黄芪对脑缺血再灌注星形胶质细胞的影响

目的：为了探讨黄芪对脑缺血再灌注后星形胶质细胞(AS)的影响。方法：采用沙土鼠双侧颈动脉夹闭脑缺血模型，于脑缺血15min再灌注24h和48h后运用免疫组织化学技术观察星型胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的动态表达。结果：缺血15min再灌注24h后，GFAP免疫阳性反应达高峰，黄芪可使GFAP免疫反应减轻；缺血15min48h后GFAP表达减弱，黄芪可使其增强。结论：黄芪对脑缺血再灌注后星形胶质细胞的调节作用可能与脑缺血损伤后神经功能的恢复有关。     

小续命汤对急性脑缺血再灌注损伤BDNF,GDNF表达的影响

目的:观察小续命汤对大鼠急性脑缺血再灌注损伤后脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF),胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响。方法:60只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、小续命汤低、中、高(15,30,60 g·kg~(-1))剂量组。各组大鼠于造模前3 d开始给药直至观察节点结束,采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,采用苏木素-伊红(HE)染色,Nissl染色观察脑缺血再灌注损伤,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫组织化学法检测脑缺血再灌注损伤后的BDNF,GDNF蛋白表达。结果:与模型组比较,小续命汤高、中剂量组可显著改善其神经功能缺损(P0.05),减轻脑缺血再灌注引起的缺血性损伤;小续命汤高、中剂量组还可显著上调BDNF,GDNF蛋白表达(P0.05)。结论:小续命汤可能通过上调脑缺血再灌注后缺血半暗带区BDNF,GDNF的表达发挥脑保护的作用。     

基于GFAP/STAT3通路探讨针康法对脑缺血再灌注大鼠神经功能和星形胶质细胞的影响

目的 观察针康法对局灶性脑缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠神经功能及胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)/信号传导及转录激活蛋白(signal transducer and activator of ...     

电针对局灶性脑缺血大鼠大脑皮层缺血灶周围区星形胶质细胞的影响

目的:观察电针对局灶性脑缺血大鼠皮层缺血灶周围区不同时间段星形胶质细胞反应性变化的影响,进一步揭示电针治疗脑缺血疾病的作用机制。方法:随机将90只Wistar大鼠分为假手术组、模型组和电针组,每组又分为1h、1d、3d、7d和21d5个时间段小组,每小组6只。采用热凝闭大脑中动脉建立局灶性脑缺血模型。电针组取"百会"大椎"穴,留针30min,每天治疗1次。分别于治疗1h、1d、3d、7d和21d后取材,用透射电镜观察不同时段各组大鼠脑皮层缺血灶周围区星形胶质细胞的超微结构,用激光共聚焦显微镜观测星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫活性反应的变化。结果:星形胶质细胞在缺血性脑损伤后肿胀、增多,电针组的星形胶质细胞肿胀程度较模型组减轻。模型组和电针组GFAP的平均荧光强度在1h时与假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05);在1、3、7、21d时,模型组和电针组高于假手术组(P<0.01),尤其是在7d时表达最强;而电针组在各时段均低于模型组(P<0.01,P<0.05)。结论:电针可减轻缺血引起的星形胶质细胞结构性损伤,下调胶质细胞内GFAP的过度表达。电针改善脑缺血的作用可能与其干预星形胶质细胞的活化状态有关。     

小续命汤对急性脑缺血再灌注线粒体相关蛋白Hsp60、Mitofilin表达的影响

目的:观察小续命汤对大鼠急性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及对线粒体相关蛋白表达的影响。方法:60只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、小续命汤组、环孢素A组、溶媒组5组,每组12只。采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,观察各组大鼠的一般情况、神经功能缺损,采用Nissl染色观察神经细胞损伤,Western blot和免疫组织化学法检测脑缺血再灌注后缺血半暗带皮层线粒体热休克蛋白60 (Heat shock protein 60,Hsp60)和mitofilin蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组出现明显神经功能缺损,细胞发生缺血再灌注损伤,缺血半暗带皮层Hsp60、mitofilin蛋白的表达上调(P 0.05)。与模型组比较,小续命汤组、环孢素A组可显著改善大鼠神经功能缺损评分,减轻神经细胞的缺血再灌注损伤,并显著上调脑缺血半暗带皮层Hsp60、mitofilin蛋白的表达,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论:小续命汤可改善大鼠神经功能缺损评分,减轻神经细胞的缺血再灌注损伤,上调脑缺血半暗带皮层Hsp60、Mitofilin蛋白的表达,从而发挥脑保护的作用。     

冠脉通片对大鼠脑缺血再灌注模型神经行为、小胶质细胞活化和SOD与MDA表达的影响

目的:探讨冠脉通片对大鼠脑缺血再灌注模型的神经保护机制。方法:采用栓线法阻断/放开大脑中动脉,造成脑缺血再灌注损伤模型。实验分6组,即假手术组、模型组、达纳康(20mg/kg)、冠脉通片高、中、低剂量(1 200、600、300mg/kg)组。缺血再灌注6和24h后分别评估大鼠神经行为;TTC染色观察各组大鼠脑组织损伤面积;HE染色与Holzer氏染色观察病理形态的改变以及小胶质细胞的活化;腹主动脉取血检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)含量。结果:与模型组比较,冠脉通片各组大鼠脑组织损伤范围明显缩小(P<0.05,P<0.01),神经行为障碍明显减轻(P<0.01),小胶质细胞的活化数量减少,血清中SOD活性升高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05,P<0.01)。结论:脑缺血再灌注损伤的机制与氧化应激和小胶质细胞活化有关,冠脉通片通过减少小胶质细胞活化的数量、增加SOD含量、降低MDA水平减轻了脑缺血再灌注损伤。     

栝楼桂枝汤对脑缺血/再灌注损伤大鼠小胶质细胞极化的影响

目的观察栝楼桂枝汤(GLGZD)对脑缺血/再灌注损伤大鼠缺血侧大脑皮层小胶质细胞极化的影响。方法采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、GLGZD组,另设一组假手术组,GLGZD组按GLGZD药液14.4 g/(kg·d),其余各组按蒸馏水0.1 m L/(kg·d)连续灌胃7 d。采用免疫荧光法检测缺血侧大脑皮层白细胞分化抗原86/离子钙结合衔接分子1(CD86/Iba1)及精氨酸酶-1/离子钙结合衔接分子1(Arg1/Iba1)阳性细胞率,免疫组化法检测白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-4(IL-4)蛋白的表达,Western blot检测核因子κBp65(NF-κBp65)蛋白的表达情况。结果与假手术组相比,模型组CD86/Iba1阳性细胞率、IL-6的蛋白表达、NF-κBp65蛋白表达明显升高(P<0.01),Arg1/Iba1阳性细胞率、IL-4的蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组相比,GLGZD组CD86/Iba1阳性细胞率、IL-6的蛋白表达、NF-κBp65蛋白表达明显降低(P<0.01),Arg1/Iba1...     

补阳还五汤对脑缺血再灌注后星形胶质细胞connexin43影响机制的研究

目的:探讨补阳还五汤对大鼠脑缺血再灌注后星形胶质细胞缝隙连接蛋白43(connexin43,Cx43)的影响机制。方法:运用线栓法建立大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,补阳还五汤治疗1 d后ELISA法检测细胞因子[白细胞介素-1 beta,(IL-1β)和白细胞介素-10,(IL-10)]的表达,通过使用NF-κB激动剂增强炎症反应后,比较海马CA1区Cx43的表达,同时,使用HE染色观察细胞形态学改变。在补阳还五汤治疗7 d后,免疫组织化学染色法观察b FGF的表达情况,联合使用b FGF中和抗体后比较各组海马CA1区Cx43的表达同时HE染色观察细胞形态学改变。结果:同模型组相比,补阳还五汤组脑缺血再灌注1天后,IL-1β减少IL-10增加(P0.05);联合使用NF-κB激动剂后补阳还五汤对海马CA1区Cx43的下调作用被抑制(P0.05),HE染色显示联合组较补阳还五汤组神经元损伤加重。脑缺血7 d时补阳还五汤增强b FGF和Cx43的表达;联合使用b FGF中和抗体后海马CA1区Cx43的表达较补阳还五汤组降低(P0.05),HE染色显示同补阳还五汤组比,联合组神经元状态更差。结论:补阳还五汤在脑缺血后1 d可能是通过抑制炎症下调Cx43发挥保护作用,而在脑缺血后7 d可能通过上调b FGF增强Cx43促进修复。     

小胶质细胞表型转换在脑缺血再灌注中作用的研究进展

〔摘 要〕　小胶质细胞是神经系统免疫的重要组成部分,脑缺血再灌注（CIR）是缺血性卒中损伤加重的重要机制 之一,小胶质细胞与 CIR 中炎症反应关系密切。受不同因子途径影响,小胶质细胞被活化并表型转换为 M1、M2 不 同亚型,调节小分子核糖核酸 miRNA–139、miRNA–137、长链非编码核糖核酸（lncRNA）–U90926 基因片段等基因 的表达,抑制或激活 NOD 样受体蛋白 3（NLRP3）/ 半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 1（caspase–1）、Notch 等通路, 从而产生促炎、抗炎作用,在 CIR 中呈现构筑炎症反应并参与炎症修复双向调节作用。     

补阳还五汤对沙土鼠脑缺血再灌注星形胶质细胞的影响

目的 :探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注后星形胶质细胞 (AS)的影响。方法 :采用沙土鼠双侧颈动脉夹闭脑缺血模型 ,于脑缺血 15min、再灌注24h和48h后 ,运用免疫组织化学技术观察星型胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的动态表达。结果 :缺血 15min再灌注 24h后 ,GFAP免疫阳性反应达高峰 ,补阳还五汤可使GFAP免疫反应减轻 ;缺血 15min再灌注 48h后GFAP表达减弱 ,补阳还五汤可使其增强。结论 :补阳还五汤对脑缺血再灌注后星形胶质细胞的调节作用可能与脑缺血损伤后神经功能的恢复有关。     

芹菜素对急性局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠半暗区内小胶质细胞的影响

目的探讨芹菜素对急性局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠半暗区内小胶质细胞的影响及意义。方法采用改良线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。动物随机分为假手术组、模型组、芹菜素组。模型组和芹菜素组按再灌注时间不同又分为再灌注6、24、48、72 h及7 d各5个小组,共11组。各组观察至规定的时间进行神经行为学评分,其中随机取6只大鼠,进行异硫氰酸荧光素标记的同工凝集素B4(FITC-ILB4)染色,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察浸润的单核细胞及半暗区小胶质细胞形态及数量的变化,余下6只大鼠取脑组织,测定脑含水量。结果脑缺血再灌注6 h,模型组大鼠脑缺血半暗区周围出现同工凝集素B4阳性(ILB4+)表达细胞即分枝状小胶质细胞(罗丹明6G标记阴性即Rhod 6G?)和浸润的单核细胞(罗丹明6G标记阳性即Rhod 6G+);48 h小胶质细胞明显增多,形态向阿米巴样转变;72 h达到高峰,主要为脑源性小胶质细胞增生,形态以阿米巴样为主;7 d小胶质细胞减少;芹菜素组相应时间点小胶质细胞较模型组明显减少(P<0.05、0.01),形态亦呈现相似改变。脑缺血48、72 h,芹菜素组大鼠脑组织含水量明显低于模型组(P<0.01)。模型组神经行为学评分与半暗区ILB4+细胞数呈负性相关(r=?0.415,P<0.05),且芹菜素能有效降低模型组神经功能缺损程度(P<0.05),明显减轻脑损伤程度。结论缺血后的大脑脑实质内一部分小胶质细胞来源于循环中的单核细胞;半暗区小胶质细胞形态及数量的变化与脑损伤程度具有相关性;芹菜素对急性局灶性大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,且可能与下调小胶质细胞数量,抑制小胶质细胞过度活化密切相关。     

身痛逐瘀汤对骨癌痛小鼠痛行为及脊髓星形胶质细胞活化的影响

目的 探讨身痛逐瘀汤的镇痛作用及对脊髓水平胶质细胞纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。     

川芎赤芍对脑缺血再灌注大鼠模型GFAP、VEGF及Notch1表达的影响

目的：本研究主要观察川芎赤芍对大鼠脑梗死再灌注后外周血胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、血管内皮生长因子（VEGF）和脑内Notch1表达的影响。方法：采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,将健康SD大鼠按随机数字表法随机分为空白组、模型组、川芎赤芍低剂量组、川芎赤芍高剂量组、银杏叶片组。采用ELISA法测定大鼠外周血GFAP、VEGF含量,采用real-time PCR法检测缺血脑组织Notch1 mRNA表达。结果：与模型组相比,川芎赤芍能够提高外周血GFAP、VEGF水平,上调脑组织Notch1 mRNA 的表达。结论：川芎赤芍可升高缺血再灌注大鼠外周血GFAP、VEGF的水平及缺血脑组织Notch1 mRNA的表达。     

芹菜素对脑缺血再灌注大鼠半暗区小胶质细胞表达和脑含水量的影响

目的观察芹菜素对脑缺血再灌注大鼠半暗区小胶质细胞数量、脑组织含水量的影响。方法采用改良线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。动物随机分为假手术组、模型组、芹菜素组。模型组和芹菜素组按再灌注后时间不同又分为再灌注24h组、48h组、72h组、7d组,共9组,每组12只。在脑缺血时和脑缺血后的12h大鼠尾静脉各注射1次罗丹明(6g)。芹菜素组于再灌注时及其后每24h腹腔注射11.6×10-3mol/L芹菜素溶液25mg/kg(0.8mL/100g),假手术组和模型组在相同时间注射等体积生理盐水。各组随机取6只,凝集素荧光(FITC-ILB4)组化染色激光扫描共聚焦显微镜观察半暗区小胶质细胞数量的变化;另6只取脑组织测定脑含水量。结果脑缺血再灌注24h,模型组脑缺血半暗区周围出现ILB4阳性表达细胞即小胶质细胞,48h明显增多,72h表达到高峰,7d下降;芹菜素组ILB4阳性表达小胶质细胞在24、48、72h及7d时较模型组明显减少(P0.05或P0.01)。脑缺血48、72h,芹菜素组大鼠脑组织含水量明显低于模型组(P0.01)。芹菜素能有效降低模型鼠24、48、72h及7d的神经功能缺损评分(P0.05),明显减轻脑损伤程度。结论芹菜素减轻脑缺血再灌注损伤后脑水肿作用可能与其下调小胶质细胞数量的表达、抑制其过度活化密切相关。     

栝楼桂枝汤调节小胶质细胞活化后的表型转化缓解脑缺血再灌注大鼠模型的神经损伤

目的 基于小胶质细胞活化后的表型转化探讨栝楼桂枝汤缓解脑缺血再灌注大鼠模型的神经损伤。方法 将SD大鼠随机分为假手术组10只和造模组20只。造模组建立脑缺血再灌注大鼠模型,假手术组仅钝性分离颈部肌肉血管,不插入线栓。Longa评分1～3分视为造模成功,采用抽签法将造模成功的大鼠分成模型组和栝楼桂枝汤组各10只。于造模成功后第2天开始灌胃,栝楼桂枝汤组按0.15 mg/（kg·d）给予栝楼桂枝汤药液灌胃,假手术组和模型组按10 mL/（kg·d）给予生理盐水灌胃,每日1次,持续灌胃1周。采用Longa评分进行神经功能评估;ELISA检测血清白细胞介素-1(IL-1)含量;HE染色法观察脑组织病理变化;Western blot检测M1表型标志物脑组织相容性复合物Ⅱ（MHC-Ⅱ）及M2表型标志物精氨酸酶1(Arg-1)蛋白表达量;免疫组化法检测脑组织离子钙接头蛋白（Iba-1）、微管相关蛋白2(MAP-2)的蛋白表达水平。结果 与假手术组比较,模型组Longa评分明显提高（P<0.05）,血清IL-1含量和脑组织MHC-Ⅱ、Iba-1蛋白表达均明显提高（P<0.05）,Arg-1...     

黄连解毒汤有效部位对脑缺血半暗带区星形胶质细胞活化及Cx43表达的影响

目的 观察黄连解毒汤水提物及其有效部位（总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜）对局灶性脑缺血半暗带区星形胶质细胞活化及缝隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）表达的影响。方法 线栓法建立大鼠永久性大脑中动脉栓塞模型,雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、黄连解毒汤水提物组（800 mg/kg）、总生物碱组（44 mg/kg）、总黄酮组（50 mg/kg）、总环烯醚萜组（80 mg/kg）,连续ig给药7 d,每天给药1次。HE染色观察脑组织病理学改变;胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫荧光染色观察星形胶质细胞活化;GFAP/Cx43免疫荧光双标染色检测Cx43表达;实时RT-PCR检测Cx43基因表达。结果 模型组大鼠缺血半暗带区神经元数目减少,GFAP、Cx43基因及蛋白表达上调（P<0.01）。黄连解毒汤水提物及其3个有效部位（总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜）均可增加脑缺血大鼠缺血半暗带区神经元数目（P<0.05、0.01）;降低缺血半暗带区GFAP及Cx43基因、蛋白表达（P<0.05、0.01）。结论 黄连解毒汤水提物及其有效部位（总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜）通过抑制星形胶质细胞过度活化,干预Cx43表达,保护缺血半暗带区神经细胞。     

电针对缺血再灌注大鼠脑内小胶质细胞活化的影响

目的：探讨电针对缺血再灌注损伤模型大鼠脑内小胶质细胞活化的抑制作用。方法：将54只SD大鼠随机分为假手术组（6只）、模型组（24只）、电针组（24只）,再将模型组、电针组分成再灌注3、12、24、48h 4个亚组,每亚组6只。模型组、电针组予制备缺血再灌注模型,其中模型组造模后不予电针治疗,电针组造模后即行电针治疗,取穴百会和大椎。各组大鼠到达预定时间点,将脑组织固定在4%多聚甲醛固定液中保存,行免疫组化染色,检测OX-42阳性小胶质细胞的活化情况。结果：各组缺血再灌注模型大鼠缺血侧顶叶皮层OX-42阳性细胞数较假手术组增多,差异具有统计学意义（P〈0.01）;模型组OX-42阳性细胞在R3h明显增多,R24h达高峰,然后呈下降趋势;R24h与R3h相比,差异具有统计学意义（P〈0.01）;电针组OX-42阳性细胞数较模型组均有所减少,除R3h外,其余各组差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：电针百会穴、大椎穴能抑制缺血再灌注损伤模型大鼠脑内小胶质细胞的活化,从而起到神经保护的作用。     

大黄素对脑缺血后小胶质细胞的活化及其炎性因子表达的影响

目的 观察大黄素对大鼠脑缺血损伤模型后离子型钙接头蛋白-1(Iba-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Toll样受体4(TLR4)、核因子kappa B(NF-κB)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的影响,探讨大黄素对脑缺血后小胶质细胞活化的作用及其可能的保护机制.方法 将120只...     

电针对缺血再灌注大鼠脑内小胶质细胞活化的影响

目的:探讨电针治疗脑缺血性疾病的机理.方法:阻塞大鼠右侧大脑中动脉30 min再灌流6～24 h,制备大脑中动脉缺血再灌注模型.将80只Wistar实验大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、正常对照组.电针取穴"水沟"和"百会",以疏密波刺激.切片组织采用免疫组化SABC法以蓖麻凝集素标记小胶质细胞.结果:正常组和假手术组小胶质细胞未见显色.各模型组在缺血灶边缘可见大量小胶质细胞活化,数量增加.经电针治疗后,各治疗组的小胶质细胞数量较模型组减低.结论:电针治疗可减少小胶质细胞活化,尤其是在小胶质细胞活化的高峰,从而对神经元发挥保护作用.     

脑络欣通对局灶脑缺血/再灌注大鼠胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达的影响

目的探讨益气活血治法之代表中药复方脑络欣通及其拆方（益气方、活血方）对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达的影响以及在不同时间点局灶性脑缺血再灌注模型大鼠GFAP蛋白表达的特点。方法将健康的Wistar大鼠120只先饲养观察3天,随机分为假手术组、模型组、益气活血方（脑络欣通）组、益气方组和活血方组5组,每组24只,1天、3天、7天三个不同时间点各8只。采用线栓大脑中动脉法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别观察益气活血、益气、活血3种治法及其代表方药在缺血2h时分别再灌注1天、3天和7天的治疗效果;以免疫组化染色SABC法检测胶质原纤维酸性蛋白GFAP表达。结果缺血再灌注各时间点,假手术组无强阳性表达,模型组明显可见GFAP表达,与假手术组比较有显著性差异（P﹤0.01）;各治疗组GFAP阳性染色的阳性细胞总面积表达增加,与模型组比较,其中再灌注1天时无显著性差异（P〉0.05）,再灌注3天、7天时脑络欣通组和益气方组与模型组比较有显著性差异（P〈0.01或P〈0.05）;各治疗组间比较,1天无差异,3天脑络欣通组GFAP表达最高,与益气方组和活血方组比较有显著性差异（P﹤0.01）;7天各治疗组间无显著性差异（P〉0.05）。结论经过益气活血法（脑络欣通）及其拆方（益气方、活血方）干预后,脑络欣通在调节GFAP（3天上调、7天下调）表达的效应上要优于其拆方（益气方、活血方）。