骨桥蛋白与口腔鳞状细胞癌细胞生物学特性关系的实验研究

目的　初步探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)与口腔鳞状细胞癌（鳞癌）细胞生物学特性关系。方法　体外培养口腔鳞癌细胞株KB和FaDu细胞,MTT法比较2种细胞的增殖活性,基质胶侵袭实验和划痕实验检测比较2种口腔癌细胞的侵袭和迁移能力的差异,免疫组化SP法检测细胞中OPN的表达。结果　KB细胞的增殖、侵袭和迁移能力均高于FaDu细胞,两种细胞中均有OPN的表达,KB的表达量高于FaDu。结论　口腔鳞癌细胞株KB和FaDu细胞生物学特性的差异可能与其OPN表达差异有关,高表达OPN的KB细胞株可以作为体外研究口腔鳞癌中OPN基因作用的实用细胞株。     

大黄素对口腔鳞状细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨大黄素对人口腔鳞状细胞癌CAL-27及SCC-15的增殖、侵袭和迁移能力的影响及作用机制.方法:采用不同浓度的大黄素处理CAL-27及SCC-15细胞,使用CCK-8法检测其增殖活性,根据结果计算不同作用时间细胞抑制率为50％时对应的药物浓度(IC50);划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测大黄素对两种细胞迁移、侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大黄素对细胞中金属基质蛋白酶-2(MMP-2)和金属基质蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平的影响;实时定量PCR(qRT-PCR)检测大黄素对细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平的影响.结果:与对照组相比,不同浓度的大黄素均可抑制CAL-27和SCC-15细胞的增殖能力(P<0.05),且呈时间-浓度依耐性;与对照组相比,大黄素可明显降低两种细胞划痕的愈合率和侵袭细胞数(P<0.05),具有浓度依耐性;与对照组相比,经大黄素处理的两种细胞中MMP-2和MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平均明显下调(P<0.05).结论:大黄素在体外可以显著抑制人OSCC细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用可能与下调MMP-2、MMP-9的表达有关.     

口腔鳞状细胞癌中NCAPD2的表达水平及生物学功能

目的 探讨非SMC凝集素Ⅰ复合亚基D2(NCAPD2)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及生物学功能。方法 首先应用数据库分析NCAPD2在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)中的表达,然后采用免疫组化法在OSCC标本中进行验证。应用高内涵筛选(high-content screening, HCS)、流式细胞仪及蛋白质印迹法(Western Blot)检测OSCC细胞的增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的表达。结果 NCAPD2在HNSCC中高表达,且与HNSCC临床分期、病理分级和淋巴结转移有关。免疫组化显示OSCC组织中的NCAPD2表达显著高于健康口腔组织(P<0.001),且NCAPD2表达与OSCC病理分级之间存在显著相关性。敲减NCAPD2能够抑制OSCC细胞的增殖促进凋亡。此外,BCL-2,p21表达下调,BAX,p53表达上调。结论 NCAPD2有望成为OSCC治疗的一个靶点。     

AMD3100对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的探讨CXCR4拮抗剂AMD3100对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响。方法采用MTT法检测细胞的增殖能力。通过趋化实验观察CXCR4特异性拮抗剂AMD3100在口腔鳞状细胞癌细胞的侵袭迁移中的作用。结果 1)口腔鳞状细胞癌细胞在SDF-1作用下增殖反应明显增强,AMD3100可有效抑制肿瘤细胞的增殖。2)趋化实验显示SDF-1可诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生明显迁移,AMD3100能阻断CXCR4受体,从而抑制这种趋化和侵袭转移作用。结论 AMD3100能阻断CXCR 4/SDF-1的相互作用,其可能成为治疗口腔鳞状细胞癌的新方法。     

HOXC9对人口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的 研究HOXC9基因对口腔鳞癌细胞系CAL-27生物学行为的影响。方法 构建HOXC9过表达质粒载体,HOXC9过表达质粒转染CAL-27细胞,实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染后细胞中HOXC9 mRNA表达水平,Western blotting检测转染后HOXC9蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测过表达HOXC9对细胞增殖能力的影响,克隆形成实验检测过表达HOXC9对细胞克隆形成能力的影响,划痕实验检测过表达HOXC9对细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测过表达HOXC9对细胞侵袭能力的影响。结果与空载对照组相比,转染HOXC9过表达质粒后,细胞中HOXC9 mRNA表达水平明显升高（P<0.001）。实验组细胞中HOXC9蛋白表达明显升高,过表达HOXC9对CAL-27细胞的增殖能力无明显影响（P>0.05）,过表达HOXC9可以促进CAL-27细胞的克隆形成能力（P<0.05）,过表达HOXC9可以促进CAL-27细胞的迁移能力（P<0.05）,过表达HOXC9可以促进CAL-27细胞的侵袭能力（P<0.001...     

长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因22调控微小RNA-27b-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探究长链非编码RNA (LncRNA)小核仁RNA宿主基因（SNHG） 22调控微小RNA (miR)-27b-3p对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法 收集52例OSCC患者的癌组织及癌旁组织标本,体外培养人正常口腔角质细胞HOK和3种人OSCC细胞（CAL-27、SCC-25和HSC-3）,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测癌组织、癌旁组织、HOK细胞和3种OSCC细胞中SNHG22、miR-27b-3p表达情况。对SCC-25细胞进行转染并将其分为Ctrl组（未进行转染）、si-SNHG22组、si-NC组、miR-27b-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、si-SNHG22+inhibitor-NC组和si-SNHG22+miR-27b-3p inhibitor组,检测各组SCC-25细胞增殖情况[细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测增殖率、流式细胞术检测增殖指数（PI）];Transwell实验检测各组SCC-25细胞侵袭情况;划痕愈合实验检测各组SCC-25细胞迁移情况;双荧光素酶实验验证SNHG22与miR...     

环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌 细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系恶性生物学行为的影响。方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）中的表达水平。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数（CCK-8）实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达。通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响。结果 环状RNA hsa_ circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织（P<0.01）,在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞（P< 0.001）。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低。结论 环状RNA hsa_circ_ 0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡。     

外泌体为载体的微小RNA-1基因运送抑制人口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖的研究

目的用供体细胞基因过表达的方法构建微小RNA-1 (miR-1)高表达的细胞内源性外泌体,探讨以外泌体为载体,运送miR-1对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖的作用。方法采用超速离心法提取过表达miR-1的HEK293细胞的外泌体,并用透射电子显微镜、纳米颗粒分析仪、Western blot及定量聚合酶链反应(qPCR)进行外泌体鉴定。过表达miR-1的HEK293细胞外泌体(miR1-EXO)、HEK293细胞的外泌体(CON-EXO)及等体积磷酸盐缓冲液(PBS)分别与CAL-27细胞共培养,用免疫荧光检测外泌体向细胞的转运,用qPCR检测CAL-27细胞miR-1及下游靶基因MET的表达变化,用噻唑蓝比色法(MTT)检测CAL-27细胞增殖情况,用流式细胞术进行细胞周期检测。同时,miR1-EXO、CON-EXO及等体积PBS分别与人正常口腔黏膜上皮角化细胞(NOK)共培养,用MTT法检测NOK细胞增殖情况。结果 miR1-EXO、CON-EXO均呈典型的球形或杯状结构,直径约110 nm,并高表达外泌体标志性蛋白CD9、Alix及Tsg101。miR1-EXO中miR-1的表...     

盐酸小檗碱对人口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨盐酸小檗碱对人口腔鳞癌细胞CAL-27、SCC-15增殖、迁移及侵袭能力的影响及可能机制.方法:通过CCK-8法检测不同浓度盐酸小檗碱对口腔鳞癌细胞增殖的影响并计算出合适的半数抑制浓度IC50进行后续实验;划痕、Transwell实验分别检测盐酸小檗碱对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响.Western Blot检...     

环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞系恶性生物学行为的影响。方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞（HOK）中的表达水平。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数（CCK-8）实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达。通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响。结果 环状RNA hsa_ circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织（P<0.01）,在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞（P< 0.001）。慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低。结论 环状RNA hsa_circ_ 0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡。     

口腔鳞状细胞癌患者唾液中透明质酸酶的活性分析

目的 研究口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者唾液中透明质酸酶(HAase)活性的变化.方法 采用类似酶联免疫吸附原理(ELISA-like)方法,研究HAase在正常人、OSCC患者、口腔良性肿瘤及瘤样病变患者唾液中的活性变化.结果 OSCC患者唾液中HAase活性为良性肿瘤患者和正常人唾液中HAase活性的2～3倍,而正常个体与良性肿瘤及瘤样病变患者唾液中HAase活性之间差异无统计学意义(P>0.05).以5.0 U/L为界值,根据HAase的活性检测OSCC的灵敏度为79.17%,特异度为65.00%;HAase活性与OSCC临床分期和颈淋巴转移正相关(P<0.01),而与病理分级无关(P>0.05).结论 HAase与OSCC的生长和侵袭密切相关,以唾液中HAase的活性为标记物检测口腔鳞状细胞癌,目前尚不能作为OSCC诊断的独立指标.     

口腔鳞状细胞癌中RhoA的表达及作用

目的探讨口腔鳞状细胞癌组织及其转移灶、癌旁组织、增生鳞状上皮和正常口腔黏膜中RhoA的表达及其意义。方法采用免疫组化检测40例口腔鳞状细胞癌,RT-PCR技术分析口腔鳞状细胞癌组织、癌旁组织、口腔鳞状细胞癌转移灶、鳞状上皮增生和正常口腔黏膜组织中RhoA的表达情况。结果RhoA在非癌组织均不表达或弱表达,40例口腔鳞癌中25例表达RhoA,阳性率为62.50%;两者之间具有显著差异(P<0.05)。低分化鳞癌中RhoA的阳性率为66.67%,中、高分化鳞癌中RhoA的阳性率为60.71%;两者之间有统计学差异(P<0.05)。16例有淋巴结转移的鳞癌组织中13例表达RhoA,阳性率为81.25%,24例无淋巴结转移的鳞癌组织中12例表达RhoA,阳性率为50%;两者之间有统计学差异(P<0.05)。RT-PCR检测RhoA mRNA的表达水平,鳞癌组织中RhoA mRNA光密度相对值明显高于癌旁组织、增生鳞状上皮和正常口腔黏膜组织(P<0.01),低于转移灶(P<0.05)。结论RhoA的表达与鳞状细胞癌分化程度、转移程度有关,有望作为鳞状细胞癌预后和转移的参考指标。     

口腔鳞状细胞癌血清中IL-18的检测及其病理、临床意义

目的 检测IL-18在口腔鳞状细胞癌（oral cavity squamous cell carcinoma，OCSCC）患者血清中的表达，探讨其与口腔鳞状细胞癌的相关性。方法 应用酶联免疫反应（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）方法检测30例口腔鳞状细胞癌和10例正常对照血清中IL-18的表达水平。结果 口腔鳞状细胞癌患者血清中IL-18表达水平高于对照组（P〈0．05）；中、低分化，临床Ⅲ、Ⅳ期，颈淋巴结转移者明显高于高分化，Ⅰ、Ⅱ期，无淋巴结转移者（P〈0．05）；不同年龄、性别、肿瘤发生部位，IL-18表达无差异（P〉0．05）。结论 IL-18的表达水平与口腔鳞状细胞癌的病理分级、临床分期及淋巴结转移密切相关。     

口腔鳞状细胞癌组织中差异微小RNA/mRNA表达谱的对接研究

目的 构建分析口腔鳞状细胞癌（OSCC）中差异表达的微小RNA（miRNA）和mRNA表达谱,初步预测与OSCC发生和发展相关的 miRNA和mRNA。方法 运用高通量深度测序技术构建 miRNA和mRNA表达谱,通过 Gene Ontology功能显著性富集分析预测与OSCC细胞周期、增殖、分化和凋亡相关的miRNA和mRNA。结果 共发现77个miRNA和1 298个mRNA显著性差异表达,富集分析显示与OSCC细胞周期、增殖、分化和凋亡相关的 miRNA共73个,且一个 miRNA可调控多个 mRNA。结论 OSCC中差异表达的 miRNA和mRNA对OSCC的发生和发展有潜在的作用。     

浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的实验研究

目的 :观察浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡作用 ,探讨浅蓝菌素抗癌的可能性。方法 :TCA 83细胞经浅蓝菌素 (10 μg/ml)处理 2 4h后 ,提取基因组DNA ,行DNA凝胶电泳。舌癌新鲜组织经浅蓝菌素(10 μg/ml)处理 2 4h后 ,行原位细胞凋亡染色 (TUNEL)。 结果 :DNA凝胶电泳得到典型的梯状DNA电泳图 ,TUNEL分析显示 ,浅蓝菌素处理组癌细胞凋亡率明显高于未经浅蓝菌素处理的癌细胞凋亡率 (P <0 .0 0 0 1) ,浅蓝菌素诱导高分化鳞状细胞癌凋亡的作用更强。结论 :浅蓝菌素可直接诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生凋亡 ,为脂肪酸合酶抑制剂的临床应用提供了直接的参考。     

Circ_0000502靶向调节miR-1231促进口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞增殖和抑制细胞凋亡的体外研究

目的 ：探讨环状RNA 0000502(circ＿0000502)是否靶向微小RNA-1231(microRNA-1231,miR-1231)调控口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）细胞HSC-3的增殖和凋亡。方法：实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）分析OSCC组织、癌旁组织中circ＿0000502和miR-1231的表达水平。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）、流式细胞术分析circ＿0000502和miR-1231表达对HSC-3细胞增殖和凋亡的影响。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR用于确定circ＿0000502和miR-1231调控关系。结果：OSCC组织中,circ＿0000502呈高表达,miR-1231呈低表达（P<0.05）。抑制circ＿0000502或过表达miR-1231能显著降低HSC-3的细胞活力,提高细胞凋亡率（P<0.05）。与单独抑制circ＿0000502比较,同时抑制circ＿0...     

微小核糖核酸-21对人舌鳞状细胞癌细胞系生物学特性的影响

目的研究微小核糖核酸-21（miR-21）对人舌鳞状细胞癌细胞系生物学特性的影响。方法将2’O-Me修饰的正义和反义miR-21寡核苷酸序列通过脂质体转染技术转染到舌鳞状细胞癌细胞Tca8113及其高转移株内,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测转染后miR-21在细胞中的表达变化,通过甲基噻唑基四唑（MTT）法、流式细胞术、Annexin Ⅴ细胞早期凋亡检测、划痕实验及Transwell实验分别检测细胞增殖能力、细胞周期、细胞早期凋亡情况、细胞迁移及侵袭能力的变化。结果靶向miR-21的反义寡核苷酸可以有效地抑制Tca8113及其高转移株细胞的增殖,促进细胞凋亡,并抑制细胞的迁移和侵袭能力。结论细胞内转染反义miR-21寡核苷酸序列后,可以降低舌鳞状细胞癌细胞中miR-21的表达,并对舌鳞状细胞癌细胞的生物学行为产生影响。