RT-PCR法检测肝癌患者周围和肝静脉血AFP mRNA及其临床意义

目的：通过对外周静脉因和肝静脉血AFPmRNA表达检测的比较，旨在寻找一种比较好的监测肝癌细胞转移的方法，并了解肝癌细胞在体内的转移机制。方法：抽取肝癌患者外周及肝静脉血，采用RT－PCR方法检测AFPmRNA，比较二者的阳性率。结果：在肿瘤直径＞5cm的肝癌患者，其外周血，肝静脉血AFPmRNA表达差异无显著性（P＝0．618），而在直径＜5cm的肝癌患者，其二处血AFPmRNA表达差异有显著性（P＝0．028）。结论：肝癌直径＜5cm的患者，直接检测肝静脉血能更准确地反映肝癌细胞肝内播散的情况。肝癌直径＞5cm的患者中，外周血，肝静脉血AFPmRNA表达差异无显著性，这部分患者的外周血AFPmRNA可代表其肝静脉血中AFPmRNA的状况。     

原发性肝癌患者外周血甲胎蛋白mRNA表达水平与临床参数的关系

目的　了解肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白 (AFP)mRNA的表达水平与不同临床参数的关系。方法　采用realtimeRT -PCR技术 ,定量检测 5 6例肝细胞癌、17例慢性活动性肝炎、2 1例肝硬化和 2 0名健康志愿者外周血AFPmRNA的表达水平。结果　 5 6例肝癌患者外周血AFPmRNA的平均表达水平为 34 6 44 .6± 9490 5 .4copies/μgRNA ,其中 2 9例为阳性 ;17例慢性活动性肝炎、2 1例肝硬化患者和 2 0名健康志愿者外周血均未检测到AFPmRNA的表达。结论　肝癌患者外周血AFPmRNA表达水平与肝癌分期、门静脉癌栓及肝外转移密切相关 ,与肿瘤直径、数目及血清AFP水平无明显相关 ,可作为预测肝癌发生远处转移的一个可靠指标     

Claudin-3 mRNA在前列腺癌组织中的表达及意义

目的探讨Claudin-3 mRNA在前列腺癌组织中的表达及其意义。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测34例前列腺癌组织和12例前列腺增生组织的claudin-3 mRNA的转录水平,并结合相关指标进行分析。结果Clau-din-3 mRNA在前列腺癌组织中的表达明显高于良性前列腺增生组织,差异有显著性(p<0.05)。Claudin-3 mRNA在前列腺癌中的表达与肿瘤病理分级和TNM分期无相关关系(p>0.05)。结论Claudin-3 mRNA表达上调可能与前列腺癌的发生相关。     

人肝癌组织中APRIL及其受体mRNA水平的定量测定

[摘要]目的：采用实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ—PCR）技术分析肝癌组织中增殖诱导配体（APRIL）及其受体mRNA的表达水平。方法：在APRIL及其受体基因的高保守区设计相应引物和荧光探针，实时检测PCR产物的荧光强度。根据标准品建立的标准曲线。由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA准确含量，并以靶基因和内参B2MmRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。     

原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性AFP mRNA检测及意义

目的 寻找一种敏感的方法以检测原发性肝癌患者外周血中肝细胞特异性ＡＦＰ ｍ ＲＮＡ。方法 巢式ＲＴ－Ｐ;ＣＲ检测外周血有核细胞成分中ＡＦＰ ｍＲＮＡ。结果 ４９例肝癌中１７例检出ＡＦＰｍＲＮＡ,阳性率３５％,其中９例证实有转移的６例阳性。１９例肝硬化,６例急性肝炎,８例慢性肝炎,５例肝良性肿瘤,６例肝内胆管癌,１１例肝转移癌,１３例健康对照组均为阴性。     

Real time RT-PCR定量检测AFP mRNA表达水平方法的建立

目的　建立realtime逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测AFPmRNA表达水平方法。方法　提取BEL740 2细胞总RNA ,进行RT PCR扩增并纯化AFP基因片段 ,构建重组质粒 ,建立realtimeRT PCR检测AFPmRNA表达水平方法。结果　重组质粒的阳性克隆效率为 81.8% ,经酶切鉴定 ,目的基因片段已插入PMD 18T载体内 ,得到realtimeRT PCR动力学曲线。结论　成功建立了realtimeRT PCR定量检测AFPmRNA表达水平方法。     

肝细胞癌及癌旁组织中白蛋白mRNA和甲胎蛋白mRNA的表达

目的：检测肝细胞癌及癌旁组织白蛋白ｍＲＮＡ和甲胎蛋白ｍＲＮＡ表达，为外周血肝细胞癌转移指标提供依据。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测１８例肝细胞癌和１３例癌旁肝组织中白蛋白ｍＲＮＡ。结果：①白蛋白ｍＲＮＡ在１８例癌及１３例癌旁组织中均有高表达；②白蛋白ｍＲＮＡ检出率明显高于第一轮ＰＣＲ甲胎蛋白ｍＲＮＡ（Ｐ〈０．００１）；③白蛋白ｍＲＮＡ和甲胎蛋白ｍＲＮＡ可同时在癌组织中表达。结论：选择检测白蛋白ｍＲＮ     

甲胎蛋白异质体检测在肝癌诊断中的意义

目的研究甲胎蛋白异质体检测在肝癌诊断中的意义。方法选取2014年3月~2015年2月期间本院收治的30例肝癌患者作为本次的研究对象作为A组,另选取同期收治的肝硬化、慢性肝炎患者作为B、C组,各30例,并将三组患者的甲胎蛋白(AFP)总含量和甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)在AFP的比例及阳性率进行比较。结果 A组肝癌患者的AFP总含量为(537.52±36.11)ng/m L,其AFP-L3在AFP的比例为(0.521±0.071)%,与B、C两组比较具有显著性差异(P0.05)。且A组肝癌患者的AFP阳性率为86.67%,AFP-L3阳性率为70.00%,与B、C两组比较均有显著性差异(P0.05)。结论甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体等检测指标在肝癌诊断中的临床价值显著,临床中可依据甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体等检测指标,以此为肝癌的确诊,为临床中制定医疗方案提供有力依据。     

COX-2mRNA在尖锐湿疣组织中的表达及其意义

目的研究尖锐湿疣组织中环氧化酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）的表达及探讨其临床意义。方法采用荧光定量聚合酶链反应法测定25例尖锐湿疣患者组织和25例正常对照者皮肤COX-2mRNA的定量表达。结果尖锐湿疣患者组织和正常对照皮肤中均有COX-2mRNA的表达,但尖锐湿疣患者组织中COX-2mRNA的表达显著高于正常对照者皮肤内的表达水平（P〈0．01）。结论COX-2可能参与了尖锐湿疣的发病过程。     

PTEN mRNA和Smad4 mRNA在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的:探讨PTEN mRNA、Smad4 mRNA在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法:采用FQ-PCR法检测94例PTC及癌旁组织,29例甲状腺腺瘤组织中PTEN mRNA和Smad4 mRNA的表达情况。结果:PTC高、中、低转移变型组PTEN mRNA和Smad4 mRNA的表达明显低于甲状腺腺瘤组及癌旁组,差异具有统计学意义(P0.05);且PTEN mRNA表达与Smad4 mRNA表达呈正相关(P0.05)。结论:PTEN和Smad4在PTC的发生发展过程中存在协调关系,二者的低表达可作为判断PTC预后不良的指标。     

乙酰肝素酶在原发性肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的 研究乙酰肝素酶在原发性肝细胞肝癌中的表达及临床意义.方法 免疫组织化学S-P法.结果 原发性肝癌45例中乙酰肝素酶表达阳性26例(57.8%);在高分化(6/17)、无肝内转移(12/28)和无淋巴结转移(14/31)的肝癌中乙酰肝素酶阳性表达率明显低于低分化(20/28)、肝内转移(14/17)和淋巴结转移(12/14)的肝癌(P＜0.05).结论 乙酰肝素酶可能是原发性肝细胞肝癌的生物学行为和预后的重要标记物,阳性表达者可能恶性程度高和预后不良.     

原发性肝癌微血管密度和血管内皮细胞生长因子表达及意义

目的 :探索原发性肝癌组织中微血管密度 (MVD)和血管内皮细胞生长因子 (VEGF)表达的临床意义。方法 :采用 S- P法检测 6 5例肝癌组织、癌旁组织 (1.5 cm)及正常肝组织中 MVD和 VEGF的表达。结果 :肝癌组织和癌旁组织 MVD计数分别为 14 .2 9± 3.74、11.13± 2 .89,VEGF表达分别为 84 .1%、75 .9% ,与正常肝组织中MVD、VEGF比较差异均有显著性 (P<0 .0 1)。 MVD高和 VEGF阳性者与肝癌分化程度、有无完整包膜及静脉癌栓密切相关 ,MVD高、VEGF阳性者预后明显较 MVD低、VEGF阴性者差 (P<0 .0 5 )。结论 :联合检测 MVD和 VEGF有助于临床评估病情、判断预后 ,并为进一步综合治疗提供依据。     

HCA587基因在肝细胞癌中的表达及其生物信息学分析

目的 :本研究检测肝细胞癌抗原 5 87( HCA5 87)基因 m RNA在肝细胞癌 ( HCC)中的表达情况 ,结合病人临床资料进行分析 ,探讨 HCA5 87基因与 HCC病人临床指标及转移与复发的关系 ,为 HCA5 87基因编码蛋白用于 HCC治疗提供依据。方法 :用反转录 -聚合酶链反应 ( RT-PCR)方法对 HCC病人的癌组织和相应癌旁组织及对照 (肝硬化和正常肝组织 )中 HCA5 87m RNA的表达进行了检测 ,为验证结果的可靠性 ,随机选取RT-PCR呈阳性的产物 4例进行 DNA序列测定 ,结合 AFP、抗 HCV、HBs Ag、肿瘤直径、分化程度等临床指标进行分析。并通过互联网对 HCA5 87进行生物信息学分析。结果 :46例 HCC病人中 ,HCA5 87的阳性表达率为3 2 .6% ( 1 5 /4 6) ,相应的癌旁组织中均为阴性 ;所测的 1 0例肝硬化和 1 0例正常肝组织均未检测到 HCA5 87的表达。 DNA测序结果表明 RT-PCR产物确为 HCA 5 87c DNA。 HCA5 87的表达与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、血清甲胎球蛋白 ( AFP)水平、HBV和 HCV感染无显著相关性 ( P >0 .0 5 )。在部分 AFP正常 ( <2 5 ng/L)HCC病人中存在 HCA5 87基因的表达。HCA5 87与 MAGE C2、MAGE E1、CT1 0的分子有很大的同源性 ;它精确定位于染色体 Xq2 7.2上 ,HCA5 87是一种新的 MAGE家族中的 CT抗原。结论 :H     

肝癌组织中浸润树突状细胞的数量和表面分子表达的临床意义

目的:研究人肝癌组织中浸润树突状细胞(DC)的数量和表面分子表达的临床意义.方法:原发性肝细胞癌(肝癌)术后组织标本30例,采用免疫组化方法(即用型两步法SupervisionTM)检测肝癌组织中DC标志蛋白S-100的表达;从肝癌组织中分离浸润性单个核细胞,流式细胞术检测DC的表面分子表达,并用RT-PCR技术检测肝癌组织IL-10、TGF-β1和VEGF-AmRNA.结果:肝癌组织中DC的数量少,高分化肝癌组织中DC浸润数量[(27.22±15.38)个/HPF]高于低分化肝癌[(11.92±8.56)个/HPF](P＜0.01);肝癌组织中浸润DC的表面分子如CDla、HLA-DR、CD80、CD86和CD54等MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子,共刺激分子和黏附分子存在低表达或不表达,与肝癌的分化程度密切相关.在mRNA水平上,IL-10、TGF-β1和VEGF-A基因在肝癌组织中的表达显著高于正常肝组织(P＜0.001,P＜0.05).结论:肝癌组织中浸润DC的数量减少并存在功能缺陷,与肝癌分化程度密切相关.     

Ras和p16基因在肝癌组织中的表达与临床意义

目的：观察基因ras和p16在肝癌组织中的表达，探讨其在肝癌术后复发及预后中的作用。方法：应用免疫组化S－P法，检测53例手术切除肝癌组织和12例正常肝组织的ras和p16表达及与肝癌临床病理指标、术后复发及预后的关系。结果：（1）ras在肝癌和正常肝组织中的阳性表达率分别为66．0％和34．0％，ras表达与肿瘤大小、有无肝内转移密切相关（P均＜0．05）。ras阳性、阴性表达病例3年复发率分别为68．8％、38．9％，3年生存率分别为37．1％、66．7％（P＜0．05）。（2）p16在肝癌和正常肝组织中的阳性表达率各为47．2％、100．0％，p16表达与有无肝内转移、组织分化密切相关（P均＜0．05）。p16阳性、阴性表达病例3年复发率分别为48．0％、67．9％，其3年生存率分别为64．0％、32．1％（P均＜0．05）。（3）ras和p16在肝癌中的表达密切相关（P＜0．01），p16阳性ras阴性与p16阴性ras阳性表达病 列3年复发率分别为35．7％、79．2％，3年生存率分别为71．4％、29．2％，差异有极显著性（P＜0．01）。结论：联合检测p16和ras的表达可作为判断肝癌术后复发及预后的有效指标，多基因分析比单基因分析更有价值。     

CK20 mRNA在大肠癌患者外周血中阳性表达的临床意义

目的：研究大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为肿瘤细胞血行播散的标志，探讨CK20 mRNA阳性表达与肿瘤病理指标的关系，观察大肠癌患者手术前、后外周血中CK20 mRNA表达的变化情况。方法：采用巢式逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）的方法，对大肠癌42例、原发性肝细胞肝癌5例、对照组（非癌肿）10例患者手术前、后不同时间外周血中肿瘤细胞的靶基因CK20 mRNA表达进行检测。结果：对照组（非癌肿）10例及原发性肝细胞肝癌5例手术前、后外周血中CK20 mRNA均为阴性表达。大肠癌组42例，手术前外周血中CK20 mRNA阳性表达率为50．0％（21／42），手术后48h外周血中CK20 mRNA阳性表达率为59．5％（25／42）。大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达率与肿瘤细胞病理分化程度无关，与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移有关。结论：大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为肿瘤细胞血行播散的标志，有助于判断大肠癌的预后及鉴别原发性肝细胞肝癌和大肠癌肝转移。手术操作会促使肿瘤细胞向血液中播散，手术过程中应加强预防措施以减少癌细胞的播散。     

p14ARF、ARF-BP1、c-myc在肝细胞癌中的表达及意义

目的:探讨肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)组织及其癌旁肝组织中p14ARF、ARF-BP1、c-myc的表达及意义.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术、免疫组化技术对45例HCC组织及其癌旁肝组织中p14ARF、ARF-BP1、c-myc的mRNA表达和p14ARF、c-myc蛋白表达情况进行检测.结果:p14ARF、ARF-BP1、c-myc的mRNA在HCC组织中阳性表达分别为80.00%、86.67%、84.44%,在癌旁肝组织中分别为11.11%、20.00%、53.33%,三者的mRNA在癌组织中呈过表达,明显高于癌旁肝组织(P＜0.01).p14ARF、c-myc蛋白在HCC组织中表达分别为78.38%、75.68%,明显高于癌旁肝组织的13.51%(P＜0.01)和51.35%(P＜0.05).结论:p14ARF、ARF-BP1、c-myc在HCC组织中高表达,这种高表达可能与HCC的发生有相关性.     

上皮性卵巢癌多药耐药基因的表达及其临床意义

目的探讨上皮性卵巢癌多药耐药（ＭＤＲ１）基因的表达及其临床意义。②方法利用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测３３例初治上皮性卵巢癌病人肿瘤组织ＭＤＲ１基因表达情况，同时用ＭＴＴ比色法检测肿瘤细胞对抗癌药的敏感性。③结果１０例（３０．３％）卵巢癌病人ＭＤＲ１基因表达阳性。体外试验表明，ＭＤＲ１基因表达阳性卵巢癌细胞对多种抗癌药耐药，ＭＤＲ１基因的表达与卵巢癌细胞分化程度有关，但与病人的年龄、组织学类型及分期无关。④结论ＭＤＲ１基因的表达可作为判断卵巢癌病人预后的一个指标     

原发性肝癌患者庚型肝炎病毒感染的临床研究

目的：探讨原发性肝癌患者庚型肝炎病毒（HGV）感染的分布。方法：根据中国株HGV5’端非编码序列设计引物，采用逆转录套式聚合酶链反应方法。用此技术对107例原发性肝癌、45例慢性肝炎、43例肝硬化患者血清进行了检测分析。结果：107例原发性肝癌患者中有10例HGV－RNA阳性（9．3％）；45例慢性肝炎患者中有5例HGV－RNA阳性（11．1％）；43例肝硬化患者中有3例HGV－RNA阳性（7．0％）。结论：庚型肝炎病毒感染可能与原发性肝癌发生有一定关系，但不是引起肝癌的主要的因素。     

肝细胞肝癌中Galectin-9 mRNA表达及其临床意义

目的：探讨Galeetin-9 mRNA在肝细胞肝癌（简称肝癌）中的表达及其临床意义。方法：用TRIZOL法从89例肝癌患者手术切除的肝癌组织及癌旁组织中提取总RNA并反转录成cDNA,荧光定量PCR检测其Galetin-9 mRNA的表达量。结果：癌组织中的Galectin-9 mRNA表达较癌旁组织表达下降,仅为癌旁组织的0．504倍,两者比较差异有统计学意义（P〈0．001）;癌组织中的Galecin-9 mRNA表达的程度与肿瘤的大小、术前转移、病理分化、TNM分级、术后复发存在相关性（P〈0．05）;而与性别、年龄、HBsAg、AFP、肝硬化、包膜完整性无相关性（P〉0．05）。结论：Galectin-9 mRNA的表达水平与肝癌的病理分化、转移、复发有关,可能成为诊断肝癌及判断预后的新生物学指标或治疗肝癌的潜在靶点。