miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路促进脂多糖诱导的肺上皮细胞凋亡

目的 探讨miR-519d-3p对脂多糖LPS诱导的肺上皮细胞A549细胞凋亡的影响,并研究其具体作用机制。方法 LPS处理A549细胞构建急性肺损伤体外细胞模型,细胞内转染miR-519d-3p拮抗剂或miR-519d-3p激动剂构建miR-519d-3p下调或者上调的细胞模型。NF-κB抑制剂 Bay 11-7082预处理用来抑制细胞内NF-κB通路活性。qRT-PCR检测A549细胞内miR-519d-3p水平,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测凋亡相关蛋白和TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达,细胞免疫荧光检测 NF-κB p65蛋白细胞核移位情况。结果 LPS处理A549细胞后,细胞内miR-519d-3p水平上升,并呈浓度依赖性;上调miR-519d-3p能够促进A549细胞凋亡,而下调则降低细胞凋亡;进一步分子机制研究表明miR-519d-3p通过影响TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达及其磷酸化,诱导NF-κB蛋白细胞核移位而影响细胞凋亡;NF-κB抑制剂可缓解miR-519d-3p上调引起的细胞凋亡。结论 miR-519d-3p通过调控TLR4/NF-κB通路影响LPS诱导的肺上皮细胞凋亡。     

miR-431-5p通过调控AKT1抑制胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和促进凋亡研究

目的研究miR-431-5p对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响和潜在的分子机制。方法qRT-PCR检测人正常胰腺上皮细胞hTERT-HPNE和胰腺癌细胞CFPAC-1和PANC-1中miR-431-5p表达水平。转染miR-431-5p模拟物至胰腺癌CFPAC-1细胞中过表达miR-431-5p后,MTT法测定细胞增殖活性,Transwell检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞中Cyclin D1、p21、Bax、Bcl-2、E-cadherin、MMP-2和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-431-5p与AKT1的调控关系。结果与hTERT-HPNE细胞相比,胰腺癌细胞PANC-1和CFPAC-1中miR-431-5p表达量降低（P < 0.05）。过表达miR-431-5p后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数降低,凋亡率升高,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平降低,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P < 0.05~P < 0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-431-5p在CFPAC-1细胞中靶向负调控AKT1表达。同时过表达miR-431-5p和AKT1后,CFPAC-1细胞活性、迁移和侵袭细胞数升高,凋亡率降低,Cyclin D1、Bcl-2和MMP-2蛋白表达水平升高,p21、Bax和E-cadherin蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论miR-431-5p通过靶向抑制AKT1降低胰腺癌CFPAC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡,可能是胰腺癌的潜在分子治疗靶点。     

miR-181a-5p靶向HMGB1调节急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的实验研究

目的 探讨miR-181a-5p调控HMGB1的表达在雨蛙素(cerulein)联合脂多糖(lipopolyasccharide, LPS)诱导的严重急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的影响。方法 以未处理的AR42J细胞作为正常组,1×10^-8 mol/L的cerulein联合10μg/mL的LPS诱导AR42J细胞24 h建立体外严重AP组,用脂质体转染法将miR-NC(空载体)和miR-181a-5p mimic转染至严重AP组作为miR-NC对照组和miR-181a-5p过表达组。采用qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-181a-5p、HMGB1和Caspase-3 m RNA的表达水平;Western Blot检测HMGB1和Caspase-3蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验明确miR-181a-5p和HMGB1的靶向关系;Pearson相关分析确定miR-181a-5p、HMGB1和Caspase-3 mRNA表达的相互关系。结果 与正...     

Wnt2B通过NF-κB/p65调节乳腺癌细胞的凋亡

目的研究Wnt2B对乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡的影响,探讨其在乳腺癌发生发展过程中的重要作用。方法应用免疫组化技术检测40例乳腺癌组织标本中Wnt2B的表达;应用Western blot检测乳腺癌配对细胞系MDA-MB-231和MCF-7中Wnt2B蛋白水平;通过瞬时转染Wnt2B特异的siRNA沉默高表达Wnt2B的MDA-MB-231细胞系后,采用流式细胞仪检测转染前后细胞的凋亡水平;应用Western blot、共聚焦显微镜和凝胶电泳迁移实验(EM-SA)检测下调Wnt2B表达后对NF-κB/p65的表达和活性的影响。结果相对于Wnt2B阴性表达的正常乳腺组织,35例乳腺癌组织的表达呈强阳性并且存在核浆转移现象;在高转移细胞系MDA-MB-231中Wnt2B表达明显高于低转移细胞系MCF-7;针对Wnt2B的siRNA沉默成功下调MDA-MB-231中Wnt2B表达后,细胞凋亡率明显增加并伴随NF-κB/p65的表达下降和活性降低;应用NF-κB/p65特异性的抑制剂PDTC阻断此通路后,Wnt2BsiRNA诱导细胞的凋亡效应被阻断。结论 Wnt2BsiRNA通过NF-κB/p65通路抑制乳腺癌细胞系MDA-MB-231的凋亡而产生抗瘤作用,Wnt2B可能成为乳腺癌有效治疗靶点之一。     

miR-22-3p靶向抑制SIRT1信号通路加重慢性阻塞性肺疾病

目的 探讨miR-22-3p是否通过沉默信息调节因子1(SIRT1)信号通路影响慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发生发展。方法 将大鼠随机分为5组：对照组、模型组、antagomir-NC组、antagomir-miR-22-3p组和antagomir-miR-22-3p+EX527组,每组12只。对照组大鼠正常饲养,其他组大鼠建立香烟烟雾(CS)和脂多糖(LPS)诱导的COPD大鼠模型。CS暴露当天开始,模型组、antagomir-NC组、antagomir-miR-22-3p组和antagomir-miR-22-3p+EX527组大鼠分别尾静脉注射生理盐水、antagomir-NC、antagomir-miR-22-3p和SIRT1抑制剂EX527,每2周注射1次,CS暴露90 d内共注射6次。CS暴露90 d后,使用肺功能分析系统测定肺功能指标：最大自主分钟通气量(MVV)、0.3 s用力呼气量(FEV0.3)、用力肺活量(FVC)和最大呼气峰流速(PEF)。按照ELISA试剂盒测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和巨噬细...     

miR-129-5p靶向HMGB1对胰腺癌细胞凋亡的作用研究

目的：研究miR-129-5p调控HMGB1表达在胰腺癌细胞凋亡中的作用。方法：以未处理的胰腺癌SW1990细胞作为对照组（Control组）,用脂质体转染法将mimics-NC（空载体）、miR-129-5p mimics、inhibitor-NC（空载体）、miR-129-5p inhibitor分别转染SW1990细胞作为mimics-NC组、miR-129-5p过表达组（miR-129-5p mimics组）、inhibitor-NC组、miR-129-5p低表达组（miR-129-5p inhibitor组）,通过在线靶基因预测网站Target genes预测miR-129-5p与HMGB1是否存在结合位点,双荧光素酶基因报告实验验证miR-129-5p与HMGB1的靶向关系。采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-129-5p的表达水平,Western blot法检测HMGB1蛋白及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2表达。Hoechst染色观察细胞凋亡变化。结果：与mimics-NC组及Control组比较,miR-129-5p mimics转染显著上调miR-12...     

沉默SIRT1基因对高糖诱导的系膜细胞NF-κB p65乙酰化

目的 探讨沉默信息调节因子1（SIRT1）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞（RMC）核因子κB（NF-κB） p65蛋白乙酰化及单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）表达的影响。 方法 构建干扰SIRT1基因的shRNA慢病毒质粒pTRC-shSIRT1并进行鉴定。将RMC分为高糖组（用高糖培养液培养）、白藜芦醇（SIRT1激活剂）+高糖组（用含1 μmol/L白藜芦醇的低糖培养液培养24 h后,换用高糖培养液培养）、SIRT1 RNAi组（添加干扰病毒pTRC-shSIRT1感染4 h后,换用低糖培养液培养）、SIRT1 RNAi+高糖组（添加干扰病毒pTRC-shSIRT1感染4 h后,换用高糖培养液培养）,同时设正常对照组和甘露醇高渗对照组。以实时荧光定量PCR检测SIRT1、MCP-1的mRNA表达,蛋白质印迹法检测SIRT1和NF-κB p65乙酰化蛋白的表达,ELISA技术检测MCP-1蛋白含量。 结果 质粒测序证实干扰SIRT1基因的shRNA慢病毒载体构建成功,且能抑制RMC中SIRT1基因表达（P<0.01）。高糖刺激使RMC SIRT1基因表达降低,NF-κB p65蛋白乙酰化增强,MCP-1 mRNA和蛋白水平增高;SIRT1激活剂白藜芦醇可逆转高糖引起的变化;而沉默SIRT1可促进高糖诱导的RMC NF-κB p56乙酰化及MCP-1 mRNA和蛋白表达（P<0.05或0.01）。 结论 SIRT1可抑制高糖诱导的RMC MCP-1表达,其机制可能与NF-κB p56去乙酰化有关。     

肾癌中KISS-1通过NF-κB调控MMP-9的表达

目的探讨了NF-κB在KISS-1调控MMP-9的表达中的作用。方法设计并合成了KISS-1基因特异性的siRNA,转染肾癌Caki-1细胞,western blot检测KISS-1、NF-κB和MMP-9蛋白的表达。应用NF-κB抑制剂BAY11-7082处理KISS-1基因表达沉默的Caki-1细胞,western blot检测MMP-9蛋白的表达。结果在Caki-1细胞中,KISS-1基因表达沉默能够显著上调NF-κB蛋白的表达,并显著下调MMP-9蛋白的表达。而BAY 11-7082能够在KISS-1基因表达沉默的Caki-1细胞,显著上调MMP-9蛋白的表达。结论 KISS-1基因在肾癌细胞中能够通过NF-κB调控MMP-9的表达。     

miR-181a通过NF-κB通路调控胃癌细胞系SGC-7901的凋亡及迁移

目的：检测miR-181a和NF-κB信号通路相关蛋白在胃癌组织及胃癌细胞系中的差异性表达,探讨miR-181a通过NF-κB信号通路影响胃癌细胞凋亡、迁移的机制,以期为胃癌的临床治疗提供新依据。方法：检测90例胃癌患者样本中miR-181a及NF-κB信号通路相关蛋白的表达水平,根据临床病例标本数据分析miR-181a及NF-κB信号通路与胃癌的相关性。采用细胞转染的方法调节细胞系SGC-7901中miR-181a表达,之后利用RT-qPCR检测其对NF-κB信号通路的影响,TUNEL法检测细胞凋亡及划痕实验检测细胞迁移的影响。结果：TUNEL法结果显示与miR-181a-up组比较,miR-181a-down组凋亡率更高。Western印迹结果显示与miR-181a-up组比较,miR-181a-down组Caspase3和Caspase9的表达量更高。结论：miR-181a抑制SGC7901癌细胞凋亡并促进癌细胞迁移,激活NF-κB信号通路。     

过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3、Panc-1铁死亡的作用机制

目的探讨过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3和Panc-1铁死亡的作用机制。 方法瞬时转染miR-199-3p/5p模拟物和抑制物至BxPC-3、Panc-1细胞中。qRT-PCR检测细胞中miR-199-3p/5p表达水平;Western blotting检测SCL7A11、BTRC、TFRC蛋白水平。谷胱甘肽(GSH)、Fe2＋、脂质过氧化物(LPO)试剂盒检测细胞GSH、Fe2＋、LPO水平。免疫共沉淀检测BTRC、TFRC泛素化水平。双荧光素酶报告实验检测miR-199与靶基因的相互作用。 结果转染miR-199-3p/5p模拟物后,胰腺癌BxPC-3、Panc-1细胞株中miR-199-3p/5p、TFRC蛋白水平显著上调;SLC7A11、BTRC蛋白水平显著降低;LPO、Fe2＋含量升高,GSH含量降低。过表达BTRC能够显著降低TFRC蛋白水平。miR-199-3p靶向结合SLC7A11,miR-199-5p靶向结合BTRC。 结论过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3和PANC-1铁死亡,可能与靶向抑制BTRC、SLC7A11促进LPO累积有关。     

肾康丸通过p38/NF-κB通路抑制AOPP诱导的足细胞炎症因子MCP-1的表达

目的 探讨肾康丸含药血清对晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导的体外培养足细胞(MPC5)单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响及其机制.方法 制备肾康丸含药血清和AOPP;体外培养MPC5,用不同浓度的肾康丸含药血清刺激不同时间,MTT法检测细胞增殖;用肾康丸含药血清干预AOPP处理的MPC5,Western blot法检测p38MAPK、IκBα蛋白表达,免疫荧光法观察NF-κB p65核转移,ELISA法检测细胞培养上清中MCP-1表达.结果 (1)肾康丸含药血清呈时间和浓度依赖性促进MPC5增殖,最佳作用浓度和时间分别是5％、24 h;(2)AOPP呈浓度和时间依赖性诱导MPC5分泌MCP-1;p38抑制剂SB203580或NF-κB抑制剂小白菊内酯预孵育能使细胞上清中MCP-1分泌减少;肾康丸含药血清能抑制AOPP诱导MPC5分泌MCP-1;(3)AOPP以浓度依赖的方式增加P-p38蛋白的表达、降低IκBα蛋白的表达;与AOPP组相比,AOPP+肾康丸组MPC5 Iκ Bα蛋白表达增加;AOPP+SB203580组IκBα蛋白表达亦增加,但不及AOPP+肾康丸组;(4)肾康丸含药血清减少AOPP诱导的NF-κB p65核转移.结论 肾康丸含药血清能通过p38MAPK/NF-κB途径下调MCP-1表达而发挥抗炎作用,为应用其防治糖尿病肾病提供了新的理论依据.     

过表达miR-202-5p通过抑制PCSK9减轻阿尔茨海默病神经损伤

目的 探讨miR-202-5p对前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)的调控作用,及对阿尔茨海默症(AD)神经元损伤的影响。方法 SD大鼠用侧脑室注射β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)法建立AD模型,随机分正常对照组、模型组、ago-miR-202-5p组、ago-NC组、PCSK9抑制剂组。给药结束后进行空间记忆及学习能力检测;尼氏染色检测脑皮层组织神经元变化;神经元核抗原(NeuN)免疫荧光染色法检测脑皮层组织神经元数目;ELISA法检测脑脊液中PCSK9、β-淀粉样蛋白42(Aβ42)、β-淀粉样蛋白40(Aβ40)、总胆固醇(TC)及脑皮层组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、磷酸化Tau蛋白(P-tau)水平;qRT-PCR法检测脑皮层组织miR-202-5p表达水平;Western blot法检测脑皮层组织PCSK9、LDL受体相关蛋白1(LRP-1)、载脂蛋白E(ApoE)及淀粉前体蛋白(APP)、β位点APP剪切酶1(BACE1)蛋白表达。双荧光素酶验证miR-202-5p对PCSK9的靶向调控作用。建立体外AD细胞模型,共转染miR-202...     

丝蛋白-羟基磷灰石复合材料通过抑制NF-κB/NLRP3促进骨缺损的修复

目的:探讨丝蛋白-羟基磷灰石复合材料修复兔骨缺损过程中对IL-1β 和IL-18的基因表达,及NF-κB和NLRP 3的蛋白表达的影响.方法:应用16只新西兰白兔,采用随机数字法分为两组,每组8只,分别为手术+HA组和手术+SF/HA组,手术组制作15mm长的右侧下颌骨节段性骨缺损模型,根据植入不同移植材料分为两组,一...     

miR-9-5 p和miR-125 b-5 p在膝关节骨性关节炎软骨中的表达及意义

目的 研究miR-9-5p、miR-125b-5p在膝关节骨性关节炎(KOA)软骨中的表达及意义.方法 选取骨科建卡就诊的KOA患者124例为研究对象(KOA组),将KOA组软骨标本(重度退变软骨、中度退变软骨、轻度退变软骨)分为重度组(32例)、中度组(44例)和轻度组(48例);选取同期因交叉韧带断裂、盘状软骨损伤...     

LINC00205靶向miR-514a-3p/NF-κB对血管平滑肌细胞生物学功能的作用

目的 LINC00205是否通过调控miR-514a-3p/NF-κB通路而参与动脉粥样硬化发生过程尚未清楚.文章旨在探讨LINC00205对血管紧张素II(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(HA-VSMC)增殖、凋亡、迁移的影响及其对miR-514a-3p/NF-κB通路的调控作用.方法 采用AngII诱导的HA-VS...     

呼吸道合胞病毒通过调控miR-409-3p/SIRT1通路促进支气管上皮细胞凋亡与炎症因子表达

目的 呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)对人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBECs)凋亡和炎性因子表达的影响及可能机制.方法 体外培养HBECs,分别转染miR-409-3p抑制剂、SIRT1过表达载体或共转染miR-4...     

miR-149-5p通过靶向AEBP1调控胃癌细胞的迁移侵袭

目的：探讨miR-149-5p对胃癌细胞迁移侵袭能力的影响及分子机制。方法：qRT-PCR检测胃癌细胞株和组织标本中miR-149-5p的表达,分析其表达水平与胃癌患者临床病理特征参数及预后的相关性,建立过表达和干扰miR-149-5p的胃癌细胞株,Transwell实验检测miR-149-5p表达水平对胃癌癌细胞迁移侵袭能力的影响;生物信息学网站预测miR-149-5p的靶基因,采用荧光素酶报告基因实验加以验证。结果：miR-149-5p在胃癌组织和细胞株中均低表达（均P<0.05）。miR-149-5p的表达水平与胃癌患者的浸润深度（P=0.016）、淋巴结转移（P=0.001）和TNM分期（P=0.023）相关。miR-149-5p低表达是胃癌患者总生存期的独立危险因素。与对照组相比,miR-149-5p mimics明显抑制胃癌细胞的迁移侵袭能力（均P<0.01）,而转染miR-149-5p inhibitors后得到了相反的结果（均P<0.05）。miR-149-5p靶向调控脂肪细胞增强结合蛋白1(Adipocyte enhancer binding pro...