脂氧素A4调控mRNA-29b保护脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的机制研究

目的探讨脂氧素A4（LXA4）调控miRNA-29家族分子保护脂多糖（LPS）诱导大鼠急性肺损伤（特征性表现为急性呼吸窘迫综合征）的机制。方法将30只SD大鼠按随机数字表法分为LPS组（按20mg/kg尾静脉注射LPS）、LPS+LXA4组（按20mg/kg尾静脉注射LPS6h后,再按2滋g/kg尾静脉注射LXA4作用2h）和对照组（予等量0.9%氯化钠注射液）,每组10只。麻醉处死大鼠取肺,左肺用于HE染色和ELISA法检测促炎因子（TNF-α、IL-6）水平,右肺用于RT-PCR法检测miRNA-29家族表达水平。结果LPS组大鼠肺组织切片可见明显的炎症改变,肺损伤评分及肺组织内TNF-α、IL-6水平较对照组均明显升高（均P＜0.05）。LPS+LXA4组大鼠肺组织切片可见炎症反应减轻,肺损伤评分及肺组织内TNF-α、IL-6水平较LPS组均明显下降（均P＜0.05）。RT-PCR结果显示,LPS组大鼠肺组织内miRNA-29a、miRNA-29b表达水平均明显升高（均P＜0.05）,LPS+LXA4组miRNA-29b表达水平明显下降（P＜0.05）。结论miRNA-29a、miRNA-29b可能在LPS诱导的大鼠急性肺损伤炎症发生过程中起着调节作用,LPS可能通过下调miRNA-29b表达来发挥促炎症消退的作用。     

迷走神经电刺激对急性呼吸窘迫综合征中Th17和Treg 蛋白变化及炎性因子的影响

目的 探讨迷走神经电刺激（Vagus nerve stimulation, VNS）调控脂多糖（LPS）诱导的急性呼吸窘迫征（acute respiratory distress syndrome, ARDS）体内Th17和Treg 蛋白变化控制炎症的机制。方法 以2mg/kg LPS 鼻管滴注SD大鼠,6h后给予左侧颈部迷走神经以10min,5V,5Hz,2ms频率刺激, 2h后取双肺及脾组织进行检测。大鼠随机分为Control组、LPS组和LPS+VNS组,每组10只。检测肺泡灌洗液总蛋白含量,测定肺部湿干比,H-E染色检测肺部炎症程度,蛋白免疫印迹法及免疫组化检测肺及脾组织Foxp3及Rorγt蛋白表达,ELISA检测肺部灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、IL-10水平。结果 成功构建大鼠ARDS模型。与Control组相比,LPS组肺泡灌洗液总蛋白含量增高（P<0.001）,湿干比增高（P<0.001）,IL-1β、IL-6、IL-17、IL-10表达升高（均P <0.01）和TNF-α表达升高,肺和脾组织中Foxp3和Rorγt蛋白表达上升;与LPS组相比,LPS+VNS组肺泡灌洗液总蛋白含量降低（P<0.05）,湿干比下降（P<0.05）,IL-6、IL-17降低（P<0.05或P<0.01）,IL-10升高（P<0.01）,肺及脾组织中Foxp3蛋白表达上调（P<0.05）和Rorγt蛋白表达下降。结论 VNS可通过调控肺和脾组织Th17和Treg蛋白进而调控炎性因子,减轻LPS诱导的ARDS病理改变,保护组织。     

肺泡巨噬细胞来源的微囊泡对肺损伤的作用

目的探究肺泡巨噬细胞来源微囊泡(microvesicles,MVs)对肺损伤的作用。方法培养小鼠肺泡巨噬细胞,通过梯度离心法获取磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)或脂多糖刺激的肺泡巨噬细胞来源的MVs,并经透射电镜、纳米粒径追踪技术及蛋白免疫印迹进行鉴定。经气管内给予肺泡巨噬细胞来源的MVs,观察小鼠肺组织变化情况,并经蛋白免疫印迹探究肺组织中紧密连接相关蛋白的表达变化。结果透射电镜发现MVs呈现sharp结构,纳米粒径追踪显示MVs粒径集中于100~200 nm,并且其表达CD63、CD68及ALIX标志物。苏木精-伊红染色发现脂多糖刺激的肺泡巨噬细胞来源的MVs可刺激小鼠发生肺损伤,并降低紧密连接相关蛋白闭合小环蛋白,咬合蛋白及闭合蛋白的表达。结论炎性肺泡巨噬细胞来源的MVs可导致肺损伤并降低肺部紧密连接相关蛋白的表达,肺泡巨噬细胞来源的MVs参与肺损伤的发生发展。     

五味子乙素对脂多糖诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织病理损伤、炎症反应和核因子-κB表达的影响

目的 观察五味子乙素对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织病理损伤、炎症反应和核因子 -κB （nuclear factor kappa-B,NF-κB）表达的影响。方法 采用气管滴注40 mg/kg LPS制备大鼠急性肺损伤大鼠模型,手术前1 h腹腔注射80 mg/kg 五味子乙素进行干预治疗,测定大鼠肺湿/干质量比,BCA试剂盒测定大鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalceolar lavage fluid,BALF）总蛋白,牛鲍氏计数板计算 BALF中白细胞数,苏木精-伊红染色观察大鼠肺组织损伤情况,ELISA法检测大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）含量,相关试剂盒检测大鼠肺组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）含量,蛋白质印迹法检测大鼠肺组织中NF-κB p65、磷酸核因子- κB 抑制蛋白（phosphorylation inhibitor of nuclear factor kappa-B,pIκBα）和Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）的表达水平。结果 与模型组相比,五味子乙素组大鼠肺湿/干质量比、BALF中总蛋白含量及白细胞数均显著减少（P<0.05）,病理损伤显著减轻,TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著减少（P<0.05）,MDA含量显著下降,SOD活性显著升高（P<0.05）,NF-κB p65、pIκBα和TLR4表达水平均显著下调（P<0.05）。结论 五味子乙素能够减轻LPS诱导的脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织的病理损伤,抑制炎症反应和氧化应激反应,抑制NF-κB通路激活。     

青藤碱抑制ERK/NF-κB信号通路缓解LPS诱导急性肺损伤

目的 验证青藤碱对急性肺损伤保护作用及作用机制;方法 建立脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠模型,给予青藤碱治疗,检测血液及肺泡灌洗液的炎症指标以及ERK/NF-κB信号通路的激活情况,并通过HE和CD68免疫组化检测病理变化。结果 青藤碱提取液可以有效抑制ERK/NF-κB通路,减少炎症因子释放,减轻LPS导致的肺炎症细胞浸润及病理变化。结论 青藤碱可以通过抑制ERK/NF-κB通路缓解LPS诱导的急性肺损伤。     

大鼠输血相关性急性肺损伤后活化巨噬细胞表面TLR4及CD40的表达情况

目的:研究大鼠输血相关性急性肺损伤后活化巨噬细胞表面TLR4及CD40的表达情况。方法:选择SD大鼠作为实验动物,依次输注脂多糖和血浆,建立输血相关性急性肺损伤(TRALI)动物模型,取肺组织测定湿干比以及TLR4、NF-κB、CD40、TNF-α、IL-1β、MIP-2、GRP78的mRNA表达量,取血清检测TNF-α、IL-1β、MIP-2的含量,取外周血巨噬细胞检测TLR4、NF-κB、CD40的mRNA表达量。结果:TRALI组大鼠肺组织湿干比显著高于Sham组;TRALI组大鼠巨噬细胞中TLR4、NF-kB、CD40的mRNA表达量均显著高于Sham组;TRALI组大鼠肺组织中TLR4、NF-kB、CD40、TNF-α、IL-1β、MIP-2、GRP78的mRNA表达量均显著高于Sham组;TRALI组大鼠血清中、TNF-α、IL-1β、MIP-2的含量显著高于Sham组;TRALI组大鼠肺脏组织中SOD、GSH的含量低于Sham组,MDA、8-OhdG含量高于Sham组。结论:大鼠输血相关性急性肺损伤后活化巨噬细胞表面TLR4及CD40的表达量显著升高,进而会通过炎症反应、氧化应激反应、内质网应激等环节来造成肺损伤。     

丹红注射液对脂多糖诱导THP-1巨噬细胞促炎因子分泌的影响及机制

目的观察丹红注射液对脂多糖（LPS）诱导的THP-1巨噬细胞促炎因子分泌的影响,并探讨其机制。方法160nmol／L佛波酯孵育THP-1巨噬细胞24h后分为对照组、脂多糖组、丹红组和脂多糖＋丹红组,酶联免疫吸附法检测培养液中促炎因子的含量,Western blot检测核因子κB（NF—κB）、p65和rroll样受体4（TLR4）的蛋白表达水平。结果丹红注射液明显抑制LPS诱导的巨噬细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素1β（IL-1β）释放,下调核因子NF—κB和TLR4的表达。结论丹红注射液抑制脂多糖诱导的炎症反应,可能与其抑制TLR4和NF—κB的表达有关。     

赤藓糖醇在脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤中的保护作用研究

目的 探讨赤藓糖醇（Ery）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用及机制。 方法 采用随机 抽签法将 40 只小鼠分为空白对照组（NT 组）、药物对照组（Ery 组）、模型组（LPS 组）和治疗组（LPS+Ery 组）,每组 10 只。Ery 组 及LPS+Ery组小鼠胃部灌注Ery（100 mg/kg Ery粉末溶于100 μL 0.9%氯化钠注射液）,1次/d,共6 d;NT组及LPS组小鼠胃部灌注 100 μL 0.9%氯化钠注射液。6 d 后,LPS 组及 LPS+Ery 组小鼠鼻内滴注 LPS（1.25 mg/kg LPS 粉末溶于 20 μL PBS）诱导小鼠 ALI,NT 组及 Ery 组小鼠鼻内滴注 20 μL PBS。12 h 后,每组随机选取 5 只小鼠,获取新鲜肺组织,采用肺组织湿重/干重（湿/干） 比值和 HE 染色评估肺组织损伤情况,检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性,采用 Western blot 法检测炎症相关蛋白磷酸化 p65（p-p65）蛋白表达水平。每组剩余的 5 只小鼠进行肺泡灌洗,获取肺泡灌洗液,采用 ELISA 法检测小鼠肺泡灌洗液中炎症 因子 IL-6 水平。应用 AutoDock 工具及 PyMOL 软件将 Ery 分子与 p65 蛋白进行对接模拟。 结果 与 NT 组比较,LPS 组小鼠可 见肺组织损伤,肺组织损伤评分、肺组织湿/干比值、肺泡灌洗液中 IL-6 水平、肺组织中 MPO 活性及 p-p65 蛋白表达水平均升 高,差异均有统计学意义（均 P＜0.05）;与 LPS 组比较,LPS+Ery 组小鼠肺损伤程度明显减轻,肺组织损伤评分、肺组织湿/干比 值、小鼠肺泡灌洗液中 IL-6 水平、肺组织中 MPO 活性及 p-p65 蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义（均 P＜0.05）。此 外,Ery 分子与 p65 蛋白具有较强的结合作用。 结论 Ery 可以减轻 LPS 诱导的 ALI 小鼠肺损伤的严重程度,降     

法舒地尔对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨法舒地尔通过RhoA/ROCK（ Rho激酶）通路是否能减轻脂多糖（ LPS）诱导的大鼠急性肺损伤（ ALI）。方法：18只Wistar健康大鼠随机分为对照组（ NS组）、脂多糖组（ LPS组）及法舒地尔干预组（ FAS组）各6只;LPS组和FAS组采用小剂量LPS 1 mg/kg腹腔注射16 h后,气管内滴注LPS 3 mg/kg建立ALI模型。 FAS组在腹腔注射LPS前30 min和气管滴注LPS后1 h给予腹腔注射法舒地尔10 mg/kg。于气管滴注LPS造模后,观察3 h后处死大鼠,通过HE染色观察各组肺组织形态学改变,测肺组织湿/干重比、丙二醛含量、髓过氧化物酶活性,反转录-聚合酶链反应及Western blot法检测肺组织匀浆中ROCK2（Rho激酶2）mRNA及蛋白的表达情况。结果：与NS组比较,LPS组肺组织病理形态学改变明显,FAS组较LPS组相比明显减轻;LPS组肺湿/干重比、丙二醛含量和髓过氧化物酶活性均较NS组明显增高（P〈0.01）,而FAS组较LPS组均有不同程度降低（P〈0.05-P〈0.01）;LPS组ROCK2 mRNA 表达较NS组明显增高（P〈0.01）,而FAS组与LPS组差异无统计学意义（P〉0.05）;LPS组ROCK2蛋白表达较NS组明显增高（P〈0.01）,而FAS组较LPS组表达水平降低（P〈0.05）。结论：法舒地尔通过RhoA/Rho激酶信号通路能够减轻LPS诱导的大鼠ALI。     

姜黄素对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的保护作用

目的观察姜黄素对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用。方法 Wistar大鼠随机分为6组：空白组、模型组、地塞米松组和姜黄素三个不同剂量组（50、100、200mg.kg-1）。LPS气管滴注复制ALI模型,6h后收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,检测TNF-α、IL-1β浓度及蛋白含量;称重法检测肺组织湿/干重比和肺含水量。结果姜黄素剂量依赖性降低LPS所致ALI模型BALF中TNF-α、IL-1β及蛋白量增加,降低肺湿/干重比、肺含水量。结论姜黄素对LPS所致ALI有保护作用,其可能的机制为调节炎症介质的产生有关。     

复方甘草酸苷对脂多糖诱导大鼠肺损伤的保护作用

目的:探讨复方甘草酸苷对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺损伤的保护作用.方法:将健康SD大鼠随机分为正常对照组、LPS组和复方甘草酸苷低、中、高剂量组,每组10只.通过腹腔注射LPS(10 mg/kg)制备大鼠急性肺损伤模型,复方甘草酸苷各剂量组于制备模型6h后腹腔注射不同剂量复方甘草酸苷(4,8或16 mg/kg).各组制备模型24 h后处死大鼠,观察肺组织的病理学改变,并检测血清中炎症因子(TNF-d、IL-1β及IL-10)及肺组织中凋亡相关因子(Bcl-2和Bax)的表达水平.结果:复方甘草酸苷治疗后大鼠肺组织病理损伤减轻,血清中TNF-α和II-1β表达显著减弱(P＜0.05),IL-10表达显著增强(P＜0.05);肺组织中促凋亡因子Bax的表达显著减弱(P＜0.05)而抗凋亡因子Bcl-2的表达显著增强(P＜0.05).结论:复方甘草酸苷对LPS诱导的大鼠急性肺损伤具有保护作用,其作用可能是通过调控炎症反应及细胞凋亡来实现的.     

脐带间充质干细胞外泌体缓解LPS诱导的急性肺损伤

目的 ：研究脐带间充质干细胞来源外泌体（MSC-exo）对急性肺损伤大鼠模型的作用。方法 ：利用超速离心法提取脐带间充质干细胞来源的外泌体,通过透射电镜、动态光散射及蛋白印迹实验鉴定外泌体。用脂多糖（LPS）诱导大鼠发生急性肺损伤动物模型,将动物分为阴性对照组、脂多糖（LPS）组和脂多糖+外泌体（LPS+exo）组。观察动物的精神状态并通过ELISA、QPCR、Western blot和组织化学分析等方法检测关键炎症因子的变化,分析外泌体对脂多糖（LPS）引起的急性肺损伤中炎症的调控作用。结果 ：用脂多糖（LPS）成功诱导大鼠产生急性肺损伤动物模型,外泌体治疗可缓解急性肺损伤模型大鼠的体重减轻、缓解肺水肿、改善炎症因子蛋白水平、减少炎症细胞的浸润。结论 ：脐带间充质干细胞来源外泌体能有效缓解脂多糖诱导的急性肺损伤表型及炎症水平。     

巨噬细胞极化与脂多糖致新生大鼠支气管肺发育不良的相关分析研究

目的探讨巨噬细胞极化在脂多糖(LPS)致新生大鼠支气管肺发育不良发病中的作用。方法使用新生鼠腹腔注射LPS的方法构造新生大鼠支气管肺发育不良模型,选取成功造模的27只作为LPS组,并选取27只同日龄新生大鼠腹腔注射等量生理盐水作为对照组。各组大鼠均行标准饲养,分别在10日龄、14日龄、21日龄进行观察。使用苏木精-伊红(HE)染色检测各组各时间点肺的病理情况;免疫组织化学染色检测各组各时间点肺组织中巨噬细胞CD68的表达情况;免疫荧光检测各组各时间点肺组织中M1型巨噬细胞(CD68~+与诱导型一氧化氮合酶iNOS~+)和CD68~+与精氨酸酶-1(Arg-1)~+的M2型巨噬细胞;流式细胞术检测各组各时间点的肺泡灌洗液中M1 (CD45/CD68/CD86阳性)和M2 (CD45/CD68/CD163阳性)型巨噬细胞所占的比例;荧光定量PCR检测各组肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、NOS和Arg-1的mRNA表达情况。结果病理HE染色显示,随着日龄的增长,对照组大鼠肺泡逐渐分化成熟,其各时间点的肺泡大小均匀、形态规则,肺泡间隔无增厚,肺泡腔内未见炎性细胞浸润;随着日龄的增长,LPS组大鼠肺泡结构紊乱,肺泡间隔明显增厚,并伴肺泡腔及肺间隔周围有炎性细胞的浸润,第21天可见明显的肺泡简单化。免疫组织化学染色后CD68阳性表达呈现胞浆褐色,10日龄、14日龄、21日龄时LPS组大鼠的CD68阳性表达细胞数量均多于对照组。M1型、M2型巨噬细胞免疫荧光染色阳性结果呈现橙色,10日龄、14日龄、21日龄时LPS组大鼠的M1型和M2型巨噬细胞均多于对照组,且第21天,LPS组M2型巨噬细胞增加比M1型更明显。对照组在第10天时以M1极化为主,之后演变为M2极化为主。而LPS组一直以M2极化为主,第10天和第21天的M1%∶M2%比值均较对照组低,差异有统计学意义(t=4.654和4.465,均P0.001)。以对照组基因表达为1,2~(-△△C)t法计算LPS组各基因的相对表达量。LPS组Arg-1基因相对表达量与对照组有1倍差异:LPS组第10天Arg-1 mRNA表达减少至对照组(0.43±0.21)倍,而在第21天表达明显增加至(2.33±0.75)倍。结论 LPS引起新生大鼠的肺损伤在14～21日龄后发展为支气管肺发育不良表型,伴随着巨噬细胞的浸润增加和M1/M2型极化,巨噬细胞激活及M1/M2型极化可通过肺炎症反应失调而阻碍肺发育。巨噬细胞高表达提示可能存在支气管肺发育不良,其可用于提前诊断。     

叔丁基对苯二酚对急性肺损伤小鼠的保护作用

目的 探究叔丁基对苯二酚（tBHQ）在急性肺损伤（acute lung injury, ALI）中调节炎症反应的作用和机制。方法 通过腹腔注射脂多糖（LPS）建立C57BL/6J小鼠ALI模型,将C57BL/6J雄性小鼠随机分组。LPS组小鼠按两种剂量（10mg/kg和20mg/kg）腹腔注射,高剂量组观察小鼠生存率,低剂量组观察炎症反应;磷酸盐缓冲液（PBS）组小鼠给予等体积PBS腹腔注射;tBHQ+LPS/tBHQ组小鼠预先24h腹腔给予tBHQ并在LPS处理的同时给予tBHQ;LPS/tBHQ组小鼠在LPS处理的同时给予tBHQ。监测7d生存率;LPS诱导3h后病理组织学观察评估其肺组织损伤程度,实时定量PCR（RT-qPCR）和多重液相蛋白定量技术分别检测小鼠肺组织和血清中IL-6、TNF-α和IL-10的水平,Western印迹法和RT-qPCR检测各组小鼠肺组织中核外转录因子NF-E2相关因子（Nrf2）的表达。结果 与LPS组相比,LPS/tBHQ组和tBHQ+LPS/tBHQ组小鼠的死亡率均明显降低（P分别为0.0005和0.0001）,并且小鼠肺组织损伤程度明显减轻,小鼠肺组织和血清中促炎症介质IL-6和TNF-α的表达降低,抗炎介质IL-10的表达增加;同时与LPS组相比,tBHQ可明显增加肺组织中Nrf2的mRNA水平以及核内蛋白水平。结论 tBHQ能够通过调节小鼠肺组织中促炎、抑炎反应平衡发挥对ALI的保护作用,其机制可能与促进Nrf2核转位有关。     

丙泊酚对LPS诱导的大鼠急性肺损伤状态下SP-B表达的调节作用

目的探讨丙泊酚对LPS诱导的大鼠急性肺损伤的保护作用和对肺组织肺表面活性蛋白B(SP-B)的调节作用。方法 30只雄性Wistar大鼠(SPF级)随机分为对照组(Control组)、治疗组(LPS+Propofol组)和模型组(LPS组)每组10只。通过颈静脉注射LPS建立大鼠急性肺损伤(ALI)模型。采用HE染色观察肺组织病理学改变并进行肺损伤评分;采用湿/干比(W/D)值分析肺水肿严重程度;使用RT-PCR和western blotting对肺组织中SP-B的表达进行检测。结果在给予颈静脉注射LPS后,大鼠肺组织出现明显的病理改变和较高的肺损伤评分,W/D值明显升高,同时肺组织中SP-B mRNA和蛋白水平明显降低,差异均有显著统计学意义(P<0.05)。但与LPS组相比较,LPS+Propofol组大鼠肺组织病理变化较轻,肺损伤评分和W/D值较低,同时肺组织中SP-B mRNA和蛋白的表达水平较高,差异均有显著统计学意义(P<0.05)。结论镇静药丙泊酚可以有效改善大鼠ALI导致的肺部炎症反应和肺水肿,同时上调肺组织中SP-B的表达水平。但仍需进一步研究揭示丙泊酚对于ALI状态下SP-B的调节作用的分子机制和相关的信号通路。     

骨髓间充质干细胞对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的早期治疗作用(英文)

目的观察经尾静脉输注的骨髓间充质干细胞(MSCs)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤小鼠的早期治疗作用。方法采用密度梯度单个核细胞分离培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,传至第4代时观察细胞形态、流式细胞仪检测细胞表面标志,定向诱导检测分化能力后备用。36只小鼠随机分为对照组,PBS治疗组,MSC治疗组。对照组气管内滴注生理盐水50μl,PBS和MSC治疗组气管内滴注LPS制备急性肺损伤模型。造模后1 h后经尾静脉输注MSC5×106(MSCs治疗组)或PBS 100μ(lPBS治疗组或对照组)。24 h后处死小鼠,留取标本检测肺组织病理形态学、肺组织湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞数、蛋白含量、细胞因子水平和肺组织中的MPO表达量。结果与对照组比较,PBS治疗组肺组织病理损伤严重,BALF中中性粒细胞数、蛋白含量、TNF-α、IL-6和IL-10水平、肺组织中的MPO含量及肺组织湿干重比均显著升高。与PBS治疗组比较,MSCs治疗组肺组织病理损伤程度减轻,BALF中中性粒细胞数、蛋白含量、TNF-α、IL-6水平、肺组织中的MPO含量及肺组织湿干重比均显著降低,但仍高于对照组水平,IL-10水平显著高于PBS治疗组和对照组。结论 MSCs移植在LPS诱导的急性肺损伤早期阶段可有效改善肺组织病理损伤,减轻肺部炎症反应,降低肺水肿程度,这种治疗作用不依赖于MSCs移植后在肺内的定植数量。     

颗粒蛋白前体通过调控调节性T细胞影响急性肺损伤白细胞介素-10表达和肺巨噬细胞极化的实验研究

目的:研究颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)在小鼠急性肺损伤(acute lung injury,ALI)模型中对调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)的调控及其对白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)表达和肺巨噬细胞极化的影响。方法:将C57BL/6小鼠随机分为Control组、脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)组、LPS+PGRN治疗组。用LPS气道滴注诱导小鼠ALI模型,LPS+PGRN治疗组在LPS处理半小时后采用0.1 mg/kg的PGRN气道滴注。给药24 h后用水合氯醒麻醉小鼠,取小鼠肺组织及肝素抗凝血。肺组织病理切片HE染色评估肺损伤;流式细胞术检测外周血Tregs;酶联免疫吸附法检测血浆IL-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、IL-10表达;免疫荧光检测肺巨噬细胞表型。结果:不同处理组间外周血Tregs,血浆中IL-6、TNF-α、IL-10,肺组织中M1、M2型肺巨噬细胞存在统计学差异(F=69.340,P=0.000;F=73.100,P=...     

黄芩苷对小鼠巨噬细胞CD36表达及肿瘤坏死因子-α分泌的影响

[目的]观察黄芩苷对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠巨噬细胞CD36表达及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的影响.[方法]分别用LPS(终浓度0.1μg/mL)或LPS加黄芩苷(终浓度分别为50、100 μmol/L)处理生长良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用实时荧光定量PCR法和流式细胞术检测黄芩苷对巨噬细胞CD36分子表达的影响,然后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中TNF-α含量变化.[结果]LPS刺激可以诱导巨噬细胞CD36表达升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);不同浓度黄芩苷预处理组可显著抑制LPS诱导的CD36基因转录和蛋白表达,与LPS组比较差异有统计学意义(P＜0.01);黄芩苷还可显著减少巨噬细胞炎症因子TNF-α的分泌(P＜0.05).[结论]黄芩苷可通过抑制CD36表达,下调LPS诱导的巨噬细胞炎症因子TNF-α的生成从而发挥抗炎作用.     

穗花杉双黄酮调控miR-140-5p介导脂多糖致急性肺损伤的机制研究

目的 探究穗花杉双黄酮对脂多糖（lipopolysaccharides ,LPS）致大鼠急性肺损伤（acute lung injury ,ALI）的保护作用及机制研究。方法 将60只大鼠随机分为4组：对照组、模型组、阳性对照组、实验组。模型组、阳性对照组和实验组大鼠均通过气道滴注3.00 mg/kg LPS 100μl,空白对照组气道滴注等体积的生理盐水,6 h后阳性对照组大鼠腹腔注射地塞米松（2.5 mg/kg）,实验组大鼠腹腔注射穗花杉双黄酮（2.5 mg/kg）,对照组和模型组注射等体积生理盐水。48 h后称重测定大鼠肺组织湿/干比;苏木精-伊红染色( hematoxylin-Eosin staining,HE )观察各组大鼠肺组织病理结构;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin 6,IL-6）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）水平;RT-PCR检测miR-140-5p在肺组织中的表达情况;蛋白印迹法（western Blot,WB）检测肺组织中Toll样受体4（Toll Like Receptor 4,TLR4）、核因子活化B细胞κ轻链增强子（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB）蛋白表达水平。RT-PCR检测肺组织中miR-140-5p的表达情况。利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入穗花杉双黄酮RT-PCR检测miR-140-5P的表达,利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入miR-140-5P抑制剂、mimic-NC干预,RT-PCR检测TLR4、NF-κB的表达。结果 实验组肺组织湿/干比明显低于模型组（P＜0.05）;HE染色结果显示实验组大鼠肺组织结构相比于ALI模型组大鼠炎症细胞明显减少,肺泡间隔明显减轻;ELISA结果显示实验组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显低于模型组（P＜0.05）;WB结果发现实验组大鼠肺组织中TLR4、NF-κB表达量明显低于模型组;RT-PCR结果显示实验组大鼠肺组织和细胞中miR-140-5P表达均明显高于模型组（P＜0.05）,而miR-140-5P mimic能明显抑制TLR4、NF-κB的表达（P＜0.05）。结论 穗花杉双黄酮能明显缓解LPS诱导的大鼠ALI,降低肺损伤病理进程中血清TNF-α、IL-6和IL-1β的含量,对ALI起保护作用,其作用机制可能是通过促进了miR-140-5P的表达,从而减低ALI炎症过程中关键炎症信号TLR4、NF-κB的表达。     

脂多糖诱导急性肺损伤小鼠肺脏蛋白质电泳图谱分析

目的 蛋白质双向电泳技术观察气管滴注脂多糖诱导急性肺损伤后小鼠肺组织在蛋白质水平上的改变.方法 小鼠气管内滴注脂多糖制备小鼠急性肺损伤模型,48 h后做小鼠肺CT、肺病理切片及测肺湿/干重比用于观察肺损伤程度;并提取总蛋白,进行双向电泳测定,对获取的蛋白图谱进行分析,寻找差异表达的蛋白质.结果 实验组肺CT显示明显炎症表现;病理切片显示小鼠肺组织水肿充血改变明显,肺泡中有大量红细胞和中性粒细胞浸润,肺损伤评分和肺湿/干重比正常组增加;双向电泳结果显示实验组小鼠比正常组小鼠的肺组织总蛋白数增加,蛋白质点数为(100±2),其中有21个表达的蛋白差异点,通过蛋白质谱鉴定和生物信息检索结果显示蛋白质过氧化物酶6在实验组和正常组中有明显差异, 其可能与急性肺损伤的发生相关.结论 通过向小鼠气管内滴注脂多糖可以诱发急性肺损伤,蛋白质双向电泳结果显示实验组小鼠肺组织中蛋白质过氧化物酶6表达的增加,机制还待进一步研究.