西红花酸调控Nrf2/HO-1 通路抑制高糖诱导人肾小球系膜细胞铁死亡

目的 探讨西红花酸抑制高糖诱导人肾小球系膜细胞(HGMCs)铁死亡的作用机制。方法 (1)体外培养HGMCs,将细胞分为空白对照组、阴性对照组(60 mmol·L^-1甘露醇)和葡萄糖实验组(30、60、90 mmol·L^-1),干预培养48 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,采用RT-qPCR法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)mRNA表达,以确定高糖诱导HGMCs的造模条件。(2)体外培养HGMCs,分为空白对照组和西红花酸给药组(5、25、125μmol·L^-1),干预培养24 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率。(3)体外培养HGMCs,将细胞分为空白对照组、模型组(60 mmol·L^-1葡萄糖)、西红花酸组(60 mmol·L^-1葡萄糖+5、25、125μmol·L^-1西红花酸)及阳性对照组[60 mmol·L^-1葡萄糖+1μmol·L^-1铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1,Fer-1)...     

白花丹素调控Nrf-2/Keap1信号通路诱导膀胱癌细胞铁死亡

目的：探讨白花丹素作为一种新型的铁死亡诱导剂在膀胱癌抑制中的作用机制。方法：本研究中使用了膀胱癌细胞T24。采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测白花丹素(0.1、1、2、3、6、12、24、48μmol·L^-1)对T24细胞活力的影响。采用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V FITC/PI)凋亡试剂盒检测白花丹素(1.5、3、6μmol·L^-1)对T24细胞凋亡的影响。采用不同的抑制剂(铁死亡抑制剂Fer-1，凋亡抑制剂VAD，坏死性凋亡抑制剂Nec-1)与白花丹素(6μmol·L^-1)联合使用。采用活性氧荧光探针(DCFH-DA)，丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)试剂盒分别检测不同浓度的白花丹素(1.5、3、6μmol·L^-1)对T24细胞内活性氧水平，MDA和GSH的含量，脂质过氧化荧光探针(C11-BODIPY)荧光探针检测白花丹素(1.5、3、6μmol·L^-1)对T24细胞中过氧化物水平的影响。蛋白免疫印迹法(Western blo...     

潜阳育阴颗粒对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化的影响

目的：通过观察潜阳育阴颗粒对肾小管上皮细胞表型的影响，探讨其对肾间质纤维化的干预作用。方法：将肾小管上皮细胞(HK-2)用不同质量浓度的转化生长因子(TGF)-β₁(0、5、10、15、20、25μg·L^-1)刺激24 h，用倒置相差显微镜观察细胞形态及生长状态，结合蛋白免疫印迹法(Western blot)结果选取最合适的TGF-β₁质量浓度20μg·L^-1用于后续实验。将HK-2细胞分为6组，分别为空白组、TGF-β₁组(质量浓度为20μg·L^-1)、潜阳育阴颗粒低、中、高剂量组(0.5、1、2 g·L^-1)、缬沙坦组(1×10-5 mol·L^-1)。细胞增殖与活性检测(CCK-8)试剂盒检测各组细胞活性；划痕实验检测细胞迁移能力；Transwell法检测细胞侵袭能力；Western blot检测纤维黏连蛋白(FN)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimen...     

茶多酚激活Nrf2/HO-1通路减轻阿司匹林诱导的GES-1细胞损伤的机制研究

目的 探讨茶多酚(tea polyphenols, TP)对阿司匹林诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响及分子机制。方法 采用阿司匹林(19.27 mmol·L^-1)和不同浓度的茶多酚(50、100、200μmol·L^-1)处理GES-1细胞24 h,将GES-1细胞随机分为对照组、阿司匹林组(19.27 mmol·L^-1)、阿司匹林19.27 mmol·L^-1+茶多酚50μmol·L^-1组、阿司匹林19.27 mmol·L^-1+茶多酚100μmol·L^-1组、阿司匹林19.27 mmol·L^-1+茶多酚200μmol·L^-1组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测GES-1细胞增殖水平,采用流式细胞术和TUNEL实验检测GES-1细胞凋亡水平。采用二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)荧光探针检测GES-1细胞活性氧(ROS)水平。采用试剂盒检测GES-1细胞超氧化物歧化酶(SOD)、过氧...     

基于SIRT1/FoxO1通路探究小檗碱抑制卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的调节机制

目的：通过观察小檗碱(BBR)对卵巢颗粒细胞衰老的影响,探究其保护作用及调节机制。方法：应用H₂O₂诱导建立人卵巢颗粒样肿瘤(KGN)细胞衰老模型;设置空白组、模型组、BBR高剂量(1μmol·L^-1)组和BBR低剂量(0.5μmol·L^-1)组,模型组与BBR组加入浓度为10μmol·L^-1 H₂O₂,孵育40 min。通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)分析检测BBR对KGN细胞增殖的影响;通过β-半乳糖苷酶染色检测BBR对KGN细胞衰老状态的影响;应用流式细胞术检测BBR对KGN细胞凋亡和ROS含量的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BBR对KGN细胞抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)比值、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、叉头框转录因子O1(FoxO1)及过氧化氢酶(CAT)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BB...     

茯苓酸通过Smads调控MMP/TIMP平衡抑制肾癌细胞侵袭转移的机制

目的：探讨茯苓中的三萜类化合物茯苓酸(PA),对肾癌侵袭转移的作用及机制。方法：采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)试剂盒检测PA(0、20、40、80、160μmol·L^-1)对细胞存活率的影响,并筛选PA浓度用于后续实验。采用克隆形成实验评估PA(0、20、40、80μmol·L^-1)对细胞增殖的作用。细胞黏附实验用来观察PA(0、20、40、80μmol·L^-1)对细胞黏附能力的效果。划痕实验和Transwell侵袭实验用来检测PA(0、20、40、80μmol·L^-1)对细胞侵袭转移的影响。高内涵成像技术进一步动态观察和验证PA(0、20、40、80μmol·L^-1)对细胞运动的抑制作用。PA(0、20、40、80μmol·L^-1)对细胞中侵袭转移相关蛋白基质金属蛋白酶/基质金属蛋白酶组织抑制因子(MMP/TIMP)和相关通路关键蛋白Smads表达的影响通过蛋白免疫印迹法(Western blot)来检测。结果：CCK-8结果显示,与空白组比较...     

补中益气汤通过Nrf2/ROS通路调控线粒体途径细胞凋亡改善A549/DDP细胞顺铂耐药的分子机制

目的:探讨补中益气汤含药血清通过核因子E₂相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS)通路调控线粒体途径细胞凋亡改善人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞(A549/DDP)顺铂耐药的机制。方法:制备补中益气汤含药血清及培养A549/DDP细胞,并进行随机分组为空白组(10%空白血清)、顺铂组(10%空白血清+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤组(10%含药血清+20 mg·L^-1顺铂)、ML385组(10%空白血清+5μmol·L^-1ML385+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤联合ML385组(10%含药血清+5μmol·L^-1ML385+20 mg·L^-1顺铂)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)组(10%空白血清+5μmol·L^-1TBHQ+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤联合TBHQ组(10%含药血清+5μmol·L^-1TBHQ+20 mg·L^-1顺铂)...     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制

目的：基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)通路探讨补阳还五汤调控巨噬细胞极化的作用机制。方法：本实验通过采用不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20、40、80 mg·L^-1)脂多糖(LPS)对RAW264.7巨噬细胞干预24 h,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测RAW264.7巨噬细胞存活率,筛选最适浓度建立体外LPS诱导RAW246.7巨噬细胞炎症模型。将实验分为空白组(20%空白血清),模型组(20%空白血清+10 mg·L^-1LPS),模型对照组(20%FBS+10mg·L^-1LPS),低、中、高(5%、10%、20%)补阳还五汤含药血清组及NLRP3抑制剂MCC950(50μmol·L^-1)、活性氧(ROS)抑制剂NAC(10μmol·L^-1)、NF-κB抑制剂PDTC(10μmol·L^-1)联合补阳还五汤高剂量(20%)组。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测...     

基于PERK/ATF4/CHOP的益肾通络方抑制内质网应激改善肾小管上皮细胞凋亡的作用机制

目的：验证益肾通络方(YSTLP)对肾小管上皮细胞凋亡的影响，并基于内质网应激通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)探讨其作用机制。方法：将db/db小鼠随机分为模型组、缬沙坦组(10 mg·kg^-1·d-1)、YSTLP低、中、高剂量组(1、2.5、5 g·kg^-1·d^-1)给予药物干预8周后取材。同窝的db/m小鼠作为正常组。体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2)，分为正常组、糖基化终产物(AGEs)组、AGEs+益肾通络方低、中、高质量浓度组(100、200、400 mg·L^-1)；原位末端标记(TUNEL)染色检测HK-2细胞的凋亡情况；细胞活力测定实验检测HK-2细胞存活率；钙离子荧光探针染色，以及荧光素酶报告基因法检测为折叠蛋白反应元件(UPRE)荧光素酶活力，检测内质网应激情况；免疫组化法(IHC)检测小鼠肾脏中磷酸化(p)-PERK蛋白的表达(p-PERK)、CHOP、ATF4的蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应...     

常春藤皂苷元对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的作用及机制研究

目的 研究常春藤皂苷元对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎(UC)的作用及其机制。方法 (1)体外实验：用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40μmol·L^-1)常春藤皂苷元处理RAW264.7细胞24 h后,采用MTT法检测细胞存活率。将RAW264.7细胞分为：空白组、脂多糖(LPS)组(1μg·L^-1)、LPS+2.5μmol·L^-1常春藤皂苷元组、LPS+5μmol·L^-1常春藤皂苷元组和LPS+10μmol·L^-1常春藤皂苷元组;采用LPS干预24 h建立体外细胞炎症模型,并用常春藤皂苷元共孵育24 h进行干预。采用ELISA法测定细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western Blot法检测细胞中TLR4/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。(2)体内实验：将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺吡啶组(200 mg·kg^-1)及常春藤皂苷元低、中、高剂量组(12.5、2...     

姜黄素对肺癌细胞TFPI-2基因去甲基化作用研究

目的：探讨姜黄素对肺癌细胞组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因去甲基化的作用。方法：将人A549细胞分为姜黄素低剂量组(20μmol·L^-1)、姜黄素中剂量组(40μmol·L^-1)、姜黄素高剂量组(80μmol·L^-1)及空白对照组,分别采用完全培养液及含相应浓度姜黄素的培养液培养后,MTT法检测A549细胞的增殖情况;RT-PCR检测TFPI-2 mRNA及DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1) mRNA、DNMT3a mRNA、DNMT3b mRNA的表达情况;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测TFPI-2基因甲基化状态。结果：与空白对照组比较,处理细胞12 h、24 h及48 h后,各剂量姜黄素组细胞增殖降低,且40μmol·L^-1姜黄素处理细胞48 h时OD值最低,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞抑制率结果显示,各...     

柴胡皂苷D通过Akt/mTOR通路调控胰腺癌Panc-1细胞凋亡及自噬

该研究旨在探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D)对胰腺癌Panc-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其作用机制。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)测定7、10、13、16、19、22、25、28μmol·L^-1柴胡皂苷D对Panc-1细胞增殖活性的影响；分别设置对照组(0μmol·L^-1)、柴胡皂苷D低浓度组(10μmol·L^-1)和柴胡皂苷D高浓度组(16μmol·L^-1),采用平板克隆形成实验检测柴胡皂苷D对Panc-1细胞克隆形成率的影响；采用苏木素-伊红(HE)染色观察柴胡皂苷D作用后细胞形态的变化；采用Hoechst 33258荧光染色检测柴胡皂苷D对细胞凋亡的影响；采用细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)检测柴胡皂苷D对细胞自噬的影响；采用蛋白免疫印迹(Western blot)法和免疫细胞化学法检测柴胡皂苷D对B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、剪切的caspase-3(cleaved caspase-...     

巴利森苷A对氧糖剥夺/复糖复氧损伤的HT22细胞的保护作用

目的：探讨巴利森苷A(PA)对氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的HT22细胞的保护作用。方法：将HT22细胞随机分为6组，分别是空白组(Control组)、OGD/R组、依达拉奉(EDA)组、PA低剂量组(40μmol·L^-1)、PA中剂量组(80μmol·L^-1)、PA高剂量组(160μmol·L^-1)。以连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)10 mmol·L^-1合并无糖DMEM培养基造成氧糖剥夺培养2 h,然后恢复为无血清高糖DMEM培养2 h作复糖复氧处理，以建立体外OGD/R模型。EDA和PA组自氧糖剥夺前24 h即加入相应药物的浓度，一直持续到复糖复氧结束。采用MTT比色法检测细胞存活率；乳酸脱氢酶(LDH)法测定细胞损伤率；采用试剂盒法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞内的活性氧(ROS)水平；Western blot法检测各组细胞缺氧诱导因子通路相关蛋白HIF-...     

川陈皮素调节AMPK/NLRP3信号通路对脂多糖诱导的肾小球系膜细胞炎性损伤的影响

目的 探讨川陈皮素(Nobiletin)调节AMP激活的蛋白激酶(AMPK)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的肾小球系膜细胞HBZY-1炎性损伤的影响。方法 将HBZY-1细胞分为5组：正常组、LPS组(100 ng·m L^-1LPS)、川陈皮素组(100 ng·m L^-1LPS+40μmol·L^-1川陈皮素)、AMPK/NLRP3信号通路抑制剂雷帕霉素组(100 ng·m L^-1LPS+0.5μmol·L^-1雷帕霉素)、川陈皮素+雷帕霉素组(100 ng·m L^-1LPS+40μmol·L^-1川陈皮素+0.5μmol·L^-1雷帕霉素)。MTT法检测HBZY-1细胞毒性和增殖;ELISA法检测HBZY-1细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量;流式细胞术检测细胞凋亡;Western...     

基于Nrf2/HO-1/GPX4信号轴探讨参芪地黄汤抑制高糖诱导人肾小管上皮细胞铁死亡的作用机制

为探讨参芪地黄汤对高糖诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)铁死亡及核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶1(heme oxygenase 1,HO-1)/谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase 4,GPX4)轴的影响及其潜在机制。构建高糖诱导HK-2细胞损伤模型，制备参芪地黄汤含药血清；筛选参芪地黄汤含药血清的最佳浓度及干预时间，将HK-2分为正常组，高糖组，参芪地黄汤低、中、高剂量组。各组细胞干预后，检测细胞增殖率，观察细胞形态和线粒体超微结构，检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)、亚铁离子(Fe²⁺)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平，检测细胞内Nrf2、HO-1、GPX4和xCT蛋白的表达。筛选出10%参芪地黄汤干预24 h为最佳剂量与干预时间，与高糖组比较，参芪地黄汤高剂量组促进高糖诱导的HK-2增殖；与高糖组比较，参芪地黄汤低、中、...     

鳖甲煎丸通过NF-κB信号通路抑制肝癌细胞上皮间质转化的作用机制

目的:研究鳖甲煎丸对转化生长因子-β₁(TGF-β₁)诱导Hep G2细胞上皮间质转化(EMT)的影响,探讨其抑制肝癌细胞EMT的作用机制。方法:以Hep G2细胞为研究对象,将细胞随机分为空白组,模型组(10μg·L^-1TGF-β₁),鳖甲煎丸低(10μg·L^-1TGF-β₁+0.55 g·kg^-1鳖甲煎丸)、中(10μg·L^-1TGF-β₁+1.1 g·kg^-1鳖甲煎丸)、高(10μg·L^-1TGF-β₁+2.2 g·kg^-1鳖甲煎丸)组,索拉非尼组(10μg·L^-1TGF-β₁+0.03 g·kg^-1索拉非尼)。用10μg·L^-1TGF-β₁诱导Hep G2细胞发生EMT,构建EMT模型。分别给予相应的含药血清处理后,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞增殖情况,分别采用细胞划痕实验,transwell迁移实验检测细胞迁移情况,采用免疫荧光、蛋白免疫印迹法分别检测EMT,核转录因子-κB(NF-κB)信号通路相关蛋白的表达情况。结果:与空白组比较,TGF-β₁刺激4 d后,细胞呈梭形改变,细胞之间变得松散,间隙增宽,伸出触角,同时E-钙黏素(E-cadherin)蛋白表达降低(P<0.05),N-钙黏素(N-cadherin),波形蛋白(vimentin)蛋白表达升高(P<0.05),说明TGF-β₁刺激4 d成功构建了Hep G2细胞的EMT模型组。与模型组比较,用相应含药血清处理48 h,各用药组均能抑制已发生EMT作用的Hep G2细胞增殖,其中以鳖甲煎丸低、高剂量组最为显著(P<0.01)。与模型组比较,鳖甲煎丸中剂量组E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),磷酸化(p)-p65,N-cadherin,vimentin蛋白表达降低(P<0.05)。与空白组比较,细胞划痕实验和transwell迁移实验表明TGF-β₁增强了Hep G2细胞的迁移能力(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组和索拉非尼组抑制Hep G2细胞迁移能力(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,模型组促进p65,Snail入核表达;与模型组比较,鳖甲煎丸低、中、高剂量组和索拉非尼组抑制p65和Snail入核表达。结论:鳖甲煎丸可能通过抑制NF-κB信号通路来抑制TGF-β₁诱导Hep G2细胞的EMT进程、增殖和迁移,从而发挥抗肝癌的作用。     

红景天苷通过Nrf2-HO-1保护Aβ25-35诱导的原代皮层神经元损伤

目的探讨红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元损伤的保护作用。方法:随机将培养成熟的原代皮层神经分为5组:正常对照组、模型组、红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、激动剂组。后3组分别使用5μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1红景天苷、10μmol·L^-1TBHQ培养24 h,余组正常换液。然后除正常对照组,将余组更换为终浓度为20μmol·L^-1Aβ25-35并维持各药物组终浓度的培养液,24 h后使用CCK8试剂盒测细胞活性、LDH试剂盒测细胞LDH释放量、免疫组化和Western Blot测Nrf2、HO-1、Caspase-3、Bax、Bcl-2等蛋白的表达水平。结果红景天苷5μmol·L^-1组、红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够提高Aβ25-35损伤后细胞的活性、减少LDH的释放改善细胞损伤,红景天苷10μmol·L^-1组、TBHQ组都能够增加Nrf2、HO-1的表达水平,下调Caspase-3蛋白表达水平、上调Bcl-2/Bax的蛋白表达水平。锌原卟啉ZnPP可逆转红景天苷及TBHQ对Aβ25-35诱导的皮层神经元的保护作用。结论红景天苷对Aβ25-35诱导的皮层神经元细胞的保护作用,可能主要通过改善凋亡相关蛋白、上调Nrf2/HO-1信号通路表达实现。     

紫菀酮对体外破骨细胞分化和活性的影响及作用机制研究

目的:探讨紫菀酮对体外破骨细胞分化和活性的影响及作用机制。方法:(1)分析紫菀酮对核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand, RANKL)诱导Raw 264.7细胞向破骨细胞分化的影响。将Raw 264.7细胞分为空白对照组、阳性对照组、紫菀酮1μmol·L^-1干预组、紫菀酮2.5μmol·L^-1干预组、紫菀酮5μmol·L^-1干预组和紫菀酮10μmol·L^-1干预组，空白对照组加入完全培养基，阳性对照组加入含25 ng·mL^-1RANKL的完全培养基，其余各组分别加入含有相应浓度紫菀酮及25 ng·mL^-1RANKL的完全培养基，培养5 d后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase, TRAP)染色，统计各组破骨细胞数；(2)分析紫菀酮对Raw 264.7细胞活力的影响。将Raw 264.7细胞分为空白对照组、紫菀酮1μ...     

基于AMPK-mTOR 信号通路探讨通心络胶囊通过调节自噬改善高糖环境下H9c2 心肌细胞损伤的机制

目的 采用高糖诱导H9c2心肌细胞损伤建立糖尿病心肌病(DCM)细胞模型,观察通心络胶囊对H9c2细胞的保护作用并探讨其可能机制。方法 以葡萄糖不同浓度(45、65、75、100 mmol·L^-1)及75 mmol·L^-1葡萄糖+通心络胶囊不同浓度(20、40、80、160、300μg·mL^-1)分别处理H9c2细胞24 h,采用CCK-8法测定细胞存活率。将H9c2细胞分为对照组、模型组(75 mmol·L^-1葡萄糖)、通心络胶囊组(75 mmol·L^-1葡萄糖+160μg·mL^-1通心络胶囊),给药干预24 h。采用DCFH-DA荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)水平;JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位;ELⅠSA法检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)水平;Western Blot法检测细胞自噬蛋白(P62、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ)及AMPK-mTOR信号通路蛋白的表达。结果 75 mmol·L^-1葡萄糖浓度...     

石斛合剂含药血清对高糖诱导小鼠足细胞损伤的保护作用

目的：探讨石斛合剂含药血清对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的影响及作用机制。方法：体外培养小鼠肾小球足细胞(MPC5),筛选高糖造模浓度和时间及石斛合剂含药血清最佳给药浓度;将细胞分为正常组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清)、模型组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清)、石斛合剂含药血清组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%石斛合剂含药血清),铁死亡抑制剂(Fer-1)组(30 mmol·L^-1葡萄糖+10%空白血清+1μmol·L^-1 Fer-1)。采用试剂盒检测细胞中Fe²⁺、乳酸脱氢酶(LDH)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测细胞谷胱甘肽(GSH)、过氧化脂质(LPO)含量;荧光探针检测活性氧(ROS)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测足细胞中肾母细胞瘤基因-1(WT-1)、结蛋白(Desmin)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4) m RNA表达水平...