基于NLRP3炎症小体研究白头翁汤正丁醇提取物对白念珠菌定植下小鼠溃疡性结肠炎的作用机制

目的 研究白头翁汤正丁醇提取物（butyl alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB）对白念珠菌异常定植下的葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium salt,DSS）诱导的小鼠溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）的治疗作用,以及对Dectin-1/脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响。方法 将105只C57BL/6小鼠随机分为对照组、DSS组、DSS+白念珠菌组及BAEB低、中、高剂量（20、40、80 mg/kg）组和美沙拉嗪（200 mg/kg）组。对照组小鼠每日自由饮水;DSS组予3%DSS溶液,自由饮用连续7 d;其他组在DSS组基础上,在第1、3、5、7天ig白念珠菌（1×108 CFU/只）。第8天开始分别ig相应药物,1次/d,连续7 d。每天称定小鼠质量,观察一般状...     

白头翁汤激活NLRP3炎症小体治疗炎症性肠病的研究

目的:探讨白头翁汤治疗炎症性肠病(IBD)的分子机制。方法:84只BALB/c小鼠随机分为7组(n=12):乙醇对照组、模型组、SASP组、白头翁汤组(低、中和高剂量组)和zVAD组。各组分别灌胃和腹腔给药。疗程结束后取小鼠结肠组织分别利用荧光定量RT-PCR、Elisa和免疫组化等方法检测NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18和IL-1β在结肠组织中的表达量。结果:与模型组比较,SASP组和中、高剂量白头翁汤对IBD有显著的治疗作用(P0.01),但这种治疗作用在zVAD组被抑制(P0.05)。同时,中、高剂量白头翁汤能够升高NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18和IL-1β在结肠组织的表达(P0.05),而zVAD能抑制这种上调(P0.05)。结论:白头翁汤可能通过激活NLRP3炎症小体进而促进相应的炎症因子包括IL-18及IL-1β的生成来发挥治疗IBD的作用。     

白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对巨噬细胞NLRP3炎症小体的作用研究

摘 要：目的：观察白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对巨噬细胞NOD样受体-3（NLRP3）炎症小体的影响。方法：用佛波酯（PMA）（10 ng?mL-1）刺激U937细胞48 h,诱导其成为巨噬细胞,观察不同剂量白术黄芪汤乙酸乙酯提取物（0,3.125,6.25,12.5,25,50,100 μg?mL-1）对细胞活力的作用,并选择合适的浓度。采用实时荧光定量（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）测定细胞中NLRP3,半胱天冬酶-1（caspase-1）的含量,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素（IL）-1β 的含量。结果：细胞计数试剂盒（CCK-8）实验表明,当药物浓度低于25 μg?mL-1时,对细胞活力没有影响,当药物浓度高于50 μg?mL-1时,对细胞活力有抑制作用（P＜0.05）,选择25 μg?mL-1浓度进行后续实验。与空白组相比,LPS组细胞中NLRP3,caspase-1表达明显增加（P＜0.01）,细胞培养上清中的IL-1β浓度也明显增高（P＜0.01）。白术黄芪汤乙酸乙酯提取物作用后,NLRP3,caspase-1,IL-1β表达均明显下降（P＜0.05）。结论：白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对LPS刺激的巨噬细胞NLRP3炎症小体有抑制作用。     

白头翁汤正丁醇提取物对碱性pH条件下白念珠菌VVC临床株形态转化的影响

目的:探讨白头翁汤正丁醇提取物(butyl alcohol extract of Baitouweng decoction,BAEB)在碱性条件下对白念珠菌VVC(vulvovaginal candidiasis)临床分离株酵母-菌丝形态转化的影响。方法:采用肉汤稀释法测定白头翁汤不同溶剂萃取物对VVC临床株的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);倒置显微镜观察不同p H环境下VVC临床株形态;采用XTT还原法评价在p H 8.0时菌丝活性;扫描电镜观察白念珠菌菌丝形态;荧光显微镜观察菌体代谢活力;固体培养基上观测菌落形态;半固体培养基上观察菌丝侵袭能力;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测菌丝特异性基因ALS3,CSH1,SUN41,HWP1和Ca PDE2的表达量。结果:白头翁汤正丁醇提取物(BAEB)对VVC临床株的MIC为64~128 mg·L-1,低于总提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物和水提取物的MIC;p H 8.0时VVC临床株的菌丝形成能力最强;扫描电镜结果显示512,1 024 mg·L-1的BAEB明显抑制VVC临床株的形态转化,荧光显微镜结果显示1 024 mg·L-1的BAEB可以降低VVC临床株的代谢活性;512,1 024 mg·L-1BAEB浓度的固体菌落未出现褶皱,1 024 mg·L-1BAEB浓度的半固体培养基内部未见菌丝侵袭;qRT-PCR检测显示1 024 mg·L-1时,ALS3,CSH1,SUN41,HWP1分别下调4.26,3.2,2.74,5.12倍,Ca PDE2上调2.38倍。结论:BAEB在碱性p H条件下对白念珠菌VVC临床株的形态转化具有抑制作用。     

蔡氏内异方调控TRIM24/NLRP3炎症小体介导大鼠异位子宫内膜细胞焦亡的机制研究

目的 探讨蔡氏内异方是否通过作用于TRIM24/NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡而干预子宫内膜异位症.方法 采用子宫内膜自体移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型.SD雌性大鼠随机取6只为正常对照组,6只为假手术组,其余大鼠造模成功后,再随机分为模型组、孕三烯酮组(0.25 mg/kg)、蔡氏内异方低剂量组(11.4 g/k...     

豨莶草醇提物调控TLRs/NF-κB通路及NLRP3炎症小体干预痛风性关节炎的机制研究

目的探讨豨莶草醇提物通过Toll样受体(TLRs)/核因子κB(NF-κB)信号通路及NOD样受体蛋白3(NLRP3)干预痛风性关节炎(GA)的作用机制。方法采用脂多糖(LPS)联合尿酸钠结晶(MSU)刺激急性单核细胞白血病细胞(THP-1)源性巨噬细胞,建立GA炎症细胞模型;以豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1不同浓度进行干预。采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测细胞上清中白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;qRT-PCR法检测TLRs/NF-κB信号通路相关基因(TLR2、TLR4、MYD88、IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、NF-κB、IL-1β)及NLRP3 m RNA的表达;Western Blot法检测NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白的表达。结果与对照组比较,豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1浓度对THP-1巨噬细胞活力均无明显影响(P>0.05);模型组的IL-1β水平明显升高(P<0.05),TLRs/NF-κB信号通路相关基因及NLRP3 mRNA表达水平均明显上调(P<0.05),NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。与模型组比较,豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1浓度组的细胞IL-1β水平明显降低(P<0.05),TLRs/NF-κB信号通路相关基因及NLRP3 mRNA表达水平均不同程度下调(P<0.05),NF-κB、NLRP3及IL-1β蛋白表达水平亦不同程度下调(P<0.05)。结论豨莶草醇提物可能通过调控TLRs/NF-κB信号通路及抑制NLRP3炎症小体活化,减少炎症因子的产生与释放,进而减轻痛风性炎症反应。     

柴胡清肝汤干预NLRP3/IL-1β通路治疗肉芽肿性小叶性乳腺炎模型大鼠的作用机制

目的 探讨柴胡清肝汤（CHQGT）治疗肉芽肿性小叶性乳腺炎（GLM）模型大鼠的作用机制。方法 将60只雌性大鼠分为正常组、模型组、醋酸泼尼松龙组（0.001 8 g·kg^-1）、柴胡清肝汤低、中、高剂量组（4.5、8.9、17.8 g·kg^-1）,采用GLM病变组织与弗氏佐剂混合后的组织匀浆进行造模,造模成功后药物干预组均给予相应的处理因素,正常组、模型组给予等量生理盐水。14 d后肉眼观察小鼠乳腺变化;苏木素-伊红（HE）染色观察取材的乳腺组织病理学改变;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、白细胞介素-1β（IL-1β） mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western bolt）检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β、白细胞介素-18（IL-18）的蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠肉眼可见乳房明显红肿,且乳腺炎症指数显著升高（P<0.01）,病理学改变包括形成以乳腺小叶为中心的肉芽肿,伴见大量淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞浸润,模型组大鼠乳腺组织中的NLRP3、Caspase-1及IL-1β mRNA相对表达量显著增加（P<0.01）,NLRP3、Caspase1、IL-1β和IL-18蛋白的表达显著增加（P<0.01）;与模型组比较,各治疗组大鼠乳房红肿均有改善,柴胡清肝汤中、高剂量组及泼尼松龙组经治后炎症指数均有不同程度下降（P<0.05,P<0.01）,乳腺的炎症程度明显改善,病理学方面巨噬细胞、淋巴细胞、浆细胞等炎性细胞均有不同程度减少,柴胡清肝汤高剂量组、泼尼松龙组均能够明显下调NLRP3、Caspase-1及IL-1β mRNA的表达（P<0.05,P<0.01）,降低NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）。结论 柴胡清肝汤能够抑制炎症,治疗大鼠GLM,其可能机制与抑制NLRP3/IL-1β信号通路有关,这为“清消法”防治GLM提供了新的靶点。