半夏泻心汤对糖尿病胰岛β细胞凋亡的影响

目的探索基于调和胃肠法的半夏泻心汤对糖尿病MIN6胰岛β细胞凋亡的影响。方法 MIN6胰岛β细胞正常培养后,MTT法测定半夏泻心汤适宜的预处理浓度及时间和TBHP适宜的造模浓度及时间后,采用不同浓度的半夏泻心汤和对照药预处理细胞12 h后TBHP建立细胞凋亡模型,进行细胞分组,分为模型组(TBHP组)、对照组(control组)、半夏泻心汤不同预处理浓度组(BXXXT组)和对照药(LI组)预处理组。分别采用MTT、Hoechst33342、TUNEL种方法测定各组细胞的凋亡,Westernblot法检测各组细胞Caspase-3的表达。结果半夏泻心汤适宜的预处理时间及浓度是0. 25mg/mL、0. 5 mg/mL、1 mg/mL干预12 h; TBHP适宜的造模浓度及时间是400μM干预4 h; 3种方法均提示半夏泻心汤中(P 0. 05)、高剂量(P 0. 05)组均可抑制MIN6细胞的凋亡;半夏泻心汤高剂量组可上调Caspase-3的表达(P 0. 05)。结论半夏泻心汤可抑制TBHP诱导的MIN6胰岛β细胞的凋亡,其可能是通过调节Caspase-3的表达实现的,这为临床治疗糖尿病提供了依据。     

补骨脂二氢黄酮甲醚对Aβ 诱导PC12 细胞损伤的保护作用及机制研究

目的探讨补骨脂二氢黄酮甲醚对β淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其相关机制。方法采用Aβ(1.5×10-4mol·L-1)诱导的PC12细胞作为阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)细胞模型,并以补骨脂二氢黄酮甲醚(1×10-6mol·L-1)、雌二醇(1×10-5mol·L-1)进行干预。实验设置空白组、Aβ组、补骨脂二氢黄酮甲醚组、雌二醇组。采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;试剂盒检测细胞线粒体膜电位,以及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性和丙二醛(MDA)含量;采用Western Blot法检测细胞中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与空白组比较,Aβ组的细胞存活率、线粒体膜电位及SOD、GSH-PX活性明显降低(P<0.01),细胞凋亡率、MDA含量以及IL-1β、IL-6、TNF-a蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与Aβ组相比,补骨脂二氢黄酮甲醚组的细胞存活率、线粒体膜电位及SOD、GSH-PX活性明显升高(P<0.01),细胞凋亡率、MDA含量以及IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论补骨脂二氢黄酮甲醚对Aβ诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,可能与提高其抗氧化酶活性及线粒体膜电位,减少炎症因子分泌有关。     

疗癣卡西甫散提取物对肿瘤坏死因子-α诱导角质形成细胞增殖的影响

目的观察疗癣卡西甫散提取物(LE)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导角质形成细胞株HaCaT细胞增殖及白细胞介素-8(IL-8)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)m RNA表达的影响,探讨其作用机制。方法将培养的HaCaT细胞分为正常组、TNF-α组和LE低、中、高剂量组。除正常组外,其余各组细胞均给予40 ng/m L TNF-α诱导,各给药组再分别给予8、40、200μg/m L LE作用48 h。MTT法检测HaCaT细胞增殖;ELISA检测HaCaT细胞IL-8和ICAM-1含量;PI和Hoechst33342荧光染色观察HaCaT细胞凋亡;半定量RT-PCR检测HaCaT细胞IL-8和ICAM-1的m RNA表达。结果与正常组比较,TNF-α组HaCaT细胞吸光度、IL-8和ICAM-1含量及其m RNA表达明显升高(P0.05,P0.01);与TNF-α组比较,LE各剂量组HaCaT细胞吸光度、IL-8和ICAM-1含量及其m RNA表达显著降低(P0.05,P0.01)。结论 LE通过促进HaCaT细胞凋亡及抑制HaCaT细胞IL-8和ICAM-1基因表达,从而维持皮损处HaCaT细胞的正常水平。     

防风石油醚提取物对TNF-α诱导的类风湿关节炎滑膜细胞增殖、凋亡、cAMP/PKA/CREB通路及AQP1表达的影响北大核心CSCD

目的:探讨防风石油醚提取物对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)增殖、凋亡、cAMP/PKA/CREB通路及水通道蛋白1(AQP1)表达的影响。方法:通过10μg/mL的TNF-α诱导HFLS-RA细胞建立体外细胞模型,用60、120、240μg/mL的防风石油醚提取物处理后,采用CCK8法测定细胞增殖,TUNEL染色检测细胞凋亡,ELISA法检测上清液中白介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10和环磷酸腺苷(cAMP)含量,采用RT-PCR法检测磷酸激酶蛋白激酶A(Pka)、cAMP效应元件结合蛋白(Creb)和Aqp1的mRNA表达,Western blot法检测PKA、磷酸化PKA(p-PKA)、CREB和AQP1的蛋白表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞增殖能力增加,凋亡减少,上清液IL-1β、IL-6和cAMP的含量升高,Creb和Aqp1的mRNA表达上调,p-PKA、CREB和AQP1的蛋白表达上调及p-PKA/PKA比值显著升高(P<0.01);与模型对照组相比,防风石油醚提取物120、240μg/mL组细胞增殖能力降低,凋亡增加,上清液IL-1β、IL-6和cAMP的含量减少,Creb和Aqp1的mRNA表达下调,p-PKA、CREB和AQP1的蛋白表达下调及p-PKA/PKA比值降低(P<0.05或P<0.01)。结论:防风石油醚提取物可抑制HFLS-RA细胞增殖,促进细胞凋亡,并通过cAMP/PKA/CREB信号通路下调AQP1的表达。     

黄芪甲苷联合大黄素通过Smads通路抑制TGF-β1诱导的足细胞凋亡

目的:探讨黄芪甲苷联合大黄素是否通过Smads通路抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导小鼠足细胞株凋亡。方法:①体外培养小鼠足细胞株。②应用不同浓度TGF-β1(10-1¹04ng/L)诱导小鼠足细胞凋亡。③TGF-β1不同刺激时间(12、24、48 h)诱导小鼠足细胞凋亡。④黄芪甲苷、大黄素联用抑制TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡,实验分为正常组、TGF-β1组、黄芪甲苷+TGF-β1组(黄芪甲苷组)、大黄素+TGF-β1组(大黄素组)、黄芪甲苷+大黄素+TGF-β1组(黄芪甲苷+大黄素组)。⑤采用流式细胞仪检测Annexin V、Caspase 3。⑥实时定量PCR及Western印迹法检测Smad2、Smad3 mRNA及蛋白质表达。结果:①随着TGF-β1浓度增加(10-1104ng/L)诱导小鼠足细胞凋亡。③TGF-β1不同刺激时间(12、24、48 h)诱导小鼠足细胞凋亡。④黄芪甲苷、大黄素联用抑制TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡,实验分为正常组、TGF-β1组、黄芪甲苷+TGF-β1组(黄芪甲苷组)、大黄素+TGF-β1组(大黄素组)、黄芪甲苷+大黄素+TGF-β1组(黄芪甲苷+大黄素组)。⑤采用流式细胞仪检测Annexin V、Caspase 3。⑥实时定量PCR及Western印迹法检测Smad2、Smad3 mRNA及蛋白质表达。结果:①随着TGF-β1浓度增加(10-1¹04ng/L)、刺激时间增加,足细胞凋亡比率增多(P<0.05),足细胞Smad2、Smad3 mRNA表达增加。TGF-β1103ng/L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24 h为最佳诱导凋亡时间。②TGF-β1组与正常组相比Caspase 3阳性细胞比率增加(P<0.01);Smad2、Smad3蛋白质表达明显增加(P<0.01)。③黄芪甲苷+大黄素组与TGF-β1组、黄芪甲苷组、大黄素组比较:足细胞凋亡比率明显减少(P<0.05);Caspase 3阳性细胞比率减少(P<0.05);Smad2、Smad3蛋白质表达减少(P<0.05)。④黄芪甲苷+大黄素组较TGF-β1组Smad2、Smad3 mRNA表达减少。结论:①TGF-β1能通过Smads通路诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。②黄芪甲苷联合大黄素能通过Smads通路阻断足细胞凋亡,其机制可能与减少TGF-β1的表达,阻止其激活Smads蛋白,从而阻止Caspase家族诱导的足细胞凋亡有关。     

黄芩苷通过IκBα/NF-κB通路调节Aβ_(25-35)诱导的HT22细胞凋亡

目的探讨黄芩苷通过IκBα/NF-κB通路调节Aβ25-35诱导的HT22细胞凋亡。方法将HT22细胞分为空白组、模型组(40μmol/L Aβ_(25-35))、黄芩苷组(50μmol/L),多奈哌齐组(20μmol/L),给药组预处理1 h后加入Aβ_(25-35)。24 h后,MTT检测细胞存活率并观察细胞形态,Annexin V-FITF/PI检测细胞凋亡,Western blot法检测p-IκBα、p-NF-κB、TNF-α, IL-1β蛋白表达。结果与模型组比较,黄芩苷组与多奈哌齐组的细胞形态较完整、细胞密度较高、细胞间隙较小,细胞存活率升高(P0.01),细胞凋亡率降低(P0.01);p-IκBα,p-NF-κB, TNF-α, IL-1β蛋白表达较低(P0.05,P0.01)。结论黄芩苷可能通过抑制由Aβ_(25-35)激活的IκBα/NF-κB通路,减少TNF-α, IL-1β分泌,从而以减少神经元的凋亡,提高细胞的存活率。     

白果内酯对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤及NLRP-1炎症小体激活的影响

目的研究白果内酯对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤及NLRP-1炎症小体激活的影响。方法 Aβ_(25-35 )(1μmol/L)诱导HT22建立细胞损伤模型,同时白果内酯(6、12、24μmol/L)和NADPH氧化酶抑制剂(DPI, 15μmol/L)处理24 h,采用CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测神经元细胞凋亡率,流式法(DCFH-DA荧光探针)测定细胞内ROS生成,ELISA法测定IL-1β、IL-6、TNF-α水平,Western blot法检测NLRP-1、ASC、caspase-1的蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞活力下降(P0.01),神经元细胞凋亡率提高(P0.01),同时,ROS的生成、细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平及NLRP-1、ASC、caspase-1的蛋白表达均增多(P0.01);与模型组比较,白果内酯(12、24μmol/L)组能提高细胞活力,减少ROS生成,降低IL-1β、IL-6、TNF-α水平与神经元细胞凋亡率(P0.05,P0.01),白果内酯(24μmol/L)组能抑制细胞NLRP-1、ASC及caspase-1的蛋白表达(P0.01)。结论白果内酯对Aβ_(25-35)诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤具有较好的保护作用,其机制可能与抑制NADPH氧化酶-ROS介导的NLRP-1炎症小体激活有关。     

白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡与线粒体跨膜电位影响

目的探讨白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位的影响。方法 20μmol/LAβ25-35刺激PC12细胞后分别给予160,80,40,20μg/L,CCK-8法检测细胞活力,AnnexinV-FITC流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态,罗丹明染色后测线粒体跨膜电位。结果与模型组比较,白藜芦醇呈剂量依赖性的提高Aβ25-35诱导的PC12细胞存活率和线粒体跨膜电位,降低PC12细胞凋亡率,有统计学差异(P<0.05)。结论白藜芦醇对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡有保护效应。     

虫草素抑制脂多糖诱导气道上皮细胞损伤作用机制研究

目的:研究虫草素抑制脂多糖(LPS)诱导气道上皮细胞损伤作用机制。方法:培养气道上皮细胞9HTZ,50μg/ml的LPS干预9HTZ细胞8h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,并收集细胞上清液和细胞,采用酶联免疫法(ELISA)法检测细胞上清液中的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β),采用Western blot法检测细胞中和转录因子NF-κB、细胞间粘附分子1(ICAM-1)蛋白表达。结果:虫草素(50,100μmol/ml)组能显著抑制LPS诱导的9HTZ细胞的凋亡,并能显著性抑制细胞上清液中的IL-6、IL-1β、TNF-α的含量,抑制细胞中NF-κB、ICAM-1蛋白的表达。讨论:虫草素能保护LPS诱导的气道上皮细胞损伤。     

慈菇消脂方对TGF-β1诱导LX2细胞miR-378a-3p表达及Hh信号通路的影响

目的 观察慈菇消脂方对TGF-β1诱导活化LX2细胞miR-378a-3p表达及Hh信号通路的影响。方法 将细胞分为对照组、诱导组、含药血清组、miR-378a-3p inhibitor组、miR inhibitor NC组。CCK-8法检测各组细胞活力，流式细胞术检测各组细胞凋亡率，RT-qPCR检测各组细胞miR-378a-3p表达，RT-qPCR和Western blot法检测各组细胞Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA和蛋白表达。结果 与对照组比较，诱导组细胞活力及Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA和蛋白表达升高(P<0.01),miR-378a-3p表达降低(P<0.01)。与诱导组比较，含药血清组细胞活力、Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA及α-SMA、Gli2蛋白表达降低(P<0.05),细胞凋亡率及miR-378a-3p表达升高(P<0.01);miR-378a-3p inhibitor组细胞活力、Shh、Gli1、Gli2、Col-I、α-SMA mRNA及Gli1、G...     

竹节参总皂苷对棕榈酸诱导HepG2细胞凋亡的保护作用研究

探讨竹节参总皂苷(TSPJ)对棕榈酸(PA)诱导的HepG2细胞凋亡的保护作用及分子机制。体外培养HepG2细胞,分为5组:对照组,模型组,竹节参参总皂苷高(50 mg·L~(-1))、中(25 mg·L~(-1))、低(12.5 mg·L~(-1))剂量组。5组细胞均培养24 h后,采用MTT法检测细胞活力,用Hoechst染色和Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡,用RT-PCR法检测TNF-α,IL-1β,BCL-2,CHOP和GAPDH mRNA表达水平,用Western blot法和流式检测BCL-2,CHOP和Toll样受体4(TLR4)蛋白表达量。结果表明,与正常组比较,模型组细胞数量显著减少(P0.01),凋亡细胞增多,与模型组比较,高,中剂量组细胞数量显著增多(P0.01),凋亡细胞减少;与正常组比较,模型组CHOP和TLR4蛋白表达量,TNF-α,IL-1β和CHOP mRNA表达水平显著升高(P0.01),BCL-2蛋白表达水平和mRNA表达水平显著降低(P0.01),与模型组比较,高剂量组CHOP和TLR4蛋白表达量,TNF-α,IL-1β和CHOP mRNA表达水平显著降低(P0.01),BCL-2蛋白表达量和mRNA表达水平显著升高(P0.01),提示竹节参总皂苷可以减轻PA诱导的炎症反应及凋亡,对肝细胞有一定的保护作用。     

罗汉果甜苷对体外人肝星状细胞活化和凋亡的影响

目的研究罗汉果甜苷对体外培养人肝星状细胞LX-2活化及凋亡的影响。方法体外培养LX-2,将其分为空白对照组、不同质量浓度的罗汉果甜苷干预组(80、160、240、320μg/mL),每组8瓶细胞,药物与细胞共同孵育24 h后,采用CCK-8试剂检测细胞增殖状态,用酶联免疫吸附法测定转化生长因子-β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原的蛋白分泌,用RT-PCR法检测TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA的表达。用流式细胞仪双染法检测细胞凋亡。结果 CCK8结果显示罗汉果甜苷各剂量组作用LX-2细胞24 h后,细胞增殖均明显降低(P<0.05);ELISA和RT-PCR结果表明,与空白对照组比较,罗汉果甜苷各剂量组可抑制LX-2中TGF-β1和Ⅰ型胶原的蛋白分泌;并能抑制TGF-β1和α-SMA的mRNA表达(P<0.05)。流式细胞检测结果显示罗汉果甜苷各剂量组亦可剂量依赖性显著增加LX-2凋亡率。结论罗汉果甜苷可通过抑制TGF-β1和I型胶原的蛋白及TGF-β1和α-SMA的mRNA的表达来抑制肝星状细胞活化,还能促进肝星状细胞凋亡,从而发挥抗肝纤维化的作用。     

从心论治方上调PI3K/Akt磷酸化减轻HUVEC炎症损伤的体外实验研究

目的探讨从心论治方对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的作用机制。方法细胞随机分为对照组、模型组(100μg/mL ox-LDL干预24 h)、从心论治方含药血清不同浓度组(预先用2.5%、5%、10%、20%药物血清孵育2 h,再加入100μg/mL ox-LDL干预24 h);CCK-8法检测细胞活力;e GFP Annexin V染色检测细胞凋亡;ELISA检测细胞炎症因子核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)与白细胞介素-10(IL-10)水平;Western blotting检测细胞内磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)以及p-Akt的表达量;收集细胞培养液,按照相应试剂盒分别检测细胞还原型谷胱甘酸(GSH)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果与对照组相比,模型组细胞凋亡增多,LDH含量显著增加,NF-κB和TNF-α水平升高,同时TGF-β与IL-10水平降低,PI3K表达量及Akt磷酸化降低。与模型组比较,含药血清各组细胞凋亡率降低,LDH、NF-κB和TNF-α水平降低,GSH、TGF-β、IL-10与p-Akt水平升高(P 0.05或P 0.01)。结论从心论治方可能通过PI3K/Akt信号通路减轻ox-LDL诱导的HUVEC细胞炎症损伤。     

人参皂苷Rg1及Rb1对Aβ25-35诱导CHO细胞毒性影响

目的:观察人参皂苷Rg1及Rb1对β-淀粉样蛋白25-35片段(A β25-35)诱导中国仓鼠卵巢瘤(CHO)细胞损伤的保护作用。方法:利用MTT法和Annexin ⅴ-FITC染色流式细胞仪检测法,依次观察人参皂苷Rg1及Rb1对40μM的Aβ25-35多肽诱导CHO细胞24h后细胞活性和细胞凋亡的干预作用。结果:加入Aβ25-35多肽模型组细胞较未加用对照组细胞活性低(P<0.05),加入Aβ25-35多肽模型组细胞凋亡数高于未加用对照组(P<0.05),模型组细胞加用人参皂苷Rg1及Rb1组细胞损伤和凋亡数均较未加用组细胞有不同程度减少(P<0.05)。结论:天然药单体人参皂苷Rg1及Rb1在一定剂量范围内均能抑制Aβ25-35诱导的神经细胞损伤。     

β-榄香烯对人胰腺癌Panc-1细胞凋亡的影响

目的观察β-榄香烯对人胰腺癌Panc-1细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法β-榄香烯浓度设置为10、20、40、80、160μg/m L,作用于体外培养的Panc-1细胞24、48、72 h。台盼蓝拒染法检测Panc-1细胞抑制率;TUNEL法检测Panc-1细胞凋亡;Hoechst33258荧光染色观察Panc-1细胞核变化;ELISA检测Panc-1细胞Caspase-3、8、9活性;Western blot检测Panc-1细胞Fas、Fas L、细胞色素C(Cyt c)、凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达。结果与对照组比较,β-榄香烯作用Panc-1细胞24、48、72 h,Panc-1细胞抑制率明显增加(P0.05,P0.01),细胞凋亡率明显增加(P0.01,P0.001),并呈时间/浓度依赖性;β-榄香烯作用Panc-1细胞72 h,Panc-1细胞核可见明显碎裂,染色质浓缩,呈强蓝色荧光,形成凋亡小体;β-榄香烯作用Panc-1细胞48 h,Caspase-3、8、9活性明显增加(P0.05,P0.01),Fas、Fas L、Cyt c及AIF蛋白表达明显增强(P0.05,P0.01,P0.001)。结论β-榄香烯能够抑制Panc-1细胞增殖、诱导细胞凋亡,其可能激活细胞内死亡受体途径及线粒体凋亡途径发挥抗肿瘤作用。     

西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探究在以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默症(Alzheimer′s Disease,AD)体外细胞模型中,西洋参水提物(water extracts of American Ginseng,WEAG)对神经元的保护作用.方法:流式细胞仪(FCM)检测确定Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的最佳浓度和时间,以及WEAG抗凋亡的浓度,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞形态的变化.结果:50 μmol/L Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72 h后,细胞变圆,聚集,Hoechst33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,FCM检测凋亡率达(37.30±0.69)%,与对照组(1.56±0.80)%比较,差异具有显著性意义(P<0.05).而Aβ25-35和不同浓度的WEAG(0.5、1、5 mg/ml)同时孵育后,细胞形态明显改善,MTT值显著高于Aβ25-35处理组(P<0.01),凋亡率分别降低到(16.71±1.08)%、(10.52±2.11)%和(3.39±1.65)%,与Aβ25-35损伤组(37.30±0.69)%相比,差异具有统计学意义(p<0.05),并呈现出剂量依赖关系.结论:西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用.     

当归拈痛汤加味膏外敷对AA大鼠关节中HIF-1α、滑膜细胞凋亡的影响

目的 探讨当归拈痛汤加味膏外敷在佐剂性关节炎(AA)大鼠关节中对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及滑膜凋亡的影响.方法 40只wistar大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组及对照组.建立AA模型,给药后18d,取踝关节行HE染色及HIF-1α免疫组化染色,流式细胞仪检测滑膜细胞的凋亡变化.分析HIF1α、滑膜凋亡在AA中的相关性及与节炎活动指标、滑膜病理之间的关系.结果 给药18d后,治疗组HE染色显示明显减轻滑膜增殖以及炎症反应,免疫组化显示治疗组HIF-1α明显表达降低,流式细胞仪检定显示治疗组滑膜细胞凋亡率明显升高.结论 HIF-1α的表达与滑膜细胞凋亡率呈明显负相关,该膏剂通过抑制HIF-1α活性,从而调控一系列下游靶基因,如滑膜细胞凋亡等,此可能是其抑制滑膜增生的作用机制之一.     

海风藤水煎剂对纤维状Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞损伤的影响

目的:探究海风藤水煎剂对纤维状Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞损伤的影响及可能机制。方法:将b End.3细胞分为阴性对照组,模型组(Aβ_(1-42)20μmol/L),海风藤水煎剂低中高剂量组(Aβ_(1-42)20μmol/L+海风藤0.5,1,5 mg/m L);(1)利用噻唑蓝(MTT)法检测海风藤水煎剂对Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞活力的影响;(2)利用Hoechst33258染色法鉴定b End.3细胞的凋亡情况;(3)Western Blot法检测死亡受体凋亡信号通路相关蛋白Caspase-8,Cleaved Caspase-8,Caspase-3及Cleaved Caspase-3的表达水平。结果:MTT与Hoechst33258染色结果显示,与模型组相比,海风藤低、中、高剂量组能显著提高b End.3细胞活性,抑制Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞凋亡(P0.05),且保护作用与海风藤水煎剂浓度成正相关;Western blot显示,与模型组相比,海风藤预处理后,可明显减Cleaved Caspase-8/Caspase-8、Cleaved Caspase-3/Caspase-3的比值(P0.05)。结论:海风藤能够提高b End.3细胞可能通过抑制Aβ_(1-42)诱导的死亡受体信号通路发挥其神经保护作用。     

黄连素对Aβ25-35诱导的HT22细胞TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨黄连素对β-淀粉样蛋白25-35(β-amyloid protein25-35,Aβ_(25-35))诱导的HT22细胞的保护作用及对Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:培养HT22细胞,孵育不同浓度的黄连素(0,5,10,20,40,80μmol·L~(-1)),24 h后行甲基噻唑基四唑法确定黄连素的保护浓度。随后将HT22细胞分为空白组,Aβ组,黄连素组,TAK242组。空白组加入培养基,Aβ组加入Aβ_(25-35)(40μmol·L~(-1)),黄连素组和TAK 242组加入黄连素(20μmol·L~(-1)),TAK 242(1μmol·L~(-1))预处理1 h后加入Aβ_(25-35)(40μmol·L~(-1))。共作用24 h后行乳酸脱氢酶释放实验检测细胞生存率,并行Hoechst33342染色检测细胞凋亡率蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测TLR4,磷酸化(p)-NF-κB和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL~(-1)β)的蛋白水平。结果:与空白组比较,20μmol·L~(-1)的黄连素促进细胞增值,40μmol·L~(-1)和80μmol·L~(-1)的的黄连素抑制细胞增值(P0.01),在各药物组中,20μmol·L~(-1)的黄连素组的细胞增殖率最高(P0.01);与空白组比较,Aβ组的细胞生存率降低(P0.01),与Aβ组比较,黄连素组和TAK 242组的细胞生存率升高(P0.01);与空白组比较,Aβ组的细胞凋亡率升高(P0.01),且染色质凝集,核萎缩,凋亡小体增多,与Aβ组比较,黄连素组和TAK 242组的细胞凋亡率降低(P0.01),且染色质凝集,核萎缩和凋亡小体较少;与空白组比较,Aβ组的TLR4,p-NF-κB和TNF-α和IL~(-1)β的表达增多(P0.01),与Aβ组比较,黄连素组和TAK 242组的TLR4,p-NF-κB和TNF-α和IL~(-1)β的表达减少(P0.01)。结论:黄连素可能通过抑制HT22细胞中由Aβ_(25-35)活化的TLR4/NF-κB通路,从而减少神经元的凋亡起到保护作用。     

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨刺芒柄花素对LPS诱导的大鼠子宫内膜上皮细胞损伤的影响

目的:探讨刺芒柄花素通过调控Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的大鼠子宫内膜上皮细胞损伤的影响。方法:以LPS诱导大鼠子宫内膜上皮细胞损伤,采用CCK8法检测细胞活性;采用RT-qPCR法检测TLR4过表达效率;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6含量;Western Blot法检测TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白的表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组细胞抑制率、细胞凋亡率、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显增加,p-P65/P65、p-IκBα/IκBα、MyD88和TLR4蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,刺芒柄花素12μmol/L组细胞抑制率、细胞凋亡率、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量明显降低,p-P65/P65、p-IκBα/IκBα、MyD88和TLR4蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01);TLR4过表达...