗AP疗效肯定，其机制可能与下调炎性递质有关。     

大黄对重症急性胰腺炎大鼠炎症因子的影响

[目的]研究大黄对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)的影响,探讨大黄治疗SAP的作用机制。[方法]采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠法建立大鼠SAP模型。将SD大鼠随机分为假手术组、SAP组、大黄治疗(大黄)组。观察各组不同时间点血清淀粉酶、TNF-α、IL-6、MCP-1水平及胰腺组织中TNF-α、IL-6、MCP-1的mRNA水平。[结果]与假手术组比较,SAP组血清淀粉酶、TNF-α、IL-6、MCP-1水平均明显升高,胰腺组织中TNF-α、IL-6、MCP-1mRNA水平亦明显增加(均P<0.01);大黄组与SAP组比较,血清淀粉酶、TNF-α、IL-6、MCP-1水平及胰腺组织中TNF-α、IL-6、MCP-1mRNA均明显降低(均P<0.01)。[结论]大黄治疗SAP的机制可能是通过下调炎症递质的表达而减轻SAP的炎症反应。     

前炎症细胞因子对人结肠腺癌细胞5-羟色胺转运体表达的影响

目的 研究前炎症细胞因子白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α对人结肠癌细胞(Caco-2细胞)5-羟色胺转运体(SERT)表达的影响.方法 Caco-2细胞系体外培养5d后,分为对照组(新鲜培养基)、IL-1β孵育组(50ng/ml)和TNF-α孵育组(50ng/ml),采用RT-PCR和Western印迹法分别观察各组2、24和48h时Caco-2细胞SERT mRNA的表达和24、48和72h时SERT蛋白的表达情况.结果对照组在2、24、48h时SERT mRNA相对表达水平分别为2.282±1.367、1.586±0.421和1.86±0.496;IL-1β孵育组分别为1.393±1.184、1.064±0.625和1.013±0.415,较对照组明显降低(P<0.05);TNF-α孵育组分别为1.000±0.000、0.829±0.162和0.945±0.147,较对照组明显降低(P<0.01),三组间比较差异有统计学意义(P<0.01).IL-1β孵育组和TNF-α孵育组于24、48、72h时SERT蛋白表达水平均低于对照组.结论 IL-1β和TNF-α在体外对结肠细胞SERT表达具有抑制作用,提示IL-1β和TNF-α可通过改变5-羟色胺系统的活性,影响内脏敏感性.     

TNF-α体外对Caco-2细胞通透性的影响及其机制

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对Caco-2细胞间通透性的影响及作用机制.方法:利用Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型,模型分为正常对照组(C组)和TNF-α预处理组(TNF-α组),TNF-α组根据预处理时间又分为3、6、12、24 h 4个亚组.应用电阻仪测定TNF-α预处理后各组Caco-2细胞的跨上皮细胞电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)变化;罗丹明-鬼笔环肽直接染色观察细胞骨架改变;同时采用荧光素酶报告基因检测NF-κB活性.结果:TNF-α各亚组TEER均降低,与C组比较均有显著性差异(均P<0.05),其中TNF-α24 h亚组TEER降低明显.与C组及TNF-α 3、6、12 h亚组比较有显著性差异(均P<0.05);TNF-α 3、6、12 h亚组NF-κB活性增高.与C组比较均有显著性差异(均P<0.05),且TNF-α12 h亚组NF-κB活性明显增高,与C组及TNF-α 3、6、24 h亚组比较均有显著性差异(均P<0.05);罗丹明-鬼笔环肽直接染色可见C组的F-actin沿细胞膜分布,呈蜂巢状线性荧光,100 μg/L TNF-α预处理后导致F-actin荧光信号减弱,并呈锯齿状异常分布.结论:TNF-α导致Caco-2细胞问的通透性增加.其机制可能与NF-κB活化及F-actin重组有关.     

硫化氢对肝部分切除老龄大鼠术后认知功能障碍的影响及其机制

目的 探讨外源性硫化氢(H₂S)对肝部分切除老年大鼠术后认知功能障碍的影响及其机制。方法 30只老年健康雄性大鼠随机分为对照(S)组、肝部分切除(HP)组和硫化氢(HS)组各10只。HS组术后腹腔注射硫氢化钠溶液5 mg/kg, S组和HP组注射等量0.9%氯化钠溶液,1次/d,连续7 d。术后1、3、7 d水迷宫试验检测认知功能,电镜下观察术后7 d海马组织形态学变化及酶联免疫吸附试验(ELISA)测定海马组织中的肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β含量。结果 与HP组相比,HS组术后第1、3、7天逃避潜伏期均明显缩短,穿越平台次数均明显增加(P<0.05);海马组织神经损伤明显减轻;海马组织中TNF-α和IL-1β水平显著下降(P<0.05)。结论 外源性H₂S可通过降低老年大鼠海马组织中的TNF-α和IL-1β表达,减轻海马组织的炎症损伤,从而改善术后认知功能。