用PCR技术研究疱疹病毒与新生儿黄疸的相关性

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３９例新生儿黄疸患儿。结果１３例外周血淋巴细胞检出疱疹病毒ＤＮＡ，总检出率３３３％，其中巨细胞病毒（ＣＭＶ）１１例，Ⅱ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶⅡ）２例，检出率分别为２８２％（１１／３９）和５１％（２／３９），未检出Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶⅠ）和ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ。提示新生儿黄疸与疱疹病毒感染有关     

用染色的石蜡包埋组织为模板进行PCR扩增

用染色的石蜡包埋组织为模板进行ＰＣＲ扩增刘宝瑞，张学庸（西京医院消化内科）关键词聚合酶链反应；基因诊断；方法；石蜡中图法分类号Ｑ７８１目前，以未染色的石蜡包埋组织为模板已能成功地进行ＰＣＲ［ＧｒｅｅｒＣＥｅｔａｌ．ＡｍＪＣｌｉｎＰｈａｔｈｏｌ，１９９...     

用PCR技术标记双链DNA探针

利用ＰＣＲ技术制备生物素或地高辛标记的ＤＮＡ探针，经原位杂交试验及敏感性和特异性检测，均取得满意效果，ＰＣＲ标记法具有经济，快速，简易和标记量大等优点，实践中发现Ｂｉｏ／Ｄｉｇ－１１－ＵＴＰ的质量，ｄＴＴＰ和Ｄ－１１－ｄＵＴＰ的比例及起始ＤＮＡ模板浓度是标记成败的关键。     

PCR技术对Wilson病基因进行定点突变的研究

目的：利用聚合酶链反应（PCR）技术对Wilson病（WD）基因进行体外定点突变的研究。方法：采用PCR定点突变技术，首先设计两对引物，将突变位点设计在引物上，通过重叠延伸法两次PCR扩增，扩增片段上含有所需要的突变位点，最后将扩增片段克隆入pRc/CMV载体中。结果：DNA测序表明在预期位点已经发生突变，WD基因第778位密码子由精氨酸（Arg)残基突变为亮氨酸残基（Leu),用PCR定点突变技术成功构建Wilson病基因突变体。结论：PCR技术诱导定点突变准确，高效。Wilson病基因突变体的构建成功，为进一步研究该突变位点导致Wilson病的发病机制和Wilson病蛋白的结构和功能的关系奠定了基础。     

PCR技术对Wilson病基因进行定点突变的研究

【目的】利用聚合酶链反应 (PCR)技术对Wilson病 (WD)基因进行体外定点突变的研究。【方法】采用PCR定点突变技术 ,首先设计两对引物 ,将突变位点设计在引物上 ,通过重叠延伸法两次PCR扩增 ,扩增片段上含有所需要的突变位点 ,最后将扩增片段克隆入pRc/CMV载体中。【结果】DNA测序表明在预期位点已经发生突变 ,WD基因第 778位密码子由精氨酸 (Arg)残基突变为亮氨酸残基 (Leu) ,用PCR定点突变技术成功构建Wilson病基因突变体。【结论】PCR技术诱导定点突变准确、高效。Wilson病基因突变体的构建成功 ,为进一步研究该突变位点导致Wilson病的发病机制和Wilson病蛋白的结构和功能的关系奠定了基础。     

PCR诊断技术的实验条件研究

以白细胞中提取的基因组ＤＮＡ作为模板，研究了应用聚合酶链反应方法检测胰高血糖素受体第二外显子基因的反应条件，实验结果表明：循环时的变性温度、退火温度、引物浓度、等条件偏离最适实验时会导致错误的结果。研究结果对于想引入ＰＣＲ实验的临床实验室是有用的信息。     

D17S30-PCR进行混合斑个人认别的应用研究

目的 探索一种可靠，稳定，适用于混合斑个人识别的检验方法。方法 采用ＰＣＲ方法对２０例已知混合斑及例强奸案中的混合斑进行Ｄ１７Ｓ３０位点扩增片段进行研究。结果 与已知男性毛囊或血痕ＤＮＡ的Ｄ１７Ｓ３０位点扩增结果完全一致。结论 该方法可靠、稳定、完全能够应用于混合斑个人认别的检验。     

PCR法与荧光定量PCR法在人巨细胞病毒检测中的作用比较

目的 比较常规PCR法与荧光定量RCR（RQ-PCR）法在人巨细胞病毒（HCMV）检测中的作用,寻找更适合于HCMV检测的方法。方法 构建携带CMV-DNA的标准质粒,利用常规PCR技术及FQ-PCR技术分别对不同稀释度的标准质粒进行检测。结果 FQ-PCR法对HCMV,标准质粒检测的灵敏度及线性范围均显著高于常规RCR法。结论 RCP法比常规PCR法更适合HCMV病毒的检测。     

IRS-PCR在分析不动杆菌DNA异质性中的应用

目的采用低频限制性位点聚合酶链反应技术（IRS-PCR）,对20株临床分离的不动杆菌DNA进行异质性分析。方法通过PCR扩增稀有限制区附近DNA序列,对20株临床分离的不动杆菌进行基因分型,并与RAPD方法的分型及生化表型结果进行比较分析。结果20株不动杆菌因生化性状不同分为溶血不动杆菌（10株）,洛菲不动杆菌（7株）及其他（3株）;IRS-PCR将该溶血不动杆菌分为5个基因型,洛菲不动杆菌分为4个基因型,其他不动杆菌分为2个基因型;RAPD方法,引物1扩增结果将溶血不动杆菌分为6个基因型,洛菲不动杆菌分为4个基因型,其他不动杆菌分为2个基因型;引物2扩增结果将溶血不动杆菌分为9个基因型,洛菲不动杆菌分为5个基因型,其他不动杆菌分为2个基因型。结论IRS-PCR可用于不动杆菌DNA异质性的分析,且较生化表型精细、准确,与RAPD技术比较两者分辨率相当,但IRS-PCR具有较好的稳定性和重复性,值得临床推广。     

应用PCR技术快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种

目的 建立快速鉴定结核分枝杆菌复合群菌种的方法.方法 将7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物(Mtbc1-7)进行聚合酶链反应(PCR)扩增,通过对扩增产物的不同系带型进行分析,对已知标准株和96株临床分离株进行菌种鉴定.结果 用3株结核分枝杆菌复合群(MTBC)标准株,9株非分枝杆菌标准株以及27株非结核分枝杆菌的分枝杆菌(MOTT)对7对结核分枝杆菌复合群各菌种特异性引物进行特异性鉴定,结果证明引物Mtbc1能鉴定出分枝杆菌和非分枝杆菌;引物Mtbc2能鉴定出MOTT和MTBC;引物Mtbc3能鉴定出田鼠分枝杆菌;引物Mtbc4能从MTBC中识别出牛分枝杆菌和卡介苗;引物Mtbc5能鉴定出非洲分枝杆菌Ⅱ型和结核分枝杆菌;引物Mtbc6和引物Mtbc4结合能鉴定出卡介苗;引物Mtbc7和引物Mtbc5联合能鉴定出canettii分枝杆菌.96株临床分离株经7对引物扩增,扩增结果显示MOTT 20株,牛分枝杆菌1株,卡介苗1株,canettii分枝杆菌3株,田鼠分枝杆菌3株,非洲分枝杆菌Ⅰ型3株,caprae分枝杆菌1株,结核分枝杆菌或非洲分枝杆菌Ⅱ型64株.结论 应用PCR技术鉴定结核分枝杆菌复合群菌种结果准确可靠,且具有简便和快速等优点,有较大的分子流行病学应用价值.     

66例早期钩体病患者血和尿标本的聚合酶链反应及生物素分子杂交分析

采用国际通用引物Ｇ１Ｇ２对６６例发病在一周内钩体病患者的血和尿标本进行了ＰＣＲ检测及生物素－链霉抗生素蛋白碱性磷酸酶体系标记的重组ＤＮＡ探针杂交分析。结果表明，ＰＣＲ技术结合生物素分子杂交分析，不仅排除了非特异性扩增，增加了可靠性，同时也提高了检测的敏感性（从７１．３％升至８６．１％）；经统计学分析发现早期尿标本的ＰＣＲ检测阳性率与同期血标本的ＰＣＲ检测阳性率没有统计学差别，由于尿标本易于收集和处理，所以对尿标本进行ＰＣＲ检测对钩体病的早期诊断和后期监测更值得重视和推广。     

聚合酶链反应检测肝病患者血液中纳米细菌的研究

目的 评价PCR检测慢性肝病和肝癌患者血液中纳米细菌(NB)的临床价值.方法 对68例慢性乙型肝炎(CHB)、54例慢性重型乙型肝炎(CSHB)、66例肝硬化(CL)、23例肝癌(HCC)患者采用免疫组化染色、透射电镜扫描和PCR技术,检测血液中的纳米细菌,并与40例健康人结果比较.结果 PCR检测纳米细菌阳性率分别为27.69%、50.00%、61.29%、52.38%和5.00%,慢性肝病和肝癌患者阳性率明显高于健康人(P＜0.005).慢性乙型肝炎阳性率低于其他肝病(P＜0.005).PCR测定结果与免疫组化染色比较,两法阳性率无明显差异(P＞0.05),PCR灵敏度为46.51%,特异性为73.95%,总有效率66.67%.结论 PCR对纳米细菌的检测具有重要的参考价值.慢性肝病和肝癌患者血液中纳米细菌感染率高于健康人.     

多重PCR点突变筛查技术在CYP2C19基因分型中的应用

目的 建立一种多重PCR点突变筛查技术,用以细胞色素氧化酶P450 2C19(CYP2C19)的基因分型.方法 设计含有拱桥式次黄嘌呤的多重PCR引物(DMP).在一个PCR管内,同时检测CYP2C19的*1、*2、*3等位基因.结果 多重PCR点突变筛查技术,最低检测下限可以达到2.8 ng,具有较高的检测灵敏度.其成功检出 248份健康人抗凝静脉血CYP2C19等位基因*1、*2、*3.并与部分标本测序法结果比较,结果与测序法结果完全一致.结论 成功建立了多重PCR点突变筛查技术,该技术特异性高、操作简单、价格低廉,为基础研究、个体化用药提供了合理可靠的检测手段.

Abstract：

Objective To establish a multiplex PCR point mutation screening technique for the genotyping of CYP2C19.Methods Deoxyinosine multiplex-polymerase chain reaction (PCR) primers (DMPs) were designed to detect simultaneously CYP2C19 * 1, * 2, * 3 alleles in one PCR tube.Results The above technique could detect the genotypes of CYP2C19 * 1, CYP2C19 * 2 and CYP2C19 * 3 successfully.And the results were completely consistent with those of DNA sequencing.Conclusion A novel screening technique of multiplex PCR point mutation is successfully established.With the advantages of high specificity, convenient handling, fast completion and low cost, it provides a reasonable and reliable detection method for basic researches and personalized medicine.     

动物粪便中肠道出血性大肠杆菌PCR检测方法的建立

【目的】建立一种能够快速检测动物源性肠道出血性大肠杆菌的PCR方法。【方法】按照华大基因公布的检测肠道出血性大肠杆菌的方法,应用PCR的方法检测腹泻动物粪便中分离到的大肠杆菌Stx2-2基因和AFF-I-2基因。【结果】在分离到的45株大肠杆菌中,Stx2-2基因阳性菌株有7株,AFF-I-2基因阳性菌株有22株,其中2种基因阳性菌株有2株,其血清型分别为O142和O127:K63。【结论】成功建立了快速检测动物源性肠道出血性大肠杆菌的PCR方法。     

猴D型反转录病毒巢式PCR检测方法的建立

目的建立SRV-1巢式PCR检测方法并进行初步应用。方法针对SRV-1env基因的保守区序列,设计特异性引物,以感染SRV-1 Raji细胞提取出的含有前病毒DNA的基因组DNA为模板,进行巢式PCR反应。扩增产物测序后与GenBank报道的序列进行同源比对。将DNA样本进行10倍梯度稀释,以检测巢式PCR反应的灵敏度。使用该方法对正常Raji细胞以及感染SIV、STLV的外周血淋巴细胞DNA样本进行扩增,检测该方法的特异性。用建立的巢式PCR方法检测40份储存猴血标本。结果使用巢式PCR扩增出的特异片段经测序分析,结果证实与GenBank报道的序列一致。所建立的巢式PCR检测法检测限度可达1.5×10-3ng/μL,而且方法特异。用此方法检测40份猴血标本,未检测到阳性标本。结论初步建立SRV-1的巢式PCR检测方法,该方法灵敏、特异,为SRV-1的检测提供了一个快速、有效的手段。     

PCR检测55例胸水中结核菌的结果分析

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对３５例结核性胸膜炎（结胸）患者胸水进行检测，共１８例阳性，阳性率为５１．４％，其中３例涂片结核菌阳性及２例经胸膜活检病理证实，共５例结胸患者胸水ＰＣＲ均为阳性，而对照组的２０例非结胸患者仅１例阳性，后胸水培养证实此例阳性患者为肺腺癌合并结核的亚临床感染。结果提示ＰＣＲ是结核性胸膜炎快速、灵敏度高、特异的诊断方法。