调控miR-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响及机制研究

目的:探究调控微小RNA(miR)-642a-5p表达对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制。方法:通过转染不同质粒将Hela细胞分为miR-642a-5p mimic组、miR-642a-5p mimic NC组,以未做任何处理的Hela细胞作为对照组。RT-qPCR法检测miR-642a-5p、NF-κB mRNA的表达水平,Western blot法检测NF-κB p65蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell法检测细胞侵袭、迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与对照组、miR-642a-5p mimic NC组比较,miR-642a-5p mimic组miR-642a-5p的表达量及细胞凋亡率升高,NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h的细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率降低(均P<0.05);对照组与miR-642a-5p mimic NC组miR-642a-5p、NF-κB mRNA、NF-κB p65蛋白的表达水平及转染24、48 h细胞增殖活性、侵袭细胞个数、划痕愈合率、细胞凋亡率比较,...     

miR-486-3p靶向DDR1对口腔鳞状细胞癌的抑制作用及槟榔致口腔鳞状细胞癌的可能机制

目的 探讨miR-486-3p靶向盘蛋白结构域受体1(DDR1)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)的抑制作用,并基于miR-486-3p和DDR1分析槟榔致OSCC的可能机制。方法 (1)收集20例原发性OSCC患者肿瘤组织及癌旁组织以检测miR-486-3p的表达水平。(2)取人口腔表皮癌(OEC)-M1细胞,分为对照1组(常规培养细胞,不给予任何特殊处理)、miR-486-3p mimic组(转染miR-486-3p mimic)、miR-486-3p inhibitor组(转染miR-486-3p inhibitor),以及对照2组(常规培养细胞,不给予任何特殊处理)、OE-DDR1组(转染过表达DDR1的慢病毒质粒)、sh-DDR1组(转染低表达DDR1的慢病毒质粒)。检测各组细胞增殖能力,以及活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、Caspase-3蛋白表达水平。检测对照1组、miR-486-3p mimic组、miR-486-3p inhibitor组DDR1 mRNA的表达水平。(3)取HEK293细胞,分别转染miR-486-3p mimic和野生型或...     

miR-122-3p靶向VEGFA基因对胰腺癌细胞恶性生物学行为影响的分子机制

目的 探讨miR-122-3p通过靶向血管内皮生长因子(VEGFA)基因对胰腺癌细胞增殖、克隆、迁移及侵袭能力影响的分子机制。方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胰腺癌细胞株(BxPC-3、Capan-1、PANC-1、HPAC、AsPC-1)与正常胰腺导管上皮细胞株HPDE中miR-122-3p mRNA及VEGFA mRNA的表达。将AsPC-1细胞株分为NC组、miR-con组、miR-122-3p mimic组、miR-122-3p+pcDNA组和miR-122-3p+pcDNA-VEGFA组。通过噻唑蓝(MTT)细胞增殖实验、平板克隆实验检测各组细胞增殖及克隆能力,通过细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力,通过蛋白质印迹实验检测MMP-2、VEGFA、ERK1、MAPK蛋白表达,通过双荧光素酶报告基因法和蛋白质印迹法验证miR-122-3p与VEGFA的靶向关系。结果 各胰腺癌细胞株中miR-122-3p mRNA表达量均低于HPDE细胞株,VEGFA mRNA表达量均高于HPDE细胞株(P<0.05)。miR-122-3...     

模拟失重下miR-138-5p靶向SIRT1负调控成骨细胞分化的研究

背景 机械刺激对于维持骨骼重塑和平衡至关重要,机械卸载引起的骨骼系统损伤是长期航天飞行的主要局限性之一.研究表明微小RNA(miRNA)可通过调控与骨形成相关的基因和信号通路调节成骨细胞功能.目的 探究模拟失重下miR-138-5p/SIRT1信号通路对成骨细胞分化的影响,为失重性骨质丢失的在体靶向干预寻求治疗靶点.方法 利用2D回转器对前成骨细胞MC3T3-E1进行模拟失重处理,验证沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)及miR-138-5p在模拟失重下的表达发生变化;向MC3T3-E1细胞中转染miR-138-5p mimic、inhibitor、pcDNA3.1(+)-SIRT1及相应的阴性对照进行功能验证;向MC3T3-E1细胞中转染inhibitor-NC、miR-138-5p inhibitor后模拟失重处理48 h进行挽救实验;采用qRT-PCR方法检测miRNA及SIRT1、Runx2、Osx的mRNA表达变化;采用Western blot方法检测SIRT1、Runx2、Osx的蛋白表达变化;采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测和ALP染色方法检测成骨细胞分化能力的变化.结果 模拟失重下,MC3T3-E1细胞中Runx2、SIRT1的mRNA及蛋白均表达下降(P<0.01或P<0.05);转染miR-138-5p mimic和inhibitor后,qRT-PCR、Western blot、ALP活性及ALP染色检测均表明过表达miR-138-5p能够显著抑制成骨细胞分化,而抑制miR-138-5p能够促进MC3T3-E1细胞分化(P<0.05或P<0.01).miR-138-5p mimic与pEX-SIRT1共转染实验表明miR-138-5p通过抑制SIRT1负调控成骨细胞分化(P<0.01).此外,抑制miR-138-5p可以降低模拟失重对成骨细胞的分化抑制,表现为促进SIRT1、Runx2、Osx mRNA和蛋白表达(P<0.01).结论 SIRT1表达在模拟失重下下调,而miR-138-5p表达上调;miR-138-5p通过直接靶向SIRT1调控Runx2、Osx的mRNA及蛋白表达,抑制成骨细胞分化;此外,抑制miR-138-5p/SIRT1通路可以部分降低模拟失重对成骨细胞的分化抑制,miR-138-5p可以作为潜在的干预靶点.     

miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及作用

目的探讨miR-23a-3p在脂多糖诱导的人肾小管上皮细胞中的表达及其作用。方法使用LPS诱导人肾小管上皮细胞HK-2细胞建立脓毒症性急性肾损伤细胞疾病模型，用CCK-8法检测细胞活力，实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测IL-6 mRNA和miR-23a-3p的相对表达量。将实验细胞分为3组： 正常对照组、LPS＋空白对照(NC)组和LPS＋miR-23a-3p模拟物（mimic）组，采用Western印迹法检测炎症和凋亡相关蛋白p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5的表达水平。结果LPS可以抑制HK-2的细胞活力并增加炎症因子IL-6 mRNA的表达水平，同时，miR-23a-3p在LPS诱导的HK-2细胞中表达下降。与正常对照组相比，LPS增加了p-NF-κB、IL-6、Cleaved Caspase-3和Usp5蛋白的表达水平，而转染miR-23a-3p模拟物可以逆转以上这些变化。结论miR-23a-3p模拟物可以显著减轻LPS诱导的HK-2细胞的炎症和凋亡水平，其作用机制可能与靶向抑制Usp5有关。     

lncRNA KTN1-AS1调节miR-153-3p/NFAT5轴对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA Kinectin 1反义RNA 1(lncRNA KTN1-AS1)调控miR-153-3p/活化T细胞核因子5(NFAT5)轴对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测NSCLC组织、癌旁组织、人正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞系A549、HCC827、H1299中KTN1-AS1、miR-153-3p表达及NFAT5蛋白表达;将A549细胞分为Ct组、si-NC组、si-KTN1-AS1组、mimic NC组、miR-153-3p mimic组、miR-153-3p mimic+pcDNA组、miR-153-3p mimic+pcDNA-NFAT5组,qRT-PCR检测细胞中KTN1-AS1、miR-153-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot检测NFAT5、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白...     

miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及其靶向调控CTDP1基因表达机制

目的：探讨miR-431-3p对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,阐明其可能的分子机制。方法：取经病理诊断确诊为胃癌的68例患者的胃癌组织及其癌旁组织。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测胃癌组织、癌旁组织和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞、人胃癌细胞（MKN-28、MGC-803、 MKN-45、 SGC-7901和HGC-27）中miR-431-3p及羧基末端结构域磷酸酶1 (CTDP1)mRNA表达水平,Western blotting法检测上述细胞中CTDP1蛋白和各组SGC-7901细胞中细胞色素C(Cyt C)、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析miR-431-3p与CTDP1 mRNA表达水平的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测miR-431-3p和CTDP1的靶向关系。将miR-431-3p mimic和CTDP1过表达慢病毒分别或同时转染至SGC-7901细胞中,将细胞分为空白组、空载过表达（mimic NC）组、miR-431-3p过表达（miR-431-3p mimic）组、空载慢病毒（Ve...     

miR-103通过NF-κB通路上调MGMT表达诱导胃癌细胞紫杉醇耐药

目的 观察miR-103在胃癌细胞紫杉醇(PTX)耐药中的作用,并对其机制进行探讨。方法 构建PTX耐药胃癌NCI-N87细胞(N87/PTX);N87/PTX 细胞转染miR-103 inhibitor和阴性对照,分别设为miR-103 inhibitor组和阴性对照组(NC),同时以未转染的N87/PTX细胞作为空白对照组(Control)。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞miR-103表达水平;生物信息学分析miR-103的靶基因;结晶紫染色法检测细胞贴壁存活率;免疫荧光法检测细胞NF-κB p65定位;蛋白印记法检测p-NF-κB p65、IKBα、MGMT蛋白表达变化。结果 N87/PTX耐药指数为26.4。IKBα蛋白的编码基因NFKBIA与miR-103存在互补结合位点。与正常N87细胞相比,N87/PTX细胞miR-103、p-NF-κBp65和MGMT表达显著升高,IKBα表达明显下调(P＜0.01)。miR-103 inhibitor可显著降低PTX对N87/PTX细胞的IC₅₀(P＜0.01)。miR-103 inhibitor显著增强PTX(3 μmol.L^_-1)诱导的N87/PTX细胞贴壁存活率降低(P＜0.01)。NF-κB p65在NC组N87/PTX细胞中表达于细胞质和细胞核,而在miR-103 inhibitor组中主要表达于细胞质。miR-103 inhibitor显著下调N87/PTX细胞p-NF-κB p65和MGMT蛋白表达,上调IKBα蛋白表达(P＜0.01)。结论 miR-103可能通过降解IKBα诱导NF-κB p65入核,NF-κB p65增强MGMT转录表达从而介导胃癌细胞对PTX耐药。     

基于microRNA-92a-3p靶向SIRT1调控氧糖剥夺再灌注诱导脑微血管内皮细胞炎症反应的作用机制研究

目的 探讨基于microRNA-92a-3p（miR-92a-3p）靶向调控SIRT1氧糖剥夺再灌注（OGD/R）诱导小鼠脑微血管内皮细胞（bEnd.3）炎症反应的作用机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定miR-92a-3p、SIRT1、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）mRNA的表达；Western blotting明确SIRT1、核转录因子-κB（NF-κB）p65、磷酸化NF-κB（p-NF-κB）p65、TNF-α和IL-1β蛋白的表达；双荧光素酶报告基因验证miR-92a-3p与SIRT1靶向关系；划痕实验检测bEnd.3细胞的迁移能力。结果 OGD/R组miR-92a-3p相对表达量较对照组升高（P <0.05）。M_SIRT1 WT+mimics+TK组荧光素酶活性较M_SIRT1 WT+mimics NC+TK组低（P <0.05）。OGD/R组SIRT1蛋白和mRNA相对表达量较对照组降低（P <0.05），OGD+92a抑制剂组较OGD+92a抑制剂内参组升高（P <0.05）。miR-92a-3p模拟物组NF-κBp65/p-NF-κBp65蛋白较模拟物内参组高，SIRT1蛋白和mRNA表达较模拟物内参组低（P <0.05）。miR-92a-3p模拟物组IL-1β、TNF-α蛋白和mRNA相对表达量较模拟物内参组高（P <0.05）。miR-92a-3p模拟物组伤口愈合率较模拟物内参组低（P <0.05）。结论 miR-92a-3p通过靶向抑制SIRT1表达，促进OGD/R诱导的脑微血管内皮细胞炎症反应。     

过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3、Panc-1铁死亡的作用机制

目的探讨过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3和Panc-1铁死亡的作用机制。 方法瞬时转染miR-199-3p/5p模拟物和抑制物至BxPC-3、Panc-1细胞中。qRT-PCR检测细胞中miR-199-3p/5p表达水平；Western blotting检测SCL7A11、BTRC、TFRC蛋白水平。谷胱甘肽(GSH)、Fe2＋、脂质过氧化物(LPO)试剂盒检测细胞GSH、Fe2＋、LPO水平。免疫共沉淀检测BTRC、TFRC泛素化水平。双荧光素酶报告实验检测miR-199与靶基因的相互作用。 结果转染miR-199-3p/5p模拟物后,胰腺癌BxPC-3、Panc-1细胞株中miR-199-3p/5p、TFRC蛋白水平显著上调；SLC7A11、BTRC蛋白水平显著降低；LPO、Fe2＋含量升高,GSH含量降低。过表达BTRC能够显著降低TFRC蛋白水平。miR-199-3p靶向结合SLC7A11,miR-199-5p靶向结合BTRC。 结论过表达miR-199-3p/5p诱导胰腺癌细胞BxPC-3和PANC-1铁死亡,可能与靶向抑制BTRC、SLC7A11促进LPO累积有关。     

miR-129-5p靶向HMGB1对胰腺癌细胞凋亡的作用研究

目的：研究miR-129-5p调控HMGB1表达在胰腺癌细胞凋亡中的作用。方法：以未处理的胰腺癌SW1990细胞作为对照组（Control组），用脂质体转染法将mimics-NC（空载体）、miR-129-5p mimics、inhibitor-NC（空载体）、miR-129-5p inhibitor分别转染SW1990细胞作为mimics-NC组、miR-129-5p过表达组（miR-129-5p mimics组）、inhibitor-NC组、miR-129-5p低表达组（miR-129-5p inhibitor组），通过在线靶基因预测网站Target genes预测miR-129-5p与HMGB1是否存在结合位点，双荧光素酶基因报告实验验证miR-129-5p与HMGB1的靶向关系。采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-129-5p的表达水平，Western blot法检测HMGB1蛋白及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2表达。Hoechst染色观察细胞凋亡变化。结果：与mimics-NC组及Control组比较，miR-129-5p mimics转染显著上调miR-12...     

微RNA-342-3p/末端尿苷酰转移酶1/凝血酶敏感素-2通路在胰腺导管腺癌中的作用及机制

目的 探讨微RNA(miR)-342-3p/末端尿苷酰转移酶1(TUT1)/凝血酶敏感素-2(THBS2)通路在胰腺导管腺癌中的作用及miR-342-3p、TUT1、THBS2 mRNA表达与患者临床病理学参数的关系。方法 选择2008年5月至2021年3月在遂宁市中心医院行根治性手术切除的胰腺导管腺癌标本(n=80)和对应癌旁正常组织标本(n=20)为研究对象。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测胰腺导管腺癌组织和癌旁正常组织中miR-342-3p、TUT1、THBS2 mRNA的表达。将对数生长期人胰腺导管腺癌细胞株PANC-1细胞分为对照组(转染miR-NC)、miR-342-3p过表达组(转染miR-342-3p mimic)、miR-342-3p抑制剂组(转染miR-342-3p inhibitor)、Vector组(转染pCS4-HA vectors)、TUT1组(转染pcDNA3-Flag-TUT1)、阴性对照组(转染sh-NC慢病毒载体)、TUT1沉默组(转染pGCshL-TUT1载体)、miR-342-3p过表达+TUT1组(同时转染miR-342-3p mimic和...     

小干扰RNA沉默NF-κB P65基因表达对胰腺癌细胞株PANC-1增殖与凋亡的影响

目的:运用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术阻断胰腺癌细胞株PANC-1中NF-κB P65基因表达,并研究该基因沉默后对细胞增殖与凋亡的影响.方法:利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的人NF-κB P65的小干扰RNA转染入胰腺癌细胞株PANC-1中.RT-PCR法测定胰腺癌细胞内NF-κB P65mRNA与细胞周期素D1(cyclinD1)mRNA的表达.ELISA法检测NF-κB亚单位P65的DNA结合活性的改变.MTT法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的抑制情况.流式细胞仪测定细胞凋亡率及细胞周期的变化.结果:化学合成的人NF-κB P65 siRNA能有效地抑制PANC-1细胞中NF-κB P65与cyclinD1基因在mRNA水平上的表达(P＜0.01),同时ELISA结果显示,RelA siRNA组的p65亚单位与DNA结合活性明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).RelA siRNA组中细胞增殖减慢,凋亡率较对照组明显增加(P＜0.01),同时G1期细胞所占的比例较对照组增加了10%,S期和G2/M期细胞则分别减少了4%与6%.结论:体外实验初步证明NF-κB P65基因在胰腺癌细胞株增殖分化与凋亡方面扮演重要角色,通过沉默其表达可抑制胰腺癌细胞株PANC-1增殖并诱导其凋亡.     

miR-122-5p靶向ADAM10调控Notch信号通路对人卵巢癌细胞SKOV-3的上皮-间质转化的抑制作用

目的 研究miR-122-5p对人卵巢癌细胞SKOV-3上皮-间质转化(EMT)的影响,阐明其可能机制.方法 常规体外培养人卵巢癌细胞SKOV-3,将miR-122-5p模拟物(miR-122-5p mimic)及其阴性对照(mimic NC)转染至SK-OV-3细胞,分为空白对照组(Blank组)、mimic NC组...     

COPD患者外周血SIRT1及NF-KB、MMP-9的表达水平分析

探讨COPD患者外周血沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)及核因子κB (NF-κB)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平及作用。比较患者SIRT1、NF-κB、MMP-9等水平情况。结果显示患者血清SIRT1水平随病情加重而降低,患者血清NF-κB、MMP-9水平随病情加重而增高。COPD稳定期组和急性加重组患者SIRT1mRNA和蛋白相对表达量明显低于对照组; NF-κB、MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组。实验证明COPD患者SIRT1表达水平降低与肺功能下降相关,可作为COPD潜在标志物; SIRT1可能通过对NF-κB、MMP-9的调节作用来调控COPD的发生与发展。     

miR-671-3p靶向调控CKAP4对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响

目的探讨miR-671-3p靶向调控细胞骨架相关蛋白4(CKAP4)对人脑胶质瘤细胞增殖及迁移的影响。 方法收集术后脑胶质瘤组织及配对癌旁正常组织标本,检测其miR-671-3p和CKAP4表达水平。将人脑胶质瘤U251细胞株分为miR-671-3p NC组、miR-671-3p mimic组和miR-671-3p inhibitor组,并转染相应质粒。采用实时荧光定量PCR测定miR-671-3p表达,CCK-8实验测定细胞增殖能力,Transwell实验测定细胞迁移能力。Western blotting测定CKAP4表达水平。 结果人脑胶质瘤组织中miR-671-3p、CKAP4表达水平高于癌旁正常组织(P＜0.05)。细胞增殖率、迁移率miR-671-3p mimic组高于miR-671-3p NC组,miR-671-3p inhibitor 组低于miR-671-3p NC组(P＜0.05)。miR-671-3p对CKAP4具有靶向调节作用。miR-671-3p mimic组CKAP4蛋白表达量低于miR-671-3p NC组,miR-671-3p mimic组低于miR-671-3p inhibitor组(P＜0.05)。 结论miR-671-3p可靶向调控CKAP4促进人脑胶质瘤细胞增殖及迁移能力。     

COPD患者外周血SIRT1及NF-KB、MMP-9的表达水平分析

探讨COPD患者外周血沉默信息调节因子相关酶1(SIRT1)及核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平及作用。比较患者SIRT1、NF-κB、MMP-9等水平情况。结果显示患者血清SIRT1水平随病情加重而降低,患者血清NF-κB、MMP-9水平随病情加重而增高。COPD稳定期组和急性加重组患者SIRT1 mRNA和蛋白相对表达量明显低于对照组;NF-κB、MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组。实验证明COPD患者SIRT1表达水平降低与肺功能下降相关,可作为COPD潜在标志物;SIRT1可能通过对NF-κB、MMP-9的调节作用来调控COPD的发生与发展。     

miR-146a-5p靶向IRAK-1调控DVT患者内皮祖细胞的增殖及炎症

目的 研究微RNA(miR)-146a-5p靶向白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)调控深静脉血栓(DVT)患者内皮祖细胞(EPCs)的增殖及炎症.方法 选取2018年7月至2019年6月该院诊断为DVT的10例患者及10例体检的健康志愿者为研究对象,分离外周血EPCs,检测miR-146a-5p、IRAK-1的表达水平;DVT患者的EPCs分为miR-阴性对照(NC)组、miR-146a-5p组、miR-NC+NC质粒组、miR-146a-5p+NC质粒组、miR-146a-5p+IRAK-1质粒组,检测细胞增殖活力及吸光度(A490)值、miR-146a-5p、IRAK-1、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平.结果 DVT患者EPCs中miR-146-5p相对表达水平低于健康志愿者,IRAK-1相对表达水平高于健康志愿者(P<0.05);miR-146a-5p组A490值、miR-146a-5p相对表达水平高于miR-NC组,IRAK-1、NF-κB、TNF-α、IL-1β表达水平、野生型IRAK-1基因的荧光活力低于miR-NC组(P<0.05);miR-146a-5p+IRAK-1质粒组A490值低于miR-146a-5p+NC质粒组,I-RAK-1、NF-κB、TNF-α、IL-1β水平高于miR-146a-5p+NC质粒组(P<0.05).结论 miR-146a-5p靶向I-RAK-1促进DVT患者的EPCs增殖并抑制炎性反应.     

晚期糖基化终末产物受体在胰腺癌细胞增殖及 成瘤过程中的作用

目的 探讨晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end products, RAGE）对胰腺癌PANC-1细胞增殖及转染后接种裸鼠在成瘤过程中的作用。方法 构建RAGE 短发夹RNA （shRNA),即shRNA RAGE -1、-2、-3质粒,转染胰腺癌PANC-1细胞后,采用八肽胆囊收缩素(CCK-8)法、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测shRNA RAGE 对细胞增殖、RAGE表达的影响,筛选干扰效果最好的shRNA RAGE 质粒;将转染了shRNA RAGE 质粒的PANC-1细胞接种于裸鼠皮下,观察成瘤时间,并测量计算肿瘤体积;采用RT-PCR和Western blot检测shRNA RAGE 对RAGE、基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinase, MMP)2和9（MMP-2和MMP-9）、核因子-κB（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells, NF-κB）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF ）的mRNA及蛋白表达的影响,并采用免疫组化方法对肿瘤进行微血管计数,计算微血管密度。结果 转染shRNA RAGE 24 h后CCK-8检测细胞的吸光度（A）值低于对照组（ P<0.05）,且在转染48 h时最明显。RT-PCR和Western blot检测显示,shRNA RAGE -2质粒转染后下调RAGE表达效果最好。转染shRNA RAGE -2质粒的PANC-1细胞接种于裸鼠后,裸鼠成瘤时间、肿瘤体积低于shRNA RAGE -1,-3,裸鼠肿瘤组织RAGE 、MMP-2、 NF-κB、 MMP-9、 VEGF mRNA及蛋白表达低于shRNA RAGE -1,-3（ P<0.05）,其微血管密度也低于shRNA RAGE -1,-3（ P<0.001）。结论 RAGE参与了胰腺癌的发生发展过程。RAGE可影响胰腺癌肿瘤生长及微血管形成。     

长非编码RNA NEAT1通过miR-141-3p/EGFR参与瘢痕疙瘩形成的调控机制

目的 探讨长非编码RNA NEAT1在瘢痕疙瘩中表达情况及参与瘢痕疙瘩形成的调控机制。方法 收集27例瘢痕疙瘩组织作为观察组,27例瘢痕疙瘩旁的正常皮肤组织作为对照组,采用实时荧光定量(RT-qPCR)检测其NEAT1、miR-141-3p的表达水平。取对数生长期的瘢痕疙瘩成纤维细胞(HKF)或293T细胞,随机分为空白对照组(Black组)、阴性对照组(NC组)、si-NEAT1组、miR-141-3p mimic组、si-NEAT1+OE-EGFR组、miR-141-3p mimic+OE-EGFR组。si-NEAT1组、miR-141-3p mimic组、si-NEAT1+OE-EGFR组、miR-141-3p mimic+OE-EGFR组细胞应用脂质体转染法分别进行si-NEAT1、miR-141-3p mimic、si-NEAT1+OE-EGFR、miR-141-3p mimic+OE-EGFR、阴性对照质粒转染,Black组细胞不作处理。RT-qPCR检测各组细胞中NEAT1和miR-141-3p的相对表达量。CCK-8法检测细胞增殖。使用生物信息学分析预测NEAT1与mi...