竹节参总皂苷对高脂饮食小鼠白色脂肪棕色化/棕色脂肪活化的影响及机制

目的：研究竹节参总皂苷对高脂饮食(HFD)喂养C57BL6/J雄性小鼠白色脂肪棕色化/棕色脂肪活化的影响，并探讨其机制。方法：将32只8周龄小鼠随机分为正常组、模型组、竹节参总皂苷低、高剂量组。对竹节参总皂苷低、高剂量组分别按25、75 mg·kg^-1·d^-1剂量灌胃给药4个月，其余组用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶剂灌胃。4月后将小鼠置于4℃环境进行急性冷暴露实验，监测小鼠核心体温情况，冷暴露实验结束后处死小鼠，快速分离棕色脂肪组织(BAT)及腹股沟白色脂肪组织(iWAT)。苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠组织形态变化；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组小鼠中解偶联蛋白1(UCP1)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、细胞色素C(CytC)、PR结构域蛋白16(PRDM16)、超长链脂肪酸延伸酶3(ELOVL3)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α) mRNA表达；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠UCP1、PR...     

基于LKB1/AMPK/PGC-1α的泽泻汤改善非酒精性脂肪肝作用机制研究

以棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的脂质堆积细胞模型和高脂诱导的非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)动物模型,探讨泽泻汤(Zexie Decoction)体内外改善NAFLD的药效,以LKB1/AMPK/PGC-1α通路为切入点探讨其可能作用机制。MTT结果显示泽泻汤对HepG2细胞活力无影响,泽泻汤剂量依赖性下调PA诱导的肝细胞培养基谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的水平,降低高脂饮食(high-fat diet,HFD)小鼠血浆ALT、AST及肝脏总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)水平。尼罗红染色观察PA诱导的细胞内脂质沉积,PA诱导的肝细胞脂质蓄积显著增加,体外细胞脂质堆积模型诱导成功,泽泻汤有效改善PA诱导的肝细胞脂质堆积;小鼠肝脏油红染色结果同样表明,泽泻汤剂量依赖性减少HFD小鼠肝脏脂质堆积。线粒体膜电位染色显示泽泻汤能够逆转PA诱导肝细胞损伤引起的线粒体膜电位的下降;同时泽泻汤激活PGC-1α上调其靶基因ACADS、CPT-1α、CPT-1β、UCP-1、ACSL-1、NRF-1等的表达;Western blot及免疫组化结果显示泽泻汤可体内外上调LKB1、p-AMPK、p-ACC、PGC-1α蛋白表达水平。综上所述,泽泻汤能够有效改善NAFLD,其机制可能与调控LKB1/AMPK/PGC-1α通路相关。     

啤酒花提取物对原代棕色脂肪细胞功能的影响及其机制

目的探讨啤酒花提取物对原代棕色脂肪细胞增殖和功能的影响及潜在机制,为2型糖尿病和肥胖症的治疗提供新依据。方法体外培养新生鼠棕色脂肪前体细胞,添加不同质量浓度啤酒花提取物,用MTT法检测细胞的增殖;诱导分化成熟后,用油红O染色以染色比色法分析细胞脂滴消耗程度;采用Western blotting技术检测相关蛋白表达水平,包括解耦联蛋白1(UCP1)、p38α丝裂原激活蛋白激酶(p38αMAPK)、过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC1α)。结果啤酒花提取物对原代前棕色脂肪细胞的增殖没有影响;与对照组比较,随着质量浓度的增加,啤酒花提取物可以显著提高脂滴消耗率;啤酒花提取物能够使棕色脂肪细胞中UCP1、p38αMAPK和PGC1α蛋白表达水平上升。结论啤酒花提取物可以提高棕色脂肪细胞产热功能,加强能量代谢,其可能机制是增强p38MAPK-PGC1α-UCP1级联反应,进而提高棕色脂肪特异性蛋白UCP1的表达。     

葛根芩连汤促进糖尿病大鼠棕色脂肪分化改善糖脂紊乱的分子机制

研究葛根芩连汤(GQD)对糖尿病大鼠棕色脂肪组织(BAT)分化及能量代谢的影响。给药干预高脂喂养加小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病大鼠13周,在确认降糖药效基础上,提取大鼠肩胛骨周围BAT总RNA,qPCR法检测核转录基因Prdm16、Pparγc1α、Pparα、Pparγ和Sirt1,BAT标志基因Ucp1、Cidea、Dio2和能量消耗基因Ampkα2,脂肪分泌因子Adpn、Fndc5、Angptl8、IL-6和Rbp4表达。IPA通路软件分析qPCR数据干预差异。提取BAT总蛋白,Western blot法检测PRDM16、PGC1α、PPARγ、PPARα、SIRT1、ChREBP、AMPKα、UCP1、ADPN、NRG4、GLUT1和GLUT4等表达水平。结果显示,与模型组相比,GQD显著上调糖尿病大鼠Pparγc1α、Pparα、Pparγ、Ucp1、Cidea、Ampkα2、Dio2、Fndc5、Rbp4和Angptl8表达水平(P0.05),显著下调Adpn和IL-6表达水平(P0.05),Prdm16表达有上调趋势(P=0.182),而Sirt1表达有下调趋势(P=0.104)。IPA通路功能分析显示GQD促进脂肪组织棕色化,激活PPARα/RXRα和SIRT1信号通路,减少脂质积累。与正常组相比,模型组PRDM16、PGC1α、PPARα、PPARγ、SIRT1、ChREBP、AMPKα、UCP1、GLUT1、GLUT4和NRG4蛋白表达下调(P0.01),给药后表达上调(P0.05);与正常组相比,模型组ADPN蛋白表达上调(P0.01),给药后表达下调(P0.01)。研究表明GQD促进BAT分化成熟,增加能量消耗,有助于减轻机体糖脂代谢紊乱,改善糖尿病症状。     

二仙汤对卵巢切除大鼠棕色脂肪产热功能的影响

目的 研究二仙汤对卵巢切除大鼠肩胛区棕色脂肪产热功能的影响。方法 40只雌性SD大鼠随机分为五组,分别为假手术组(SHAM),卵巢切除模型组(OVX),二仙汤低剂量治疗组(EXDL),二仙汤高剂量治疗组(EXDH),雌激素治疗组(E)。灌胃连续治疗14周。检测各组大鼠血脂四项;HE染色观察各组大鼠肩胛区棕色脂肪形态学变化;应用Western-blot及qPCR检测各组大鼠肩胛区棕色脂肪脱偶联蛋白-1（UCP-1）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因-1alpha（PGC-1alpha）蛋白及mRNA的表达水平。结果 卵巢切除大鼠体重、腹腔内脂肪重量较假手术组大鼠相比显著增加,卵巢切除大鼠血清总胆固醇水平较假手术组大鼠显著升高;二仙汤治疗后可降低卵巢切除大鼠体重及腹腔内脂肪重量并降低血清总胆固醇水平。卵巢切除大鼠肩胛区棕色脂肪中UCP-1及PGC-1alpha的蛋白及mRNA的表达水平下降,二仙汤治疗后可提高卵巢切除大鼠肩胛区棕色脂肪中UCP-1及PGC-1alpha的蛋白及mRNA的表达水平。结论 二仙汤可降低卵巢切除大鼠的体重和腹腔内脂肪的重量并降低血清中总胆固醇的水平,这可能与其改善卵巢切除大鼠棕色脂肪的产热功能有关。     

红景天苷通过激活3T3-L1前脂肪细胞Nrf2/HO-1信号通路及下调脂肪生成转录因子表达来抑制脂肪生成

目的:研究红景天苷对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化及Nrf2/HO-1信号通路和脂肪生成转录因子的影响。方法:按文献介绍的方法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,然后分别用红景天苷(50和100μM)、吡格列酮(100μM)及红景天苷(100μM)与HO-1抑制剂ZnPP(3μM)共同处理3T3-L1细胞7天,分别于2、5、7天后进行胞内脂质含量测定,7天后进行胞内TG含量检测,实时定量PCR检测细胞中PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c、aP2、adiponectin mRNA表达, Western blot检测胞浆和胞核中Nrf2及细胞中HO-1蛋白表达。结果:红景天苷(50和100μM)可显著抑制胞内脂质的积聚和TG生成,降低脂肪生成相关转录因子PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c、aP2、adiponectin mRNA表达,抑制Nrf2核易位,上调HO-1蛋白表达,且量效关系明显;当与ZnPP联用后,上述作用被明显削弱。结论:红景天苷对3T3-L1前脂肪细胞分化和脂肪生成具有显著的抑制作用,其作用机制可能与其激活Nrf2/HO-1信号通路及抑制PPARγ、C/EBPα、SREBP-1c、aP2、adiponectin等脂肪生成转录因子的表达有关。     

二仙汤对卵巢切除大鼠棕色脂肪产热相关蛋白表达的影响

目的研究二仙汤对卵巢切除大鼠肩胛区棕色脂肪中产热相关蛋白表达的影响。方法 40只雌性SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组(SHAM),卵巢切除模型组(OVX),二仙汤低剂量治疗组(EXDL),二仙汤高剂量治疗组(EXDH),雌激素治疗组(E),并分别给予相应的药液连续灌胃给药14周。检测各组大鼠血脂4项;HE染色观察各组大鼠肩胛区棕色脂肪形态学变化;应用Western-blot及q PCR检测各组大鼠肩胛区棕色脂肪中脱偶联蛋白-1(UCP-1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)的蛋白及其m RNA的表达水平。结果卵巢切除模型大鼠体质量、腹腔内脂肪质量与假手术组大鼠相比显著增加,卵巢切除大鼠血清总胆固醇水平较假手术组大鼠显著升高;二仙汤治疗后可降低卵巢切除大鼠体质量及腹腔内脂肪质量并降低血清总胆固醇水平。卵巢切除大鼠肩胛区棕色脂肪中UCP-1及PGC-1α的蛋白及其m RNA的表达水平下降,二仙汤治疗后可提高卵巢切除大鼠肩胛区棕色脂肪中UCP-1及PGC-1α的蛋白及其m RNA的表达水平。结论二仙汤可降低卵巢切除大鼠的体质量和腹腔内脂肪的质量并降低血清中总胆固醇的水平,这可能与其提高卵巢切除大鼠肩胛区棕色脂肪中产热相关蛋白UCP-1及PGC-1α的蛋白及其m RNA表达水平有关。     

芦丁促进3T3-L1前脂肪细胞棕色化及其机制

目的：观察芦丁对3T3-L1前脂肪细胞棕色化效应的影响,并探讨其机制。方法：细胞增殖与活性检测-8(CCK-8法检测不同浓度芦丁(3.125、6.25、12.5、25、50、100、200μmol·L^-1)对3T3-L1细胞活性影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度芦丁(12.5、25、50μmol·L^-1)对脂肪细胞产热相关蛋白解偶联蛋白1(UCP1)、PR结构域蛋白16(PRDM16)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α)表达的影响。确定芦丁最佳浓度后,油红O染色观察芦丁对脂肪细胞中脂滴生成的影响,Western blot检测线粒体生物合成标志性蛋白核呼吸因子1(NRF1)、核呼吸因子2(NRF2)和线粒体转录因子A(TFAM)的表达。结果：与空白组比较,200μmol·L^-1芦丁显著抑制3T3-L1细胞活性(P<0.01);在12.5、25、50μmol·L^-1浓度下,50μmol·L^-1芦丁显著促进产热蛋白(UCP1...     

穿心莲内酯通过下调PPARγ-C/EBPα抑制脂滴形成

[目的]探讨穿心莲内酯抑制脂肪细胞分化和脂滴堆积作用及机制。[方法]将不同浓度穿心莲内酯分别作用于3T3-L1脂肪细胞,采用高内涵细胞成像技术,分析穿心莲内酯对脂滴形成的作用,并通过检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)表达分析穿心莲内酯的分子作用机制。[结果]穿心莲内酯剂量依赖降低脂滴堆积,在30μmol/L可显著降低PPARγ和C/EBPα表达(P0.01),无显著的细胞抑制作用(P0.05)。[结论]穿心莲内酯通过降低PPARγ-C/EBPα表达抑制脂肪细胞分化,降低脂滴过度堆积,具有潜在的减轻肥胖作用。     

温肾健脾化痰方对肥胖大鼠PPARγ/PGC-1α/UCP1通路基因表达的影响

目的 观察温肾健脾化痰方对肥胖大鼠皮下脂肪组织PPARγ/PGC-1α/UCP1mRNA的影响。方法 以SPF级雄性SD大鼠为研究对象，高脂喂养8周建立单纯性肥胖大鼠模型，将大鼠分为空白组、模型组、西药组、温肾健脾化痰方组（全方组）、肉桂-陈皮组（药对组）5组，每组6只。灌胃6周后，测量体质量及血脂水平；以实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测皮下白色脂肪组织（i WAT）中过氧化物酶体增殖物激活受体 （PPAR ）、过氧化物酶体增殖物激活受体- 共激活因子-1(PGC-1)、解偶联蛋白-1(UCP1)基因表达量。结果 与模型组比较，西药组、药对组、全方组体质量和血清甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）均有下降（均P<0.05）；与西药组相比，药对组和全方组血脂均无统计学差异（P>0.05）。与模型组相比，全方组、药对组大鼠PPARγ、PGC-1αm RNA和UCP1 m RNA表达量增加（P<0.05）。结论 温肾健脾化痰方可能是通过调控PPARγ/PGC-1α/UCP1通路，发挥减肥降脂的作用。     

健脾调肝饮对单纯性肥胖症小鼠核心体温/自主活动度及白色脂肪棕色化的影响研究

目的:探讨健脾调肝饮对单纯性肥胖症的作用及机制。方法:将40只C57BL/6J小鼠随机分为空白组10只与模型组30只,模型组通过高脂饲料的喂养造模后,随机分为中药组与肥胖对照组。空白组与肥胖对照组给予生理盐水灌胃,中药组给予中药健脾调肝饮灌胃,实验周期共10周。实验结束时,置入自主活动度/核心体温无线讯号发射器并留取白色脂肪组织,对比3组小鼠自主活动度、核心体温、白色脂肪棕色化特异性标志物UCP-1/PGC-1α等方面指标。结果:10周后,与肥胖对照组相比中药组体质量显著降低;自主活动度及核心体温全天均有所提高;白色脂肪组织中UCP-1、PGC-1α蛋白及mRNA表达水平显著增高。结论:健脾调肝饮可有效减轻肥胖小鼠体质量,提高肥胖小鼠自主活动度及核心体温,提高基础代谢率,上调脂肪组织UCP-1、PGC-1α蛋白及mRNA表达,其可能作用机制为通过增高小鼠白色脂肪棕色化程度,促进产热消耗能量以达到减重的治疗效果。     

三棱丸方对肠上皮细胞上皮间质转化TGFβ1/Smads信号通路的影响

目的:研究三棱丸(Sparganii Pill SP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的间质化肠上皮细胞(IEC-6)钙黏蛋白E(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actinα-SMA)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响及其对IEC-6细胞TGFβ1/Smads信号转导途径的影响及可能机制。方法:以IEC-6细胞为研究对象,用Western blot法检测高、中、低剂量的SP及罗格列酮含药血清作用后的PPARγ、Smad2/3及p-Smad3蛋白的表达,RT-PCR检测E-cadherin、α-SMA mRNA的表达,观察SP及罗格列酮对PPARγ、pSmad3入核水平的影响。结果:与10%正常大鼠血清组比较,SP含药血清组能够抑制α-SMA mRNA表达水平;提高E-cadherin、PPARγ,降低pSmad3、α-SMA的蛋白表达,尤以20%SP含药血清组作用明显;10%SP含药血清组促进PPARγ入核,抑制pSmad3的入核。结论:在体外,SP抑制TGFβ1/Smads信号通路途径转导IEC-6细胞EMT的机制可能与激活PPARγ的表达有关。     

三七总皂苷对3T3-L1细胞增殖分化与分泌功能的影响

目的 观察三七总皂苷对3T3-L1细胞增殖、分化和分泌Leptin、PAI-1的影响,探讨其调脂作用的可能机制。方法 培养3T3-L1细胞,并用不同浓度的三七总皂苷(5,50,100 μg·mL-1)进行干预,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;用油红O染色和染色比色法分析脂肪细胞的分化程度,用逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物酶增殖物激活受体γ2(PPARγ2)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA的表达;用ELISA法检测细胞培养上清中Leptin、PAI-1的含量。结果 三七总皂苷低、中浓度组对模型细胞增殖无明显影响(P ＞ 0.05),高浓度组能促进细胞的增殖(P ＜ 0.05);中、高浓度组明显抑制模型细胞的分化,并能抑制PPARγ2、C/EBPα基因的表达(P ＜ 0.01);药物对模型细胞分泌Leptin、PAI-1有明显抑制作用(P ＜ 0.01)。结论 三七总皂苷可能通过抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化和抑制其分泌因子而达到调脂作用,以中剂量作用效果最好。     

葛根芩连汤激活PPARγ上调脂联素和GLUT4表达改善脂肪胰岛素抵抗

该实验研究复方葛根芩连汤体内外改善脂肪胰岛素抵抗(IR)的药效及相关分子机制。采用高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,葛根芩连汤给药干预3个月,检测糖尿病大鼠空腹血糖、胰岛素和糖化血清蛋白,计算胰岛素抵抗指数。提取大鼠脂肪组织总RNA,q PCR检测糖尿病大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、脂联素(ADPN)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、乙酰辅酶A羧化酶α基因(ACACA)和乙酰辅酶A羧化酶β(ACACB)基因mRNA表达水平。1μmol·L~(-1)地塞米松诱导建立稳定IR-3T3-L1脂肪细胞模型,CCK-8法检测葛根芩连汤含药血清对细胞活力的影响,采用5%,10%,15%葛根芩连汤含药血清干预24 h检测细胞培养液葡萄糖含量、游离脂肪酸(NEFA)含量和外泌脂联素含量,测定细胞内甘油三酯(TG)含量。荧光定量q PCR和Western blot分别检测IR-3T3-L1细胞PPARγ,ADPN和GLUT4 mRNA和蛋白质表达水平。结果显示葛根芩连汤给药3个月可明显降低糖尿病大鼠的空腹血糖、胰岛素和糖化血清蛋白(P0.01),下调胰岛素抵抗指数(P0.05),具有较好的降糖效果。葛根芩连汤可显著升高糖尿病大鼠脂肪组织PPARγ,ADPN,GLUT4,GLUT2,ACACA和ACACB基因mRNA表达水平。5%,10%,15%葛根芩连汤含药血清均可显著性上调IR-3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量(P0.01);降低IR-3T3-L1细胞TG含量(P0.01);一定程度下调NEFA含量但并不显著。此外,葛根芩连汤含药血清剂量依赖上调外泌ADPN,15%含药血清上调ADPN非常显著(P0.01);各剂量含药血清显著上GLUT4表达(P0.01)。该研究显示葛根芩连汤激活PPARγ上调ADPN和GLUT4调节糖代谢改善脂肪IR。     

柚皮苷对前脂肪细胞3T3-L1增殖和诱导分化的影响

目的观察柚皮苷对前脂肪细胞3T3-L1增殖和分化的影响,并探讨其影响3T3-L1分化的可能作用机制。方法培养3T3-L1细胞,并用不同浓度的柚皮苷进行干预,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,用油红O染色和染色比色法分析脂肪细胞的分化程度。逆转录多聚酶联反应(RT-PCR)检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物酶增殖物激活受体γ2(PPARγ2)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA的表达。结果柚皮苷能抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化,并能抑制PPARγ2、C/EBPα基因的表达。结论柚皮苷可抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,并能通过下调分化相关基因的表达抑制分化。     

辣椒素受体在针刺促进白色脂肪褐变中的作用

白色脂肪组织(WAT)褐变是肥胖机体能量代谢的途径之一。辣椒素受体(TRPV1)广泛存在于多种代谢活跃的组织中,通过多个途径参与褐变,包括:细胞内增加钙离子内流,阻止脂肪细胞生成;刺激细胞代谢;TRPV1激活sirt1依赖的PPARγ去乙酰化,促进PPARγ与prdm16的相互作用进而促使褐变。而针刺能显著提高肥胖小鼠WAT的UCP1、PGC-1α、prdm16、sirt1等这些BAT特异性蛋白的表达水平,促进PPARγ去乙酰化水平和WAT的脂质分解,达到褐变的效果。TRPV1参与针刺减肥的可能途径或参与了针刺信号的启动,或通过激活TRPV1通道促使褐变发生。     

补益脾胃元气方药对SAMP8小鼠学习记忆及海马区PKA/ERK/p-CREB信号通路的影响

目的观察补益脾胃元气类方药人参汤、洗心汤、大补元煎对SAMP8小鼠学习记忆能力和海马区蛋白激酶A(PKA)/细胞外调节激酶(ERK)/磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p-CREB)信号通路的影响,探讨其防治阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法将3月龄SAMP8小鼠随机分为模型组、安理申组、补益脾胃元气类方药组(人参汤组、大补元煎组、洗心汤组),另以3月龄SAMR1小鼠作为对照组,共6组,连续ig给药10周后进行相关指标检测。采用Morris水迷宫实验观察各组小鼠空间学习记忆能力。免疫组化法检测PKA蛋白表达,免疫荧光法检测ERK、p-CREB蛋白表达。蛋白印迹法检测小鼠海马区PKA、p-CREB、ERK蛋白表达。结果与模型组比较,补益脾胃元气类方药各组小鼠逃避潜伏期缩短,在目的象限游泳时间及穿越平台次数增加(P0.05、0.01);免疫组化结果提示补益脾胃元气类方药各组小鼠海马区PKA蛋白表达量增加;免疫荧光结果提示补益脾胃元气类方药各组小鼠海马区ERK、p-CREB蛋白表达量增加;蛋白印迹实验结果与免疫组化、荧光结果一致(P0.05、0.01)。结论补益脾胃元气类方药对SAMP8小鼠空间学习记忆有明显的改善作用,其机制可能与改善海马区PKA/ERK/p-CREB信号通路有关。     

PPARs激动剂体外筛选模型的建立及其在泽泻活性成分筛选中的应用

利用酵母GAL4 BD-UAS反式激活分析(transactivation assay)系统在哺乳动物细胞中建立以过氧化物酶体增殖物受体的配体结合结构域(PPARs-LBD,包括PPARα,PPARβ和PPARγ)为靶点的体外筛选模型,并应用该模型对泽泻化学成分进行筛选,研究泽泻14种化学成分对PPARs的激活作用。首先构建GAL4 BD-PPARs LBD融合表达质粒p Bind-PPARs-LBD,采用Lipofectamine将表达质粒p Bind-PPARs-LBD与含有UAS:luciferase报告质粒p GL4.35共转染293T细胞。以PPARs的激动剂(PPARα:非诺贝特;PPARβ:L165041;PPARγ:罗格列酮)为阳性对照,通过测定萤火虫荧光素酶活性来验证系统是否构建成功,并用该系统来考察泽泻中14种化学成分对PPARs靶点激活的影响。PPARs的阳性激动剂结果显示系统构建成功,用该系统分析泽泻化学成分结果显示泽泻单体化合物5,6,7,8,13,14对PPARα有激活作用,化合物5,7对PPARβ有激活作用,而化合物6,7,8,12对PPARγ有激活作用,其中化合物12对PPARγ有显著激活能力。该研究在哺乳动物293T细胞中成功构建以PPARα/β/γ配体结合结构域为靶点的体外筛选细胞模型,并成功应用于泽泻PPARα/β/γ的天然激动剂的筛选。     

基于网络药理学研究人参、川芎药对有效成分抗动脉粥样硬化的作用机制

目的探讨人参、川芎药对有效成分抗动脉粥样硬化的作用机制。方法通过PubMed、CNKI、中药系统药理学数据库和分析平台TCMSP数据库检索人参总皂苷、川芎嗪化学成分,构建化学成分数据库。通过BATMAN-TCM平台预测成分靶标,并预测疾病靶标,利用Cytoscape 3. 6. 1软件进行核心靶标筛选、GO基因及KEGG通路富集分析,构建药物成分-作用靶标-代谢通路网络图,探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。结果本研究收集化学成分17个,筛选成分-靶标PPI网络有464个节点,214832条连接。药物-疾病核心靶标17个,GO基因富集分析提示涉及生物过程、分子功能2个方面,KEGG通路富集分析潜在调控通路有PPAR通路、脂肪细胞因子信号通路及胆汁酸分泌,且发掘靶标、通路中多个与肥胖相交叉,其中PPARγ/PGC-1α/UCP1信号通路能够通过促进白色脂肪棕色化发挥抗动脉粥样硬化作用。结论人参、川芎有效成分可能通过PPARγ/PGC-1α/UCP1信号通路促进白色脂肪棕色化,改善动脉粥样硬化。     

基于AMPK/PPARα/PGC-1α信号通路探讨金合欢素改善代谢综合征大鼠骨骼肌能量代谢紊乱作用机制北大核心CSCD

目的:探究金合欢素对代谢综合征大鼠骨骼肌能量代谢紊乱的影响,并初步探讨其作用机制。方法:通过果糖诱导自发性高血压(SHR)大鼠建立代谢综合征大鼠模型,灌胃给予金合欢素25、50 mg/kg, 7 w后检测收缩压(SBP)、胰岛素抵抗数指数(HOMA-IR),试剂盒检测血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)的含量;ELISA法检测腓肠肌组织中ATP含量;采用qPCR法测定大鼠腓肠肌中线粒体DNA(mtDNA)拷贝数;Western Blot法检测UCP 3、线粒体融合蛋白(MFN2)、线粒体裂变因子(MFF)、线粒体动力相关蛋白(Drp1)、线粒体途径凋亡指标蛋白(Cytochrome c)、能量代谢相关蛋白AMPK、p-AMPK、PPAR α、PGC-1α的表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组大鼠SBP、HOMA-IR、体质量以及血清中LDL-C、TG含量显著升高(P<0.01),血清中HDL-C、腓肠肌质量、ATP含量、mtDNA拷贝数显著降低(P<0.01),腓肠肌组织线粒体中UCP 3、MFN2、Cytochrome c蛋白表达显著下调(P<0.01),MFF、Drp1蛋白表达显著上调(P<0.01),腓肠肌组织中AMPK蛋白磷酸化表达、PPAR α、PGC-1α蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组相比,金合欢素各组能明显改善代谢综合征大鼠SBP、HOMA-IR、体质量以及血清中HDL-C、LDL-C、TG的含量;升高腓肠肌质量和ATP含量、mtDNA拷贝数,明显上调UCP 3、MFN2、Cytochrome c蛋白表达,下调MFF、Drp1蛋白表达(P<0.05或P<0.01),促进大鼠腓肠肌线粒体融合并抑制其分裂;上调AMPK蛋白磷酸化、PPAR α、PGC-1α蛋白表达(P<0.01)。结论:金合欢素可能通过激活AMPK/PPAR α/PGC-1α通路,促进代谢综合征大鼠骨骼肌线粒体融合并抑制其分裂,增强线粒体功能进而改善代谢综合征大鼠骨骼肌能量代谢紊乱。