杜仲多糖通过抑制NF-κB通路减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤

目的:探讨杜仲多糖对白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）诱导的软骨细胞损伤的影响及可能机制。方法：体外培养小鼠软骨细胞ATDC5，用含10μg/ml IL-1β处理ATDC5制作骨关节炎软骨细胞炎症模型，随机分为空白组、模型组、模型+杜仲多糖低浓度组、模型+杜仲多糖中浓度组和模型+杜仲多糖高浓度组。其中空白组细胞用常规培养基培养，模型组细胞用含10μg/ml IL-1β的培养基培养，模型+杜仲多糖低浓度组、模型+杜仲多糖中浓度组和模型+杜仲多糖高浓度组细胞分别用含100、200、400 μg/ml杜仲多糖与10μg/ml IL-1β的培养基共同培养。分别培养24、48、72 h后，CCK-8法检测细胞活力。培养48 h后，流式细胞术和DAPI染色检测细胞凋亡，ELISA法检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α），一氧化氮（netric oxide，NO），γ干扰素（interfero-γ，IFN-γ）和白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）的表达，DCFH-DA法检测细胞中活性氧含量，Western-blot法检测金属蛋白酶组织抑制因子1（tissue inhibrtor of metalloproteinase，TIMP-1），基质金属蛋白酶13（mitochondrial membrane protential，MMP-13）及NF-κB信号通路相关P65，磷酸化P65（p-P65）的蛋白表达，免疫荧光染色观察NF-κB P65细胞定位。结果：与空白组比较，模型组ATDC5细胞活力及TIMP-1蛋白表达降低（P<0.05），细胞凋亡率，TNF-α、NO、IFN-γ和IL-6水平，活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量，MMP-13和p-P65的蛋白表达及细胞核内P65⁺数量均升高（P<0.05）。与模型组比较，模型+杜仲多糖低浓度组、模型+杜仲多糖中浓度组和模型+杜仲多糖高浓度组ATDC5细胞活力及TIMP-1蛋白表达升高（P<0.05），而细胞凋亡率、TNF-α、NO、IFN-γ和IL-6水平、ROS含量、MMP-13和p-P65的蛋白表达及细胞核内P65⁺数量均降低（P<0.05）。结论：杜仲多糖可促进白细胞介素1β诱导的软骨细胞ATDC5增殖，并抑制其凋亡、炎症反应和基质降解，其作用机制可能与抑制NF-κB通路的激活有关。     

青蒿琥酯通过NLRP3炎症小体抑制细胞焦亡减轻大鼠肾缺血-再灌注损伤

目的探究青蒿琥酯对大鼠肾缺血-再灌注损伤(IRI)的作用及机制。方法将25只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(IRI组)、低剂量青蒿琥组(ART-L组)、高剂量青蒿琥酯组(ART-H组)和NLRP3炎症小体抑制剂组(INF39组),每组5只。分析各组大鼠血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平及肾组织病理损伤情况;检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;用免疫组织化学染色法检测各组大鼠肾组织IL-1β的表达;免疫荧光染色和蛋白质免疫印迹法检测焦亡相关蛋白的表达。结果与Sham组比较,IRI组Scr和BUN水平升高,肾组织损伤较重,炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平升高,肾损伤分子(KIM)-1及焦亡相关蛋白NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1、Gasdermin D(GSDMD)、IL-1β蛋白表达水平均升高;与IRI组比较,ART-L组、ART-H组和INF39组Scr和BUN水平均下降,肾组织损伤均较轻,TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平均降低,KIM-1、NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白表达水平均下降。结论青蒿琥酯可抑制NLRP3炎症小体诱导的细胞焦亡,减少肾IRI后焦亡相关蛋白的表达及炎症因子的释放,减轻肾IRI。     

高迁移率族蛋白1通过PINK1/Parkin介导的线粒体自噬促进骨髓干细胞的趋化及成骨分化

目的 探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）通过PTEN诱导假定激酶1（PINK1）/帕金蛋白(Parkin)介导的线粒体自噬对骨髓干细胞的趋化及成骨分化的影响。方法 将人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）分为7组：control组、siRNA-NC组、siRNA-HMGB1组、pcDNA-NC组、pcDNA-HMGB1组、pcDNA-HMGB1+siRNA-NC组、pcDNA-HMGB1+siRNA-PINK1组。采用Transwell检测细胞迁移能力;茜素红染色检测各组细胞中钙结节数目;ELISA检测骨桥蛋白（OPN）、碱性磷酸酶（ALP）的含量;RT-qPCR检测各组细胞中成骨细胞特异性转录因子（Osterix）、HMGB1及Runt相关转录因子2（RUNX2）、转录因子CCAAT/增强子结合蛋白（C/EBPα）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）水平;透射电镜检测线粒体自噬小体数目;Western Blot检测hBMSCs中Parkin及微管相关蛋白1A/1B-轻链3（LC3Ⅱ/Ⅰ）、选择性自噬接头蛋白62（P62）和自噬关键分子酵母Atg6同系物（Beclin1）等线粒体自噬相关蛋白的表达。结果 HMGB1通过PINK1/Parkin介导的线粒体自噬对hBMSCs的趋化作用研究表明：与pcDNA-NC组相比,pcDNA-HMGB1组HMGB1表达、细胞迁移率、线粒体自噬数目及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达增加,Parkin、P62等蛋白的表达降低（P＜0.05）;与siRNA-NC组相比,siRNA-HMGB1组HMGB1表达、细胞迁移率、线粒体自噬数目及Beclin-1、LC3B-Ⅱ/Ⅰ等表达降低,Parkin、P62表达增高（P＜0.01）。HMGB1通过PINK1/Parkin介导的线粒体自噬对hBMSCs的成骨分化作用研究结果显示：与pcDNA-NC组相比,pcDNA-HMGB1组钙结节数量、Osterix及RUNX2含量、ALP及OPN的表达升高（P＜0.01）,PPARγ、C/EBPα的表达降低（P＜0.05）;与pcDNA-HMGB1+siRNA-NC组相比,pcDNA HMGB1+siRNA-PINK1组钙结节数量、Osterix及RUNX2含量、ALP及OPN的表达降低（P＜0.05）,PPARγ、C/EBPα的表达升高（P＜0.05）。结论 HMGB1高表达能通过PINK1/Parkin介导的线粒体自噬促进hBMSCs的趋化、成骨细胞分化及抑制成脂细胞分化,可能是骨质疏松症的潜在治疗靶点。     

甲酰基肽受体1对脊髓损伤后小胶质细胞诱导的炎性反应的影响

目的 探讨甲酰基肽受体1（Fpr1）是否参与脊髓损伤（SCI）后小胶质细胞诱导的炎性反应，为SCI后减轻神经炎性反应提供理论依据。方法 将30只成年C57BL/6雄性小鼠按照随机数字表法分为假手术组（Sham组）和不同时间点SCI组（术后1、3、5、7 d），每组6只。采用蛋白质印迹检测小鼠SCI后不同时间点损伤周围脊髓组织Fpr1蛋白的表达变化，采用免疫荧光实验检测Fpr1在小胶质细胞中的定位。选择Fpr1蛋白表达水平最高时间点制作小鼠模型进行进一步实验，将小鼠随机分为SCI组和Fpr1抑制剂（HCH6-1）干预组（HCH6-1干预组），每组6只，并与Sham组比较，应用免疫荧光实验评估各组小胶质细胞的活化程度，通过蛋白质印迹检测各组炎性因子［白细胞介素（IL）-1β、IL-18和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）］以及炎性小体（NLRP3、ASC和Caspase-1）蛋白的表达情况。结果 与Sham组相比，Fpr1在SCI后第1天开始表达增多，第3天最高，第5天下降，第7天下降至与Sham组水平相当。免疫荧光染色结果提示，Fpr1主要表达在小胶质细胞。与SCI组相比，HCH6-1干预组小胶质细胞的活化程度显著减轻，炎性因子（IL-1β、IL-18和TNF-α）和炎性小体（NLRP3、ASC和Caspase-1）的表达显著减少。结论 Fpr1能够介导SCI后小胶质细胞诱导的炎性反应，抑制Fpr1有望成为干预SCI后继发性损伤的新治疗策略。     

益肾蠲痹丸干预相关通路介导细胞焦亡对膝骨性关节炎大鼠的影响

目的 探讨益肾蠲痹丸干预NLRP3/NF-κB/Caspase-1信号通路对膝骨性关节炎（knee osteoarthritis,KOA）大鼠的保护作用,并分析其对细胞焦亡相关蛋白的影响。方法 随机将90只SPF级SD大鼠分为空白组、模型组、阳性对照组和益肾蠲痹丸低、中、高剂量组,每组15只。空白组不做处理,其他组制备KOA大鼠模型后进行干预治疗。比较6组大鼠干预前后膝关节直径及足趾容积情况;ELISA法检测血清中IL-1β、IL-18及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）含量变化;HE染色观察关节软骨组织病理学改变情况;TUNEL法检测细胞凋亡情况;免疫组化法分析Caspase-1相关蛋白表达;Western blot及qRT-PCR法检测NLRP3/NF-κB/Caspase-1相关蛋白及mRNA表达水平。结果 KOA造模后,与空白组比较,模型组大鼠膝关节直径与足趾容积明显增大,血清中IL-1β、IL-18及VEGF含量明显升高,软骨组织细胞排列紊乱,出现炎性浸润,细胞凋亡程度增高,NLRP3/NF-κB/Caspase-1相关蛋白及mRNA表达水平明显升高（P均＜0.05）;与模型组比较,阳性对照组及益肾蠲痹丸治疗组大鼠膝关节直径与足趾容积明显减轻,血清中IL-1β、IL-18及VEGF含量下降,软骨组织细胞炎性浸润改善,细胞凋亡程度减轻,NLRP3/NF-κB/Caspase-1相关蛋白及mRNA表达水平明显下降（P均＜0.05）,其中益肾蠲痹丸高剂量组显著优于益肾蠲痹丸低剂量组（P＜0.01）。结论 益肾蠲痹丸能够改善KOA大鼠关节软骨组织损伤,降低炎症因子表达和细胞凋亡程度,其机制可能与调控NLRP3/NF-κB/Caspase-1信号通路减轻细胞焦亡有关。     

小针刀通过足三里对肌痛共病抑郁大鼠行为学及海马NLRP3和IL-1β表达的影响

目的：观察小针刀刺激足三里穴对肌痛共病抑郁大鼠行为学及海马区Nod样受体蛋白3（Nod-likereceptor protein,NLRP3）和白介素1β（interleukin-1β,IL-1β）表达的影响。

方法：采用急性利血平腹腔注射法制备肌痛共病抑郁大鼠动物模型,将24只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、小针刀组和阿米替林组,每组6只,分别给予对应处理。检测各组大鼠Open field行为学以及机械痛敏程度,智能热板仪检测各组大鼠热缩足阈值,应用Western blotting免疫印迹法检测大鼠海马NLRP3和IL-1β表达量。

结果：与模型组比较,小针刀组大鼠足底机械痛阈明显改善（P<0.01）;与阿米替林组比较,针刀刺激足三里可显著提高大鼠热缩足阈值（P<0.05）。在Open field行为学大鼠水平运动距离及穿格次数比较中,小针刀组大鼠旷场水平运动总距离明显增加（P<0.05）;与模型组比较,大鼠穿格次数有增多趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。模型组大鼠海马体NLRP3和IL-1β表达均明显升高（P<0.05）,小针刀组IL-1β表达明显降低（P<0.05）;针刺足三里可抑制大鼠海马NLRP3的表达,但与模型组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。

结论：小针刀可以改善利血平导致的肌痛共病抑郁大鼠的病理状态,其作用机制可能与抑制中枢海马内NLRP3炎性小体和IL-1β的表达有关。     

低氧对炎性环境下髓核细胞凋亡的作用及机制

目的 探讨低氧对炎性环境下髓核细胞凋亡的影响及作用机制。方法 体外培养大鼠原代髓核细胞，采用低氧小室进行低氧干预，采用促炎因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激髓核细胞模拟炎性环境。通过流式细胞术及TUNEL染色检测髓核细胞凋亡情况，通过蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白表达水平，明确低氧对髓核细胞凋亡的影响；随后通过荧光定量PCR及酶联免疫吸附试验评估炎性环境下髓核细胞内炎性反应情况，并通过蛋白质印迹法分析髓核细胞内NLRP3炎性小体激活水平；最后采用NLRP3炎性小体激动剂QS-21，通过回复实验明确NLRP3炎性小体在低氧调控髓核细胞凋亡中的作用。结果 低氧对正常环境下髓核细胞凋亡无明显影响，但能抑制炎性环境下髓核细胞凋亡。在炎性环境下，髓核细胞炎性细胞因子白细胞介素（IL）-1β、IL-8、IL-18的表达及分泌增加，细胞内NLRP3炎性小体激活，而低氧干预能缓解上述改变。回复实验表明，NLRP3炎性小体激动剂QS-21可削弱低氧对炎性环境下髓核细胞凋亡的抑制作用。结论 低氧通过抑制NLRP3炎性小体激活缓解炎性环境下髓核细胞凋亡。     

活血清解汤对重症急性胰腺炎大鼠肠道免疫屏障功能的影响及机制

背景与目的 重症急性胰腺炎（SAP）易并发肠道免疫屏障功能障碍,笔者前期发现活血清解汤可缓解SAP,但其作用是否与肠道免疫屏障功能有关尚不清楚。因此,本研究探讨活血清解汤对SAP大鼠肠道免疫屏障功能的作用及机制。方法 将SD大鼠随机分成假手术组、SAP模型组（模型组）、SAP模型+活血清解汤治疗组（治疗组）,SAP模型采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法诱导,治疗组造模后给予活血清解汤灌胃,假手术组与模型组给予等体积生理盐水代替。分别在术后6、12 h处死动物,ELISA检测各组血清中的促炎因子TNF-α、抗炎因子IL-4、血淀粉酶及脂肪酶的指标变化;HE染色检测胰腺及小肠组织的病理变化;qRT-PCR及Western blot检测小肠组织巨噬细胞M1型标志物iNOS及M2型标志物Arg-1的表达。将大鼠小肠巨噬细胞分别用牛磺胆酸钠、活血清解汤、牛磺胆酸钠+活血清解汤处理,以无处理的大鼠小肠巨噬细胞为空白对照,用qRT-PCR及Western blot检测各组细胞NF-κB、iNOS、TNF-α、IL-4、Arg-1、TIPE2和PPAR-γ的表达。结果 体内实验中,与假手术组比较,模型组与治疗组术后的TNF-α、IL-4、血淀粉酶、脂肪酶水平均有不同程度升高（部分P<0.05）,但治疗组TNF-α、血淀粉酶、脂肪酶升高的程度明显低于模型组,而IL-4升高的水平明显大于模型组（均P<0.05）;模型组与治疗组术后胰腺与小肠组织均出现明显的病理损伤,但治疗组的损伤程度小于模型组,且随时间延长,模型组的损伤程度加重,治疗组则减轻,模型组与治疗组胰腺与小肠组织病理评分差异均有统计学意义（均P<0.05）;iNOS蛋白与mRNA的表达在模型组小肠组织中表达明显升高,而在治疗组的小肠组织中明显降低（均P<0.05）,Arg-1蛋白与mRNA的表达模型组小肠组织后期（12 h）明显升高,而在治疗组的早期（6 h）与后期（12 h）均明显升高,且升高程度大于模型组（均P<0.05）。体外实验中,单独牛磺胆酸钠处理后的大鼠小肠巨噬细胞的NF-κB、iNOS、TNF-α蛋白与mRNA表达水平明显上升（均P<0.05）,而Arg-1、IL-4、TIPE2、PPAR-γ蛋白及mRNA表达无明显变化（均P>0.05）;单独活血清解汤处理后,大鼠小肠巨噬细胞的Arg-1、IL-4、TIPE2及PPAR-γ蛋白及mRNA表达水平明显升高（均P<0.05）,而NF-κB、iNOS、TNF-α蛋白及mRNA表达无明显变化（均P>0.05）;与单独牛磺胆酸钠处理比较,牛磺胆酸钠+活血清解汤处理的大鼠小肠巨噬细胞的NF-κB、iNOS及TNF-α蛋白及mRNA表达水平明显下降,而Arg-1、IL-4、TIPE2及PPAR-γ蛋白及mRNA表达水平明显增加（均P<0.05）。结论 中药活血清解汤对SAP大鼠的肠道免疫屏障功能有保护作用,其作用机制可能与调控小肠巨噬细胞由M1型向M2型转化,促进抗炎因子表达,抑制促炎因子的释放,进而缓解全身炎症反应有关。     

酸浆苦味A通过抗炎和抗凋亡途径延缓骨关节炎的进展

目的 探究酸浆苦味A（Physalin A,PA）对骨关节炎的保护作用及作用机制。方法 取5日龄的C57BL/6乳鼠膝关节原代软骨细胞进行传代培养,使用5 ng/mL的白细胞介素-1β（IL-1β）刺激原代软骨细胞以模拟骨关节炎的软骨细胞炎性模型,并使用不同浓度的PA（2.5 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L）进行干预,具体分组为对照组、IL-1β组、IL-1β+PA（2.5 μmol/L）组、IL-1β+PA（5 μmol/L）组、IL-1β+PA（10 μmol/L）组。Western blot法检测不同组间蛋白聚糖（ACAN）、二型胶原（COL2A1）、基质金属蛋白酶13（MMP13）、Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶（ADAMTS5）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧合酶2（COX-2）、白细胞介素6（IL-6）和B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达水平。结果 与对照组比较,IL-1β组ACAN、COL2A1蛋白表达水平明显下调（P＜0.05）,而MMP13、ADAMTS5和iNOS、COX-2、IL-6蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;相比于IL-1β组,IL-1β+PA（2.5 μmol/L）组、IL-1β+PA（5 μmol/L）组、IL-1β+PA（10 μmol/L）组中ACAN、COL2A1蛋白表达水平逐渐升高（P＜0.05）,MMP13、ADAMTS5蛋白和iNOS、COX-2、IL-6蛋白表达水平逐渐下降（P＜0.05）。此外,相比于对照组,IL-1β组Bcl-2/Bax比值下降（P＜0.05）;相比于IL-1β组,IL-1β+PA（2.5 μmol/L）组、IL-1β+PA（5 μmol/L）组、IL-1β+PA（10 μmol/L）组中,Bcl-2/Bax比值升高（P＜0.05）。结论 PA能通过抗炎和抗凋亡途径发挥保护关节软骨的作用。     

高雄激素通过诱导细胞焦亡影响卵巢颗粒细胞增殖

目的 探讨多囊卵巢综合征(PCOS)中高雄激素对卵巢颗粒细胞焦亡、增殖的影响。方法 3周龄的ICR小鼠随机分为对照组(5只)和PCOS组(5只),PCOS组小鼠连续注射脱氢表雄酮(DHEA,6 mg/100 g体重) 21 d,对照组小鼠则注射等体积不含DHEA的芝麻油。通过HE染色观察两组小鼠卵巢形态的变化；运用实时定量PCR和蛋白免疫印迹(WB)观察炎症及焦亡相关基因和蛋白在小鼠卵巢中的表达情况。通过睾酮(10μmol/L)诱导KGN细胞建立高雄诱导的PCOS体外细胞模型，对照组为不添加睾酮的培养基处理的KGN细胞，PCR法检测对照组和睾酮组细胞中炎症(NLRP3、NF-κB、IL-1β)及焦亡(ASC、Caspase-1)相关基因的表达情况，运用WB和免疫荧光技术观察焦亡相关蛋白(Caspase-1、N-GSDMD/GSDMD)的表达情况，CCK8实验和LDH释放实验观察睾酮对KGN细胞生长的影响。结果 HE染色显示PCOS组小鼠卵巢未成熟小卵泡及闭锁卵泡明显增多，提示PCOS模型构建成功。实时定量PCR结果显示，PCOS小鼠卵巢组织中NLRP3、NF-κB、IL-1β、ASC和...     

局部脑氧饱和度监测对老年高血压脊柱内固定手术围术期循环和炎症因子的影响

目的 探讨局部脑氧饱和度（rSO₂）监测在高血压老年病人脊柱内固定手术中对围术期循环、炎症因子水平以及病人术后认知功能的影响。方法 选取我院2020年1月至2021年1月老年高血压骨科全麻手术病人106例,随机抽签分为观察组与对照组,观察组术中持续监测rSO₂,对照组仅行常规管理。观察两组麻醉前（T0）、手术开始时（T1）、手术开始30 min（T2）、手术开始90 min（T3）及术后（T4）的rSO₂、平均动脉血压（MAP）及心率变化,比较两组手术前、术后3 d神经生长因子（NGF）、前列腺素E2（PGE₂）、神经肽Y（NPY）、白介素6（IL-6）、C反应蛋白（CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平、术后神经认知功能障碍（PND）及躁动发生率。结果 观察组手术时间、出血量、术后引流量明显低于对照组（P＜0.05）。T1、T2、T3时观察组rSO₂明显高于对照组（P＜0.05）;T2、T3时观察组MAP明显高于对照组（P＜0.05）。与术前比较,两组术后3 d NGF、PGE₂、NPY、IL-6、CRP、TNF-α水平均明显升高（P＜0.05）,但术后3 d观察组IL-6、CRP、TNF-α水平明显低于对照组（P＜0.05）。两组PND及躁动发生率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 rSO2监测指导高血压老年病人脊柱内固定手术的血压管理效果可靠,可减少术中出血量并降低术后炎性因子水平。     

体内埋置光纤介导的光生物调节对脊髓损伤后小鼠继发性炎症反应和功能恢复的影响

目的 研究体内埋置光纤介导的光生物调节对脊髓损伤小鼠组织修复和运动功能恢复的影响。方法 构建小鼠T9节段钳夹损伤及光生物调节治疗模型,将小鼠随机分为假手术（Sham）组、脊髓损伤（SCI）组、光生物调节治疗（SCI+PBM）组。用实时荧光定量PCR（qPCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测损伤区炎症因子的表达情况。免疫荧光染色及原位末端标记（TUNEL）法观察损伤区神经元存活和轴突再生情况。采用巴索小鼠量表（Basso mouse scale,BMS）及足印记评估脊髓损伤小鼠后肢运动功能恢复情况。结果 与SCI组比较,SCI+PBM组小鼠损伤区的白细胞介素-1α（interleukin-1α,IL-1α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的表达水平显著降低（P＜0.01）,总凋亡和神经元凋亡百分比显著降低（P＜0.001）,轴突到损伤中心的距离显著缩小（P＜0.001）,BMS评分和足印记步长明显优于SCI组（P＜0.01）。结论 体内埋置光纤介导的光生物调节可抑制小鼠脊髓损伤区继发性炎症反应,促进损伤区神经元存活及轴突再生,并最终促使损伤小鼠后肢运动功能的恢复。     

核转运蛋白α2通过ERK信号通路调控乳腺癌细胞生物学行为的研究

背景与目的 核转运蛋白α2（KPNA2）异常表达能增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力,导致肺转移风险,并与乳腺癌患者不良预后相关。本研究进一步分析KPNA2在乳腺癌细胞中的表达情况,并探讨其对乳腺癌细胞生物学行为影响的相关机制。方法 用免疫组化检测62例乳腺癌患者癌组织与癌旁组织标本中KPNA2的表达。将两种人乳腺癌细胞株（MDA-MB-453、MCF-7）分为阴性对照组（转染空白质粒）、KPNA2敲低组（转染KPNA2 siRNA）、ERK抑制剂组（ERK抑制剂U0126处理）、联合组（转染KPNA2 siRNA联合U0126处理）。各组细胞处理48 h后,分别用qRT-PCR与Western blot检测KPNA2 mRNA与蛋白表达,并分别用MTT法、流式细胞术、Transwell实验、Western blot检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力,以及ERK1/2通路与凋亡相关蛋白表达的变化。结果 免疫组化结果显示,KPNA2蛋白在乳腺癌组织中表达水平高于癌旁组织（2.48±0.39 vs. 1.28±0.22,P<0.05）。qRT-PCR与Western blot结果显示,两种乳腺癌细胞株的阴性对照组和ERK抑制剂组的KPNA2 mRNA及蛋白表达水平均无明显差异（均P>0.05）,而KPNA2敲低组和联合组KPNA2 mRNA和蛋白表达下调（均P<0.05）。功能实验结果显示,与各自的阴性对照组比较,ERK抑制剂组、KPNA2敲低组和联合组的细胞增殖率降低、凋亡率升高、细胞侵袭能力减弱,其中联合组各项变化最为明显（均P<0.05）。Western blot结果显示,与各自的阴性对照组比较,ERK抑制剂组、KPNA2敲低组和联合组磷酸化ERK1/2、裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达均下调,且联合组两者的下调程度最为明显（均P<0.05）。结论 乳腺癌组织中KPNA2表达水平升高,其增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的作用可能与活化ERK信号通路有关,KPNA2有望作为乳腺癌药物开发的新靶点。     

围术期全麻药七氟烷对新生大鼠远期记忆损害和神经细胞焦亡的影响

目的 研究围术期吸入性全麻药七氟烷对新生大鼠海马神经细胞焦亡和认知功能的影响。方法 出生后7 d的SD大鼠随机分为对照组和实验组,同一环境下实验组暴露于2.8%七氟烷4 h,对照组暴露于空气中4 h,6 h后提取海马组织,western blot检测焦亡相关蛋白NLPR3、GSDMD、GSDMD-N、IL-18、IL-1β的表达变化（n=6）。另一批动物七氟烷或空气暴露处理后,与母鼠同窝继续饲养,30 d行旷场实验,33～34 d行条件恐惧性实验（n=10）。结果 与对照组相比,七氟烷组幼鼠海马组织焦亡相关蛋白NLPR3、GSDMD、GSDMD-N、IL-18、IL-1β表达显著上调（P<0.001）。七氟烷组动物在条件恐惧性实验中僵直时间比对照组明显缩短（P<0.001）,旷场实验中总运动距离和中心区域时间七氟烷组与对照组差别无统计学意义（P>0.05）。结论 七氟烷暴露可以导致新生大鼠记忆能力障碍,其机制可能与诱导神经细胞焦亡有关。     

结直肠癌细胞中NF-κB活化与TRAF6、CCR5及PTEN/PI3K通路的关系及作用

背景与目的 NF-κB的活化在多种恶性肿瘤的发生、发展中起了重要的作用。研究发现，趋化因子受体5（CCR5）、肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）以及PTEN/PI3K通路相关蛋白均在恶性肿瘤中异常表达。因此，本研究探讨以上分子在结直肠癌细胞中的作用及相互关系。方法 分别用Western blot、CCK-8实验、Transwell法检测结直肠癌HT29和SW480细胞经Maraviroc（CCR5抑制剂）、MG132（TRAF6抑制剂）和NF-BAY（NF-κB抑制剂）处理后，各蛋白表达的变化，以及增殖、迁移、侵袭能力的变化。结果 在两种结直肠癌细胞中，抑制CCR5蛋白后，PI3K的表达降低，PTEN表达升高（均P<0.05），TRAF6和NF-κB表达无明显变化（均P>0.05）；抑制TRAF6蛋白后，PI3K和CCR5表达降低，PTEN表达升高（均P<0.05），NF-κB的表达无明显变化（均P>0.05）；抑制NF-κB表达后，CCR5、TRAF6和PI3K表达降低，PTEN表达升高（均P<0.05）。三种抑制剂均可明显降低两种结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.05）。结论 结直肠癌细胞中存在NF-κB异常活化，后者可能通过上调TRAF6与CCR5的表达，抑制抑癌分子PTEN的活性，从而导致促癌分子PI3K及其通路的活性升高。     

术后延长吸氧时间对老年全膝关节置换术病人术后疼痛、炎症因子及免疫功能的影响

目的 探讨术后延长吸氧时间对老年全膝关节置换术（TKA）病人术后疼痛、炎症因子及免疫功能的影响。方法 选取2022年1月至2023年1月西安交通大学第二附属医院收治的拟行TKA治疗的病人142例,男65例,女77例;年龄（73.35±7.30）岁。采用随机数字表法将病人分为观察组和对照组,每组71例。对照组病人术后给予8 h的常规鼻导管低流量（3 L/min）吸氧,观察组在对照组的基础上延长吸氧时间至术后48 h。观察两组术前和术后8、24、48 h简易精神状态检查量表（MMSE）评分和疼痛视觉模拟量表（VAS）评分,术前和术后8、48 h血清炎症因子和免疫功能指标水平;术前和术后24、48 h脉搏血氧饱和度（SpO₂）、心率和呼吸频率情况。结果 观察组术后24、48 h MMSE评分显著高于对照组（P＜0.05）,VAS评分显著低于对照组（P＜0.05）。两组术后24、48 h VAS评分较术前均显著降低（P＜0.05）。对照组术后各时点MMSE评分较术前均显著降低（P＜0.05）,观察组术后8、24 h MMSE评分显著降低（P＜0.05）。观察组术后24、48 h SpO2显著高于对照组（P＜0.05）,心率、呼吸频率显著低于对照组（P＜0.05）。观察组术后48 h白介素-10（IL-10）、CD³⁺、CD⁴⁺、CD⁸⁺、CD⁴⁺/CD⁸⁺水平显著高于对照组（P＜0.05）,白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平显著低于对照组（P＜0.05）。与术前比较,两组术后8、48 h血清IL-6、TNF-α水平均显著升高（P＜0.05）,CD³⁺、CD⁴⁺、CD⁸⁺、CD⁴⁺/CD⁸⁺水平均显著降低（P＜0.05）。结论 术后延长吸氧时间可降低老年TKA病人疼痛,提高病人术后免疫功能,改善炎症因子水平。     

分层应变技术评价青蒿素对砷中毒大鼠心功能的保护作用

目的 观察分层应变技术用于评估青蒿素保护砷中毒大鼠心功能的价值。方法 将32只大鼠随机分为砷中毒组、青蒿素低剂量干预组(低干预组)及高剂量干预组(高干预组)及对照组各8只。以NaAsO₂对砷中毒组、低及高干预组大鼠灌胃建模;12周后对低、高干预组分别给予青蒿素30、60 mg/kg体质量,其余2组给予等量生理盐水,均连续灌胃2周。比较末次干预后各组心脏常规超声参数、分层应变参数、心肌损伤标识、炎症因子水平及心脏病理改变的差异;以Spearman相关性分析评估分层应变参数与实验室指标的相关性。结果 相比对照组,另外3组左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室射血分数(LVEF)、左心室乳头肌水平,心内膜下、中层、心外膜下心肌整体圆周应变(GCS-Endo、GCS-Mid、GCS-Epi),以及心肌各节段圆周应变、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)均降低(P均＜0.05);肌肉型肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)均升高(P均＜0.05)。相比砷中毒组,低、高干预组LVEF、GCS-Endo,后壁、下壁、前间隔圆周应变及SOD、GSH均升高,CK-MB、LDH、TNF-α及IL-6均降低(P均＜0.05);高干预组LVFS、前壁圆周应变均升高(P均＜0.05)。相比低干预组,高干预组LVEF、GCS-Endo,前壁、后壁、下壁圆周应变,及SOD、GSH均升高(P均＜0.05);CK-MB、LDH、TNF-α及IL-6均降低(P均＜0.05)。GCS-Endo、GCS-Mid、GCS-Epi与CK-MB及LDH均呈负相关(r为-0.651~-0.865,P均＜0.05),与SOD及GSH均呈正相关(r为0.642~0.880,P均＜0.05)。砷中毒组大鼠心肌细胞变形,排列紊乱,细胞核不同程度萎缩、溶解;低、高干预组大鼠心肌细胞改变则有不同程度缓解。结论 分层应变技术可用于评估青蒿素对砷中毒大鼠心肌的保护作用。