O-GlcNAc通过抑制Wnt信号通路影响上唇发育的实验研究

目的：探讨氧联乙酰葡萄糖胺( O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)影响上唇发育时上皮层的消失过程中,Wnt信号通路在其中发挥的作用。方法通过在鸡胚唇部植入浸有O-GlcNAc促进剂氧联乙酰葡萄糖胺转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)、O-GlcNAc 的抑制酶氧联乙酰葡萄糖胺水解酶(O-GlcNAcase,OGA)以及OGA的抑制剂链脲佐菌素( streptozoticin,SZT)的琼脂糖微球,构建O-GlcNAc高表达与低表达以及反向高表达实验组,并继续孵育24 h,茜素红—阿利新蓝骨组织染色观察胚胎骨、软骨发生的变化,TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫组化染色法检测Wnt信号系包括GSK-3β、β-catenin在内的一系列信号因子。结果 O-GlcNAc过表达组OGT和STZ中,上皮层的消失出现延迟,骨染色发现胚胎唇部出现骨缺损,TUNEL检测与正常组相比未发现明显细胞凋亡,但GSK-3β在细胞质内表达增加,β-catenin细胞核内表达减少;正常侧及O-GlcNAc 低表达组OGA中上唇发育未受影响。结论 O-GlcNAc过表达时引起上皮层的消失发生延迟,这并非由细胞凋亡减少引起,而是可能通过抑制Wnt信号通路,导致 GSK-3β、β-catenin在内的相关信号因子变化,这些变化将影响上唇发育并可能导致唇腭裂的发生。     

Wnt/β-catenin信号通路影响牙本质形成及再生的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路是Wnt通路中的经典途径,在牙的发生中发挥着重要作用。研究表明,Wnt/β-catenin信号通路在牙本质的形成过程中扮演着重要角色,本文就近年来相关研究对Wnt/β-catenin信号通路在成牙本质细胞分化和牙本质发生及再生中的作用及影响作一阐述。     

Wnt1、β-catenin在硝苯地平引起的药物性牙龈增生中的表达

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin在硝苯地平引起的药物性增生的牙龈组织中的表达.方法:选择正常牙龈对照组、(未服药)高血压牙龈增生组、硝苯地平引起的药物性牙龈增生组各10例,用Western-Blot和RT-PCR检测牙龈组织中Wnt1、β-catenin的表达.结果:药物性牙龈增生组的牙龈组织中Wnt1、β-catenin蛋白及mRNA表达水平显著高于正常牙龈对照组(P＜0.05)和高血压牙龈增生组(P＜0.05).结论:硝苯地平引起的药物性牙龈增生的牙龈组织中Wnt1、β-catenin表达水平增高,可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进牙龈成纤维细胞的增殖导致牙龈纤维化.     

Chir99021调控Wnt/β-catenin信号通路干预干细胞成骨/成牙分化的研究

目的:探讨Chir99021调控Wnt/β-catenin信号通路干预人牙髓干细胞成骨/成牙分化及其可能的机制.方法:分离纯化和培养人前磨牙牙髓干细胞(HDPSCs),免疫荧光检测牙本质涎蛋白(dentin sialoprotein,DSP)和波形蛋白(Vimentin),CCK-8检测不同浓度Chir99021对HDPSCs细胞增殖作用的影响.将HDPSCs分为3组培养,第1组正常培养,为空白对照组;第2组成骨诱导液培养,为实验对照组;第3组成骨诱导液+Chir99021培养,为实验组.15 d后用茜素红染色对各组细胞进行钙沉积物检测;qPCR于5、10、15 d检测各组轴抑制蛋白2(axis-inhibition protein2,Axin2)、β连环蛋白(β-catenin)及糖原合成激酶3(GSK-3β)水平;Western blot于5、10、15 d检测各组RUNT相关转录因子2(Runx2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和Ⅰ型胶原的表达.结果:分离培养后的HDPSCs中DSP和Vimentin呈阳性表达;Chir99021浓度为2000 nmol/L时,细胞增殖情况最明显;茜红素染色显示实验组钙沉积物较其余两组显著增加;实验组中Axin2、β-catenin显著上升,GSK-3β显著下降(P<0.05);Runx2、ALP在实验组及实验对照组中有显著表达(P<0.05),OC在实验组中显著表达(P<0.05);DSPP、Ⅰ型胶原在实验组中显著表达(P<0.05).结论:Chir99021通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进HDPSCs的增殖和成骨/成牙分化.     

Wnt／β-catenin信号通路在大鼠骨髓间充质干细胞牵张中的表达

目的：了解经典Wnt信号通路在骨髓间充质干细胞（BMSCs）加载牵张中的作用。方法：分离培养大鼠BMSCs,通过自行研制的细胞加载装置．对BMSCs施加机械张应力刺激。用实时荧光定量RT—PCR与Western印迹检测Wnt3A、B—catenin与Lef-1的表达,同时检测BMSCs细胞增殖及骨向分化转录因子Runx2与成骨因子碱性磷酸酶（ALP）的变化情况。所得数据应用SPSS19．0软件包进行配对￡检验。结果：在牵张力刺激下,经典Wnt信号通路的3个关键分子Wnt3A、β-atenin与IJef_因表达显著增强（P〈0．05）。BMSCs的增殖、Runx2表达以及ALP活性也在加力后增强（P〈0．05）。结论：张应力加载激活了经典Wnt信号通路．并刺激BMSCs增殖与骨向分化,提示Wnt／β-catenin参与了牵张成骨的分子调控过程。     

miR-27a通过Wnt/β-catenin通路对骨质疏松小鼠颅骨缺损的修复效果及机制研究

目的：探讨miR-27a对骨质疏松小鼠颅骨缺损的修复效果以及对Wnt/β-catenin通路的调节作用。方法：40只小鼠建立骨质疏松颅骨缺损模型,随机分为模型组、miR-27a NC组、miR-27a mimic组和mi R-27a inhibitor组,另外10只骨质疏松小鼠作为对照组。对照组和模型组小鼠尾静脉注射10μL生理盐水,其余组小鼠分别尾静脉注射10μL mi R-27a阴性对照质粒、miR-27a过表达慢病毒质粒和mi R-27a沉默慢病毒质粒,1次/周,连续4周。micro-CT检测颅骨愈合情况,ELISA检测血清中碱性磷酸酶（ALP）、钙和磷水平,qRT-PCR法和蛋白印迹法检测骨钙素（OCN）和骨桥蛋白（OPN）基因和蛋白表达量,蛋白印迹法检测细胞核和细胞质中β-catenin蛋白表达情况。结果：与对照组比较,模型组小鼠ALP活性、钙和磷水平,OCN和OPN m RNA和蛋白水平均降低（P<0.05）;与mi R-27a NC组比较,miR-27a mimic组小鼠BV/TV、骨小梁数量以及骨小梁厚度,ALP活性、钙和磷水平,OCN和OPN基因和蛋白水平均升高...     

DZIP1通过影响Wnt/β-catenin信号通路促进口腔鳞状细胞癌增殖、迁移和侵袭

目的 探究DZIP1通过Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞状细胞癌增殖、迁移和侵袭的影响.方法 实时荧光定量PCR和Western blot检测DZIP1和Wnt/β-catenin信号通路相关基因mRNA表达和蛋白表达,CCK-8检测细胞活力,克隆形成实验检测口腔鳞状细胞癌(oral squamous cel...     

基于Wnt/β-catenin通路探究下调miR-21对口腔癌细胞生物学行为的影响

目的:探究下调微小RNA-21(miR-21)对口腔癌细胞生物学行为的影响及对Wnt/β-catenin通路的影响。方法:将人口腔癌HSC-4细胞,分为空白组、上调组、下调组3组;空白组细胞不做任何处理,上调组转染oe-miR-21上调载体,下调组转染si-miR-21下调载体。鉴定miR-21转染效率,检测细胞凋亡、侵袭能力、迁移能力及细胞Wnt/β-catenin通路蛋白表达量。结果:经转染后,与上调组相比,下调组miR-21的表达量明显减低(P<0.05)。与上调组相比,下调组24 h、48 h、72 h细胞凋亡率均明显升高(P<0.05)。两组细胞迁移数、细胞侵袭数相比,均具有统计学差异,且下调组细胞迁移数、细胞侵袭数均明显降低(P<0.05)。下调组的β-catenin、Bcl-2表达量明显降低,Caspase-3、Bax表达量明显升高(P<0.05)。结论:下调miR-21可促进口腔癌细胞凋亡,抑制迁移、侵袭,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活性相关。     

富血小板纤维蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化的研究

目的 :研究富血小板纤维蛋白(PRF)通过Wnt/β-catenin信号通路对骨髓基质干细胞(BMSCs)分化的影响。方法:分离、培养原代兔BMSCs,取第三代细胞进行干细胞鉴定,收集同一只兔耳缘静脉血离心制备PRF,将PRF与BMSCs置于Transwell小室中共培养并进行成骨分化。实验分组:A组为单纯BMSCs对照组;B组为PRF与BMSCs共培养组;C组为加入DKK1的PRF与BMSCs共培养组;D组为加入Wnt3a的PRF与BMSCs共培养组。茜素红染色观察各组钙结节形成情况,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测各组ALP活性,定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测成骨成脂相关基因Runx2、OCN、PPARγ2及LPL的m RNA表达,同时检测Wnt/β-catenin信号通路关键因子Cyclin D1及β-catenin的m RNA表达。结果:流式细术检测结果显示,原代培养的BMSCs符合间充质干细胞鉴定标准。茜素红染色结果显示,B组和D组的钙结节数量明显多于A组和C组,A组和C组之间无明显差异。碱性磷酸酶(ALP)活性检测结果显示,B组与D组的ALP活性较A组和C组明显增加(P<0.05),且两组之间差异无明显统计学意义。q RTPCR结果显示B组与D组中的成骨分化标志基因Runx2、OCN的m RNA表达,较A组和C组显著增加(P<0.05),而成脂分化标志基因PPARγ2、LPL的m RNA表达显著降低(P<0.05)。此外,B组和D组中Wnt/β-catenin信号通路关键因子Cyclin D1及β-catenin的m RNA表达较A组和C组显著增加(P<0.05)。结论:PRF通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化而抑制其成脂分化。     

Wnt信号通路与牙胚发育

牙齿的发生、分化是牙源性上皮与外胚间充质相互诱导、相互作用的结果。牙胚发育过程中复杂的信号调控体系是近年来口腔科学研究领域的难点和热点。现已初步证实Wnt信号通路是参与牙胚发育过程重要的分子信号调控因子。在牙胚发育过程中,随着Wnt信号通路调控机制的阐明,必将为牙再生的研究提供理论基础。该文就近几年对Wnt信号通路与牙胚发育关系的研究作一综述。     

Wnt/β-catenin通路与NF-κB通路的交叉调控对间充质干细胞分化的影响

Wnt/β-catenin信号通路与NF-κB信号通路都是高度保守的通路,调节多种生物学过程,二者之间的交叉影响已在多个生物和医学研究领域引起重视。该文将就Wnt/β-catenin信号通路与NF-κB信号通路的相互作用及对间充质干细胞多向分化的影响进行综述。     

静态张应力作用下人牙周膜成纤维细胞β-catenin和Wnt3a蛋白的表达

目的:研究人牙周膜成纤维细胞在不同大小机械张应力作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。方法:运用酶解组织块法体外培养人牙周膜成纤维细胞,将细胞按加力时间的不同(2 h、4 h、6 h)分为3组,每组再按形变率不同将其分为8%、12%和16%3个亚组,并取加力时间0h、形变率0%作为对照组。用western blot技术检测细胞在不同时间点和不同形变率作用下Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin和Wnt3a蛋白的表达变化。结果:Western blot结果显示,人牙周膜成纤维细胞在机械力加载后β-catenin 和Wnt3a蛋白表达显著减少(P<0.05)。在加力时间相同的组内(2 h、4 h、6 h),β-catenin 和Wnt3a蛋白表达随着形变率的增大而逐渐减少(P<0.05)。结论:β-catenin和 Wnt3a参与了静态张应力作用下牙周膜成纤维细胞的代谢,机械力对牙周膜成纤维细胞中Wnt/β-catenin信号通路有抑制作用。     

Wnt信号通路在牙齿发育不同阶段作用的研究进展

牙齿发育起始于神经嵴来源的外胚上皮和外胚间充质细胞间相互的信号作用[1]。牙齿形成早期由口腔上皮的增厚并陷入其下间充质内,然后浓缩并形成牙蕾。     

经典Wnt信号通路与牙周膜干细胞成骨分化

牙周炎是口腔最常见的疾病之一,累及牙周支持组织,随着疾病的进展将引起附着丧失、牙周袋形成、牙槽骨吸收,最终导致牙齿松动脱落。因被牙周炎破坏吸收的牙槽骨自愈能力十分有限,所以牙周炎的治疗目标是在彻底清除菌斑生物膜的基础上,争取获得较多的牙周组织再生。牙周膜干细胞作为最适宜进行牙周组织再生的细胞,被广泛研究。Wnt信号通路分为经典Wnt通路和非经典Wnt信号通路,为十分复杂而高度保守的通路传导途径。该通路与牙周膜干细胞成骨分化的关系十分密切,牙周膜干细胞的成骨分化又对牙周组织再生有重要意义。该文对经典Wnt信号通路与牙周膜干细胞成骨分化的研究概况作一综述。     

GSK126通过Wnt/β-catenin信号通路调控牙周膜干细胞成骨分化能力

目的体外研究GSK126对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)成骨分化能力的影响及调控机制。方法分离培养人牙周膜干细胞,检测牙周膜干细胞矿化诱导前后EZH2和H3K27me3的表达;新型EZH2抑制剂(GSK126)加入成骨诱导液培养后,qPCR检测EZH2和成骨基因(RUNX2、ALP、OCN)mRNA水平的表达;Western blot检测H3K27me3及β-catenin蛋白水平的表达,茜素红染色观察细胞成骨分化能力的变化;检测Wnt/β-catenin抑制剂(XAV939)对GSK126作用后细胞成骨分化能力的影响。结果成骨诱导后牙周膜干细胞中成骨基因(RUNX2、ALP、OCN)的表达水平明显升高,而EZH2和H3K27me3的表达水平显著下调;GSK126可显著抑制EZH2、H3K27me3的表达,但明显促进hPDLSCs的成骨分化能力及β-catenin蛋白水平的表达;进一步实验结果表明XAV939可逆转GSK126对牙周膜干细胞成骨分化的促进作用。结论 GSK126可通过Wnt/β-catenin信号通路调控人...     

流体剪切力作用下喷砂酸碱处理钛表面对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白mRNA表达的影响

目的探讨流体剪切力及喷砂酸碱处理钛表面在不同时相对原代成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白表达的影响。方法制备抛光处理纯钛钛片(P组)、喷砂酸碱处理纯钛钛片(S组),取新生第一天SD大鼠颅骨进行原代成骨细胞培养并分别接种于玻片(G组)、P组钛片、S组钛片表面,培养72h后,置于流体加载系统中,在0dynes/cm2(静止组)和12dynes/cm2(受力组)大小的流体剪切力下分别作用0h、0.25h、0.5h、1h、2h、4h,通过实时荧光定量聚合酶链反应检测低密度脂蛋白受体相关蛋白5(low-density lipoprotein receptor-relat-ed protein5,LRP5)和β-连环蛋白(β-catenin)的mRNA表达变化。结果 3种表面受力组LRP5和β-catenin的mRNA表达水平均比静止组高(P<0.05)。LRP5的mRNA表达水平在S组最高(P<0.05);细胞受力时G组在1h、P组和S组在0.5h时LRP5的mRNA表达量达到最高峰。β-catenin的mRNA表达水平在S组最高(P<0.05);细胞受力时表达量最高峰在3种表面均出现在0.5h。结论适宜大小的流体剪切力以及喷砂酸碱处理钛表面均能促进成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的激活,并且喷砂-酸碱处理钛表面提高了成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路对流体剪切力刺激的敏感性。     

地塞米松通过Wnt/β-catenin信号通路诱导腭裂的实验研究

目的探讨地塞米松对腭发育关键时期腭突间充质细胞和上皮细胞增殖和凋亡的影响,以及Wnt/β-catenin信号通路的分子关联作用。 方法将80只怀孕8.5 d（E8.5）的C57孕母鼠平分为两组,地塞米松组行腹腔注射地塞米松（8 mg·kg^-1·d^-1）,对照组注射等量0.9%氯化钠溶液,持续至E12.5,分别取E13.5、E14.5、E15.5和E17.5的胎鼠头部制成石蜡切片,苏木精-伊红染色观察腭突的形态,BrdU和荧光TUNEL染色分别检测腭突细胞的增殖和凋亡情况,Western blot检测腭突细胞的Wnt/β-catenin信号通路活性。χ²检验分析组间细胞增殖的差异,t检验分析组间细胞凋亡的差异。 结果在E13.5阶段,对照组前部腭突间充质细胞增殖率为（40.1 ± 7.4）%,地塞米松组增殖率为（35.5 ± 8.2）%,差异无统计学意义（χ²= 3.16,P= 0.075）。在E14.5阶段,对照组前部腭突间充质细胞增殖率为（50.3 ± 10.0）%,地塞米松组增殖率为（32.9 ± 8.8）%,差异有统计学意义（χ²= 5.229,P= 0.011）。在E15.5阶段,对照组前部腭突间充质细胞增殖率为（31.3 ± 6.5）%,地塞米松组增殖率为（18.5 ± 5.7）%,差异有统计学意义（χ²= 4.433,P= 0.02）。但各时间点后部腭突间充质细胞和上皮细胞的增殖差异均无统计学意义。地塞米松组腭突Wnt/β-catenin信号通路的活性显著下降。 结论地塞米松通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制腭突间充质细胞的增殖而导致腭裂发生。     

Wnt信号通路对牙齿发育和牙囊成骨向分化的调控作用

Wnt信号通路包括经典Wnt/β-catenin信号通路和非经典通路,对个体组织发育和干细胞的自我更新具有重要调控作用,在包括颅面部器官在内的几乎所有器官发生过程中都必需Wnt信号通路的调控。研究发现,Wnt/β-catenin信号通路不仅在牙齿发育过程中参与了上皮和间充质的相互作用,在牙囊细胞的分化过程亦有Wnt信号通路的参与。本文就Wnt信号通路在牙齿发育和牙囊成骨/成牙骨质向分化中的调控作用研究进展作一综述。