运用蛋白质组学技术研究结肠粘膜、腺瘤及腺癌组织蛋白的差异表达

 ［目的］通过比较结肠正常粘膜、腺瘤、腺癌组织之间的蛋白质组表达差异，寻找结肠腺癌相关的蛋白质，筛选结肠癌早期诊断的分子标志物。［方法］运用比较蛋白质组学技术，对8例结肠癌患者（伴有腺瘤）的正常粘膜、腺瘤、腺癌组织提取的总蛋白进行双向电泳（2-D），分析凝胶图片选择两两间差异表达超过2倍的蛋白质进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析。［结果］成功建立结肠正常粘膜、腺瘤、腺癌的双向凝胶电泳图谱，在凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3066 、2986和3289，其中两两间表达差异超过2倍的斑点共有31个，质谱分析和数据库检索共鉴定出18种蛋白质，包括keratin 8、S100A6、protein disulfide isomerase等。从功能分析，这些差异蛋白与癌细胞的发生、增殖、分化、转移等相关。结论 比较蛋白质组学能较好地提示结肠腺癌与腺瘤及正常组织间的蛋白质表达差异，而对相关差异表达蛋白的研究有可能为结肠癌的早期诊断和治疗提供新的分子靶向。     

结肠癌组织蛋白质组成分的双向凝胶电泳分析

目的 分析结肠癌病人癌组织、癌旁组织及正常结肠黏膜组织双向凝胶电泳的蛋白质表达图谱,寻找差异表达的蛋白质.方法 采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离结肠癌病人配对癌组织、癌旁组织及正常结肠黏膜组织的总蛋白,银染显色,PDQuest 2DE软件分析差异表达的蛋白质点.结果 获得了重复性较好的双向凝胶电泳银染图谱.图像分析显示,3组胶的平均匹配率分别为:癌组织87.3%、癌旁组织80.3%、正常结肠黏膜组织84.0%.等电聚焦方向上的平均偏差为(1.16±0.29)mm,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方向上的平均偏差为(1.00±0.38)mm.差异分析共获得164个差异表达的蛋白质点.结论 双向凝胶电泳分离结肠癌组织的总蛋白可获得重复性较好的结果.获得的差异蛋白质点为寻找结肠癌早期诊断的分子标记物提供了理论依据.     

特发性间质性肺炎蛋白质组学的初步研究

目的 应用蛋白质组学的方法筛选出特发性间质性肺炎(IIP)相关蛋白质,为阐明IIP的发病机制和预后提供理论依据。方法 收集8例通过小切口开胸肺活检获取的新鲜肺组织及5例远离肺部良性病变的肺组织,提取组织总蛋白,运用固相PH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)技术分离组织总蛋白,图象分析软件识别差异表达的蛋白质点,运用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点,明确其生物学功能。结果 建立双向电泳图谱,质谱分析鉴定出7个差异表达的蛋白质,分别为热休克蛋白70、膜联蛋白Ⅱ和触珠蛋白等。结论 建立了重复性较好的IIP与正常肺组织的双向电泳图谱,并鉴定出一些与IIP发病机制相关的蛋白质,为进一步寻找IIP特异分子标志物和靶向治疗打下坚实的基础。 【关键词】 特发性间质性肺炎 蛋白质组学 双向凝胶电泳 基质辅助电离解析飞行时间质谱     

正常人眼小梁组织的二维凝胶电泳及质谱分析

【目的】应用二维电泳和质谱对正常人眼小梁组织蛋白质组的进行初步分析。【方法】采用二维凝胶电泳对正常人眼小梁组织进行蛋白分离和图像分析。分别用(7cm×8cm、13cm×16cm、18cm×16cm)3种不同尺寸大小凝胶分离蛋白,并结合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析及数据库搜索从而鉴定部分蛋白质斑点。【结果】建立小梁组织蛋白样品处理及二维凝胶电泳的实验条件及方法,获得正常人眼小梁组织二维凝胶电泳蛋白图谱。3种不同尺寸大小凝胶的蛋白质分离斑点数分别为230个、875个、1213个。质谱鉴定出14个蛋白点。【结论】完成人眼小梁组织蛋白质的二维电泳凝胶“标准”图谱并作质谱分析的方法性探索对同类研究具有参考意义,为分析小梁组织在青光眼发病过程中蛋白质表达改变研究提供了新的方法及途径。     

CDX2在结肠腺瘤性息肉及结肠癌组织中的表达

【目的】研究CDX2在结肠黏膜、结肠腺瘤性息肉以及结肠癌中的表达,并探讨CDX2与结肠腺瘤性息肉和结肠癌之间的关系。【方法】随机续贯选择结肠腺瘤性息肉患者30例,结肠癌患者30例,以正常结肠黏膜30例作为对照组。用免疫组化的方法检测CDX2的表达。【结果】CDX2在正常结肠黏膜组阳性表达率为90.0%,结肠腺瘤性息肉组阳性表达率为60.0%,结肠癌组阳性表达率为33.3%。结肠癌组CDX2的表达水平显著低于正常结肠黏膜组(P<0.005),和结肠腺瘤性息肉组(P<0.05)。【结论】本文提示CDX2作为肠上皮分化的特异性标志物,其表达减低可能与结肠腺瘤性息肉和结肠癌的发生有密切联系。     

Cox-2和Bcl-2在结肠癌及癌前病变的表达及临床意义

目的 研究Cox-2和Bcl-2在结肠癌及癌前病变中的表达,并探讨其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法 检测61例结肠腺癌,31例结肠腺瘤,10例正常结肠黏膜,分别进行Cox-2和Bcl-2检测.结果 Cox-2表达在正常结肠黏膜、腺瘤及腺癌中阳性表达率逐渐增强,分别为20%、41.93%、69.84%.三种病变阳性表达率两两比较,差异有统计学意义(P<0.05);Cox-2表达强度与组织分级呈负相关(P<0.05);Bcl-2阳性率分别为腺癌76.19%和腺瘤中74.19%,两者比较差异无统计学意义(P<0.05).阳性表达强度腺癌明显高于腺瘤(P<0.05),在正常结肠黏膜阳性表达率为20%,明显低于腺瘤和腺癌组织表达率,差异有统计学意义(P<0.05).Cox-2与Bcl-2表达呈正相关.结论 根据Cox-2与Bcl-2表达正相关性分析,Cox-2的表达增高可能诱导Bcl-2的表达,二者协同作用与结肠癌的发生、发展起重要作用.     

基于咳嗽模型小鼠相关差异蛋白表达探讨中医“肺与大肠相表里”研究

【目的】研究与分析"肺病及肠"——咳嗽模型小鼠结肠组织差异表达蛋白质,探讨肺与大肠病理上的相关性,以进一步提供中医"肺与大肠相表里"的物质基础。【方法】运用蛋白质组学技术,对正常对照组和咳嗽模型组小鼠结肠组织总蛋白质进行差异双向电泳(2D-DIGE),选择差异表达蛋白质斑点,进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物信息学分析。【结果】筛选取出5个差异表达蛋白点,其中3个蛋白点在咳嗽组表达下调,2个蛋白点表达上调。经鉴定分别为肌动蛋白、血小板活化因子乙酰水解酶IBβ亚基、谷胱甘肽过氧化物酶1、5’(3’)-脱氧核糖核苷酸酶、过氧化物氧化还原化酶-6(Prdx-6)。【结论】肺病及肠咳嗽模型小鼠大肠组织可能存在氧化应激,Prdx-6基因或蛋白可能是肺与大肠之间沟通的"信号"。     

肺腺癌相关蛋白的筛选及鉴定

目的建立肺腺癌组织及配对癌旁组织的2-DE图谱,分析两者蛋白质表达的差异,进而寻找有诊断价值的相关蛋白。方法应用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对肺腺癌组织、配对癌旁组织进行蛋白质组学比较研究。结果获得了分辨率高、重复性好的双向凝胶电泳图谱。经过Im-ageMaster 2DPlatinum 5.0软件对图像分析后,获得差异大于3倍的蛋白点63个,12个点仅在肺腺癌组织中表达,5个点仅在配对癌旁组织中表达。质谱鉴定去冗余后确定了5种蛋白质,其中4种蛋白与肿瘤相关,分别为S100钙结合蛋白(S100-A11)、Ras相关蛋白Rab-14、微管辅助蛋白(Stathmin)、凝溶胶蛋白(gelsolin)。结论肺腺癌组织与配对癌旁组织的双向电泳结果有明显差异,这些差异蛋白可作为肺腺癌的候选肿瘤标志物。     

喉鳞形细胞癌比较蛋白质组的初步研究

目的:研究喉癌及癌旁喉正常黏膜组织蛋白质组的差异表达.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离喉癌及癌旁喉正常黏膜组织总蛋白质,考马斯亮蓝染色显色、ImageMaster 2D软件分析所获得的双向凝胶电泳图谱,找出差异表达的蛋白质点.取差异表达的蛋白质点进行质谱鉴定.结果:获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱,并找出在喉癌和癌旁喉正常黏膜组织差异表达的33种蛋白质.其中有22种蛋白质在喉癌组织中表达上凋,11种蛋白质表达明显下调.随机取10个在喉癌组织中表达上调的蛋白点进行质谱指纹图分析,查询数据库初步鉴定出了8个蛋白质.结论:本研究建立了分辨率和重复性较强的喉癌及喉正常黏膜组织蛋白质组表达图谱,且两者蛋白质的表达明显不同,差异表达的蛋白质可能成为潜在的诊断喉癌的肿瘤标志物和治疗靶分子,对探讨喉癌的发生机制有重要意义.     

基于便秘模型小鼠相关差异蛋白表达探讨中医“肺与大肠相表里”理论

【目的】从"肠病及肺"角度,研究便秘模型小鼠肺组织差异表达蛋白质,寻找肺与大肠的病理联系,为阐明中医"肺与大肠相表里"理论实质提供物质基础。【方法】运用蛋白质组学技术,对正常对照组和便秘模型组小鼠肺组织总蛋白质进行双向凝胶电泳(2-DE),选择差异蛋白质斑点,进行基质辅助激光解吸电离—串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)分析和生物信息学分析。【结果】筛选出3个差异表达蛋白质点,其中细胞色素c氧化酶亚基5A(COX5A)、过氧化物氧化还原酶2(Prdx-2)蛋白在便秘组表达下调,肌球蛋白调节轻链2(MLC-2)蛋白表达上调。【结论】便秘小鼠"肠病及肺"的机制可能与肺细胞发生氧化应激损伤有关。     

中分化肺腺癌及癌旁组织中差异蛋白质组学分析

目的分析人中分化肺腺癌及癌旁正常组织中的差异蛋白,寻找与肺腺癌发病相关的蛋白质。方法利用双向凝胶电泳法分离肺腺癌及癌旁正常组织中的蛋白质,通过图像扫描寻找差异2倍以上蛋白点,进而应用基质辅助激光电离飞行时间质谱得到肽质量指纹图谱,对比数据库确定差异蛋白。结果肺腺癌组织及癌旁正常组织平均蛋白点数分别为1 810±167、1 704±53。共筛选出18个差异蛋白点,其中13个差异蛋白点在肺腺癌组织中表达上升。结论双向凝胶电泳技术结合基质辅助激光电离飞行时间质谱可鉴定肺腺癌及癌旁正常组织的差异蛋白,为早期诊断肺癌、判断预后提供依据。     

卵巢癌组织的差异蛋白质研究

目的分析卵巢癌患者癌组织、癌旁组织及正常卵巢黏膜组织双向凝胶电泳的蛋白质表达图谱,寻找差异表达的蛋白质。方法采用固相pH梯度双向凝胶电泳分离卵巢癌患者配对癌组织、癌旁组织及正常卵巢黏膜组织的总蛋白,银染显色,PDQuest2DE软件分析差异表达的蛋白质点;凝胶经银染显色后,Bio-Rad凝胶扫描仪扫描,Imagemaster图像软件分析,差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离-两级飞行时间串联质谱法进行鉴定。结果获得了重复性较好的双向凝胶电泳银染图谱。3组胶的平均匹配率分别为：癌组织83.4%、癌旁组织81.2%、正常卵巢黏膜组织88.1%。斑点位置偏差等电聚焦方向上为（1.21±0.27）mm,SDS-PAGE方向上为（1.03±0.28）mm。差异分析共获得164个差异表达的蛋白质点;有差异性表达的8种蛋白质中有4种为结合珠蛋白的亚型。结论双向凝胶电泳-质谱技术能分离卵巢癌组织的总蛋白,并获得重复性较好的结果;结合珠蛋白能为诊断卵巢癌提供诊断手段。     

肠易激综合征肠道燥热证结肠黏膜组织蛋白质组初步分析

目的分析肠易激综合征肠道燥热证患者与正常人结肠黏膜组织蛋白质表达的差异。方法应用双向凝胶电泳技术对肠易激综合征肠道燥热证患者和正常人的结肠黏膜组织蛋白质组进行初步分析。结果通过比较肠易激综合征肠道燥热证组和正常对照组结肠黏膜组织双向凝胶电泳平均胶图谱,发现有10个蛋白质点的表达存在明显差异,其中有2个蛋白点表达发生明显上调,有8个蛋白点表达发生明显下调。结论肠易激综合征肠道燥热证患者和正常人结肠黏膜组织蛋白质表达存在明显差异,可能与肠易激综合征肠道燥热证的发病机制有关。     

适于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术

 【目的】 建立适于人表皮组织的双向电泳技术,并应用质谱技术对人表皮组织蛋白质组进行初步分析?【方法】 利用组织匀浆法制备人表皮组织总蛋白?固相pH 梯度胶条进行双向电泳?PDQuest 7.4软件比较和分析电泳图谱,利用质谱技术鉴定部分蛋白斑点?【结果】 成功建立了适用于人表皮组织蛋白质组分析的双向电泳技术,获得和比较了人表皮组织双向电泳四种染色图谱?人表皮组织的蛋白质在pH5～8范围内分布均匀,分子量集中在15～100 ku之间?银染图谱获得的蛋白斑点数为586±14;对质谱兼容的几种染色方法进行比较分析,结果表明Neuhoff 胶体考染更适合于人表皮组织蛋白质的双向电泳分析,其在上样量为350 μg时蛋白斑点数达394±9,匹配率为85.53%?利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术成功获得了Neuhoff 胶体考染的两个蛋白斑点的肽质量指纹图谱,并鉴定为Caspase 14 前体和27 ku热激蛋白1?【结论】建立的表皮组织双向电泳技术及其图谱可为皮肤蛋白质组学研究提供参考,为人皮肤蛋白质组学平台的构建奠定良好基础?     

埃兹蛋白、转移相关黏附分子44V6、E-钙黏附素在人结肠癌组织中的表达及其意义

目的 探讨埃兹蛋白(Ezrin蛋白)、转移相关黏附分子44V6(CD44V6)、E-钙黏附素在人结肠癌组织中的表达及意义.方法 应用免疫组化S-P法检测Ezrin、CD44V6、E-钙黏附素在78例结肠癌组织、30例结肠腺瘤组织、30例正常结肠黏膜中的表达,分析三者与临床病理特征的关系及相关性.结果 结肠癌组织中Ezrin、CD44V6蛋白表达阳性率显著高于结肠腺瘤组织及正常结肠组织(P＜0.01),而有淋巴转移者显著高于无淋巴转移者(P＜0.05);E-钙黏附素蛋白表达阳性率显著低于结肠腺瘤及正常结肠黏膜组织(P＜0.01),无淋巴转移组明显高于有淋巴转移组(P＜0.01).结肠癌组织中Ezrin、CD44V6蛋白表达水平与肿瘤进展及转移呈正相关(P＜0.05),而E-钙黏附素蛋白表达水平与肿瘤进展及转移呈负相关(P＜0.05).结论 Ezrin、CD44V6、E-钙黏附素可能与结肠癌的侵袭转移相关,三者联合检验能更准确地判断结肠癌的转移情况.     

亚健康大便不成形人群结肠黏膜蛋白质组学研究

目的:利用蛋白质组学方法建立亚健康大便不成形人群结肠黏膜蛋白质图谱,并对部分表达明显差异的蛋白质进行鉴定,为探讨亚健康大便不成形人群的结肠黏膜改变机制提供理论依据.方法:采用高分辨双向凝胶电泳(2-DE)对亚健康大便不成形人群及健康志愿者结肠黏膜组织进行蛋白质分离,ImageMaster 2D Elite分析软件进行图...     

前列腺精子结合蛋白的二维凝胶电泳及质谱分析

【目的】应用精子膜蛋白亲和层析柱分离金黄地鼠前列腺精子结合蛋白，并用二维电泳和质谱对金黄地鼠前列腺精子膜结合蛋白进行初步分析。【方法】应用附睾精子膜亲和层析柱纯化前列腺精子结合蛋白，采用二维凝胶电泳对纯化的前列腺精子膜结合蛋白进行蛋白分离和图像分析，并结合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析及数据库搜索从而鉴定部分蛋白质斑点；RT—PCR检测已鉴定蛋白在前列腺及未受精卵子中的mRNA的表达。【结果】附睾精子膜蛋白亲和层析柱可纯化出前列腺结合蛋白，前列腺附睾精子膜蛋白结合蛋白的二维凝胶电泳蛋白图谱。分离的蛋白质斑点为30个，质谱鉴定出2个蛋白点，一为热休克蛋白105，另一羰基还原酶（NADPH）-3。前列腺和未受精卵中均表达热休克蛋白105和羰基还原酶-3的mRNA。【结论】自前列腺分泌物中分离出精子膜结合蛋白，金黄地鼠前列腺中精子结合蛋白经双向电泳及飞行质谱分析鉴定出蛋白热休克蛋白和羰基还原酶。     

ki67、c-erbB-2在结肠癌及腺瘤中的表达及意义

目的探讨ki67、c-erbB-2在结肠癌与腺瘤中的表达状况及意义。方法采用免疫组化S-P法检测58例结肠癌,36例结肠腺瘤,20例正常结肠组织,分别进行了ki67、c-erbB-2蛋白的检测。结果ki67在腺癌中的阳性表达率及表达强度最高,显著高于腺瘤(P<0.01),腺瘤的中、重度不典型增生明显高于轻度不典型增生(P<0.01)。c-erbB-2在腺癌中的阳性表达强度和表达率与正常黏膜及腺瘤相比有显著差异(P<0.01),有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者(P<0.01)。结论ki67的阳性表达及表达强度对诊断腺癌和监视腺瘤癌变有重要意义。c-erbB-2的过表达与结肠癌的发生、发展密切相关,可作为判断结肠癌恶性程度、淋巴结转移及预后的重要参考指标。     

ki-67与smad4在结肠癌及结肠腺瘤组织中的表达及意义

目的分析ki-67与smad4在结肠癌及结肠腺瘤组织中的表达及意义。方法采用免疫组化检测结肠癌、结肠腺瘤及正常结肠组织的手术标本中的ki-67和smad4的表达,采用SPSS11.5软件进行相关统计学处理和分析,其中计数资料利用X~2进行检验,P0.05表示具有显著的统计学差异。结果不管是腺癌的ki-67阳性表达率,还是ki-67表达强度,都比腺瘤更加明显,且差异具有统计学意义(P0.01)。相较于轻度不典型增生,中重度不典型增生的ki-67表达率更高,且差异具有明显的统计学意义(P0.01)。相较于腺瘤,腺癌的smad4阳性表达率更高,且差异具有统计学意义(P0.01)。相较于正常黏膜,腺瘤的smad4阳性表达率更高,但不具有明显的统计学差异(P0.05)。ki-67的阳性表达强度和结肠癌的分化程度以及淋巴结转移之间的相关性不是很明显。smad4蛋白的过分表达与结肠癌的发生、发展密切相关,与癌细胞的分化程度和淋巴结转移相关。结论 ki-67的阳性表达强度对诊断结肠腺癌、监视腺瘤癌变的监视有重要意义。smad4蛋白的表达可作为鉴别大肠良恶性病变的重要指标之一,可成为判断结肠癌恶性程度、淋巴结转移及预后的主要参考指标     

特发性间质性肺炎蛋白质组学初步研究

目的应用蛋白质组学的方法筛选出特发性间质性肺炎(IIP)相关蛋白质,为阐明IIP的发病机制和预后提供理论依据。方法收集8例通过小切口开胸肺活检获取的新鲜肺组织及5例远离肺部良性病变的肺组织,提取组织总蛋白,运用固相PH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)技术分离组织总蛋白,图象分析软件识别差异表达的蛋白质点,运用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点,明确其生物学功能。结果建立双向电泳图谱,质谱分析鉴定出7个差异表达的蛋白质,分别为热休克蛋白70、膜联蛋白Ⅱ和触珠蛋白等。结论建立了重复性较好的IIP与正常肺组织的双向电泳图谱,并鉴定出一些与IIP发病机制相关的蛋白质,为进一步寻找IIP特异分子标志物和靶向治疗打下坚实的基础。