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目的克隆人小细胞肺癌抗体/T细胞受体嵌合基因。方法应用聚合酶链反应(PCR)技术将人小细胞肺癌单克隆抗体的变区VH、VK与T细胞受体(TCR)恒区Cα、Cβ进行拼接,构建成VHCβ、VKCα嵌合TCR,并分别克隆至pMAM、pXT1真核表达载体。结果应用PCR中重叠延伸剪接(SOE)方法,能简化基因拼接步骤;该嵌合基因的克隆有助于对肿瘤免疫治疗新途径的探索。 相似文献
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乳腺癌MTS1/p16基因缺失及表达异常的初步研究 总被引:3,自引:0,他引:3
采用PCR和免疫组化等方法对51例乳腺肿瘤MTS1/p16基因的缺失及表达异常情况进行了分析,结果显示,MTS1/p16基因在乳腺癌中的阴性表达率为32.6%(15/46),而其中60%(9/15)因纯合性缺失而无转录和表达产物,占总检测病例的19.5%(9/46)。MTS1/p16基因缺失的病例多为淋巴结转移阳性,组织浸润程度高和分化程度低,提示MTS1/p16基因的纯合性缺失与乳腺癌的发生发展及恶性程度密切相关。另外,在p16蛋白阴性表达的病例中除了基因的纯合性缺失造成的蛋白失表达外,还有40%(6/15)的病例有MTS1/p16基因的扩增但没有表达产物,则可能是DNA的异常甲基化,基因位移,点突变等其它基因变异作用的结果,进一步的研究正在进行中 相似文献
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耐顺铂人肺腺癌细胞系A549DDP的建立及耐药机制 总被引:24,自引:2,他引:24
采用递增顺铂(DDP)浓度的方法,体外连续培养建成一株耐DDP的人肺腺癌细胞系A(549)DDP,耐DDP为亲代A(549)的24.4倍。在无DDP的培养基中培养5月余,其耐药性仍稳定。A(549)DDP细胞内谷胱甘肽(GSH)水平显著高于亲代细胞(P<0.01)。BSO耗竭细胞内GSH后,A(549)DDP细胞对DDP敏感性增加5倍,BSO对亲代A(549)细胞无增敏作用,A(549)DDP细胞GST酶同功酶GST—π含量较A(549)高1.6倍,却无GST基因扩增,表明GSH/GST解毒系统参与A(549)DDP耐药性的产生。实验结果亦示A(549)DDP与卡铂及氨甲喋呤间存在交叉耐药,而与易产生MDR或atMDR之ADM、VCR、VP-16、VM-26无交叉耐药,A(549)细胞无P-糖蛋白(P-gp)表达,Southernblot研究A(549)DDP无mdrlTopoⅡ基因扩增,提示A(459)DDP细胞系与MDR及at-MDR无交叉耐药。 相似文献
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目的 通过分析山东青岛地区宫颈组织中HPV16型E6和E2基因突变情况,探讨其与该地区宫颈癌的关系。方法 从104例青岛地区宫颈疾病组织中提取DNA作为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)技术筛选出高危型HPV及HPV16阳性标本,扩增出HPV16型E6、E2全长基因,PCR产物纯化后测序,与德国HPV标准株进行比对分析。结果 宫颈组织中高危型HPV阳性率为93.27%(97/104),HPV16阳性率为69.23%(72/104)。HPV16阳性标本中扩增出E6基因37例,有5例与标准株序列相同,32例存在突变,其中25例突变型别为T178G或T178A(D25E)。在E2基因全序列测序中,23例均存在C3684A(T-K),14例同时存在T3524C、C3684A(T-K)和C3787A(D-E),9例同时存在A2926G、C3159A(T-K)、G3249A(R-Q)、T3384C(I-T)、C3410T(P-S)和C3684A(T-K)。结论 山东青岛地区宫颈癌患者HPV16型E6、E2基因与德国标准株比较存在多处变异,E6与E2基因突变可能存在相关性。 相似文献
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LOSSOFHETEROZYGOSITYINVOLVINGTHEAPCTUMORSUPPRESSORGENEINHUMANCOLORECTALCARCINOMA¥XuWenhuai;徐文怀;YangDingcheng;杨定成(Departmentof... 相似文献
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白细胞介素—12基因与HSV—TK基因联合治疗小鼠肝癌的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 观察白介素12(IL12) 基因与单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVTK) 基因联合治疗小鼠肝癌的疗效。方法 将IL12 基因和HSVTK 基因分别转导入小鼠肝癌MM45T-Li 细胞,获稳定表达的MM45T-LiIL12 和MM45T-LiTK。于Balbc 小鼠皮下接种MM45T-Li 细胞2 ×105 ,待肿瘤长至0-5~1-0 cm 时,将MM45T.LiTK细胞与经60 Co 照射的MM45T.LiIL12 细胞混合,行瘤内注射治疗,于治疗次日,腹腔注射Ganciclovir(GCV40 mg·kg- 1·d- 1) ,连续注射10 天。按同样方法观察对远侧接种的肿瘤的治疗作用,并通过细胞毒T淋巴细胞(CTL) 活性检测及免疫组化染色,探讨其抗肿瘤机制。结果 MM45T.LiIL12 与HSVTKGCV 联合治疗,肿瘤体积显著缩小,生长受到抑制,疗效显著优于单独治疗组( P< 0.01) 。有60% 小鼠的肿瘤完全消退,且观察2 个月无肿瘤生长。两者联合治疗,对远侧肿瘤也具有明显的抗肿瘤作用( P<0.05) 。MM45T.LiIL12 与HSVTKGCV系统联合诱导的小鼠CTL明显高于单 相似文献
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利用Genescan分析TCR Vβ亚家族CDR3长度的方法检测AML的T细胞克隆性 总被引:11,自引:0,他引:11
目的 分析急性髓性白血病(AML)的T细胞克隆性,方法 利用反转-多聚酶链反应(RT-PCR)法分析5例AML,8例正常人的外周血单个核细胞和T细胞株Jurkat的T细胞受体TCRVβ24个亚家族的互补决定区3(CDR3)长度,PCR产物进一步进行基因扫描(genescan)和核苷酸序列分析,结果 RT-PCR分析显示8例正常人外周血单个核细胞除Vβ20外,存在各Vβ亚家族的T细胞,而5例病人则仅 相似文献
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目的 通过体内外实验研究人源化抗表皮生长因子受体(EGFR)单抗尼妥珠(h-R3)对耐多西紫杉醇(DTX)人肺腺癌细胞株(SPC-A1/DTX)化疗敏感性的调变作用。方法 免疫组化法及流式细胞仪测定人肺腺癌细胞株SPC-A1和SPC-A1/DTX肺腺癌细胞株表面EGFR的表达强度,突变富集液相芯片法检测其EGFR、K-Ras和PI3KCA基因的突变情况,流式细胞仪检测h-R3对细胞周期的影响以及h-R3联合DTX对细胞凋亡的影响,MTT法检测h-R3与DTX的联合指数(CI),裸鼠SPC-A1/DTX移植瘤模型观察联合组及单药组对裸鼠抑制瘤模型肿瘤的增殖情况并计算瘤重抑制率(TWI)。结果 SPC-A1细胞株EGFR表达强度为(+,21.53%),SPC-A1/DTX细胞株为(+++,92.47%);SPC-A1/DTX细胞株的PI3KCA基因外显子20突变,SPC-A1细胞株无突变。h-R3作用24h后,SPC-A1/DTX细胞G1 期阻滞较SPC-A1细胞更显著(P=0.0002);h-R3及DTX联合用药后SPC-A1/DTX细胞株的凋亡率为(24.7±0.5)%,明显高于h R3单药组的(14.5±0.1)%,而单用DTX后的凋亡率无显著升高,SPC-A1细胞株单药组及联合组凋亡率均有升高(P<0.05);100μg/ml及200μg/mlh R3与DTX联合对SPC-A1或SPC-A1/DTX细胞株的增殖抑制具有协同作用;联合组对SPC-A1/DTX肺腺癌荷瘤裸鼠的TWI为71.7%,高于DTX组的52.6%和h-R3组的36.9%。结论 h-R3能明显增加耐DTX的人肺腺癌细胞株化疗的敏感性,其机制可能为h-R3具有G1期阻滞和逆转耐药细胞凋亡抵抗的作用,并且其疗效与耐药细胞较亲本细胞的EGFR表达增强有关,而耐药细胞的PI3KCA基因突变对疗效的影响不显著。 相似文献
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TSP、VEGF与大肠癌血管生成、转移关系的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 分析小板反应素(thrombospondin,TSP)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达和大肠癌血管生成、远处转移之间的关系。方法 对47例大肠癌手术标本采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TSP1和TSP2mRNA表达,并采用免疫组化法检测微血管计数(microvessel count,MVC)和VEGF蛋白表达。结果 大肠癌MVC和VEGF表达的程度呈正相关(r=0.438,P=0.002),在淋巴结转移和远处转移者高于无转移者(P〈0.05)。TSP2mRNA表害和MVC(r=-0.362,P=0.01)、VEGF表达(r=-0.322,P〈0.05)有明显的负相关。TSP2mRNA表达率在远处转移病人中低于没有远处转移者( 相似文献
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目的 观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表皮生长因子受体(EGFR)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况以及与临床病理参数的关系。方法 免疫组织化学法检测76例NSCLC组织和14例非恶性肺组织EGFR和VEGF的表达。结果 EGFR和VEGF在76例NSCLC组织中的阳性表达率分别为47.4%(36/76)和51.3%(39/76),在14例非恶性肺组织表达率分别为714%(1/14)和7.14%(1/14),两组EGFR、VEGF表达差异显著(P<0.05)。Ⅲ期NSCLC组织的EGFR表达率为56.8%(25/19),高于Ⅰ ~Ⅱ期患者的31.3%(10/32),两者差异显著(P<0.05),EGFR表达与其他临床病理参数均无关;淋巴结阳性的NSCLC组织VEGF表达率为77.8%(28/34),明显高于淋巴结阴性的27.5%(11/42),两者差异显著(P=0.000),VEGF表达与肿瘤分期、性别、年龄、肿瘤细胞分化等临床病理参数亦无关。EGFR和VEGF在NSCLC组织中表达无相关性(P>0.05)。结论 NSCLC组织中EGFR和VEGF常常为高表达,EGFR表达与肿瘤的TNM分期有关,VEGF与淋巴结转移有关;但是EGFR和VEGF的表达之间无相关性。 相似文献
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目的:通过对比微滴式数字 PCR(dropletdigitalPCR,ddPCR)和突变扩增阻滞系统 PCR(amplificationrefrac torymutationsystemPCR,ARMS PCR)检测非小细胞肺癌(non smallcelllungcancer,NSCLC)表皮生长因子受体(epi dermalgrowthfactorreceptor,EGFR)基因 T790M突变的检测效能,综合分析两种检测方法的优势及适用范围。方法: 回顾性收集 115例 NSCLC患者的标本,同时使用 ddPCR和 ARMS PCR两种方法检测 EGFR基因 T790M突变状态, 比较两种方法的检测结果,并分析不同样本类型对 ddPCR检测结果的影响。结果:ddPCR检测 T790M阳性率为 65.2%,ARMS PCR阳性率为 27.8%,ddPCR检测敏感性显著高于 ARMS PCR(P<0.05),两种方法检测一致率为 62.6%。ddPCR+ARMS-样本的 T790M平均阳性微滴数和平均突变丰度(11,0.35%)均显著低于 ddPCR+ARMS +样本(632.3,17.7%)。ddPCR检测基因组 DNA和外周血游离 DNA阳性率分别为 55.9%和 78.7%,不同样本类 型 T790M突变阳性微滴数和突变丰度无显著差别。结论:ddPCR和 ARMS PCR均可用于 NSCLC患者 EGFR基因 T790M突变检测,二者具有良好的一致性,ddPCR具有更高的灵敏性,在检测突变丰度较低的样本方面具有优势。 相似文献
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肺癌组织抑癌基因P53异常分析 总被引:6,自引:0,他引:6
P53基因5-8外显子PCR产物的DNA序列分析及石蜡包埋组织P53鼠抗人单克隆抗体(Do-1)免疫组化分析发现:57例原发性肺癌中37例有P53蛋白积累。DNA/PCR产物直接测序发现:9/12例小细胞肺癌(SCLC),8/15非小细胞肺癌(NSCLC)P53基因突变,错义突变为12/17,G→T突变为6/17。免疫组化发现:11/19例SCLC,19/37例NSCLC P53蛋白染色阳性。4/ 相似文献
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PRELIMINARY STUDY OF RETROVIRAL MEDIATED TRANSFER OF THE HUMAN mdr-1 GENE INTO MURINE AND HUMAN HEMATOPOIETIC STEM/PROGENITOR CELLS 总被引:1,自引:0,他引:1
PRELIMINARYSTUDYOFRETROVIRALMEDIATEDTRANSFEROFTHEHUMANmdr1GENEINTOMURINEANDHUMANHEMATOPOIETICSTEM/PROGENITORCELLSFengKai冯凯Pe... 相似文献