脂肪间充质干细胞外泌体可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡

背景：间充质干细胞外泌体在组织损伤修复中可能发挥关键作用，而miRNA是外泌体发挥治疗作用的重要成分，其中miR-29b-3p具有减少细胞凋亡、促进轴突再生和血管生成的作用。目的：研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对过氧化氢诱导PC12细胞损伤模型的保护作用，并探讨相关机制。方法：(1)首先采用胶原酶消化法提取大鼠脂肪间充质干细胞，通过miR-29b-3p模拟物及抑制物转染脂肪间充质干细胞，采用超速离心法从培养上清中提取外泌体并进行鉴定，从而构建高表达和敲低miR-29b-3p的脂肪间充质干细胞外泌体；(2)通过过氧化氢诱导PC12细胞模拟神经细胞损伤模型，研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对神经元细胞损伤模型发挥保护作用的相关机制。结果与结论：(1)脂肪间充质干细胞外泌体具有典型的杯状形态，直径分布在50-140 nm范围内，表达外泌体表面特异性标志膜蛋白Alix、CD63及TSG101，并可被PC12细胞成功摄取；(2)脂肪间充质干细胞外泌体预处理可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡，并且这种保护作用随着外泌体中miR-29b-3p表达的增加而增强，...     

滑膜间充质干细胞外泌体源性miR-376b-3p靶向MYC抑制骨关节炎进展北大核心CSCD

目的:探讨滑膜间充质干细胞(SMSCs)外泌体(exo)通过携带高水平的miR-376b-3p调控MYC对骨关节炎(OA)的作用。方法:IL-1β处理HC-A细胞建立OA损伤模型,分析miR-376b-3p、MYC水平变化。滑膜组织中分离SMSCs及exo,干预miR-376b-3p与MYC表达,CCK-8、流式细胞术和ELISA检测HC-A细胞增殖、凋亡、炎症因子IL-6、TNF-α分泌。结果:与对照组相比,OA组织与细胞中miR-376b-3p表达均下调(均P<0.05)。SMSCs源性exo能够促进软骨细胞增殖,抑制其凋亡,下调IL-6、TNF-α水平,该作用能被miR-376b-3p抑制剂部分抵消(均P<0.05)。MYC被证实是miR-376b-3p的靶基因且能促进OA软骨细胞损伤,对OA损伤的促进作用能被SMSCs源性exo部分抵消(均P<0.05)。结论:SMSCs源性exo携带的miR-376b-3p通过抑制MYC促进软骨细胞增殖,抑制其凋亡和炎症反应,从而抑制OA进展。     

肿瘤相关巨噬细胞外泌体调控KRAS信号通路影响胰腺癌细胞糖酵解功能

目的 探究肿瘤相关巨噬细胞外泌体对胰腺癌细胞糖酵解的影响及机制。方法 THP-1细胞诱导分化为M0型和M2型巨噬细胞,并提取二者分泌的外泌体（M0 exo和M2 exo）。将胰腺癌细胞CAPAN-2和ASPC-1分为PBS组、M0 exo组、M2 exo组、M2 exo+siKRAS组,分别与等体积PBS、10μg/mL M0 exo、10μg/mL M2 exo、转染KRAS siRNA+10μg/mL M2 exo共孵育。透射电镜观察外泌体结构;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;试剂盒检测葡萄糖摄取率和乳酸生成水平;Western blot检测外泌体标志物、KRAS蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平。结果 THP-1诱导分化为表达标志蛋白Arg-1和IL-10的M2型巨噬细胞,M0 exo和M2 exo具有双层膜结构,粒径100 nm左右,表达外泌体标志蛋白CD9、CD81、TSG101。与PBS组比较,M2 exo组CAPAN-2和ASPC-1细胞增殖能力、葡萄糖摄取率力、乳酸生成水平显著增加（P<0.05）,KRAS表达以及ERK1/2磷酸化水平显著增加（P<0.00...     

miR-130b-3p有望作为人膀胱癌的标志物

目的进一步了解miRNA在膀胱癌中的潜在机制。方法芯片分析4对人膀胱癌组织和相邻正常组织中的miRNA的表达。并用RT-q PCR来验证两个最上调的miRNA及其靶基因的表达是否符合miRNA/mRNA芯片结果。通过相关性分析和双荧光素酶报告实验推断并验证miR-130b-3p可以靶向PTEN。应用CCK8、EDU、流式细胞术、划痕、Transwell和细胞骨架等实验证明miR-130b可以影响膀胱癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。用Western blot检测PI3K/AKT和整合素β1/FAK信号通路的关键靶蛋白。结果人膀胱癌中miR-130b-3p表达高于癌旁且与PTEN表达呈负相关。miR-130b-3p可下调PTEN表达,导致PI3K/AKT和整合素β1/FAK信号通路的激活,且与膀胱癌EJ细胞的增殖、迁移和侵袭相关。细胞转染miR-130b-3p抑制剂时,可以重排细胞骨架。结论本结果揭示miR-130b/PTEN有望用于人膀胱癌诊断和治疗的标志物。     

微小RNA-181a-5p靶向PTEN对人白血病HL-60细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-181a-5p对白血病HL-60细胞增殖和侵袭的影响,并初步分析其机制。方法体外培养人白血病HL-60细胞,将miR-181a-5p抑制物转染白血病HL-60细胞,MTT法检测各组HL-60细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组HL-60细胞的侵袭能力。实时定量PCR和Western blot检测各组细胞miR-181a-5p和PTEN的表达,双荧光素酶报告基因实验分析miR-181a-5p和PTEN的靶向关系。结果 MTT和Transwell实验结果显示,转染miR-181a-5p抑制物后,HL-60细胞的增殖和侵袭能力下降（P<0.05）,miR-181a-5p的表达下降,PTEN的表达上升（P<0.05）。双荧光素酶实验表明PTEN是miR-181a-5p的靶基因。结论 抑制miR-181a-5p使白血病细胞HL-60的增殖和侵袭能力下降,其机制可能与上调PTEN表达有关。     

外泌体介导miR-335-5p通过靶向LKB1对胶质瘤细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨外泌体中microRNA-335-5p(miR-335-5p)被胶质瘤细胞摄取并作用于肝激酶B1(liver kinase B1, LKB1)影响胶质瘤细胞侵袭的分子机制。方法 通过外泌体提取试剂盒提取外泌体;运用透射电镜、粒度仪、Western blot法鉴定分离获取的外泌体;RT-PCR检测不同肿瘤细胞来源外泌体中miR-335-5p的表达量;外泌体摄取实验检测胶质瘤细胞对外泌体的摄取情况;Transwell实验检测加入外泌体后胶质瘤细胞的侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p是否靶向结合LKB1;Transwell实验检测转染miR-335-5p mimic后胶质瘤细胞的侵袭能力;Western blot法检测转染miR-335-5p mimic后胶质瘤细胞中LKB1和上皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和vimentin)的表达水平。结果 LN229细胞来源的外泌体中miR-335-5p表达水平明显高于H4细胞来源的外泌体;过表达miR-335-5p后LN229细胞侵袭能力增强;miR-335-5p靶向结合LKB1 mRNA...     

肝癌细胞外泌体诱导巨噬细胞M2极化后促进肝癌细胞迁移及侵袭

目的：探讨外泌体在肝细胞癌（HCC）细胞与巨噬细胞间是否存在活性物质交通作用，分析肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）与HCC细胞转移的关系及机制。方法：采用超速离心法从Huh-7和RAW264.7细胞的培养基中提取外泌体，Western blot和透射电镜进行外泌体鉴定；激光共聚焦显微镜对外泌体与受体细胞结合内化进行追踪；qRT-PCR及ELISA检测巨噬细胞表型变化；miRNA模拟物进行功能性实验验证其作用；细胞划痕及Transwell试验检测TAMs对HCC细胞迁移及侵袭能力的影响。结果：HCC细胞外泌体可被巨噬细胞内吞；肝癌细胞外泌体及miR-151模拟物处理的巨噬细胞M2型标志物CD206、Arg-1 mRNA表达及IL-10、TGF-β蛋白表达显著高于对照组（P<0.05）;TAMs外泌体处理组HCC细胞迁移及侵袭能力高于其他组（P<0.05）。结论：HCC细胞来源外泌体miR-151可诱导巨噬细胞极化为TAMs,TAMs对肝癌细胞迁移及侵袭有促进作用。     

结直肠癌细胞来源的外泌体miR-34a对M2型巨噬细胞极化的影响北大核心CSCD

目的:探究结直肠癌来源的外泌体对巨噬细胞极化的影响及其作用机制。方法:建立THP-1来源的M2型巨噬细胞体外诱导分化模型,利用流式细胞染色实验检测细胞分化效率;通过与结直肠癌细胞共培养、结直肠癌细胞外泌体干预M2型巨噬细胞分化,利用实时荧光定量PCR实验检测ARG1、IL-10和NLRP3 mRNA的表达水平。结果:体外诱导分化的M2型THP-1巨噬细胞CD163阳性细胞比例显著升高;与对照组相比,与结直肠癌细胞HCT8和HCT116共培养的M2型巨噬细胞ARG1、IL-10表达水平显著升高,NLRP3表达水平下降。与转染阴性对照microRNA(miR-NC)组相比,转染miR-34a inhibitor的HCT8和HCT116共培养或外泌体刺激下,M2型巨噬细胞ARG1、IL-10表达水平下降,NLRP3表达水平升高;与miR-NC组相比,转染miR-34a inhibitor的THP-1细胞ARG1、IL-10表达水平显著下降,NLRP3表达水平显著升高。结论:结直肠癌细胞来源的外泌体miR-34a可以抑制巨噬细胞NLRP3的表达,促进巨噬细胞M2型极化。     

MiRNA-29-2-5p对人胰腺癌细胞SW1990迁移能力的影响

目的研究miR-29b-2-5p在胰腺癌细胞系SW1990中迁移的作用。方法荧光定量PCR方法检测miR-29b-2-5p在胰腺癌细胞系SW1990中的过表达情况,Transwell小室迁移实验和细胞划痕实验观察miR-29b-2-5p对胰腺癌细胞系SW1990的迁移能力的影响。结果在胰腺癌细胞系SW1990中过表达miR-29b-2-5p后,miR-29b-2-5p表达显著上调,胰腺癌细胞系的迁移能力明显下降。通过Targetscan软件预测及免疫蛋白印迹法检测发现miR-29b-2-5p的靶蛋白AKT表达水平明显降低。结论 miR-29b-2-5p显著抑制胰腺癌细胞的迁移能力可能与抑制AKT表达相关,为解明胰腺癌迁移机制及针对胰腺癌迁移的新靶点开发提供依据。     

鸟结核分枝杆菌感染巨噬细胞后的外泌体刺激巨噬细胞产生的细胞因子及其蛋白质表达改变

目的 探讨鸟结核分枝杆菌(M.avium)感染巨噬细胞后分泌的外泌体[(+)外泌体]刺激巨噬细胞后产生的分子免疫机制及其差异蛋白质成分研究.方法 冷冻高速离心法收集经鸟分枝结核杆菌感染及未感染的巨噬细胞上清中的外泌体,然后利用外泌体刺激巨噬细胞;ELISA方法检测经外泌体刺激巨噬细胞后细胞上清中IFN-γ、TNF-α的含量;流式细胞术从蛋白水平检测巨噬细胞受外泌体刺激后CD80、CD86蛋白表达情况;2-DE MALDI-TOF/TOF MS技术分析鉴定巨噬细胞受M.avium感染后分泌的外泌体中的差异蛋白.结果 IFN-γ、TNF-α在(+)外泌体刺激巨噬细胞后培养上清中含量增加;CD80、CD86蛋白在巨噬细胞受(+)外泌体刺激后表达上调.外泌体经2-DE MALDI TOF/TOF MS分析获得18个差异蛋白,且质谱成功鉴定12个.结论 (+)外泌体促进巨噬细胞TNF-α、IFN-γ的分泌从而增强巨噬细胞的炎症反应,并且可促进巨噬细胞CD80、CD86蛋白表达增强;筛选出差异蛋白的功能与细胞骨架结构、蛋白质合成与加工,炎症反应密切相关.     

Notch信号通路相关微小RNA在胶原蛋白诱导的关节炎小鼠免疫细胞中的表达

目的研究胶原蛋白诱发关节炎(CIA)小鼠T细胞中Notch信号通路相关微小RNA(miRNA)的表达情况。方法用牛Ⅱ型胶原蛋白和佐剂免疫DBA/1J小鼠建立CIA小鼠模型,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞术分选CIA小鼠和正常对照小鼠外周血、脾脏、淋巴结CD4~+T细胞和CD8~+T细胞。实时荧光定量PCR检测PBMC及T细胞中Notch信号通路相关miRNA分子的表达水平。结果与正常对照相比,CIA小鼠PBMC中miR-200b-3p、miR-30c-5p、miR-30b-5p及miR-23b-3p的表达水平均明显降低,miR-200b-3p、miR-30c-5p及miR-30b-5p在CIA小鼠外周血、脾脏、淋巴结CD4~+T细胞和CD8~+T细胞中的表达与正常对照相比未见明显差异,而CIA小鼠外周血、脾脏CD4~+T细胞中miR-23b-3p的表达水平显著低于正常对照小鼠,外周血CD4~+T细胞中的miR-23b-3p来源于脾脏。结论 miR-23b-3p可能参与Notch信号对CIA小鼠T细胞的免疫调控。     

miR-125b-5p 靶向STAT3 调控血管内皮细胞凋亡

目的:探讨miR-125b-5p靶向STAT3对血管内皮细胞凋亡影响。方法:过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡,qPCR法测定miR-125b-5p表达。血管内皮细胞中转染miR-125b-5p mimics,MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞PCNA和C-caspase-3蛋白水平。靶基因预测软件预测STAT3与miR-125b-5p的靶向关系,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。血管内皮细胞共转染STAT3过表达载体及miR-125b-5p mimics,检测细胞活力、凋亡及PCNA、C-caspase-3蛋白表达。结果:过氧化氢处理后的血管内皮细胞中miR-125b-5p水平下降,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,细胞PCNA蛋白表达降低,C-caspase-3蛋白表达提高。转染miR-125b-5p mimics可提高过氧化氢条件下血管内皮细胞活力,减少细胞凋亡,提高细胞PCNA蛋白水平,降低细胞C-caspase-3蛋白水平。miR-125b-5p靶向调控STAT3表达。STAT3过表达载体可逆转miR-125b-5p mimics对过氧化氢诱导的血管内皮细胞活力和凋亡的影响。结论:miR-125b-5p靶向STAT3抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡。     

尿毒症毒素通过刺激巨噬细胞外泌体分泌miR-22促进心肌细胞自噬

目的:探讨在尿毒症毒素微环境下巨噬细胞外泌体分泌微小RNA-22(miR-22)对心肌细胞自噬的影响。方法:收集硫酸吲哚酚(IS)刺激后的巨噬细胞源性外泌体,并将其与H9c2细胞共培养,RT-qPCR检测巨噬细胞及其分泌的外泌体中miR-22的表达水平,CCK-8法检测H9c2细胞的活力,Western blot检测外泌体表面标志蛋白CD63及自噬相关蛋白LC3和P62的表达。结果:在IS刺激下,巨噬细胞中外泌体表面标志蛋白CD63的水平显著高于对照组(P<0. 05),同时IS组巨噬细胞及其分泌的外泌体中miR-22的水平较对照组显著上调(P<0. 01)。随着共培养体系中巨噬细胞外泌体浓度的增大,H9c2细胞的活力逐渐降低(P<0. 05),并且巨噬细胞外泌体的刺激降低了H9c2细胞P62的表达,并促进了LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化,这种变化呈剂量依赖性(P<0. 05)。在巨噬细胞外泌体刺激下,miR-22模拟物转染的H9c2细胞与相应阴性对照miRNA转染的细胞相比,具有更高的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比率(P<0. 05)及更低的P62蛋白表达量(P&...     

circITCH靶向miR-106b-5p对高糖诱导的肾小管上皮细胞IL-6、TNF-α表达和细胞凋亡的影响

目的探讨cirITCH对高糖(HG)诱导的人肾小管上皮细胞炎症因子IL-6、TNF-α表达和凋亡的影响和可能机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,用25 mmol/L葡萄糖诱导24 h,RT-qPCR法检测细胞中cirITCH和miR-106b-5p表达。分别转染cirITCH过表达载体、miR-106b-5p抑制剂或共转染cirITCH过表达载体与miR-106b-5p模拟物至HK-2细胞后,用25 mmol/L葡萄糖诱导24 h,酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中IL-6和TNF-α水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证cirITCH和miR-106b-5p调控关系。结果 HK-2细胞经高糖诱导后,细胞中circITCH表达降低,而miR-106b-5p表达升高。上调cirITCH或下调miR-106b-5p可减少高糖诱导的HK-2细胞分泌IL-6和TNF-α,并降低细胞凋亡率和Bax蛋白表达,而增加Bcl-2蛋白表达。circITCH靶向负调控miR-106b-5p表达,上调miR-106b-5p...     

上调miR-34b-5p通过抑制胰岛素样生长因子1受体干扰肾癌Caki-1细胞的增殖和侵袭

目的观察微小RNA-34b-5p(miR-34b-5p)对人肾癌细胞增殖和侵袭的影响及分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qRT-PCR)检测人肾癌细胞ACHN、Caki-1、OS-RC-2、786-O、A498和人正常肾小管上皮细胞HK-2中miR-34b-5p的表达量。以miR-34b-5p表达量最低的Caki-1细胞为转染对象,应用脂质体转染miR-34b-5p或微小RNA(miR-NC)。采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-34b-5p的表达水平。MTT法和Transwell侵袭实验检测肾癌细胞的增殖和侵袭能力。生物信息学预测并采用双荧光素酶报告基因验证miR-34b-5p的潜在靶基因。qRT-PCR和Western blot法分别检测miR-34b-5p潜在靶基因及下游通路蛋白的表达。结果肾癌细胞中miR-34b-5p的表达量低于正常肾小管上皮细胞。用脂质体转染miR-34b-5p后Caki-1细胞中miR-34b-5p的表达量明显高于miR-NC组,提示过表达成功。上调miR-34b-5p可抑制肾癌细胞的增殖能力和侵袭能力。生物信息学预测和双荧光素酶报告基因证实胰岛素样生长因子1受体(insulin like growth factor 1 receptor, IGF1R)为miR-34b-5p的靶基因。上调miR-34b-5p可降低肾癌Caki-1细胞中IGF1R基因及PI3K/Akt信号通路蛋白的表达量。结论上调miR-34b-5p可抑制人肾癌Caki-1细胞的增殖和侵袭,其可能的分子机制为降低IGF1R基因及下游PI3K/Akt信号通路蛋白的表达。     

MiRNA在E3泛素连接酶Cbl-b抑制CD4~+T细胞活化中的作用研究

本研究探讨miRNA在Cbl-b抑制CD4~+T细胞活化中的作用机制。采用miRNA深度测序的方法检测WT CD4~+T细胞、Cbl~(-b-)/-CD4~+T细胞、抗CD3抗体活化的WT CD4~+T细胞和抗CD3抗体活化的Cbl-b~(-/-)CD4~+T细胞中miRNA的表达谱。结果显示,miR-125b-2-3p、miR-125b-5p、miR-99a-5p和miR-99a-3p同时在Cbl-b-/-CD4~+T细胞和抗CD3抗体活化的Cbl-b~(-/-)CD4~+T细胞中显著高表达。运用miRWalk2.0预测差异表达miRNA的靶基因并用GO和KEGG分析差异表达的miRNA的可能作用机制。结果显示差异表达的miRNA可能通过MAPK等信号通路来影响Cbl-b抑制CD4~+T细胞的活化。综上所述,Cbl-b可能通过miR-125b-2-3p、miR-125b-5p、miR-99a-5p和miR-99a-3p等miRNA调控MAPK等信号通路来抑制CD4~+T细胞的活化。     

慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺泡巨噬细胞促进气道上皮细胞增殖及黏蛋白和炎症因子分泌的机制

目的 通过慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型探讨肺泡巨噬细胞对气道上皮细胞增殖和分泌的影响及其相关机制。方法 支气管肺泡灌洗术收集烟熏和脂多糖诱导造模的COPD大鼠肺泡巨噬细胞与16HBE气道上皮细胞共培养。使用外泌体分离试剂盒提取大鼠肺泡巨噬细胞外泌体，PCR检测外泌体差异表达的微小RNA(miRNA)。采用miR-380模拟物(miR-380 mimic)过表达miR-380,小干扰RNA(siRNA)敲低16HBE细胞囊性纤维化跨膜转导调节因子(CFTR)。CCK-8法检测细胞增殖，Transwell^TM迁移实验检测16HBE细胞迁移；Western blot法检测黏蛋白5AC(MUC5AC)、 MUC5B、 MUC2、 CFTR的表达，ELISA检测16HBE细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量。结果 COPD大鼠肺泡巨噬细胞促进16HBE细胞的增殖和迁移，上调16HBE细胞黏蛋白和TNF-α、 IL-6的表达。COPD组大鼠肺泡巨噬细胞外泌体中miR-380明显上调。过表达miR-380及敲低CFTR均可下调16HBE细...     

肺腺癌细胞源性外泌体活化的人THP-1巨噬细胞促进肺癌细胞的侵袭

目的研究肺腺癌细胞来源的外泌体对巨噬细胞极化的作用及受外泌体作用后的巨噬细胞对肺癌细胞生物学行为的影响。方法提取A549和H1299肺腺癌细胞外泌体, Western blot法检测其表面标志物CD9、 CD63进行鉴定。100 ng/mL佛波酯(PMA)处理人THP-1细胞48 h,实时定量PCR检测细胞CD68的mRNA水平。200μg/mL外泌体处理贴壁巨噬细胞24 h后,实时定量PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 CD163的mRNA水平, IMMULITE 1000化学发光免疫分析仪检测白细胞介素6(IL-6)、 IL-8、 IL-10的蛋白水平;将外泌体处理后的巨噬细胞分别与A549细胞和H1299细胞共培养,通过Transwell~(TM)实验检测肺腺癌细胞侵袭能力,实时定量PCR检测基质金属蛋白酶2(MMP2)、 MMP9的mRNA水平。结果 CD9、 CD63在外泌体高表达, PMA诱导后的巨噬细胞高表达CD68,外泌体处理后的巨噬细胞iNOS表达降低, CD163、 TNF-α、 IL-6、 IL-8、 IL-10表达水平均增加;外泌体处理后的巨噬细胞与肺腺癌细胞共培养,可增强肺腺癌细胞的侵袭能力并促进MMP2、 MMP9的表达。结论肺腺癌细胞来源的外泌体可以诱导巨噬细胞极化,表现为M1/M2的混合表型,进而增强肺癌细胞的自身侵袭能力。     

肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的机制研究

目的 探讨缺氧环境下肝癌细胞外泌体诱导单核细胞代谢重编程的潜在机制。方法 缺氧环境下,正常肝细胞LO2外泌体或肝癌细胞HepG2外泌体处理,检测单核细胞代谢关键指标葡萄糖摄取和乳酸产生水平。miRNA-seq检测miRNA表达水平并筛选以鉴定诱导单核细胞代谢重编程的关键miRNA。通过HumanTargetScan在线分析预测以及遗传学筛选鉴定miRNA的靶标。结果 缺氧环境下,肝癌细胞外泌体单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生（分别为34856±2944、174±16）高于正常肝细胞外泌体（分别为23454±2194、135±12）(P<0.05)。过表达miR-34b-3p、OMA1及敲低PHB2能够促进单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生（分别为22287±2207与36399±3123;121±10与158±17;22972±2330与32099±2017;121±11与161±16;24020±2156与37901±3084;110±10与151±16,均P<0.05）;敲低miR-34b-3p、OMA1及过表达PHB2能够抑制单核细胞葡萄糖摄取和乳酸产生（分别为22287±22...     

人角质形成细胞外泌体辅助超抗原SEB诱导淋巴细胞增殖

目的分离人角质形成细胞外泌体,探究负载细菌超抗原后人角质形成细胞分泌的外泌体诱导静息CD4~+、CD8~+T淋巴细胞增殖的作用。方法多步超速离心法分离体外培养的人永生化角质形成细胞外泌体(HaCaT cell exosomes,HaCaT-Exo),透射电子显微镜观察HaCaT-Exo的形态结构,Western blot检测HaCaT-Exo的标志蛋白CD63以及免疫相关分子MHCⅡ的表达,流式细胞术检测负载细菌超抗原后HaCaT分泌的外泌体诱导静息CD4~+、CD8~+T淋巴细胞增殖情况。结果提取的HaCaT-Exo符合外泌体特性并表达标志蛋白CD63;经IFN-γ刺激后HaCaT-Exo可以表达MHCⅡ分子,负载细菌超抗原SEB的HaCaT-Exo以及单独HaCaT-Exo均不能诱导淋巴细胞增殖,但经IFN-γ刺激后负载SEB的HaCaT-Exo可以诱导静息CD4~+、CD8~+T淋巴细胞增殖(P0.05)。结论经IFN-γ刺激后人角质形成细胞外泌体可表达MHCⅡ分子,并且负载细菌超抗原SEB后其分泌的外泌体具有诱导静息CD4~+、CD8~+T淋巴细胞增殖能力,这提示外泌体可能是角质形成细胞参与细菌超抗原相关免疫反应的新机制。