125I标记抗MIF单克隆抗体制备及其生物学活性的研究

目的:建立125I标记抗巨噬细胞移动抑制因子(MIF)单克隆抗体(mAb)方法,探讨其在体内外生物学活性.方法:①利用Iodogen法,Na125I标记Anti-mMIF mAb,用Sephadex G-25柱凝胶过滤层析法分离纯化,测定其标记率.纸层析法测定放射化学纯度和稳定性.②采用ELISA和改良MMI鉴定其免疫活性及生物学活性.③观察小鼠体内的生物学分布情况.结果:①标记的最佳条件为Iodogen 40～100μg、抗体20～50μg[Iodogen(m):抗体(m)=2:1],加入Na125I15～30 MBq、室温反应10～15 min,标记率为(90.40 4±3.34)%,放射化学纯度为(97.60±1.14)%,比活度为12.2～26.0 MBq/μg;标记物4℃条件下放置3周后放射化学纯度仍为90.36%.②125I-mMIF mAb能与抗原MIF特异性结合,较好地保持其免疫活性及生物学活性.③体内生物学分布,在肺、肝、脾、肾内具有较高的放射性计数.结论:Iodogen法获得高标记率和放射化学纯度的125I-mMIF mAb,具有很好的体外稳定性,其在体内外保持较好的生物学活性.为进一步应用125I-mMIF mAb进行放射免疫显像和靶向治疗奠定了实验基础.     

抗人CTLA-4单克隆抗体的制备及其生物学活性研究

以我室用基因工程表达的人CTLA 4蛋白[1,2 ] 作为免疫原 ,采用细胞融合、ELISA法和免疫印迹等方法制备并筛选到鼠抗人CTLA 4的单克隆抗体 ,并以单向混合淋巴细胞刺激反应 (MLR )测定了抗人CTLA 4抗体对淋巴细胞增殖的影响。结果表明我们得到了 4株单克隆抗体 (1H7、 2G2、 2F11、 3A7) ,它们均可与近似天然构象的人CTLA 4Ig融合蛋白结合 ,又可与大肠杆菌表达出的经复性后的人CTLA 4蛋白结合 ,并且可分别识别人CTLA 4Ig融合蛋白不同抗原决定簇。其中一株(3A7)既和近似天然构象的蛋白结合又可与变性的蛋白结合 ,并具有显著阻断CTLA 4的抑制性免疫信号传递 ,促进同种异体混合淋巴细胞增殖的功能     

~(125)Ⅰ标记纤维蛋白释放法测定组织型纤溶酶原激活物活性

检测组织型纤溶酶原激活物(Tissueplasminoge activator,t-PA)活性,对观察纤溶系统功能状态,与临床上血管血栓性疾病的发病关系和药物治疗作用机理探讨均具有重要意义。我们参考有关文献报告,     

肿瘤靶细胞~(125)Ⅰ-UdR标记方法的建立及其在LAK活性测定中的应用

本文选用~(126)Ⅰ-UdR进行肿瘤靶细胞同位素标记,并用于LAK细胞活性测定。靶细胞~(125)Ⅰ-UdR标记率在一定时间内随标记时间延长而增加,与~(125)Ⅰ-UdR和FUdR的剂量呈正相关关系,其自发释放随效靶作用时间的延长而增加.将此方法用于LAK活性测定取得较好的实验结果,并具有外照射损伤小、标记率高、自发释放相对低而特异性释放高等优点。     

小鼠抗人PD-1单克隆抗体的制备及其生物学活性评价

目的制备鼠抗人PD-1单克隆抗体,并对其生物阻断活性进行评价。方法利用重组人源PD-1/PDCD1蛋白作为免疫蛋白,免疫接种Balb/c小鼠,分离并提取小鼠脾淋巴细胞,然后与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞融合培养,经过多次克隆化培养筛选出稳定分泌鼠抗人PD-1单抗的杂交瘤细胞株。鉴定单抗Ig G类别及亚类,并分析其特异性和细胞毒性;建立Hep G2细胞和Jurkat细胞共同培养体系,ELISA法检测PD-1单抗对Jurkat细胞分泌抗肿瘤细胞因子的影响,MTT法分析PD-1单抗对Jurkat细胞杀伤Hep G2细胞能力的影响。结果获得了1株新的小鼠抗人PD-1单克隆抗体,命名为2H7。单抗2H7能够特异性识别T细胞表面的PD-1蛋白;高浓度长时间处理对Jurkat细胞有一定毒性作用;低浓度单抗2H7可阻断PD-1/PD-L1信号通路,使Jurkat细胞对Hep G2细胞杀伤能力显著增强(P0.01),且Jurkat细胞分泌的IL-2和IFN-γ等细胞因子水平显著高于对照组(P0.01)。结论成功制备了1株具有良好生物阻断活性的小鼠抗人PD-1单克隆抗体2H7,该抗体能够显著提高T细胞对肝癌细胞Hep G2的杀伤能力。     

~(125)I标记的抗p185抗体的体外代谢与体内生物学分布

目的:研究125I标记的抗p185抗体(鼠mAbA21、人鼠嵌合抗体A21scFv-Fc及单链抗体A21scFv)在体外的细胞代谢和在体内的生物学分布,为其在诊断和治疗高表达p185肿瘤的临床应用提供依据。方法:通过FACS检测抗体是否与高表达膜表面抗原p185的SKOV3特异结合。采用氯胺T法进行碘标记抗体,用细胞放射免疫分析实验,检测抗体在SKOV3细胞中的代谢。建立荷SKOV3裸鼠模型,以观察抗体的体内生物学分布。结果:体外细胞代谢实验表明,抗体在与细胞膜表面结合后,进而被内吞入细胞,在细胞内降解和脱碘,最后被分泌出细胞外。体内药物代谢实验表明,抗体在动物体内肿瘤部位出现选择性放射性浓聚,而无关抗体未出现放射性浓聚,呈全身分布。结论:mAbA21,A21scFv-Fc和A21scFv对于高表达p185的卵巢癌在体内和体外都具有亲和力,可望用作高表达p185肿瘤的诊断和治疗。     

~(125)I标记单克隆抗体竞争结合试验在研究细胞表面抗原中的应用

用氯胺-T法将~(125)I标记到经高压液相纯化的单克隆抗体上进行竞争结合试验,对刺激前后人T细胞白血病细胞株Jurkat和H-TLV-1感染的HUT 102 B2细胞表面活化抗原进行定量检测,结果表明,静止Jurkat细胞不表达Tac抗原(CD25),TLisA1抗原为2.8×10~3/每个细胞,kd值为1.37×10~(-9)M;PMA 20ng/ml刺激24h后Jurkat细胞表面Tac分子为3930/每个细胞,kD值为1.56×10~(-10)M,TLisA1分子增加到2.4×10~4/每个细胞,kD值无明显变化。未刺激HUT     

~(90)γ标记肺癌单克隆抗体的初步研究

放射性核素标记的肿瘤McAb对肿瘤进行治疗是攻克肿瘤的一项重要研究课题。在应用的众多放射性核素中,人们对~(90)γ寄于极大希望。因为此核素只发射β-射线,能量为2.27mev,半衰期为64h,杀伤肿瘤作用强、损伤机体小,对环境污染少。~(90)γ从发生器中以EDTA液洗脱。经加热蒸干、碳化,气化去掉其中的EDTA。乙酸化后pH调至5,利用~(90)γ致辐射,以γ计     

~(125)I标记的卵巢癌单克隆抗体在接种卵巢癌裸鼠体内的分布

卵巢癌是威胁妇女生命的恶性肿瘤之一。建立一些有效的体外诊断、监测以及体内定位技术以确定卵巢病变性质,从而决定治疗方案,是提高治疗效果的关键。     

抗VEGF单克隆抗体生物学活性分析方法的建立及其应用

目的建立抗VEGF单克隆抗体生物学活性分析方法,并对实验条件进行优化及方法学验证。方法从新生儿脐带分离获取人脐静脉内皮细胞(HUVEC),使用第4~6代细胞进行活性检测。HUVEC接种96孔板于CO_2培养箱培养4 h后加入不同浓度的抗VEGF单克隆抗体——VEGF165混合物孵育48 h,加入CCK8显色4 h,酶标仪读取各孔OD450吸光值,采用四参数拟合绘制标准曲线,计算参比品和样品的IC50值,获取样品的相对活性。结果该方法专属性强,仅在抗VEGF单克隆抗体上呈现相应的剂量关系曲线,标准曲线拟合度r~20.99,精密度样品相对活性RSD20%,方法在50%~200%活性范围内具有良好的准确性。用该方法对两个候选药分别进行6次重复性检测,候选药相对活性值分别为(95.80±3.29)%,(101.10±3.81)%。结论本研究建立的HUVEC增殖抑制法特异性高、重复性好,并具有良好的准确性及精密度,可用于抗VEGF单克隆抗体生物学活性的评估。     

~(99)mTc标记抗CEA单克隆抗体肠癌放射免疫断层显像的临床研究

本文报告~(99m)Tc标记抗CEA单克隆抗体对12例大肠癌患者作放射免疫显像的临床结果。我们对一种新方法(Schwarz法)进行改良,制备出~(99m)Tc标记抗体.经Seph-adex G25凝胶柱层析法及纸层析法检测标记率为90％～95％,应用前不需进一步纯化。在注射标记物后6h～20h,用SPECT进行     

黄芩抗内毒素组分的制备及其生物学活性研究

目的:研究从黄芩中分离提取拮抗内毒素(LPS)组分的制备方法及其生物学活性。方法:采用大孔吸附树脂AB-8将黄芩水提物分离成若干组分,应用生物传感器技术检测各组分与LPS的活性中心LipidA的结合活性,ELISA法检测各组分对LPS刺激RAW264.7细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响;由此筛选出能与LipidA结合并对LPS刺激的RAW264.7细胞活化具有抑制作用的组分,进一步观察所得组分对脓毒血症模型动物的保护作用。结果:采用大孔吸附树脂AB-8从黄芩中共分离到5种组分(SbG-1～5),其中SbG-4、SbG-5与LipidA具有较高结合活性,特异性结合值(RU)分别为113.36arc/s、73.75arc/s;SbG-4、SbG-5(100mg/L)可显著抑制LPS(100μg/L)诱导的RAW264.7细胞释放TNF-α(P<0.05);SbG-4能显著提高热灭活大肠杆菌(1.33×1011CFU/Kg)所致脓毒血症小鼠的72h存活率(P<0.05),并呈剂量效应关系。结论:从黄芩中分离提取的具有拮抗LPS活性的SbG-4可抑制LPS刺激的RAW264.7细胞活化,并对脓毒血症模型动物具有显著的保护作用。     

抗人心肌单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步研究

本文以人心肌抗原免疫BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获2株(2F_1和1F_6)分泌抗人心肌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。免疫印迹试验证明,细胞培养上清及小鼠腹水中的特异性抗体均能与分子量为55KD蛋白带结合。抗原阻断试验结果,证明获得的两株单抗是人心肌抗原特异的。染色体数分别为102条和96条。1F_6和2F_1的Ig亚类型均为IgG_1。间接免疫荧光呈肌束膜型,ABC免疫组化显示肌束膜和肌原型(胞浆)。     

抗CEA单克隆抗体-~(111)In标记及其临床应用

本研究利用放射性核素~(111)In标记抗CEA单抗进行放射免疫显像,并将抗体标记技术药盒化.同时对药盒稳定性、安全性及与肿瘤细胞结合力等方面进行了研究。结果表明,本药盒可供放射免疫显像研究。 利用此药盒对9例临床上难以诊断的消化系统病人进行了放射免疫显像。与病理对     

~(125)Ⅰ标记眼镜蛇毒组份Ⅲ在小白鼠体内的组织分布

目的 观察中华眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒组份III在小鼠体内的分布情况,探讨组份III在动物体内的分布特点。方法 用氯胺-T法对眼镜蛇毒组份III进行碘化标记,用放射性核素示踪动力法检测血液中的药物浓度,以放射性参与量(脏器与血液放射比)的比值作为组份III在组织中分布的依据。结果 小鼠尾静脉注射125I-组份III后,2h及4h放射性参与量大于1的器官为肝脏、肾脏、肺脏、心脏和肌肉,其中以肾脏分布最高,且4h放射性参与量高于2h。结论 小鼠静注组份III后2h,以肾脏分布最高,肝脏与肺脏的放射性参与量也较高,尿中含量很高。     

抗人心肌球蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性初步研究

作者以人心肌球蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得2株(2F1和1F6)分泌抗人心肌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经ELISA检测细胞培养液上清和小鼠诱导的腹水,其抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)和10~(-5)～10~(-6)。抗原区带测定结果,细胞培养液上清及小鼠腹水中的特异性抗体均能与分子量为65 000的蛋白质结合,经酶联二抗及底物处理,呈一条明显的显色带,阴性对照无显色带。抗原阻断     

一株抗人BLys单克隆抗体的制备及其生物学功能研究

研究以稳定高表达BLys的基因转染细胞L-BLys为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,L-BLys细胞和天然表达BLys的HL60细胞为抗体筛选阳性细胞株,经免疫荧光标记分析反复筛选和以有限稀释法反复克隆化培养。将获得的克隆4F7培养细胞注射入经致敏的小鼠体内,-抽取的腹水经Protein G亲和层析柱纯化。将纯化所得的抗体作用于经BLys分子刺激的扁桃体B细胞,3H-TdR检测细胞的增殖效率。结果获得1株持续、稳定分泌鼠抗人BLys单克隆抗体的杂交瘤细胞株。该细胞株所分泌的抗体能阻断膜型和可溶性BLys分子对扁桃体B细胞的促增殖作用。对这株单克隆抗体生物学功能的研究表明,这株单抗能特异性识别人BLys分子及阻断膜型和可溶性BLys发挥生物学活性。     

抗多胺(polyamine)单克隆抗体的制备及临床应用的研究——Ⅰ.抗精脒(Spermidine)单克隆抗体的制备

用碳二亚胺作为接合剂,致精脒-牛血清白蛋白缩合剂制成人工抗原(Spd-BSA),以此复合抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫脾细胞与Sp2/0-Ag-14(Sp2)细胞进行融合实验。经酶联免疫测定法(ELISA)和14-G-精脒放射免疫分析法筛选,获得5个分泌抗SpD单     

γ—干扰素的~(125)I偶联标记

<正>小分子量细胞因子的~(125)I同位素标记是研究细胞因子作用机理及其检测十分有用的技术。由于细胞因子分子量通常较小,~(125)I的直接偶连常导致生物活性丧失。我们在~(125)I标记重组人γ-干扰素的实验中,比较了几种连接方法后,用自制的Bolton-Hunter酰化试剂标记取得了较满意的结果。现报道如下。