高度浓缩生长因子对MC3T3-E1成骨细胞生物学性能的影响

目的：观察高度浓缩生长因子（concentrated growth factor,CGF）对成骨细胞生物学性能的影响。方法：将MC3T3-E1细胞在CGF环境下进行培养,并设立空白对照组。扫描电镜观察成骨细胞在CGF表面的附着;培养1、4、7 d后,检测细胞增殖情况以及碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色观察矿化结节和成骨相关基因Runx2的表达。CGF浸出液培养细胞24 h后,以鬼笔环肽染色观察细胞骨架的形态变化。采用 SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果：CCK-8比色显示,培养1、4、7 d,在相同时间点,实验组与对照组相比,CGF细胞增殖活性显著增强（P< 0.05）。ALP活性检测显示,培养1 d后,实验组与对照组无显著差异（P>0.05）;培养4、7 d后,实验组与对照组相比,ALP活性具有显著差异（P<0.05)。茜素红染色显示,CGF组钙化结节数量增多且面积较大。鬼笔环肽染色和DAPI染色可见,CGF组中细胞数量增多,细胞铺展面增大,肌动蛋白形态更为清晰。CGF可促进Runx2 mRNA表达（P<0.05）。结论：CGF可促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化以及Runx2的表达。     

猪釉基质蛋白对MC3T3-E1成骨细胞增殖分化的影响

目的：探索釉基质蛋白（ＥＭＰｓ）促进成骨细胞增殖分化的作用,为进一步研究提供基本数据。方法：选择ＭＣ３Ｔ３－ＥＩ成骨细胞株,利用体外细胞培养方法,分别加入不同浓度的ＥＭＰｓ α－ＭＥＭ培养液,于培养０、１、２、３、４、５、６ｄ进行细胞计数,采用ＳＡＳ软件对细胞计数数据作单因素方差分析。结果：ＥＭＰｓ各组细胞计数均高于阴性对照（Ｃ）组（Ｐ〈０．０１）。第２天,１００μｇ／ｍｌ ＥＭＰｓ组的细胞计数高     

新型根管封闭剂对MC3T3-E1成骨细胞的细胞毒性评估

目的：评估新型根管封闭剂RealSeal sealer、GuttaFlow对MC3T3-E1成骨细胞的细胞毒性,并与传统的AH Plus比较。方法：制备RealSeal sealer、GuttaFlow和AH Plus（固化7d）的材料浸提液,倍比稀释为4种浓度：100%、50%、25%、12.5%;MC3T3-E1细胞于其中分别培养24h和72h,CCK-8法检测细胞存活率,评价不同材料的细胞毒性。结果：在实验期内,RealSeal sealer组的细胞存活率显著低于AH Plus、GuttaFlow（P〈0.05）,AHPlus、GuttaFlow和阴性对照组间无显著差异。结论：在本实验条件下,RealSeal sealer对MC3T3-E1成骨细胞的毒性最强,而GuttaFlow和AH Plus几乎无细胞毒性。     

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??Objective??To explore the effect of different concentration of titanium-copper alloy on the differentiation of MC3T3-E1 cells and to find the best mass fraction of copper promoting cell differentiation. Methods??Different concentrations of titanium-copper alloy were divided into groups. Mark cp Ti with Group1??as control group??mark Ti-2 wt% Cu with Group 2??Ti-5wt% Cu with Group 3??and Ti-10 wt% Cu with Group 4??as experiment groups. The MC3T3-E1 cells were inoculated into a 24-well culture plates with prepared samples for co-culture at a density of 2×104 per well. The expression of ALP activity of osteoblasts was detected by micro-enzyme-labeled method at 3 d??5 d??10 d and 15 d. The expression of type I collagen and osteocalcin in the supernatant of the co-cultured osteoblasts were detected by ELISA at 7 d??14 d and 21 d. All data were analyzed by means of  one-way ANOVA with SPSS 20.0 software package. Results??Ti-2wt% Cu was the most favorable for the expression of alkaline phosphatase activity ??P??0.05??and reached the maximum at the 10th day after co-culture. Ti-5wt% Cu was the most favorable for the expression of type I collagen protein??P??0.05??and reached the maximum at the 7th day after co-culture. Ti-5wt% Cu was the most favorable for the expression of osteocalcin??P??0.05?? and reached the maximum at the 14th day. Conclusion??Compared with cp Ti??low concentration of Ti-Cu ??2wt%??5wt% ?? alloy promotes the differentiation of MC3T3-E1 cells??being time-dependent??and high concentration of Ti-Cu ??10wt%?? alloy inhibits the differentiation of MC3T3-E1cells. Relatively speaking??Ti- 5wt%Cu alloy promotes the differentiation of MC3T3-E1 cells best.     

MicroRNA-103-3p对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化早期的影响

目的:探讨miR-103-3p对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化早期的影响。方法:以小鼠前成骨细胞MC3T3-E1为实验对象,对MC3T3-E1细胞进行成骨诱导,分别在0、3、5、7 d应用实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测细胞中Runx2、Osx、ALP、miR-103-3p表达水平,Western免疫印迹（Western blotting）检测Runx2、Osx蛋白表达并进行碱性磷酸酶（ALP）染色。通过脂质体lipofectamine2000瞬时转染miR-103-3p模拟物 （miR-103-3p mimics）及模拟物阴性对照进入MC3T3-E1细胞内,Real-time PCR检测2组细胞miR-103-3p的表达水平,CCK-8试剂盒检测细胞增殖。分别对2组细胞进行成骨诱导,在成骨诱导后0、3、7 d,分别使用Real-time PCR和Western免疫印迹检测2组细胞Runx2、Osx等成骨相关基因mRNA和蛋白的表达变化,并对2组细胞进行ALP染色。实验数据采用SPSS19.0软件包进行统计学分析。结果:MC3T3-E1经成骨诱导0、3、5、7 d后,细胞内Runx2、Osx、ALP转录水平持续显著升高;Runx2、Osx蛋白表达升高。ALP染色逐渐加深。在成骨诱导3、5、7 d的MC3T3-E1细胞中,miR-103-3p水平较诱导前受到持续显著抑制(P<0.05)。瞬时转染miR-103-3p mimics后,MC3T3-E1细胞中的miR-103-3p表达水平较对照组显著上调(P<0.05),细胞增殖受到抑制,Runx2、ALP转录水平显著抑制（P<0.05）,Runx2蛋白表达显著抑制。对转染后的细胞进行成骨诱导3、7 d后,miR-103-3p转染组细胞Runx2、Osx、ALP在转录水平的表达较对照组显著降低,Runx2、Osx在蛋白水平的表达较对照组显著降低,且miR-103-3p转染组细胞ALP活性较对照组显著降低。结论:miR-103-3p可能对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的成骨分化早期起抑制作用。     

钛表面RGD/仿生磷酸钙复合涂层对MC3T3-E1细胞黏附、增殖、分化的影响

目的:研究钛表面RGD/仿生磷酸钙复合涂层对MC3T3-E1细胞黏附、增殖和分化的影响。方法:1)两步法在钛表面制备仿生磷酸钙涂层,扫描电子显微镜(SEM)观察形态,X射线衍射(XRD)、傅立叶转换红外光谱(FTIR)检测表征;2)RGD固定至仿生磷酸钙涂层;3)实验分3组:纯钛组,钛/仿生磷酸钙涂层组,钛/RGD/仿生磷酸钙复合涂层组,细胞分别接种至3组材料表面。4)SEM观察细胞接种4 h和24 h的形态;5)结晶紫染色检测细胞接种4 h和8 h的黏附情况。6)MTT法检测细胞1、3、7 d的增殖活性;7)检测细胞3、7、14 d的ALP活性。结果:SEM细胞形态观察及结晶紫染色结果显示,RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的细胞黏附效果优于对照组。MTT结果显示RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的细胞增殖活性强于对照组。ALP检测结果显示RGD/仿生磷酸钙复合涂层组的成骨分化活性高于对照组。结论:钛表面RGD/仿生磷酸钙复合涂层对MC3T3-E1细胞的黏附、增殖、分化均有促进作用。     

RGD多肽修饰的无机小牛骨粉对MC3T3-E1细胞黏附、增殖及分化的影响

目的:研究小鼠前成骨细胞MC3T3-E1在RGD修饰的无机小牛骨粉上的黏附、增殖及分化。方法:浸泡法制备RGD/Bio-Oss复合材料。MTT法检测细胞1 h、2 h、3 h黏附,扫描电镜观察细胞黏附形态,DNA浓度定量分析细胞1 d、3 d、5 d、7 d的增殖。碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞7 d、14 d的分化。结果:1 h、2 h、3 h细胞黏附结果Bio-Oss/RGD组明显高于Bio-Oss组及空白对照组;1 d、3 d、5 d、7 d Bio-Oss/RGD组和Bio-Oss组的DNA浓度差别无统计学意义,但都低于空白对照组;细胞分化第14天时Bio-Oss/RGD组的结果明显高于Bio-Oss组与空白对照组。结论:RGD对细胞黏附及分化有一定的促进作用,但对细胞增殖无显著促进作用。     

脂多糖刺激的单核巨噬细胞培养上清液对小鼠MC3T3-E1细胞c-fos表达的影响

目的：研究经牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）脂多糖（LPS）刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清对小鼠成骨细胞（MC3T3-E1细胞）c-fos表达的影响。方法：收集100μg/L的Pg LPS刺激RAW264.724h后的上清液,以20%稀释浓度分别作用于MC3T3-E1,分别在1、3、6、12、24、48、72h时,采用RT-PCR和Western blot检测ALP mRNA、c-fos mRNA及蛋白表达水平的变化。结果：Pg LPS刺激RAW264.7细胞培养上清作用于MC3T3-E1后,ALP mRNA表达均下降,在6h时表达最低,而c-fos的mRNA和蛋白水平均提高,分别在3h和6h时达最高水平。结论：Pg LPS刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清可通过上调成骨细胞c-fos的表达而抑制其成骨能力。     

硫酸软骨素蛋白聚糖对MC3T3-E1细胞株矿化的影响

目的:观察硫酸软骨素蛋白聚糖(chondroitin sulfate proteoglycan,CSPG)对前成骨细胞株MC3T3-E1矿化过程中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和钙离子沉积量的影响。方法:MC3T3-E1细胞株在含不同浓度CSPG(0、5、10、15 mg/L)诱导液中培养,不加CSPG组为对照组,其余3组为实验组,细胞诱导14 d时行ALP染色和活性检测,21 d时行茜素红染色和钙离子沉积量检测。结果:与对照组比较,各实验组ALP和茜素红染色面积随CSPG浓度增加逐渐减小,颜色变浅;定量分析结果显示,钙离子沉积量整体差异有统计学意义(P<0.05),ALP活性整体差异无统计学意义。结论:在本实验周期内,CSPG以剂量依赖方式抑制MC3T3-E1细胞株钙离子的沉积。     

不同质量分数的钛-铜合金对MC3T3-E1细胞分化的影响研究

目的　探究不同质量分数的钛-铜合金对MC3T3-E1细胞分化的影响,并寻找促进细胞分化作用最佳的含铜质量分数。方法　将不同质量分数的钛-铜合金样片分组,设组1（cp Ti）为对照组,组2（Ti-2wt%Cu）、组3（Ti-5wt%Cu）、组4（Ti-10wt%Cu）为实验组。将MC3T3-E1细胞按2 × 104/孔的密度接种到包埋样片的24孔培养板中行共培养。在第3、5、10和15 d时,用微量酶标法检测成骨细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性表达情况;在第7、14和21 d时,分别用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测上清液中Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）、骨钙素（OC）活性表达情况。采用SPSS 20.0统计分析软件包对所有检测数据进行单因素方差分析,比较各组间差异。 结果　Ti-2wt%Cu最有利于ALP活性表达（P＜0.05）,共培养第10 d时达最大值;Ti-5wt%Cu最有利于COL-Ⅰ活性表达（P＜0.05）,共培养第7 d时达最大值;Ti-5wt%Cu最有利于OC活性表达（P＜0.05）,共培养第14 d时达最大值。 结论　与cp Ti相比较,低质量分数钛-铜（Ti-2wt%Cu、Ti-5wt%Cu）对MC3T3-E1细胞分化有促进作用,表现为时间依赖性;高质量分数钛-铜（Ti-10wt%Cu）对MC3T3-E1细胞分化有抑制作用。相对而言,Ti-5wt%Cu合金对MC3T3-E1细胞分化作用最佳。     

低温氩氧等离子体处理的无机牛骨对MC3T3-E1细胞黏附、增殖及分化的影响

目的研究小鼠胚胎成骨细胞MC3T3-E1在低温氩氧等离子体处理的无机牛骨上的黏附、增殖及分化特征。方法使用低温氩氧等离子体对无机牛骨进行表面活化(实验组)后,使用扫描电子显微镜(SEM)观察无机牛骨表面形貌的变化,X射线光电子能谱分析(XPS)检测表面元素的组成。将MC3T3-E1细胞接种于低温氩氧等离子体处理的无机牛骨表面,使用SEM观察细胞的黏附形态,CCK-8法检测细胞1、3、5 d的增殖变化,碱性磷酸酶(ALP)法检测细胞7、14 d的分化状态。以不作处理的无机牛骨作为对照。结果对照组与实验组的表面形貌无明显改变;在表面材料的元素组成上,实验组表面碳元素减少,氧、钙、磷元素均增高。实验组MC3T3-E1细胞的黏附更充分,细胞伸出伪足;培养1、3、5 d时,实验组细胞增殖数量明显高于对照组;培养14 d时,实验组ALP活性明显高于对照组(P<0.05)。结论低温氩氧等离子体处理对无机牛骨表面小鼠胚胎成骨细胞的黏附、增殖及分化具有一定的促进作用。     

补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞PDGF表达的影响

目的 研究补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1细胞)血小板生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)表达的影响,探讨该方剂诱导成骨的作用机制.方法 MC3T3-E1细胞分别用10％补肾活血固齿方含药血清、无药血清、胎牛血清,培养24h、48h、72h,ELISA法...     

MC3T3-E1细胞流体剪切力敏感信号通路的基因芯片研究

目的 探讨适宜流体剪切力力值及作用时间下成骨细胞差异表达基因及相关信号通路。方法 通过平行板流室加力装置对盖玻片培养的MC3T3-E1细胞施加流体剪切力,提取总RNA,进行包括44 170个基因的全功能组表达谱基因芯片检测,对差异表达基因进行Pathway和GO分析,并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RTPCR）RTPCR）对芯片结果进行验证。结果 芯片结果显示,差异基因共有884个,其中表达增强基因444个,表达降低基因440个。Pathway分析涉及的信号通路,主要包括Notch信号通路、RIG-Ⅰ样受体信号通路等。GO分析主要涉及前列腺素的生物合成、一氧化氮介导的信号传导、钙介导的信号及细胞免疫反应等不同的功能分类。结论 流体剪切力对MC3T3-E1细胞的保护作用可能与激活促进细胞生存及抑制细胞凋亡相关信号通路及生物学过程相关。     

多孔钛的骨传导性及其孔隙结构对MC3T3-E1细胞早期分化的影响

目的 探讨多孔钛的骨传导性及其孔隙结构对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1早期分化的影响.方法 碳酸氢铵造孔剂结合粉末冶金法制备6组由不同平均孔隙率及不同平均孔径组合的多孔钛试样,即AⅠ（43.1±0.7）％和（154.8±11.9） μm AⅡ：（40.9±1.5）％和（295.6±8.5） μm AⅡ （44.3±1.1）％和（560.4±25.6） μm;BⅠ：（53.3±1.2）％和（191.6±3.7） μm; BⅡ.（51.7±2.7）％和（303.8±8.2） μm; BⅢ：（49.9±3.9）％和（583.1±21.7） μm,Ta2级商业致密纯钛作为对照组;每组3个试样.MC3T3-E1细胞接种于24孔板3h贴壁后置入多孔钛试样,培养3d和5d后激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察经FITC微丝蛋白荧光探针标记的细胞.MC3T3-E1细胞接种于已置入试样的24孔板,培养7d和14d后测定碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性,评价细胞的早期分化能力;培养21d后茜素红染色观察细胞晚期矿化结节.结果 MC3T3-E1细胞贴壁后,5d可长人多孔钛孔内及表面.7d和14d多孔钛组ALP活性显著高于对照组（P＜0.05）;其中BⅠ组在14d的ALP活性显著高于其它各组（P＜0.05）.21d多孔钛试样表面及孔隙内均可见钙结节形成.结论 在本实验条件下,多孔钛具有一定的骨传导性;平均孔隙率为53.3％且平均孔径为191.6 μm的多孔钛利于MC3T3-E1细胞的早期分化.     

Dlx2在MC3T3-E1细胞成骨分化过程中的作用

目的:探讨Dlx2(distal-less homeobox 2)基因过表达对体外培养的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1 向成骨方向分化的影响.方法:构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序验证.体外病毒转染MC3T3-E1后,以嘌呤霉素行抗性筛选稳定细胞株,以RT-PCR和Western印迹检测转染后细胞中Dlx2的表达.应用实时定量PCR(RT-PCR)检测Dlx2过表达对部分成骨相关基因(ALP、OCN、Runx2、Msx2)表达的影响.以碱性磷酸酶(ALP)活性测定和茜素红染色法检测Dlx2过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.采用SAS 6.04软件包对数据进行随机设计的方差分析.结果:本实验成功构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序正确.体外转染后筛选出Dlx2稳定高表达细胞株MC3T3-E1-Dlx2,其mRNA和蛋白表达量显著高于对照组.在成骨诱导过程中,MC3T3-E1-Dlx2细胞ALP值在第4、7、14d均高于对照组细胞,茜素红染色显示实验组较对照组和空白组染色深.Dlx2过表达在成骨诱导早期能显著促进ALP和Msx2的表达(P<0.05),晚期则上调OCN表达(P<0.05),而Runx2表达无明显变化(P>0.05).结论:Dlx2过表达上调AIP、OCN等成骨相关基因的表达.促进MC3T3-E1细胞的成骨分化.     

釉基质蛋白诱导MC3T3-E1细胞成骨分化过程中微小核糖核酸的表达

目的 探讨微小核糖核酸(micro ribonucleicacid,miRNA)是否参与到釉基质蛋白(EnamelMatrix Derivative,EMD)诱导的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞成骨分化的过程,并对发生显著变化的miRNA进行分析.方法 将MC3T3-E1用含EMD(刺激组)/不含EMD(对照组)的培养液培养0天、7天和14天,检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,实时聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分析成骨分化标记物ALP、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙素(osteocalcin,OC)的信使RNA(mRNA)水平的表达变化.利用基因芯片技术分析miRNA的相对表达.结果 0天、7天、14天的ALP染色结果显示随着培养时间的增加,两组ALP活性均逐渐增强,EMD刺激组ALP活性增强较对照组更为明显.RT-PCR结果表明,与对照组相比,ALP、BSP、OC的mRNA表达量均显著增加,ALP与OC均于14天时表达量达到峰值,BSP则于7天时处于峰值表达,EMD刺激组MC3T3-E1成骨活性更强;各期11个miRNA表达上调,28个miRNA表达下调,其中miR-335-5p,miR-503已被证实可参与促进骨形成,而miR-30家族(miR-30a,-30b,-30c和-30d)则被证实参与抑制成骨.结论 miRNA参与EMD诱导的MC3T3-E1细胞的成骨分化过程,这一发现可以为了解EMD促进成骨分化的机理及临床应用提供指导.     

辐照对MC3T3-E1细胞TGF-β1和Smads基因及蛋白表达的影响

目的:探讨放射线对成骨细胞系MC3T3-E1细胞增殖及TGF-β1和Smad3/P-Smad3表达的影响。方法:以小鼠胚胎成骨细胞系MC3T3-E1为研究对象,4MV直线加速器为放射源,给予单一剂量8Gy照射。照射后以CCK-8检测成骨细胞增殖情况,通过荧光定量PCR和Western免疫印迹分别检测TGF-β1、Smad3基因和蛋白的表达,并分别用2-ΔΔct法及光密度分析法分析基因及蛋白的表达水平。采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:单次8Gy剂量照射的细胞组与对照组相比,生长速度明显减慢;Smad3及TGF-β1基因在照射后0.5 h,1 h组与对照组无显著差异(P>0.05),照射后1.5 h组Smad3及TGF-β1基因表达量与对照组存在显著差异(P<0.05);P-Smad3、TGF-β1蛋白表达在第1天明显上调;第3天、第5天照射组与对照组差异逐渐减小。8Gy照射后第1天,P-Smad3蛋白表达量最高,TGF-β1蛋白表达量第3天最高。结论:8Gy照射剂量可抑制MC3T3-E1细胞增殖,短时间内上调TGF-β1和Smad3/P-Smad3在基因及蛋白水平的表达。     

不饱和聚磷酸酯对MC3T3－E1成骨细胞的毒性研究

目的：评价不饱和聚磷酸酯（UPPE）聚合物对小鼠胚胎颅顶骨MC3T3－E1成骨细胞的毒性影响。方法：将β－磷酸三钙（β－TCP）、UPPE聚合物分别与小鼠胚胎颅顶骨MC3T3－E1细胞共同培养,细胞培养液作为阴性对照组, AlamarBlue法评价其对MC3T3－E1细胞的体外细胞毒性,对实验结果进行单因素方差分析及Turkey＇s HSD多重比较。结果：各组的MC3T3－E1细胞活性均随培养时间的延长而增长,β－TCP组、UPPE聚合物组的细胞毒性与阴性对照组相比无统计学差异（P＞0．05）。结论：UPPE聚合物对MC3T3－E1细胞的生长无不利影响,具有较好的骨细胞生物相容性。