miR-125在甲状腺癌组织中的表达及通过靶向负调控RAB11A促进甲状腺癌细胞活性的研究

目的:探讨miR-125在甲状腺癌组织中的表达及促进甲状腺癌细胞增殖的相关机制。方法:采用RT-PCR法检测26例甲状腺乳头状癌（PTC）标本和4株PTC细胞株中miR-125的表达水平。采用CCK-8法、细胞集落形成实验、Transwell实验以及流式细胞法验证miR-125在PTC细胞中的作用。采用双荧光素酶实验验证RAB11A是否是miR-125的直接靶点。结果:miR-125在甲状腺癌组织中的相对表达水平显著高于癌旁正常组织（P＜0.05）;与Nthy-Ori3-1相比,甲状腺癌细胞株TPC-1、NPA、KTC-1、WRO中的miR-125表达水平显著升高（P＜0.05）。与miRNA NC组相比,miR-125 mimics组的细胞克隆形成数量及侵袭细胞数量明显增多,miR-125 inhibitor组显著减少（P＜0.05）。Transwell实验结果显示,miRNA NC组细胞的迁移速度明显比miR-125 mimics组慢,但显著快于miR-125 inhibitor组。流式细胞检测显示,miRNA NC组、miR-125 mimics组、miR-125 inhibitor组的凋亡细胞比例分别为（5.1±0.08）%、（1.5±0.06）%、（7.8±0.07）%,两两比较后发现,miR-125 mimics组凋亡细胞比例最低,miR-125 inhibitor组最高。荧光素酶报告显示,RAB11A是miR-125的直接靶点。将miR-125模拟物、抑制剂或miRNA NC(100 nmol/L)转染KTC-1细胞后,RAB11A mRNA水平均无明显改变。但Western blot检测显示,与对照组相比,miR-125 mimics组RAB11A蛋白表达显著降低,miR-125 inhibitor组RAB11A蛋白表达显著增加。表明miR-125不影响RAB11A mRNA的稳定性,但在转录后水平调节RAB11A蛋白的表达。结论:miR-125通过在转录后水平负调控RAB11A蛋白的表达而发挥促甲状腺癌的作用。miR-125有望成为PTC患者诊断和治疗的新靶点。     

miRNA-143对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响及机制研究

目的 探讨miRNA-143对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响及机制.方法 实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测宫颈癌组织、癌旁组织及宫颈癌C-33A、HeLa、CaSki细胞中miRNA-143的表达水平.将miR-NA-143 mimics、miRNA-143 inhibitor及HIF-1α-siRNA转染至HeLa细胞中,未转染的作为对照组.Western blot检测转染48 h后miRNA-143 mimics组、miRNA-143 inhibitor组和对照组的HIF-1α蛋白表达水平.将miRNA-NC+miRNA-143 mimics、Wt-HIF-1α+miRNA-143 mimics、Mut-HIF-1α+miRNA-143 mimics转染HeLa细胞,检测荧光素酶活性;后续实验分为对照组、miRNA-143 mimics组及HIF-1α-siRNA组,各组细胞转染48 h后,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Ki-67、cleaved caspase 3、β-catenin、cyclin D1蛋白表达水平.结果 宫颈癌组织中miRNA-143的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01),人宫颈癌CaSki细胞中的miR-NA-143表达水平高于人宫颈癌HeLa细胞和C-33A细胞(P<0.05).miRNA-143 mimics组的HIF-1α蛋白表达水平低于对照组,miRNA-143 inhibitor组的HIF-1α蛋白表达水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).Wt-HIF-1α+miRNA-143 mimics组的荧光素酶活性低于miRNA-NC+miRNA-143 mimics组和Mut-HIF-1α+miRNA-143 mimics组,差异均有统计学意义(P<0.05);而Mut-HIF-1α+miRNA-143 mimics组与miRNA-NC+miRNA-143 mim-ics组的荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(P>0.05).miRNA-143 mimics和HIF-1α-siRNA组的细胞存活率及Ki-67、β-catenin、cyclin D1蛋白表达水平均低于对照组,细胞凋亡率及cleaved caspase 3蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miRNA-143在宫颈癌中低表达,miRNA-143可通过下调HIF-1α的表达及抑制Wnt/β-catenin信号通路,抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖并促进其凋亡.     

微小RNA-526b-3p通过JAK/STAT3信号通路对黑色素瘤细胞侵袭迁移的影响

目的 探讨微小RNA-526b-3p(miR-526b-3p)对黑素瘤细胞侵袭与迁移的影响及潜在机制。方法 实时定量PCR(qPCR)检测黑色素瘤组织和A2058细胞中miR-526b-3p和信号转导子与激活子3(STAT3)的表达水平，双荧光素酶报告基因实验验证miR-526b-3p和STAT3的靶向关系。成功构建miR-526b-3p模拟物(mimics)和过表达STAT3的质粒pcDNA3.1-STAT3后进行转染，将A2058细胞分为miR-NC组(对照)、miR-526b-3p mimics组(过表达miR-526b-3p)、miR-526b-3p mimics+pcDNA3.1-STAT3组(过表达miR-526b-3p和STAT3)。采用CCK-8法检测细胞增殖，划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭；运用qPCR和Western blot方法检测miR-526b-3p和JAK/STAT3信号通路相关基因STAT3和p-JAK1的表达水平。结果 黑色素瘤组织和细胞中miR-526b-3p表达下调，而STAT3表达上调(P<0.05)。相较于miR...     

miR -450a -5p 对人卵巢癌 SKOV3细胞生物学行为的影响

目的:研究miR-450a-5p对体外培养的人浆液性卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭、周期、凋亡机制的影响,分析miR-450a-5p对人卵巢癌SKOV3细胞肿瘤生物学行为的影响。方法:运用Hiperfect转染试剂介导的转染法将miR-450a-5p mimics转染人卵巢癌SKOV3细胞,设阴性对照组(NC组)及空白对照组(blank组)。采用MTT法、Transwell迁移及侵袭实验、划痕实验、流式细胞术,分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力、周期及凋亡。结果:MTT实验:miR-450a-5p mimics组细胞增殖活性与NC组、blank组无明显差异(P>0.05)。Transwell迁移及侵袭实验均显示转染miR-450a-5p mimics后,细胞的迁移及侵袭能力明显减弱(P<0.05)。划痕后miR-450a-5p mimics组细胞迁移能力较NC组、blank组降低(P<0.05)。流式细胞术:转染miR-450a-5p mimics后,mimics组细胞周期明显被阻滞于G1期(P<0.05)。miR-450a-5p mimics组、NC组、blank组凋亡结果无明显差异(P>0.05)。结论:过表达miR-450a-5p可能对人卵巢癌细胞系SKOV3的侵袭及迁移能力存在负性调控,可能将SKOV3细胞周期阻滞于G1期。     

miR-3200-3p通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展的机制研究

目的:探讨miR-3200-3p能否通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞恶性进展。方法:选择5株人结直肠癌细胞系,Real-time PCR检测miR-3200-3p、RNF111的表达,Western blot检测RNF111蛋白的表达;利用双荧光素酶实验验证miR-3200-3p与RNF111的靶向抑制;利用miR-3200-3p mimic/inhibitor或利用miR-3200-3p inhibitor与RNF111 siRNA共转染HCT116细胞,Real-time PCR检测miR-3200-3p表达,Western blot检测RNF111、p-SMAD2蛋白表达,MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:五株人结直肠癌细胞中,HCT116细胞中miR-3200-3p相对高表达,RNF111相对低表达;miR-3200-3p mimic或inhibitor转染后,与各自NC组相比,可显著促进或抑制RNF111蛋白的表达,促进或抑制细胞的增殖、侵袭及迁移,抑制或促进细胞凋亡（均P＜0.05）;与pmirGLO-MUT 3' UTR+mimics转染组相比,pmirGLO-WT 3' UTR+mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P＜0.05）;与miR-3200-3p NC组相比,miR-3200-3p inhibitor及miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组RNF111蛋白表达显著升高,p-SMAD2蛋白表达显著降低,细胞增殖、迁移及侵袭被显著抑制,细胞凋亡被显著促进（均P＜0.05）,与miR-3200-3p inhibitor+siRNA NC组相比,miR-3200-3p inhibitor+RNF111 siRNA组细胞RNF111、p-SMAD2蛋白表达、增殖、迁移、侵袭及凋亡被显著逆转（均P＜0.05）。结论:miR-3200-3p可通过靶向抑制RNF111促进结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移,抑制细胞凋亡。     

microRNA let-7f-5p对胃癌细胞系GC9811迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨转染let-7f-5p mimics/inhibitor对胃癌细胞系GC9811迁移和侵袭能力的影响 。方法:用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)的方法在mRNA水平测定转染let-7f-5p mimics/inhibitor及其阴性对照后let-7f-5p表达水平的变化;以Transwell实验检测转染let-7f-5p mimics/inhibitor后迁移和侵袭能力有无变化。结果:RT-PCR结果显示:转染let-7f-5p mimics可明显上调GC9811细胞let-7f-5p的表达;转染let-7f-5p inhibitor可明显下调GC9811细胞let-7f-5p的表达。Transwell实验结果显示与对照组相比转染let-7f-5p mimics的GC9811细胞迁移和侵袭能力明显减弱;与对照组相比转染let-7f-5p inhibitor的GC9811细胞迁移和侵袭能力明显增强。结论:microRNA let-7f-5p能够抑制胃癌细胞GC9811的迁移和侵袭能力。     

基于miR-152-3p/Wnt轴辣椒素对乳腺癌他莫昔芬耐药细胞株LCC9耐药的作用机制

目的 探讨辣椒素对乳腺癌他莫西芬耐药细胞株LCC9耐药性的影响及其具体机制。方法 不同浓度辣椒素处理LCC9细胞，CCK8法检测细胞存活率，qRT-PCR检测MCF-7和LCC9细胞中miR-152-3p和Wnt1 mRNA相对表达水平。将LCC9细胞分为对照组、inhibitor NC组(转染inhibitor NC)、inhibitor组(转染miR-152-3p inhibitor)、inhibitor+辣椒素组(转染miR-152-3p inhibitor 24 h后，200μmol/L辣椒素处理),CCK8法检测细胞存活率、qRT-PCR检测miR-152-3p相对表达水平、流式细胞仪检测细胞凋亡率、双荧光素酶报告基因法检测miR-152-3p与Wnt的靶向关系、蛋白印迹法检测β-连环蛋白(β-catenin)和T细胞因子4(TCF4)蛋白相对表达量。结果 细胞存活率随辣椒素浓度的升高而降低(P<0.05)。LCC9细胞中miR-152-3p表达较MCF-7细胞降低，Wnt1 mRNA水平较MCF-7细胞升高(P<0.05)。与inhibitor NC组比较，in...     

红景天苷通过miR-99a-5p/IGF-1R信号通路调节鼻咽癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的:探讨红景天苷调节微小RNA-99a-5p（microRNA-99a-5p,miR-99a-5p）/胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R）信号通路对鼻咽癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人鼻咽上皮细胞（NP69）、鼻咽癌细胞系（CNE-2Z、HONE1、6-10B、HNE2）中miR-99a-5p、IGF-1R信使RNA（mRNA）表达水平;将对数期HNE2细胞分为对照组（常规培养HNE2细胞）、红景天苷低浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入0.5 μg/mL的红景天苷）、红景天苷中浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入1 μg/mL的红景天苷）、红景天苷高浓度组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷）、模拟物（mimics）-NC组（HNE2细胞转染miR-99a-5p mimics阴性对照）、miR-99a-5p mimics组（HNE2细胞转染miR-99a-5p mimics）、红景天苷高浓度+抑制剂（inhibitor）NC组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷并转染miR-99a-5p inhibitor阴性对照）、红景天苷高浓度+miR-99a-5p inhibitor组（含HNE2细胞的培养基中加入2 μg/mL的红景天苷并转染miR-99a-5p inhibitor）。qRT-PCR法检测各组HNE2细胞中miR-99a-5p、IGF-1R mRNA表达水平;细胞计数试剂盒-8、流式细胞术、Transwell小室、划痕实验、蛋白免疫印迹法分别检测HNE2细胞增殖能力、凋亡率、侵袭能力、迁移能力、IGF-1R蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-99a-5p与IGF-1R的靶向关系。结果:与NP69细胞相比,CNE-2Z、HONE1、6-10B、HNE2细胞系中miR-99a-5p表达水平降低,IGF-1R mRNA表达水平升高（P＜0.05）,其中HNE2细胞中miR-99a-5p、IGF-1R mRNA表达水平与NP69细胞差异更明显（P＜0.05）;与对照组相比,红景天苷低、中、高浓度组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率依次升高（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率依次降低（P＜0.05）;与对照组、mimics-NC组相比,miR-99a-5p mimics组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率升高（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率降低（P＜0.05）;与红景天苷高浓度组、红景天苷高浓度+inhibitor NC组相比,红景天苷高浓度+miR-99a-5p inhibitor组miR-99a-5p表达水平、增殖抑制率、凋亡率降低（P＜0.05）,IGF-1R mRNA与蛋白表达水平、侵袭细胞数目、划痕愈合率升高（P＜0.05）;miR-99a-5p与IGF-1R存在靶向关系。结论:红景天苷可能通过促进miR-99a-5p表达,靶向抑制IGF-1R表达,参与抑制HNE2细胞增殖、侵袭、迁移,并促进HNE2细胞凋亡。     

MicroRNA-183抑制结直肠癌肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移

目的:探讨microRNA183 （miRNA-183）对结直肠癌肿瘤细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法:使用慢病毒技术,分别转染HT29细胞株,建立稳定过表达细胞株miRNA-183 mimics,抑制miRNA-183表达的稳定细胞株miRNA-183 inhibitor以及阴性对照组negative control。qRT-PCR检测各组细胞miRNA-183的表达,Western blot检测miRNA-183下游靶基因PDCD4蛋白水平表达变化,CCK8增殖实验检测各组细胞的增殖情况,同时以划痕实验和Transwell实验分析转染miRNA-183 mimics和miRNA-183 inhibitor对HT29细胞迁移、侵袭能力的影响。结果:与阴性对照组相比,miRNA-183 mimics组细胞增殖速度明显下降,其迁移和侵袭能力也显著降低,差异均具有统计学意义（P<0.05）;miRNA-183下游靶基因PDCD4蛋白水平表达明显增加。结论:miRNA-183可有效地抑制结直肠癌肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移。     

转染microRNA-330-5p对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-330-5p表达对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力等生物学行为的影响,揭示miR-330-5p的作用机制。［方法］ 分析非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系95C和95D的 miRNA表达谱芯片中miR-330-5p的表达情况并用靶标软件预测其靶基因;转染miR-330-5p类似物（mimics）至95D、转染miR-330-5p 抑制剂(inhibitor)至95C中,应用CCK-8法、transwell小室法检测miR-330-5p对肺癌细胞增殖、侵袭迁移等生物学行为的影响;应用Western blot法检测miR-330-5p表达对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达水平的影响。［结果］ miRNA表达谱芯片显示miR-330-5p在95D中表达明显低于95C;靶标预测软件预测mTOR mRNA可能是miR-330-5p的靶基因;转染miR-330-5p mimics后95D细胞增殖能力显著降低,其24h侵袭穿膜细胞数明显低于对照组,mTOR蛋白表达明显下调(P<0.01);而转染miR-330-5p inhibitor后95C细胞的增殖能力增强,其24h侵袭穿膜细胞数较对照组明显增加,mTOR蛋白表达上调(P<0.01)。［结论］ 提高miR-330-5p表达能够明显抑制肺癌细胞的增殖、侵袭与迁移能力,mTOR mRNA可能是其重要的靶基因。     

m6A修饰的circ_100367通过调控miR-885-5p轴介导甲状腺乳头状癌免疫逃逸

目的:探讨m6A修饰的circ_100367对甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）免疫逃逸的影响,并阐述其可能的机制。方法:采用qRT-PCR法检测PTC患者癌组织及其癌细胞株中circ_100367和miR-885-5p的表达水平。将circ_100367干扰质粒（si-circ_100367）及其阴性对照干扰质粒（si-NC）、circ_100367过表达质粒（oe-circ_100367）及其阴性对照质粒（oe-NC）和miR-885-5p mimics及其阴性对照NC mimics分别转染至TPC1细胞中,分为Blank组、si-circ_100367组、si-NC组、oe-circ_100367组、oe-NC组、miR-885-5p mimics组和NC mimics组。采用qRT-PCR法检测各组TPC1细胞中circ_100367和miR-885-5p的表达水平;采用双荧光素酶报告系统验证circ_100367可靶向调控miR-885-5p;MeRIP-qPCR法检测circ_100367的m6A甲基化水平;Transwell法检测细胞侵袭能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测细胞FASL、IDO1、PD-L2和PD-L1表达水平。结果:circ_100367在PTC患者癌组织及其癌细胞株K1、TPC1和IHH4中表达水平明显升高（P＜0.05）,而miR-885-5p表达水平明显降低（P＜0.05）。双荧光素酶报告系统结果说明:circ_100367靶向负调控miR-885-5p。MeRIP试验结果显示:circ_100367含有丰富的m6A甲基化,且与NC mimics比较,miR-885-5p mimics细胞中circ_100367的m6A甲基化水平明显降低（P<0.05）。此外,与Blank或si-NC比较,si-circ_100367细胞侵袭数量、细胞划痕愈合率和FASL、PD-L1、PD-L2、IDO1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与Blank或oe-NC比较,oe-circ_100367细胞侵袭数量、细胞划痕愈合率和FASL、PD-L1、PD-L2、IDO1蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与Blank或NC mimics比较,miR-885-5p mimics细胞侵袭数量、细胞划痕愈合率和FASL、PD-L1、PD-L2、IDO1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论:m6A甲基化修饰的circ_100367能诱导PTC细胞侵袭,影响PD-L1的表达进而促进免疫逃逸,其可能与 m6A甲基化修饰的circ_100367和miR-885-5p竞争性结合有关。     

微小RNA-218-5p对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的 探讨miRNA-218-5p对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 将BIU-78膀胱癌细胞分为miRNA-con组(转染miRNA-con)、miRNA-218-5p组(转染miRNA-218-5p mimics)、anti-miRNA-con组(转染anti-miRNA-con)、anti-miRNA-218-5p组(转染anti-miRNA-218-5p)、si-con组(转染si-con)、si-98序列相似的家族成员A(FAM98A)组(转染si-FAM98A)、miRNA-218-5p+pcDNA-con组(共转染miRNA-218-5p和pcDNA-con)、miRNA-218-5p+pcDNA-FAM98A组(共转染miRNA-218-5p和pcDNA-FAM98A).采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-218-5p和FAM98A mRNA的表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果 相较于正常膀胱组织细胞SV-HUC-1,膀胱癌细胞BIU-78、T24、EJ中FAM98A mRNA和蛋白表达水平均升高,miRNA-218-5p表达水平均降低(P﹤0.05).过表达miRNA-218-5p和敲减FAM98A均可抑制膀胱癌细胞BIU-78增殖,诱导细胞凋亡,抑制cyclin D1、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达,促进Bcl-2相关X蛋白(BAX)表达.miRNA-218-5p靶向负调控FAM98A的表达,过表达FAM98A能逆转miRNA-218-5p对膀胱癌细胞BIU-78的增殖抑制和凋亡促进作用.过表达miRNA-218-5p抑制磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路中p-PI3Kp85和p-AKT蛋白的表达,过表达FAM98A能逆转miRNA-218-5p对p-PI3Kp85和p-AKT表达的抑制作用.结论 miRNA-218-5p可抑制膀胱癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与FAM98A及PI3K/AKT信号通路有关,将可为膀胱癌的预防和治疗提供新靶点.     

结肠癌细胞中miR-145-5p、miR-143-3p的表达变化对多药耐药的影响

目的:探讨人结肠癌细胞中miR-145-5p、miR-143-3p的表达发生变化后对P-gp和MRP的影响。方法:采用Western Blot和qRT-PCR法检测人结肠癌细胞分别转染miR-145-5p mimics/inhibitor、miR-143-3p mimics/inhibitor后P-gp 和MRP的表达。结果:转染miR-145-5p mimics后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均降低（P<0.05）,转染miR-145-5p inhibitor后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达均升高（P<0.05）。转染miR-145-5p mimics NC和miR-145-5p inhibitor NC后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达无明显变化（P>0.05）。转染miR-143-3p mimics后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均降低（P<0.05）,miR-143-3p inhibitor后P-gp和MRP的蛋白和基因表达均升高（P<0.05）。转染miR-143-3p mimics NC和miR-143-3p inhibitor NC后P-gp 和MRP的蛋白和基因表达无明显变化（P>0.05）。结论:miR-145-5p及miR-143-3p对多药耐药蛋白P-gp、MRP具有调控作用,参与了结肠癌的多药耐药。     

miR-129-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制研究

目的 研究微小RNA-129-5p(miR-129-5p)对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭的影响及其可能的作用机制。方法 通过荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常肺组织细胞株BEAS-2B和3种非小细胞肺癌细胞系(A549、NCI-H157、GLC-82)中miR-129-5p相对表达量,选取相对表达量最低的细胞株转染miR-129-5p mimics,另设miR-129-5p NC组和空白对照组,通过MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭能力,采用免疫印迹(Western blot)法检测转染后STAT3通路相关蛋白表达水平。结果 与正常细胞株BEAS-2B相比,非小细胞癌细胞株A549、NCI-H157、GLC-82 miR-129-5p表达均下降(P<0.05),miR-129-5p在A549细胞株中相对表达量最低;与空白组、miR-129-5p NC组相比,miR-129-5p mimics组miR-129-5p相对表达量升高(P<0.05);MTT试验显示,与空白组、miR-129-5p NC组相比,miR-129-5p mimics组...     

miR-21靶向Atg5对非小细胞肺癌A549细胞自噬调控促进细胞增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的  探讨miR-21通过靶向作用自噬相关靶基因5（Atg5）调控非小细胞肺癌（NSCLC）自噬的作用机制及其在A549细胞增殖、迁移及侵袭中的作用。方法  无义核酸序列NC（NC组）、miR-21 模拟物（miR-21 mimics组）、miR-21抑制物（miR-21 抑制组）分别转染A549细胞, CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移能力; Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-21和Atg5之间的靶向关系。Western blotting检测LC3B-II、p62和Atg5蛋白的表达。结果  与NC组比较,miR-21 mimics组细胞增殖、迁移、侵袭能力均上调,miR-21 抑制组细胞增殖、迁移、侵袭能力均下调（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-21显著抑制野生型Atg5 3’-UTR质粒转染细胞的荧光素酶活性（P＜0.05）,但对突变型Atg5 3’-UTR的基因报告质粒与miR-21 mimics共转染之后,并未对荧光素酶活性产生影响。NC组LC3B-II蛋白表达量为1.24±0.059,低于miR-21 mimics组的1.98±0.077,高于miR-21抑制组的0.52±0.021（P＜0.05）;NC组p62蛋白表达量为0.62±0.021,高于miR-21 mimics组的0.45±0.020,低于miR-21抑制组的0.79±0.031（P＜0.05）;NC组Atg5蛋白表达量为1.17±0.025,高于miR-21 mimics组的0.38±0.014,低于miR-21抑制组的1.40±0.039（P＜0.05）。与NC组比较, 3-MA处理降低miR-21 mimics转染诱导的A549细胞增殖能力（P＜0.05）;划痕实验和Transwell实验表明,3-MA处理抑制了miR-21mimics转染诱导的A549细胞的迁移和侵袭,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论  miR-21靶向Atg5调控NSCLC自噬促进细胞增殖、迁移和侵袭。     

miRNA-124-3p通过靶向STAT3抑制鼻咽癌细胞生长和转移

目的:探讨miR-124-3p在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌细胞的影响及其机制.方法:收集鼻咽癌组织标本90例和慢性鼻咽炎症组织标本85例,运用qRT-PCR方法检测组织标本和CNE1、CNE2、SUNE1、HONE1、5-8F、6-10B及C666-1鼻咽癌细胞株和永生化鼻咽上皮细胞NP69中miR-124-3p的表达,脂质体介导的转染方法下调高表达miRNA-124-3p的鼻咽癌细胞株CNE2,同时上调低表达miRNA-124-3p的鼻咽癌细胞株C666-1.CCK8法、流式细胞技术、细胞划痕实验、Transwell实验和Boyden小室检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的变化;生物信息学靶基因预测miRNA-124-3的靶基因并运用荧光素酶报告实验验证,Western Blotting检测细胞中STAT3及其下游的p-STAT3、CCND2和MMP2蛋白表达水平.结果:鼻咽癌组织中miRNA-124-3p表达水平与慢性鼻咽炎症组织相比明显下调(P ＜0.001);miRNA-124-3p的表达水平与肿瘤大小及范围、区域淋巴结受累情况及临床分期显著相关(均P＜0.001);7种鼻咽癌细胞与NP69细胞相比较,miRNA-124-3p的表达水平均显著低于NP69(均P＜0.05).miRNA-124-3p过表达后C666-1细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭均显著低于空白对照组和mimics NC组(均P＜0.05);miRNA-124-3p抑制后CNE2细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭均显著高于inhibitor NC组和空白对照组(均P＜0.05).转染miRNA-124-3p后C666-1细胞STAT3、p-STAT3、CCND2和MMP2的表达显著降低,抑制CNE2细胞的miRNA-124-3p表达后STAT3、p-STAT3、CCND2和MMP2的表达显著降低.结论:miR-124-3p可通过下调靶基因STAT3的表达,进而影响其下游的p-STAT3、CCND2和MMP2信号通路,从而促进鼻咽癌细胞凋亡,抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及侵袭.     

miR⁃93⁃5p靶向PKMYT1对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨miR⁃93⁃5p靶向蛋白激酶膜相关酪氨酸/苏氨酸1（protein kinase membrane associated tyrosine/threonine 1,PKMYT1）对肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法 使用LipofectamineTM 2000分别将质粒inhibitor NC、miR⁃93⁃5p inhibitor、pcDNA、pc⁃PKMYT1转染至A549细胞中,记为inhibitor NC组、miR⁃93⁃5p inhibitor组、pcDNA组和pc⁃PKMYT1组,同时将未转染的细胞记为control组。利用qRT⁃PCR检测细胞中miR⁃93⁃5p、PKMYT1 mRNA的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR⁃93⁃5p与PKMYT1的靶向关系;CCK⁃8法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测细胞中PKMYT1、细胞周期素D1（Cyclin D1）、细胞周期素B1（Cyclin B1）的蛋白表达水平。结果 与BEAS⁃2B细胞相比,SPC⁃A⁃1细胞、A549细胞、LTEP⁃α⁃2细胞中miR⁃93⁃5p表达水平均升高（均P<0.01）,PKMYT1 mRNA和蛋白表达水平均降低（均P<0.001）。转染24 h后,分别与control组、inhibitor NC组相比,miR⁃93⁃5p inhibitor组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低（均P<0.05）,G2/M期细胞比例升高（P<0.001）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR⁃93⁃5p NC+3'UTR⁃WT组相比,miR⁃93⁃5p mimic+3'UTR⁃WT组细胞相对荧光素酶活性下降（P<0.001）。转染24 h后,与pcDNA组相比,pc⁃PKMYT1组A549细胞增殖活性、S期细胞比例、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、Cyclin D1和Cyclin B1蛋白水平均降低（均P<0.001）,G2/M期细胞比例升高（P<0.001）。结论 沉默miR⁃93⁃5p可能通过上调PKMYT1表达水平抑制肺腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-409-5p对肝癌细胞系HepG2增殖及迁移的影响

目的 观察过表达miR-409-5p对肝癌细胞系HepG2增殖及迁移能力的影响。方法 利用miR-409-5p mimics进行转染肝癌细胞系HepG2,并通过实时荧光定量PCR进行验证。高表达miR-409-5p后,使用MTT法和划痕实验分别检测HepG2细胞增殖能力及迁移能力的变化。结果 MTT实验显示,HepG2细胞转染miR-409-5p mimics后细胞增长趋势减缓,且随miR-409-5p mimics浓度和时间成正比。划痕实验显示,在24h和48h两个时间点三组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),证实过表达miR-409-5p mimics的细胞体外迁移能力明显低于转染阴性对照组(NC mimics)组和对照组。结论 上调miR-409-5p可抑制肝癌细胞系HepG2的增殖及迁移能力。     

miR-135b-5p靶向CMTM3调节胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力

目的:探究miR-135b-5p通过靶向CMTM3基因调节胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。方法:采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测胃癌组织和细胞系中CMTM3和miR-135b-5p的表达水平。利用慢性病毒转染技术将miR-135b-5p inhibitor转染至胃癌细胞,RT-qPCR检测转染效率;CCK-8比色法和Transwell实验检测转染后细胞的增殖、侵袭和迁移能力;Western blotting 检测转染后细胞中CMTM3蛋白表达水平。利用生物信息学网站预测miR-135b-5p潜在靶基因CMTM3,利用荧光素酶实验进行验证。结果:RT-qPCR检测结果表明,miR-135b-5p在胃癌组织和胃癌细胞株中呈现高表达,CMTM3在胃癌组织中呈现低表达（P<0.01）。RT-qPCR检测转染效率,结果显示,转染miR-135b-5p inhibitor敲低了miR-135b-5p的表达水平（P<0.001）;CCK-8和Transwell实验结果表明,敲低miR-135b-5p后抑制了胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力（P<0.01）,Western blotting实验结果表明,敲低miR-135b-5p促进了CMTM3蛋白的表达。生物信息学网站预测CMTM3为miR-135b-5p的潜在靶基因,荧光素酶实验证实了miR-135b-5p直接靶向胃癌细胞中CMTM3基因（P<0.01）。结论:miR-135b-5p作为重要的调节因子,反向调节抑癌靶基因CMTM3,从而促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。     

miR-138-5p靶向调控SOX4对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的:研究微小RNA-138-5p(miR-138-5p)通过调控SOX4抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡的机制。方法:分别利用miR-NC与miR-138-5p体外模拟物(mimics)转染骨肉瘤细胞系MG63,构建阴性对照与miR-138-5p上调表达模型;采用CCK8法检测细胞增殖活力;采用Transwell实验检测细胞侵袭能力和迁移能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡变化;通过双荧光素酶活检检测miR-138-5p与SOX4的相互作用关系;利用Real-time PCR(RT-PCR)法检测不同处理组中miR-138-5p与SOX4的mRNA水平表达变化;利用Western blot法检测不同处理组中SOX4及凋亡相关蛋白BAX与BCL2的表达变化。结果:利用miR-138-5p mimics转染MG63细胞后,细胞中miR-138-5p表达较对照组显著上调(t=8.661,P=0.001);miR-NC与miR-138-5p mimics分别转染细胞24 h、48 h以及72 h后,CCK8结果显示MG63细胞的增殖能力较对照组显著降低(24 h:t=4.145,P...