四色法流式细胞术测定淋巴细胞内细胞因子的方法学探讨

目的 建立流式细胞术测定淋巴细胞内细胞因子的方法。方法 正常人外周血在PMA、iono—mycin和BFA存在的条件下在体外短期培养，进行细胞膜表面抗原和细胞内细胞因子染色，再用流式细胞仪对淋巴细胞内细胞因子进行测定，并对分析方法中的一些测定条件进行了探讨。结果 刺激剂的刺激时间和不同的固定穿透剂对结果有较大的影响，但在最佳条件下，该方法的实验内变异比较小，平均CV在8％左右；实验间的变异稍大，平均CV在20％左右。结论 ①流式细胞术是单细胞水平检测细胞内细胞因子的理想方法，联用IFN-γ／IL-4／CD8／CD3四色荧光标记，可以在一支检测管中同时了解T细胞亚群中两类细胞因子的表达情况；②细胞内细胞因子检测的影响因素较多，分析时需注意选择适当的测定条件。     

流式细胞术测定T淋巴细胞亚群不同商家试剂的比较

T淋巴细胞亚群的测定在临床医学中越来越受到重视。应用流式细胞分析技术来检测人外周血T淋巴细胞亚群 ,具有简便、快速 ,计数细胞量大 ,相对精度好等优点。但是 ,由于流式细胞技术进入临床应用时间短 ,在操作技术规范、试剂质量指标等诸多方面还无严格标准可循 ,因而造成测定结果差异较大 ,可比性差。本文用国外的 3个商家试剂在流式细胞仪上测定T淋巴细胞亚群进行比较 ,现将结果报告如下。1　材料与方法1 1　仪器　美国B D公司FASCCalibur流式细胞仪。1 2　试剂　试剂① :B D公司三色标记T亚群试剂CD4FITC/CD8PE/CD3Percp、阴…     

流式细胞术检测肺结核患者血清中T淋巴细胞亚群的变化

目的 探讨肺结核患者血清中T淋巴细胞亚群的改变。方法采用先进的流式细胞术分别测定了29例结核菌阴性及49例结核菌阳性的初治活动性肺结核患者血清T淋巴细胞亚群计数。结果初治活动性肺结核患者血清中CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋降低，而CD3^＋、CD8^＋升高，与正常对照组比较，CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋差异有显著性（P〈0．05）；老年结核患者的CD3^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋均较青年结核病患者低，其中CD4^＋／CD8^＋差异有显著性；病变范围广泛者的CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋较病变范围小者低，CD3^＋差异有显著性；痰菌阳性者与阴性者比较，CD4^＋／CD8^＋下降，CD8^＋升高，但差异无显著性。结论初治活动性肺结核患者的T细胞亚群变化存在其自身特点。对肺结核患者T淋巴细胞亚群的检测有助于判断病情、了解抗结核治疗效果及预后。     

流式细胞术在严重急性呼吸道综合征诊治中的临床应用

目的 :探讨流式细胞术在严重急性呼吸道综合征 (SARS)诊治中的临床价值。方法 :应用流式细胞仪动态检测SARS患者外周血中淋巴细胞亚群 ,并与健康人进行比较 ,观察其在SARS发病过程中的变化规律。结果 :2例SARS患者的病程约为一个月左右 ,其外周血中CD3 、CD3 CD4 、CD3 CD8 绝对计数值最低时仅为 12 0个 /μl、60个 /μl和 5 6个 /μl,随着病情的好转 ,其数值逐渐升高 ,并恢复至正常范围。结论 :应用流式细胞术检测SARS患者外周血中的淋巴细胞亚群 ,可动态监测病情的变化 ,为SARS患者的诊治提供了可靠的依据     

流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用

目的探讨胸水、腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群的检测方法及临床价值。方法采用流式细胞术检测良、恶性疾病患者的50例胸水、46例腹水、47例肺泡灌洗液(BALF)中T淋巴细胞亚群的水平并分组进行比较。结果 1)胸水:结核性胸膜炎组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(27.36±6.41)%、Th细胞占T淋巴细胞的(67.98±7.41)%、Th/Ts比值为2.60±0.64,肺部恶性肿瘤组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(67.97±4.20)%、Th细胞占T淋巴细胞的(37.61±4.80)%、Th/Ts比值为0.47±0.10,与结核性胸膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著下降(P0.01)而Ts显著升高(P0.01);2)肺泡灌洗液:肺良性疾病组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(44.54±9.56)%、Th细胞占T淋巴细胞的(49.28±12.88)%、Th/Ts比值为1.13±0.29,肺部恶性肿瘤组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(65.11±7.77)%、Th细胞占T淋巴细胞的(34.57±6.65)%、Th/Ts比值为0.54±0.19,与良性病变组比较,恶性组Th下降(P0.05),Th/Ts比值显著下降(P0.01),而Ts显著升高(P0.01)。3)腹水:结核性腹膜炎组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(33.11±3.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(66.69±3.78)%、Th/Ts比值为2.03±0.28,恶性组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(56.64±9.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(35.86±3.30)%、Th/Ts比值为0.65±0.10,与结核性腹膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著下降(P0.01),而Ts显著升高(P0.01)。结论胸腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群检测可用于分析性质并有助于评估患者局部免疫功能状态。     

流式细胞术检测T细胞亚群在2型糖尿病及糖尿病肾病患者中的应用

目的 观察2型糖尿病及糖尿病肾病患者外周血中T细胞亚群变化,探讨其在2型糖尿病、糖尿病肾病发病中的致病作用.方法 采用流式细胞技术测定30例2型糖尿病无肾病(DM组)患者,30例糖尿病肾病(DN组)患者,20例健康对照者(NC组)外周血T淋巴细胞上CD3、CD4、CD8的表达.结果 DM组和DN组外周血CD3+T细胞数量(58.5±7.5)%、(54.8±5)% 低于NC组(65.1±8.6)% (P<0.05);CD4+T细胞数量(39.5±2.1)%、(42.1±1.6)%均明显高于NC 组(34.3±5.1)% ( P<0.01);CD8+T细胞数量(19.6±2.2)%、(17.1±2.6)% 低于NC组(21.1±3.2)% ( P<0.01);CD4+/CD8+比值(2.01±0.5、2.65±0.21)高于NC(1.79±0.72) (P<0.01);DN组外周血CD4+T细胞数量高于DM组(P<0.05);DN组外周血CD3+T、CD8+T细胞数量低于DM组,但差异无统计学意义 (P>0.05);DN组外周血CD4+/CD8+比值高于DM组(P<0.05).结论 2型糖尿病患者存在T细胞亚群失衡,合并糖尿病肾病患者较糖尿病无肾病患者表达失衡更为严重,提示自身免疫调节异常可能参与2型糖尿病、糖尿病肾病的发生与发展.     

流式细胞术分析神经系统疾病患者脑脊液T淋巴细胞亚群

目的用流式细胞术分析脑脊液中T淋巴细胞及其亚群,探讨不同类型神经系统疾病患者脑脊液中T淋巴细胞亚群百分率差异,寻找在疾病诊断和治疗监测中有意义的实验室检测指标。方法采用流式细胞术测定神经系统疾病患者脑脊液和外周血T淋巴细胞亚群。结果采用流式细胞术分析脑脊液中T淋巴细胞亚群时,运用侧向散射光(SS)vs.CD45能更准确的确定淋巴细胞群;但流式细胞术只适用于检测神经系统免疫相关疾病患者脑脊液中T淋巴细胞亚群,不适用于分析神经系统变性疾病患者。中枢神经系统炎性疾病和脊髓炎患者脑脊液中CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞和CD3+CD8+T淋巴细胞百分率最高,脱髓鞘疾病患者脑脊液T淋巴细胞亚群百分率最低,但各类神经系统疾病患者脑脊液中T淋巴细胞百分率无明显差异(P>0.05)。细菌性脑膜炎患者脑脊液中CD3+T淋巴细胞和CD3+CD4+T淋巴细胞百分率最高,明显高于脱髓鞘疾病患者(P=0.032),但与病毒性脑膜炎患者比较差异无统计学意义(P>0.05)。各类神经系统疾病患者脑脊液中CD4/CD8比值明显高于外周血,其中细菌性脑膜炎和脊髓炎患者脑脊液中CD4/CD8比值最高,脱髓鞘疾病脑脊液中CD4/CD8比值最低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。脑脊液IgG生成指数与脑脊液中CD3+CD4+T淋巴细胞百分率有一定相关性(r=0.324,P=0.032)。结论流式细胞术分析神经系统炎性疾病较脑脊液常规检测具有优势,敏感性更高,可同时分析脑脊液免疫状况。流式细胞术分析在神经系统相关炎性疾病具有重要意义,CD3+CD4+T淋巴细胞高百分率与神经系统炎性疾病密切相关。但流式细胞术对于神经系统变性疾病的临床应用有限。     

外周血T淋巴细胞亚群测定在卵巢癌患者中的应用

采用流式细胞术测定89例卵巢癌患者及25例健康正常人的外周T血淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+),并作比较分析。结果卵巢癌患者CD3+细胞、CD4+淋巴细胞CD4+/CD8+比值显著降低,而CD8+淋巴细胞显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。Ⅰ~Ⅳ期卵巢癌患者,随着期别越高,其外周血中CD4+、CD4/CD8比值逐渐下降,CD8+细胞水平逐渐升高,其中,Ⅰ期与Ⅱ期之间相比,差异无统计学意义(P0.05)。但Ⅲ、Ⅳ与Ⅰ、Ⅱ期之间,Ⅲ期与Ⅳ期之间比较差异均有统计学意义(P0.05),且各组与对照组比较有显著差异(P0.05),年龄对患者外周血T淋巴细胞亚群的影响无显著性(P0.05)。外周血T淋巴细胞亚群可作为卵巢癌患者免疫状态的有效评价指标,定期检测外周血中上述指标的变化,有利于了解恶性肿瘤患者的病情变化及预后。也为肿瘤的免疫增强治疗提供了理论依据。     

流式细胞术测定儿童淋巴细胞亚群多色荧光标记的比较

目的：本文比较了采用双色、三色和四色荧光标记分析淋巴细胞亚群的结果，调查了正常儿童淋巴细胞亚群分布。方法：采用双色、三色和四色荧光标记流式细胞术，测定89例儿童淋巴细胞亚群（T＋B＋NK）。结果：双色、四色法结果除T细胞值p〉0．0．5外，均有差异（p〈0．05）．两者spearman相关系数除NK细胞（相对数为0．83，绝对数为0．80）较低外，其他均有0．85以上，大多数在0．90以上。双色、三色和四色荧光标记测定CD4／CD8比值有差异（ANOVAP〈0．01）。结论：三种方法相关，但有差异（除T细胞外），需建立各自的参考范围。     

流式细胞术分析实体瘤T-淋巴细胞亚群

目的为了研究良性和恶性肿瘤T-淋巴细胞亚群变化关系及其对诊断、治疗和预后的价值.方法采用流式细胞术对92例良性和恶性肿瘤的患者进行测定、比较,并求出相关性.结果良性肿瘤患者CD3、CD4和CD8虽然比较恶性肿瘤患者均有增高,但增高的程度不同;虽然较正常人均有不同程度的降低,但降低的程度有所不同,相互之间无显著性差异.结论恶性肿瘤T-细胞亚群的各项检测指标对良、恶性肿瘤诊断以及指导治疗及评价预后有重要实用价值,尤其对恶性肿瘤转归有更加重要的意义,适于测定体内免疫活性.     

流式细胞术分析实体瘤T-淋巴细胞亚群

目的 为了研究良性和恶性肿瘤T-淋巴细胞亚群变化关系及其对诊断、治疗和预后的价值。方法采用流式细胞术对92例良性和恶性肿瘤的患者进行测定、比较，并求出相关性。结果良性肿瘤患者CD3、CD4和CD8虽然比较恶性肿瘤患者均有增高。但增高的程度不同；虽然较正常人均有不同程度的降低．但降低的程度有所不同，相互之间无显著性差异。结论恶性肿瘤T-细胞亚群的各项检测指标对良、恶性肿瘤诊断以及指导治疗及评价预后有重要实用价值．尤其对恶性肿瘤转归有更加重要的意义，适于测定体内免疫活性。     

HBV DNA含量与T淋巴细胞的相关性研究

目的 观察乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV DNA的含量与T淋巴细胞亚群的相关性,探讨HBV感染者细胞免疫功能的变化.方法 收集60例HBV感染者的血清,用荧光定量PCR仪检测其HBV DNA的含量,按HBV DNA的浓度分为HBV DNA阴性组(<500.00 copy/mL)、HBV DNA低浓度组[(500～1)×105 copy/mL]和HBV DNA高浓度组(1×105～1×108 copy/mL),另外取20例健康人的血清作对照,同时取上述80例的新鲜外周血,用流式细胞仪检测他们的T淋巴细胞亚群CD3+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+及CD3+CD4+/CD3+、CD8+,对其结果 进行分析.结果 HBV DNA阴性组和低浓度组的CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD4+/CD3+CD8+与健康对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05),HBV DNA高浓度组的CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD3+CD4+/CD3+CD8+与健康对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),HBV DNA低浓度组和高浓度组的HBV DNA含量与CD3+CD4+和CD3+CD4+/CD3+CD8+呈现负相关关系,与CD3+CD8+呈现正相关关系,相关系数分别为0.46、0.69和0.52.结论 HBV DNA对细胞免疫产生了影响,HBV DNA含量与T淋巴细胞亚群的分布存在一定的相关性.     

T淋巴细胞亚群在急性脑梗死预后判断中的意义

目的：探讨T淋巴细胞亚群在急性脑梗死中的预后意义。方法：用流式细胞仪检测(直接荧光染色法)急性脑梗死总者发病后第三天的周围血CD3^ 、CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞百分数．用中国卒中量表(CSS)对每1例急性脑梗死患者发病后第20天的神经功能缺失进行计分。结果：CD4^ 、CD4^ ／CD8^ 比值跟CSS计分至显著负相关(P＜0．05)．相关系数分别为-0．552和-0．651．而CD3^ 淋巴细胞和CD8^ 淋巴细胞跟CSS计分无显著相关(P＞0．05)。结论：本研究结果提示急性脑梗死患者第三天的周围血CD4^ T淋巴细胞和CD4^ ／CD8^ 比值越低，其近期预后越差。     

T细胞免疫功能检测平台的建立及在感染性疾病中的应用

<正>细胞免疫功能在人体抗感染中发挥着重要作用,各种感染性疾病的转归与细胞免疫功能密切相关,尤其是与T淋巴细胞功能的关系更加密切。然而临床上缺乏体内直接检测T细胞功能的手段,主要靠体外间接方法进行评估,如检测外周血T淋巴细胞及各亚群数量和比例、增殖功能及产生细胞因子的能力,主要方法有酶联免疫吸附试验(enzyme-linked     

流式细胞仪检测肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群对肺部疾患的诊断价值

目的用流式细胞术免疫荧光三色分析法检测肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群,探讨其对肺部恶性肿瘤的意义。方法采用流式细胞术与CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP三色荧光抗体检测肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群,以SSC/CD3-PerCP圈出T淋巴细胞群,分析肺良性与恶性疾病患者肺泡灌洗液中TH(CD3 CD4 )及Ts(CD3 CD8 )细胞占T淋巴细胞的百分比。结果肺良性疾病组Ts细胞占T淋巴细胞的(44.54±9.56)%,TH细胞占(49.28±12.88)%,TH/Ts比值为1.13±0.29;肺恶性肿瘤组Ts细胞占T淋巴细胞的(65.11±7.77)%,TH细胞占(34.57±6.65)%,TH/Ts比值为0.54±0.19。与良性病变组比较,恶性组TH下降(P<0.05),TH/Ts比值显著下降(P<0.01),而Ts显著升高(P<0.01)。结论流式细胞术可用于检测肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群,有助于分析患者肺泡局部细胞免疫功能。     

流式细胞术的临床应用

流式细胞术(flowcytometry,FCM)是20世纪70年代发展起来的对单细胞定量分析的一种新技术。它借鉴了荧光标记技术、激光技术、单抗技术和计算机技术,具有极高的检测速度与统计精确性,而且从单一细胞可以测得多个参数,为生物医学与临床检验提供了全新视角和强有力手段。目前,随着单克隆抗体技术的发展,流式细胞仪检测技术已经广泛使用在基础研究和临床实践的各个方面,在肿瘤学、血液学,免疫学、微生物学、细胞生物学-遗传学及临床检验学等诸多领域内发挥着重要作用[1]。本文就其在临床上的应用综述如下。1流式细胞仪的工作原理流式细胞仪主要由细胞流动室、激光聚焦区、检测系统、数据处理系统等4部分组成,其工作原理是将待测标本制成单细胞悬液,经染色后进入流动室,流动室充满流动的鞘液,鞘液压力与样品压力是不同的,当两者的压力差异达到一定程度时,鞘液裹挟着的样品流中细胞排成单列逐个经过激光聚焦区。若将细胞中感兴趣的部分特异性地标上荧光染料,那么这些染料将在细胞通过激光检测区时受激光产生特定波长的荧光,通过一系列信号转换、放大、数字化处理,就可以在计算机上直观地统计染上各种荧光染料的细胞各自的百分率。选择不同的单克隆抗体及荧光染料...     

流式细胞仪测定肝病患者T淋巴细胞亚群及NK细胞

目的：研究慢性乙型肝炎、肝硬化及原发性肝癌（PHC）患者的免疫状态,观察T细胞亚群以及自然杀伤（NK）细胞活性在不同肝病中的变化情况。方法：应用流式细胞仪测定了共147例肝病患者血中T细胞亚群和NK细胞活性。结果：与正常组相比较,各病例组CD3＋及CD4＋细胞数减少,CD8＋细胞数则高（P＜0．05）,使CD4＋／CD8＋比值明显降低（P＜0．01）,其中,肝硬化上PHC组变化更为明显,PHC组的上述指标甚至与慢性乙直炎组之间也存在着差异（P＜0．0）。同时PHC组NK细胞活性明显低于正常对照组,甚至低于慢性乙型肝炎和肝硬化组（P＜0．05）,但其他三组间无显著差别（P＞0．05）,结论：用流式细胞仪检测肝病虱外周血中T淋巴细胞亚群及NK细胞活性具有快速、灵敏、准确等特点,其检验结果,对了解肝病患者的免疫状态态,指导肝病的治疗及判断预后具有重要价值。     

流式细胞术检测淋巴细胞亚群对发热患儿病原体判断的价值

目的评估流式细胞术(FCM)检测淋巴细胞亚群对发热患儿病原体判断的价值。方法应用FCM检测62例发热患儿外周血淋巴细胞免疫表型(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16/56+),同时进行外周血常规检查,独立和联合判断患儿可能感染的病原体,并进行比较。结果 FCM检测发热患儿淋巴细胞亚群的异常率为89%,显著高于血常规法的66%,差异有统计学意义(P<0.01),两种方法联合判断时为95%;FCM、血常规法和两种方法联合判断发热患儿的病原体感染情况时,FCM能较多地发现病毒或胞内菌感染,但病原体倾向不明显,血常规法可能更容易提示为细菌感染,而联合判断能提高病原体的诊断率。单独采用FCM和血常规法判断病原体的正确率分别为82%和73%,两者差异无统计学意义(P>0.05)。单独采用FCM和血常规法对62例发热患儿感染病原体的正确判断率分别为74%和66%,联合判断时升至90%。结论 FCM淋巴细胞亚群检测联合血常规可提高对发热患儿病原体判断的准确率,有利于指导临床合理用药。     

流式细胞术检测淋巴细胞亚群抗体用量的探讨

目的探讨应用流式细胞术（FCM）检测人淋巴细胞数绝对值在正常范围（0.8～4）&#215;10^9／L时，荧光抗体的最佳用量。方法：取30例标本，淋巴细胞数量在（O.8～4）&#215;10^9／L不等，用流式细胞术检测CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD19＋及NK细胞，根据荧光抗体用量分为4组，分别为20、10、5、2．5μL，统计分析4组间差异。结果所测白细胞分化抗原（CD）3＋、CD4＋、CD8＋、CD9＋及自然杀伤细胞（NK），结果4组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论对于淋巴细胞数绝对值在正常范围（O.8～4）&#215;10^9／L的全血标本，减少荧光抗体量至2、5μL对CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD19＋及NK细胞检测结果无影响，比常用量可减少8倍，对于临床实验室节约试剂成本、减少浪费等有一定参考价值。